Name: normothermic ex vivo kidney perfusion for the preservation of kidney grafts prior to transplantation
Uploaded: 2015-07-15T14:00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation at JoVE.com

Мы хотим поблагодарить Сорин Group (Милан, Италия) за предоставление нам с заказ цепей почек перфузии. Кроме того, мы благодарим XVIVO перфузии Inc. (Гетеборг, Швеция) за предоставление нам с решением Стин, BBraun AG (Melsungen, Германия) на поставку с шприцевые насосы, и Rieber GmbH &amp; Co KG (Ройтлинген, Германия).

Примечание: схематическое представление протокола исследования представлена ​​на рисунке 1. <img alt="Фигура 1" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig1.jpg" /> Рисунок 1. Протокол исследования. Это исследование протокол нормотермической экс естественных условиях почечной перфузии на основе свиной модели. После хирургического рассечения сосудов трансплантата почки и промывки 500 мл гистидин-триптофан-КГ (НТК), трансплантат может быть восстановлена. После холодного хранения (SCS) в течение 3 часов, привитой почки перфузии нормотермических Экс Vivo (NEVKP) для нескольких часов до назначенного трансплантации. Все животные получали гуманного ухода в соответствии с &#39;&#39; Принципы лабораторных животных &#39;&#39;, сформулированных Национальным обществом для медицинских исследований и &#39;&#39; Руководстве по уходу за лабораторными животными &#39;&#39;, опубликованной Национальным институтом здравоохранения,Онтарио, Канада. Уход Комитет животных в Торонто Генеральной научно-исследовательского института одобрил все исследования. 1. Животные <ol><li> Используйте мужчина Йоркшир свиней (27 - 33 кг) в данном протоколе. </li></ol> 2. Орган поисковая <ol><li> Предоперационная Порядок <ol><li> Дом мужчины свиньи Йоркшир в научно-исследовательский центр, по крайней мере одной недели, чтобы уменьшить их уровень стресса. Быстрое свиней в течение как минимум 6 часов до индукции анестезии. </li><li> Инициирование обезболивания свиньи с помощью внутримышечной инъекции кетамина (25 мг / кг), атропин (0,04 мг / кг) и мидазолама (0,15 мг / кг). Впоследствии, транспортировки животного из жилищного объекта в операционную (OR). </li><li> Поместите кота в лежачем положении на столе или на. Пусть это дышать 2 л кислорода с 5% изофлуран спонтанно. После отдыха, разоблачить голосовые связки с ларингоскопа и брызги их с 2% лидокаина, чтобы предотвратить спазм, вызванный интубации. Мтер зондирование с 6,5 мм трубы, блокировать манжету 3 - 5 мл воздуха. Примечание: Capnometry показывает правильное положение эндотрахеальной трубки. </li><li> Опустите ИФ газа до 2,5%. Установите вентилятор 14 - 16 вдохов / мин и дыхательного объема до 10 - 15 мл / кг массы тела. Монитор свинью тесно. ЧСС и насыщения кислородом записываются импульса оксиметрии. </li><li> В стерильных условиях, ввести 8,5 Фр х 10 см катетер в яремную вену в Сельдингера техники 13. Таким образом, использовать иглу, чтобы проколоть венозный сосуд. После введения проволоки, заменить иглу с катетером. Устранить провода и закрепить катетер к коже. Администрирование 200 мл лактата раствор Рингера в час на протяжении операции. </li></ol></li><li> Хирургическая Процедура <ol><li> После дезинфекции и покрытия операционного поля, выполните срединный разрез от xyphoid к лобкового симфиза. Для улучшения экспозиции, расширить хирургического подхода слевый боковой разрез. Обложка больших и малых кишечника с полотенцем и поместить их в левую сторону для оптимального доступа к правой почке. </li><li> Отделите нижнюю полую вену (IVC) из брюшной аорты. Лигировать ветвей аорты от задней аорты. </li><li> После полного расслоения аорты в спину, передать лигатуры вокруг аорты краниально почечных отраслей. Кроме того, поместите два лигатуры черепных подвздошной бифуркации. Поставьте галстук вокруг левой почечной артерии. </li><li> Освободите правую почку от ее приверженцем ткани. Проанализируйте почечной вены, артерии и мочеточник. </li><li> Откройте диафрагму и управлять 1000 МЕ гепарина на кг веса донора в сердце. Для модели DCD, вводят 40 mval из KCl внутрисердечно 3 мин после системного гепаринизации, чтобы вызвать остановку сердца. Остановка сердца ценится в качестве отправной точки теплой ишемии. </li><li> Между тем, для сбора крови, соединить линии CPDA мешки (цитрат, фосфат, декстроза, аdenosine) в катетера, введенного в левую верхнюю яремную вену. Выполните мягкий спин (1500 XG без тормоза). Удалить плазмы и Баффи пальто под стерильном состоянии (биозащитой класса II) и хранить эритроциты для переливания. </li><li> Иглу аорты с органной флеш строке выше подвздошной бифуркации. Tie лигатуры на аорте и левой почечной артерии. </li><li> Промойте почку с гистидин-триптофан-КГ раствора (HTK) с давлением 100 см H 2 O. Зажим грудной вены и собирать кровь через яремную катетер. Отрежьте брюшную вену ниже почечной вены, чтобы обеспечить оптимальную флеш почки. </li><li> После полного флеш правой почки, получить трансплантат с сегментом аорты. Вырезать почечной вены и оставить мочеточник долго. </li></ol></li><li> Вернуться Таблица Подготовка почки трансплантат