Name: ex vivo culture of pharyngeal arches to study heart and muscle progenitors and their niche
Uploaded: 2015-07-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche at JoVE.com

We thank Kwon laboratory members for helpful discussions. This work was supported by grants from NHLBI/NIH (R01HL111198) and Maryland Stem Cell Research Fund (MSCRF).

सभी चूहों जॉन्स हॉपकिन्स विश्वविद्यालय में जानवरों की सुविधा -accredited प्रयोगशाला पशु की देखभाल के प्रत्यायन के लिए एक अमेरिकन एसोसिएशन (AAALAC) पर बनाए रखा और प्रयोगशाला पशु की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड में उल्लिख?...

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	<li>Kelly, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+second+heart+field.">The second heart field.</a> Curr Top Dev Biol. 100, 33-65 (2012).</li><li>Bruneau, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+developmental+genetics+of+congenital+heart+disease.">The developmental genetics of congenital heart disease.</a> Nature. 451, 943-948 (2008).</li><li>Tzahor, E., Evans, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharyngeal+mesoderm+development+during+embryogenesis:+implications+for+both+heart+and+head+myogenesis.">Pharyngeal mesoderm development during embryogenesis: implications for both heart and head myogenesis.</a> Cardiovasc Res. 91, 196-202 (2011).</li><li>Uosaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Contact+with+Endoderm-like+Cells+Efficiently+Induces+Cardiac+Progenitors+from+Mouse+and+Human+Pluripotent+Stem+Cells.">Direct Contact with Endoderm-like Cells Efficiently Induces Cardiac Progenitors from Mouse and Human Pluripotent Stem Cells.</a> PLoS One. 7 (10), e46413 (2012).</li><li>Cheng, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibronectin+mediates+mesendodermal+cell+fate+decisions.">Fibronectin mediates mesendodermal cell fate decisions.</a> Development. 140, 2587-2596 (2013).</li><li>Kwon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+regulatory+pathway+involving+Notch1/beta-catenin/Isl1+determines+cardiac+progenitor+cell+fate.">A regulatory pathway involving Notch1/beta-catenin/Isl1 determines cardiac progenitor cell fate.</a> Nature cell biology. 11, 951-957 (2009).</li><li>Shenje, L. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precardiac+deletion+of+Numb+and+Numblike+reveals+renewal+of+cardiac+progenitors.">Precardiac deletion of Numb and Numblike reveals renewal of cardiac progenitors.</a> Elife. 3, e02164 (2014).</li><li>Grevellec, A., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pharyngeal+pouches+and+clefts:+Development,+evolution,+structure+and+derivatives.">The pharyngeal pouches and clefts: Development, evolution, structure and derivatives.</a> Semin Cell Dev Biol. 21, 325-332 (2010).</li><li>Kwon, C., Cordes, K. R., Srivastava, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt/beta-catenin+signaling+acts+at+multiple+developmental+stages+to+promote+mammalian+cardiogenesis.">Wnt/beta-catenin signaling acts at multiple developmental stages to promote mammalian cardiogenesis.</a> Cell Cycle. 7, 3815-3818 (2008).</li><li>Cho, G. S., Fernandez, L., Kwon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+medicine+for+the+heart:+perspectives+on+stem-cell+therapy.">Regenerative medicine for the heart: perspectives on stem-cell therapy.</a> Antioxid Redox Signal. 21, 2018-2031 (2014).</li></ol>

इस वीडियो में, हम अलग करने और 9.5 दिन पुरानी माउस भ्रूण की पहली संस्कृति और दूसरा ग्रसनी मेहराब को कैसे प्रदर्शित करता है। ग्रसनी मेहराब, पहले मेहराब 8 में दूसरे मेहराब और सिर मांसपेशी पूर्वज अलावे embryo...

ग्रसनी mesoderm कोशिकाओं दिल के कुछ हिस्सों और ग्रसनी की मांसपेशियों को जन्म दे। भ्रूण के विकास के दौरान, दूसरा दिल क्षेत्र से multipotent हृदय पूर्वज कोशिकाओं ग्रसनी मेसोडर्म से विस्थापित और हृदय बहिर्वाह पथ और सही वेंट्रिकल आबाद है, और उनके असामान्य विकास बारीकी से जन्म दोष और जन्म defect- की जन्मजात हृदय रोग के प्रमुख कारण के साथ जुड़ा हुआ है मनुष्य 1-3 में संबंधित मौतों। हाल के अध्ययनों से ग्रसनी mesoderm mesoderm कार्डियो-craniofacial विकास 4 का एक महत्वपूर्ण हिस्सा है, जिससे दिल के अलावा, मांसपेशियों सिर करने के लिए योगदान देता है कि प्रदर्शन किया है। इस प्रकार, प्रेरण, प्रसार, और ग्रसनी mesoderm में सिर और दिल के progenitors के भेदभाव सहित विकास की प्रक्रिया में सक्रिय जांच 5-7 के तहत कर रहे हैं। अभी हाल तक, यह हृदय की मूल कोशिकाओं विस्तार witho गुजरना चाहे अनजान बनेउनके सेलुलर पर्यावरण के बारे में जानकारी की कमी के कारण आंशिक रूप से केन्द्र शासित प्रदेशों के भेदभाव,। हमारे हाल के एक अध्ययन ग्रसनी मेहराब हृदय और मांसपेशियों progenitors के नवीकरण के लिए एक microenvironment के रूप में सेवा और कई हफ्तों से 8 विवो पूर्व संवर्धित किया जा सकता है कि पता चलता है। इस explant विधि कार्डियो-craniofacial पूर्वज पूर्व vivo के विकास का अध्ययन करने के लिए एक उपन्यास और अद्वितीय अवसर प्रदान करता है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<colgroup>
		<col span="4" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30071.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS + Ca2 + Mg2</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-030-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10cm petri plates</td>
			<td>Fishersci</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2">Dissection forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2">Serum Free Media:</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMDM</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>15-016-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#8217;s F12</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>10-080-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2-SUPPLEMENT</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27-retinoic acid</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12587-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% BSA (in PBS) &#224; (Invitrogen Cat#. P2489)</td>
			<td>Life Sciences</td>
			<td>P2489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100X Glutamine (Gibco Cat.# 25030-081)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100X Pen/Strep (Gibco Cat#. 15070-063)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo culture of pharyngeal arches to study heart and muscle progenitors and their niche

विकासशील भ्रूण की ग्रसनी mesoderm सिर और दिल मांसलता के व्यापक क्षेत्रों के लिए योगदान देता है। हम (भी गिल मेहराब के रूप में जाना जाता है) ग्रसनी मेहराब के साथ सिर और दिल के पूर्वज सेल विकास पूर्व vivo अध्ययन करने के लिए एक उपन्यास तरीका विकसित किया है। इस विधि का उपयोग करना, हम हाल ही में दूसरी ग्रसनी मेहराब स्वयं renewing दिल पूर्वज होता है और माउस दिल के विकास के दौरान progenitors के विस्तार के लिए एक microenvironment के रूप में कार्य करता है कि वर्णन किया है। मूल कोशिकाओं कट्टर के अंदर समान और प्रशस्त रहते हैं, लेकिन जल्दी से वे कट्टर से बाहर की ओर पलायन के रूप में कार्य cardiomyocytes हो जाते हैं। हम भी पहले ग्रसनी चाप चाप छोड़ने के बाद myotubes को जन्म दे रही मांसपेशी पूर्वज जिसमें सूचना दी। यहाँ, हम विच्छेदन और माउस भ्रूण विकसित करने से पहले और दूसरे ग्रसनी मेहराब के पूर्व vivo संस्कृति के लिए प्रक्रिया को प्रदर्शित करता है। विधि सिर और दिल के पूर्वज / मांसपेशियों देव अध्ययन करने के लिए एक सक्षम बनाता हैcardiomyocyte और विस्तार पूर्व vivo में myotube गठन सहित elopment,।

वे पैदा करना और सिर और दिल मांसलता, क्रमशः (चित्रा 1 ए, ए &#39;और एक&#39; &#39;) बनने के लिए, 1 सेंट और 2 एन डी ग्रसनी चाप से विस्थापित के रूप में विकास के दौरान, चेहरे की मांसपेशियों और हृदय पूर्वज ?...