для перфузии <ol><li> Освободите почку от прилипшей ткани. Закрыть черепной части аорты с Свяжитей иглу в нижнюю часть с &quot;х 3/8&quot; 1/4 редуктора. Галстук мелкие артериальные ветви, идущие от аорты. </li><li> Иглу почечной вены с &quot;х 3/8&quot; редуктора непосредственно 1/4. Интубировать мочеточник с 8 Фр питательная трубка. </li><li> Поместите почку на льду до начала NEVKP. </li></ol></li></ol> 3. нормотермических Экс естественных почек перфузии (NEVKP) <ol><li> Подготовка перфузии округа Перфузии схема состоит из новорожденных кровообращения оборудования (рисунок 2). <img alt="Рисунок 2" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig2.jpg" /> Рисунок 2. Схематическое изображение перфузии Circuit. Схема состоит из новорожденных сердечно-технологии обхода. Решение перфузии собирают в венозной резервуара. Центробежный насос продвигает раствор в оксигенатор, где он обогащен кислородом и нагревают до 37 ° С. После годовыхssing пузырь фильтр артериальное, перфузата приводом с давлением 60 - 80 мм рт.ст. через почечную артерию в почках. Венозный отток (0 - 3 мм рт.ст.) приводит перфузат обратно в венозной водохранилище. Шприц и инфузионные насосы обеспечить подачу с дополнительными соединениями. Моча собирается в течение всего перфузии. Характеристики перфузии цепи записываются непрерывно. Часовые образцы венозной и артериальной крови газа и повреждение почек маркеры анализировали. <ol> <li> Подключите пользовательский сделал схему перфузии в почках перфузии устройства. </li><li> Подключите трубку к венозной водохранилище и оксигенатора. Подключите трубку артериальной линии с артериальной оттока оксигенатора и положение пузырь фильтр в держатель. Подключите линию продувки. Подключение трубки венозный линии на вход венозной резервуара. </li><li> Для оценки во время перфузии, подключите датчик температуры в артериальной розетку, подключить расходомер и буbble датчик с трубкой артериальной линии и подключите линии давления. Подключить датчик уровня. </li><li> Подключите венозных и артериальных образцов линии на венозных и артериальных портов образца. </li><li> Расположите камеру органов на стенде и представить венозной и артериальной трубки через подготовленные отверстия. Закрепите трубку на стол и камеры твердо. </li><li> Вставьте всасывающий шланг в роликового насоса и положение один конец в камеру для сбора жидкости. </li><li> Подключите шланг кислорода в бак газа, содержащего 95% O 2/5% CO 2 и оксигенатора. Подключите нагревательный блок трубки с оксигенатора и камеры органов. </li><li> Используйте трубы зажимы, чтобы закрыть венозные и артериальные линии отток. Применить другой зажим трубки для оттока венозной водохранилище. </li></ol></li><li> Подготовка перфузии решение, дополнительная, и Грунтовка цепи <ol><li> Используйте один инфузионный насос, чтобы заменить полученный мочи сЛактат Рингера. </li><li> Используйте один шприцевой насос, чтобы управлять питание (глюкозу 0,5 мл / ч, аминокислоты 0,5 мл / ч) и инсулина (5 МЕ / ч) в венозной водохранилище. Используйте второй шприц насос влиться сосудорасширяющее (верапамил, 0,25 мг / ч) непосредственно в артериальную линию. </li><li> Заполните венозный резервуар с раствором для перфузии. Таким образом, залить лактат Рингера (175 мл), раствор STEEN (200 мл), DRO (27 мл), гепарин (1000 МЕ), бикарбонат натрия для доведения рН и глюконат кальция в венозную резервуара. Наконец, добавьте отмытых эритроцитов (125 мл). </li><li> Включите машину легочное сердце (ВВУ). Активируйте панели давления, температуры, уровня и датчик пузырь. Активируйте система управления данными (DMS), чтобы записать данные в течение перфузии. Активируйте нагревательный элемент, чтобы нагреть раствор перфузии и органов камеру к 37 ° C. Откройте подачу О 2. </li><li> Откройте зажим трубки за венозной водохранилище и освободить centrifugаль напор воздуха из полностью. Начало центробежный насос со скоростью 1000 оборотов в минуту и, чтобы раствор в движение по всей цепи. Зажим трубки обход артериальной фильтр и выпустить воздух из артериальной фильтра. </li><li> Ноль линии давления. Активируйте шприцев и инфузионные насосы. </li></ol></li><li> Почки трансплантата перфузии <ol><li> Удалить почку от льда, и положение почек на постельных принадлежностей в камере органов. Поместите катетер мочи в коллектор мочи. Убедившись, что венозная и артериальная трубки свободны от воздуха, подключите разъемы на трубы. </li><li> Закройте ярлык между артериальной и венозной линий труб. Установите артериальное давление на 75 мм рт.ст. путем регулирования скорости центробежного насоса. </li><li> Запись давления, артериальная поток, температура, и наличие пузырьков постоянно с DMS. Соблюдайте значения тщательно в течение перфузии. Во время перфузии, утечка крови в камере КоллеИДКТК с помощью всасывающей трубки обратно в венозную резервуара. </li><li> Запишите количество мочи производства. Сбор венозной крови и мочи ежечасно. Монитор перфузии путем принятия венозный и артериальный проб газа в крови и аспартатаминотрансферазы (AST) и лактата анализ. </li><li> В конце перфузии, отсоединить трубки от почечной артерии и вены, промыть холодной трансплантата HTK, а не хранить его на льду в стерильной мешок органа до трансплантации. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Wolfe, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+mortality+in+all+patients+on+dialysis,+patients+on+dialysis+awaiting+transplantation,+and+recipients+of+a+first+cadaveric+transplant.">Comparison of mortality in all patients on dialysis, patients on dialysis awaiting transplantation, and recipients of a first cadaveric transplant.</a> The New England journal of medicine. 341 (23), 1725-1730 (1999).</li><li>Rabbat, C. G., Thorpe, K. E., Russell, J. D., Churchill, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+mortality+risk+for+dialysis+patients+and+cadaveric+first+renal+transplant+recipients+in+Ontario,+Canada.">Comparison of mortality risk for dialysis patients and cadaveric first renal transplant recipients in Ontario, Canada.</a> Journal of the American Society of Nephrology : JASN. 11 (5), 917-922 (2000).</li><li>Fuquay, R., Teitelbaum, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplant+outcomes+and+dialysis+modality.">Transplant outcomes and dialysis modality.</a> Contributions to nephrology. 178, 251-257 (2012).</li><li>Ingsathit, A., Kamanamool, N., Thakkinstian, A., Sumethkul, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+advantage+of+kidney+transplantation+over+dialysis+in+patients+with+hepatitis+C:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Survival advantage of kidney transplantation over dialysis in patients with hepatitis C: a systematic review and meta-analysis.</a> Transplantation. 95 (7), 943-948 (2013).</li><li>Davis, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+extent+and+predictors+of+waiting+time+geographic+disparity+in+kidney+transplantation+in+the+United+States.">The extent and predictors of waiting time geographic disparity in kidney transplantation in the United States.</a> Transplantation. 97 (10), 1049-1057 (2014).</li><li>Perico, N., Cattaneo, D., Sayegh, M. H., Remuzzi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+graft+function+in+kidney+transplantation.">Delayed graft function in kidney transplantation.</a> Lancet. 364 (9447), 1814-1827 (2004).</li><li>Maggiore, U., Cravedi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+marginal+kidney+donor.">The marginal kidney donor.</a> Current opinion in organ transplantation. 19 (4), 372-380 (2014).</li><li>Dittrich, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+cold+storage+on+renal+ischemia+reperfusion+injury+after+non-heart-beating+donor+explantation.">Influence of cold storage on renal ischemia reperfusion injury after non-heart-beating donor explantation.</a> Nephron. Experimental nephrology. 96 (3), e97-e102 (2004).</li><li>Summers, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+donor+age+and+cold+storage+time+on+outcome+in+recipients+of+kidneys+donated+after+circulatory+death+in+the+UK:+a+cohort+study.">Effect of donor age and cold storage time on outcome in recipients of kidneys donated after circulatory death in the UK: a cohort study.</a> Lancet. 381 (9868), 727-734 (2013).</li><li>Hosgood, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.+pilot+study+assessing+the+feasibility+of+a+short+period+of+normothermic+preservation+in+an+experimental+model+of+non+heart+beating+donor+kidneys.">et al. pilot study assessing the feasibility of a short period of normothermic preservation in an experimental model of non heart beating donor kidneys.</a> The Journal of surgical research. 171 (1), 283-290 (2011).</li><li>Hosgood, S. A., Patel, M., Nicholson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+conditioning+effect+of+ex+normothermic+perfusion+in+an+experimental+kidney+model.">The conditioning effect of ex normothermic perfusion in an experimental kidney model.</a> The Journal of surgical research. 182 (1), 153-160 (2013).</li><li>Nicholson, M. L., Hosgood, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+after+ex+vivo+normothermic+perfusion:+the+first+clinical+study.+American+journal+of+transplantation.">Renal transplantation after ex vivo normothermic perfusion: the first clinical study. American journal of transplantation.</a> official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 13 (5), 1246-1252 (2013).</li><li>Seldinger, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catheter+replacement+of+the+needle+in+percutaneous+arteriography;+a+new+technique.">Catheter replacement of the needle in percutaneous arteriography; a new technique.</a> Acta radiologica. 39 (5), 368-376 (1953).</li><li>Stubenitsky, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exsanguinous+metabolic+support+perfusion--a+new+strategy+to+improve+graft+function+after+kidney+transplantation.">Exsanguinous metabolic support perfusion--a new strategy to improve graft function after kidney transplantation.</a> Transplantation. 70 (8), 1254-1258 (2000).</li><li>Delpech, P. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+warm+ischaemia+combined+with+cold+preservation+on+the+hypoxia-inducible+factor+1&#945;+pathway+in+an+experimental+renal+autotransplantation+model.">Effects of warm ischaemia combined with cold preservation on the hypoxia-inducible factor 1&#945; pathway in an experimental renal autotransplantation model.</a> The British journal of surgery. , (1002).</li><li>Cypel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+vivo+lung+perfusion+in+clinical+lung+transplantation.">Normothermic ex vivo lung perfusion in clinical lung transplantation.</a> The New England journal of medicine. 364 (15), 1431-1440 (2011).</li><li>Knaak, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subnormothermic+Ex+vivo+liver+perfusion+reduces+endothelial+cell+and+bile+duct+injury+after+DCD+pig+liver+transplantation.">Subnormothermic Ex vivo liver perfusion reduces endothelial cell and bile duct injury after DCD pig liver transplantation.</a> Liver transplantation : official publication of the American Association for the Study of Liver Diseases and the International Liver Transplantation Society. , (2014).</li><li>Hosgood, S. A., Nicholson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+normothermic+perfusion+of+declined+human+kidneys+after+inadequate+in+situ+perfusion.">Ex vivo normothermic perfusion of declined human kidneys after inadequate in situ perfusion.</a> American journal of transplantation official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 14 (2), 490-491 (2014).</li><li>Op den Dries, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+normothermic+machine+perfusion+and+viability+testing+of+discarded+human+donor+livers.">Ex vivo normothermic machine perfusion and viability testing of discarded human donor livers.</a> American journal of transplantation official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 13 (5), 1327-1335 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Это исследование показывает, что NEVKP раствором эритроцитов основе могут быть выполнены с отличными результатами в течение длительного периода времени в модели свиньи. За 10 часов экс естественных условиях перфузии почки продемонстрировали стабильные параметры перфузии, активный обмен веществ почек, гомеостаз и минимальное повреждение почек. Выработку мочи и повреждение почек зависит от состава раствора перфузии. Важно, чтобы сохранить онкотического давления и осмолярности перфузату в физиологическом диапазоне. В частности, низкий онкотическое давление приведет к unphysiologically высокой выработки мочи со значительным отеком почек и увеличения маркеров повреждения почек. STEEN раствор, содержащий альбумин выбирается в этой модели, чтобы регулировать онкотического давления и имитировать физиологические условия для почек. Бикарбонат натрия и глюконат кальция добавляют к системе, чтобы достичь физиологические значения рН, НСО 3 </suB&gt;, натрий, калий, кальций и хлорид. Выбор и дозировка сосудорасширяющее важно обеспечить достаточный кровоток и снабжение кислородом. Методика нормотермической экс виво почек перфузии имеет ряд ограничений. Экс естественных перфузии не связан с гормональной поддержки почки, что может негативно повлиять на более длительные периоды перфузии. Кроме того, новая технология, в этот момент времени, связан с увеличением расходов. Будущие улучшения могут упростить технологию и сократить расходы. Разработка портативного устройства почек перфузии может позволить, чтобы полностью избежать холодного хранения почек в будущем. Тяжелой и сохраняющейся нехватки органов приводит к увеличению использования маргинальных органов (ECD или DCD почек трансплантатов) 7. В настоящее время, сохранение орган на основе статического холодного хранения или гипотермии машины перфузии. Как длительная холодная ишемическая время имеет существенное импакт о результатах функции почек стандартных критериев 15 и маргинальных трансплантатов 8,9, новые методы сохранения минимизация холодного хранения представляют особый интерес 16-19. Основным препятствием для использования маргинальных трансплантаты более тщательное неспособность оценить качество и жизнеспособность органов перед трансплантацией. В настоящее время только клинические параметры, такие как возраст, доноров доноров заболеваний, и время тепловой ишемии трансплантатов используются для решения, является ли орган принял или отклонил для трансплантации. Сохраняя трансплантата под нормотермических условиях, оценка трансплантата на основе характеристик перфузии и данных возможно. Параметры в режиме реального времени, такие как почечных сосудов потока, давления, внутрипочечного сопротивления, производства мочи, потребление кислорода, и параметров повреждение почек (например, АСТ и лактата) должны быть полезные параметры для оценки жизнеспособности трансплантата. В Additион, активный обмен веществ во время NEVKP позволяет применение стратегий для улучшения ремонтных предельные трансплантатов почек до трансплантации. Например, ингибирование провоспалительных путей, иммуномодуляции, переноса генов, а также управления стволовых клеток может быть будущие методы для изменения трансплантатов почки во время сохранения и улучшить исход получатель.