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Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Here, we present a protocol to culture pharyngeal arches to study the biology of heart and muscle progenitor cells and their microenvironment.

ग्रसनी मेहराब के पूर्व vivo संस्कृति हार्ट और स्नायु progenitors और अपने आला अध्ययन करने के लिए

The pharyngeal mesoderm of developing embryos contributes to broad regions of head and heart musculature. We have developed a novel method to study head ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

माउस hippocampal ऊतक के पूर्व utero Electroporation और Organotypic स्लाइस संस्कृति

Mouse genetics offers a powerful tool determining the role of specific genes during development. Analyzing the resulting phenotypes by immunohistochemical ...

Ex Vivo Culture of Chick Cerebellar Slices and Spatially Targeted Electroporation of Granule Cell Precursors

Ex Vivo Culture of Chick Cerebellar Slices and Spatially Targeted Electroporation of Granule Cell Precursors

पूर्व Vivo चिकी अनुमस्तिष्क स्लाइस की संस्कृति और स्पैटियली Electroporation ग्रेन्युल सेल व्यापारियों की लक्षित

The cerebellar external granule layer (EGL) is the site of the largest transit amplification in the developing brain, and an excellent model for studying ...

Epicardial Outgrowth Culture Assay and Ex Vivo Assessment of Epicardial-derived Cell Migration

Epicardial Outgrowth Culture Assay and Ex Vivo Assessment of Epicardial-derived Cell Migration

एपिकार्डियल परिणाम संस्कृति परख और<em&gt; पूर्व विवो</em&gt; एपिकार्डियल व्युत्पन्न सेल प्रवास का आकलन

A single layer of epicardial cells lines the heart, providing paracrine factors that stimulate cardiomyocyte proliferation and directly contributing ...

Identification Of Erythromyeloid Progenitors And Their Progeny In The Mouse Embryo By Flow Cytometry

ईरीथ्रोमाइलॉयड प्रजनकों की पहचान और उनकी गर्भ में फ्लो साइटोमैट्री द्वारा माउस भ्रूण

Macrophages are professional phagocytes from the innate arm of the immune system. In steady-state, sessile macrophages are found in adult tissues where ...

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

Chimeric zebrafish भ्रूण में अलग-अलग रेटिना प्रोजेनिटर्स में ट्रांसजेनिक जीन एक्सप्रेशन के vivo इमेजिंग में सेल Nonautonomous प्रभावों का अध्ययन करने के लिए

The genetic and technical strengths have made the zebrafish vertebrate a key model organism in which the consequences of gene manipulations can be traced ...

Isolation, Culture, and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells and Osteoclast Progenitors from Mice

अलगाव, संस्कृति, और चूहों से अस्थि मज्जा Stromal कोशिकाओं और अस्थिशोषक Progenitors के भेदभाव

Bone marrow stromal cells (BMSCs) constitute a cell population routinely used as a representation of mesenchymal stem cells in vitro. They reside within ...

Application of Chronic Stimulation to Study Contractile Activity-induced Rat Skeletal Muscle Phenotypic Adaptations

सिकुड़ा गतिविधि-प्रेरित चूहे कंकाल मांसपेशी Phenotypic रूपांतरों का अध्ययन करने के लिए पुरानी उत्तेजना के आवेदन

Skeletal muscle is a highly adaptable tissue, as its biochemical and physiological properties are greatly altered in response to chronic exercise. To ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

Vivo में मांसपेशी की इमेजिंग- Drosophila कोषस्थों में पट्टा Morphogenesis

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

Generation of First Heart Field-like Cardiac Progenitors and Ventricular-like Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells

हृदय Progenitors और वेंट्रिकुलर की तरह पहले दिल क्षेत्र की पीढ़ी-मानव Pluripotent स्टेम कोशिकाओं से Cardiomyocytes की तरह

The generation of large amounts of functional human pluripotent stem cells-derived cardiac progenitors and cardiomyocytes of defined heart field origin is ...

Ex Vivo Perfusion of the Rodent Placenta

Rodent अपरा के Ex Vivo छिड़काव

The placenta is a key organ during pregnancy that serves as a barrier to fetal xenobiotic exposure and mediates the exchange of nutrients for waste. An ...