Почки являются наиболее часто пересаженные органы твердые. Для пациентов, страдающих от терминальной стадии почечной болезни, трансплантация почки обеспечивает лучшую продолжительность жизни, и улучшение качества жизни по сравнению с диализом 1-4. Сохраняющаяся нехватка орган представляет собой серьезную проблему в области трансплантационной медицины (Таблица 1) 5. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td></td><td> Соединенные Штаты * </td><td> Евротрансплант область ** </td></tr><tr><td> Больные на пересадке почки очереди </td><td> 101563 (февраль, 2015) </td><td> 10689 (декабрь, 2014) </td></tr><tr><td> Умершие почки доноров пересадили в 2014 году </td><td> 10,650 </td><td> 3119 </td></tr><tr><td> Медиана времени ожидания пересадки умершего донора почки (в годах) </td><td> До 5 лет * </td><td> До 4 лет ** </td></tr></tbody></table> Таблица 1. ПочкиПрививка Нехватка в США и Евротрансплант области. Исход трансплантации почки отрицательно влияет на время ожидания, с плохим прогнозом для пациентов, подвергающихся длительному диализа 6. Это вызвало интерес к предельным трансплантатов почки в качестве дополнительного источника доноров, таких как почки от пожилых доноров, доноров с несколькими сопутствующими (расширенных критериев доноров (ECD) и почек пожертвованы после сердечной смерти (DCD). Маргинальный доноров почки, которые были бы снизилась в прошлом, в настоящее время считается для трансплантации 7. Основным препятствием для использования маргинальных трансплантатов почек является метод сохранение холодной бескислородной хранения. В настоящее время, трансплантаты почек хранятся статически на льду или перфузии при 4 ° С в отсутствие кислорода. Холодный бескислородной метод сохранения связан с постоянной травмы трансплантата при консервировании почки и не позволяет оценку трансплантата из-за отсутствия Metabolism и производство мочи. В частности, предельные трансплантаты почек терпеть холодного хранения плохо, что приводит к значительным травмам почек, и высокие темпы задержки функции трансплантата (DGF) 8,9. DGF является прогностическим фактором для бедных долгосрочного функции трансплантата. Экстракорпоральное перфузии почек представляет собой альтернативный метод для сохранения, оценки и ремонта органов. В свиной модели, положительные результаты были представлены почек перфузии экс естественных условиях под нормотермических 10,11. Первое клиническое испытание выполняется в 2013 году продемонстрировали более низкий уровень задержки функции трансплантата почки при извлеченные из расширенные критерии доноров перфузии в течение 1 часа непосредственно перед трансплантацией 12. Эта статья представляет собой модель нормотермической экс естественных условиях почечной перфузии (NEVKP). Целью данного исследования является снижение применяется время холодной ишемии до минимума и продлить срок NEVKP. NEVKPэто альтернативный способ сохранения, который стремится уменьшить ущерб, который может быть вызван методами холодной хранения.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neonatal cardiopulmonary bypass technology</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td>Custom made</td>
			<td>Neonatal venous reservoir D100 (500 mL, 1/16&#34; in- and outflow), neonatal oxygenator D100, centrifugal pump head (Revolution), arterial bubble filter (D130)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heart lung machine, St&#246;ckert S3</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td>Custom made</td>
			<td>Centrifugal pump, roller pump, control panel (sensors for pressure, flow, temperature, bubbles, and level), oxygen blender, heater unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="3">Tubing</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td>01906BPC SG XS</td>
			<td>3/16&#34;x 1/16&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>019071PC SG XS</td>
			<td>1/4&#34;x 1/16&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>019060PC SG XH</td>
			<td>3/8&#34;x 1/16&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing connectors</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td></td>
			<td>Various sizes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STEEN solution</td>
			<td>XVIVO (G&#246;teborg, SWE)</td>
			<td>19004</td>
			<td>200 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer&#39;s lactate</td>
			<td>Baxter (Mississauga, ON, CAN)</td>
			<td>JB2324</td>
			<td>175 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Hospira (Montr&#233;al, QC, CAN)</td>
			<td>6625050</td>
			<td>pH dependent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium gluconate</td>
			<td>Pharmaceutical Partners of Canada (Richmond Hill, ON)</td>
			<td>C31110</td>
			<td>Calcium dependent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Sandoz Canada Inc (Toronto, ON, CAN)</td>
			<td>10750</td>
			<td>1000 IU</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amino acid and glucose, Travasol 10%</td>
			<td>Baxter (Mississauga, ON, CAN)</td>
			<td>JB6760</td>
			<td>1 mL/h</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast acting insulin, Novorapid</td>
			<td>Novo Nordisk Canada Inc (Mississauga, ON, CAN)</td>
			<td>DS6H748</td>
			<td>5 IE/h</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Verapamil</td>
			<td>Sandoz Canada Inc (Quebec, QC, CAN)</td>
			<td>52216</td>
			<td>0,25 mg/h</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

normothermic ex vivo kidney perfusion for the preservation of kidney grafts prior to transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a serious problem. Therefore, the acceptance criteria for organ donors have been extended leading to the usage of marginal kidney grafts. These marginal organs tolerate cold storage poorly resulting in increased preservation injury and higher rates of delayed graft function. To overcome the limitations of cold storage, extensive research is focused on alternative normothermic preservation methods.
Ex vivo normothermic organ perfusion is an innovative preservation technique. The first experimental and clinical trials for ex vivo lung, liver, and kidney perfusions demonstrated favorable outcomes.
In addition to the reduction of cold ischemic injury, the method of normothermic kidney storage offers the opportunity for organ assessment and repair. This manuscript provides information about kidney retrieval, organ preservation techniques, and isolated ex vivo normothermic kidney perfusion (NEVKP) in a porcine model. Surgical techniques, set up for the perfusion solution and the circuit, potential assessment options, and representative results are demonstrated.

В итогам шести экспериментов с использованием модели извлечения почек сердца биться представлены. После того как в месте флеш и поиска почек, трансплантаты были сохранены на льду в течение 3 ч (СКС), а эритроциты были подготовлены. Для клинической, это имитирует время, необходимое для поиска и подготовки рольганг. NEVKP проводили в течение 10 ч. Для поддержания физиологических условий и моделировать в естественных условиях окружающей для почек, камера орган должен нагреваться и опечатаны. Перфузии и решение замена мочи должны представлять физиологические значения для анализа газов крови, онкотического давления и осмолярности. Нормальные значения (исходных значений), полученных из йоркширских свиней на месте, расположены в каждом описании фигуры, соответственно (фиг 3 - 13). Целью NEVKP является обеспечение того, трансплантат поставляется с достаточным количеством кислорода и питательных веществ. Как ишемии окиспользует сужение сосудов, тем самым увеличивая сопротивление внутрипочечный, достижения постоянного потока со стабильным давлением хороший показатель для адекватной оксигенации. После того как температура целевого привитого 37 ° С достигается с помощью согревания органа после СКС, значения потока и сопротивление внутрипочечный остаются стабильными при постоянной физиологической давлении около 60-80 мм рт.ст. в течение всего перфузии (Рисунки 3 и 4). Количество мочи производства зависит в основном от состава перфузии раствора (рисунок 5). Часовые измерения венозного и артериального рО 2 выявить метаболическую активность почек. Потребление кислорода рассчитывали, используя уравнение ((рО 2 искусство - рО 2 вэн) х потока / вес) (Рисунок 6) 14. Во время перфузии рН, НСО 3, и электролиты являются стабильными, не требуя вмешательства (Рисунки 7 - 10). В режиме реального времени, какТ и лактата измерения служат для контроля клеточного повреждения. Никакое увеличение параметров повреждения клеток не обнаружено в течение периода NEVKP (11 и 12). Осмолярность перфузии раствор стабилен (рисунок 13). Гистологическое оценка показывает незначительные изменения (рис 14 - 16). <img alt="Рисунок 3" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig3.jpg" /> Рисунок 3. Среднее артериальное потока со стандартным отклонением (мл / мин). В течение всего перфузии поток остается в физиологическом диапазоне. Свиные физиологические значения, измеренные на месте: значит, искусство. расход: 170 ± 57 мл / мин (диапазон 83 - 325 мл / мин). <img alt="Рисунок 4" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig4.jpg" /> Рисунок 4. Интраренальная сопротивление (IRR), среднее и стандартное отклонение (мм рт.ст. / </strong&gt; Мл / мин). Среднее артериальное давление (САД) остается постоянной от 60 до 80 мм рт. Внутрипочечный сопротивление ниже 0,5 мм рт.ст. / мл / мин постоянно. <img alt="Рисунок 5" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig5.jpg" /> Рисунок 5. Общий объем мочи, среднее и стандартное отклонение (мл). Общий объем мочи в основном зависит от состава раствора перфузии. Чем выше онкотического давления и осмолярность, тем ниже производство мочи. <img alt="Рисунок 6" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig6.jpg" /> Рисунок 6. Расход кислорода, среднее и стандартное отклонение (мл / мин / г). <img alt="Рисунок 7" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig7.jpg" /> Рисунок 7. рН венозной, среднее и стандартное отклонение. РН РЕМАмодули постоянной в физиологическом диапазоне без введения бикарбонатов. Свиные физиологические значения, измеренные на месте: рН 7,46 ± 0,06 (диапазон 7,34 - 7,63). <img alt="Рисунок 8" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig8.jpg" /> Рисунок 8. НСО 3 венозная, среднее и стандартное отклонение (ммоль / л). НСО 3 остается в физиологических пределах без введения бикарбонатов. Свиные физиологические значения, измеренные на месте: HCO 3 30,3 ± 2,4 ммоль / л (диапазон 21,6 - 35,8 ммоль / л). <img alt="Рисунок 9" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig9.jpg" /> 9. Венозный концентрация натрия, среднее и стандартное отклонение (ммоль / л). Натрия остается в физиологическом диапазоне. Свиные физиологические значения, измеренные на месте: 137,1 &amp;# 177; 3,8 ммоль / л (диапазон 118,7 - 140,9 ммоль / л). <img alt="Рисунок 10" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig10.jpg" /> 10. Венозный концентрация калия, среднее и стандартное отклонение (ммоль / л). Калия остается постоянной в физиологическом диапазоне. Свиные физиологические значения, измеренные на месте: 3,85 ± 0,46 ммоль / л (диапазон 3,5 - 5,36 ммоль / л). <img alt="Рисунок 11" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig11.jpg" /> Рисунок 11. Венозная аспартатаминотрансферазы, среднее и стандартное отклонение. (АСТ, U / L) экс естественных нормотермической перфузии почек, АСТ демонстрирует повреждение клеток маркер. Значения АСТ являются низкими на протяжении перфузии. <img alt="Рисунок 12" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig12.jpg" /> Рисунок 12: лактат<html> , Среднее и стандартное отклонение (ммоль / л). В естественных условиях экс нормотермической перфузии почек, лактат представляет собой повреждение клеток маркер. Значения являются стабильными в течение перфузии. <img alt="Рисунок 13" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig13.jpg" /> Рисунок 13:. Осмолярность сыворотки, среднее и стандартное отклонение (мОсм / л) постоянным осмолярность в перфузии раствором обеспечивает низкую, но постоянное производство мочи. Свиные физиологические значения, измеренные на месте: 282 ± 1,7 мОсм / л (диапазон 279 - 283 мОсм / л). <img alt="Рисунок 14" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig14.jpg" /> Рисунок 14:. Гистология (H &amp; E) 50X / 200X увеличение в кортико перехода показывая мягкий трубчатый вакуолизацию. Никаких признаков некроза.Arget = &quot;_ пустое&quot;&gt; Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры. <img alt="Рисунок 15" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig15.jpg" /> Рисунок 15: Гистология (ССА) 50X / 200X увеличение в кортико перехода показывая мягкий трубчатый вакуолизацию.. Никаких признаков некроза. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52909/52909fig15large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, не нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенное версию этой фигуры.</a> <img alt="Рисунок 16" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig16.jpg" /> Рисунок 16:. Гистология (TUNEL окрашивание) 25X / 200X увеличения. Очень редко ядра окрашиваются демонстрируя очень низкие цены апоптоза. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52909/52909fig16large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation at JoVE.com

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Острая нехватка органов привели к увеличению использования маргинальных трансплантатов почек для трансплантации. Это вызвало интерес к альтернативным методам хранения, так как предельные трансплантаты особенно терпеть холодного хранения плохо. Техника нормотермической экс естественных условиях почечной перфузии (NEVKP) представляет собой новый способ сохранения для трансплантатов почек до трансплантации.

Нормотермических<em&gt; Экс Vivo</em&gt; Почки перфузии по охране почки графты до трансплантации

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Метод мышей Изоляция Островок и субкапсулярной трансплантации почек

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Методика Subnormothermic<em&gt; Экс Vivo</em&gt; Печень перфузии для хранения, оценки и Ремонт окраинных печени трансплантатов

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Мышь трансплантации почки: Модели аллотрансплантата Отказ

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Экс Ситу нормотермических машина перфузии Печени доноров

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Функциональная печени человека Сохранение и восстановление с помощью Subnormothermic машины перфузии

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Murine Kidney Transplant Technique

Мышиные трансплантации почек Техника

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

Мелких животных модель Ex Vivo нормотермических печени перфузии

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Optical Clearing and Imaging of Immunolabeled Kidney Tissue

Оптическая очистка и визуализация иммуномаркированных тканей почек

Optical clearing techniques render tissue transparent by equilibrating the refractive index throughout a sample for subsequent three-dimensional (3-D) ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

Ортопедическая трансплантация почек в свиной модели с использованием 24 часов сохранения органов и непрерывной телеметрии

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...