Name: instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research
Uploaded: 2015-08-31T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research at JoVE.com

Følgende protokol beskriver et system, der fungerer godt i 20-35 g mus. Fremgangsmåden kunne nemt kunne tilpasses til større eller mindre mus ved blot at ændre kateteret størrelse. Alle dyr protokoller blev godkendt af Johns Hopkins University Animal Care og brug Udvalg. 1. Lung Instillation <ol><li> Vælg en kommerciel én-tommer lange 20 g intravenøs kanyle bruge til intubation. </li><li> Ændre kateterspidsen manuelt at bøje det til at generere en let krumning ved spidsen, som <s...

<ol>
	<li>Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+of+endotracheal+intubation+and+pulmonary+functional+assessment+for+repeated+studies+in+mice.">A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice.</a> J Appl Physiol. 87, 2362-2365 (1999).</li><li>Walters, D. M., Wills-Karp, M., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+cellular+profile+and+lung+function+with+repeated+bronchoalveolar+lavage+in+individual+mice.">Assessment of cellular profile and lung function with repeated bronchoalveolar lavage in individual mice.</a> Physiol Genomics. 2, 29-36 (2000).</li><li>Hamacher, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+wire+guide-based+orotracheal+mouse+intubation:+description,+evaluation+and+comparison+with+transillumination.">Microscopic wire guide-based orotracheal mouse intubation: description, evaluation and comparison with transillumination.</a> Laboratory animals. 42, 222-230 (2008).</li><li>Spoelstra, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+simple+method+for+endotracheal+intubation+of+mice.">A novel and simple method for endotracheal intubation of mice.</a> Laboratory. 41, 128-135 (2007).</li><li>Zhao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+retrograde+intubation+in+mice.">A technique for retrograde intubation in mice.</a> Lab animal. 35, 39-42 (2006).</li><li>Rivera, B., Miller, S., Brown, E., Price, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+endotracheal+intubation+of+mice+and+rats+used+in+imaging+studies.">A novel method for endotracheal intubation of mice and rats used in imaging studies.</a> Contemporary topics in laboratory animal science / American Association for Laboratory Animal Science. 44, 52-55 (2005).</li><li>Vergari, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+of+orotracheal+intubation+in+mice.">A new method of orotracheal intubation in mice.</a> European review for medical and pharmacological sciences. 8, 103-106 (2004).</li><li>Vergari, A., Polito, A., Musumeci, M., Palazzesi, S., Marano, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Video-assisted+orotracheal+intubation+in+mice.">Video-assisted orotracheal intubation in mice.</a> Laboratory animals. 37, 204-206 (2003).</li><li>Hastings, R. H., Summers-Torres, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Laryngoscopy+in+Mice.">Direct Laryngoscopy in Mice.</a> Contemporary topics in laboratory animal science / American Association for Laboratory Animal Science. 38, 33-35 (1999).</li><li>Hsia, C. C., Hyde, D. M., Ochs, M., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+official+research+policy+statement+of+the+American+Thoracic+Society/European+Respiratory+Society:+standards+for+quantitative+assessment+of+lung+structure.">An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure.</a> Am J Respir Crit Care Med. 181, 394-418 (2010).</li><li>Foster, W. M., Walters, D. M., Longphre, M., Macri, K., Miller, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodology+for+the+measurement+of+mucociliary+function+in+the+mouse+by+scintigraphy.">Methodology for the measurement of mucociliary function in the mouse by scintigraphy.</a> J Appl Physiol. 90, 1111-1117 (2001).</li><li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung.">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50601 (2013).</li><li>Das, S., Macdonald, K., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+of+mouse+lung+intubation.">A simple method of mouse lung intubation.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2013).</li><li>MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+simple+method+of+mouse+lung+intubation.">An improved simple method of mouse lung intubation.</a> J Appl Physiol. 106, 984-987 (2009).</li><li>Lum, H., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+10%+formalin+fixation+on+fixed+lung+volume+and+lung+tissue+shrinkage.">Effects of 10% formalin fixation on fixed lung volume and lung tissue shrinkage.</a> American Reveiw of Respiratory Diseases. 132, 1078-1083 (1985).</li><li>Bishai, J., Fields, M. J., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Mouse+Lung+Volumes+Inflated+with+Air+and+Instilled+Fixatives.">Comparison of Mouse Lung Volumes Inflated with Air and Instilled Fixatives.</a> Proc Am Thorac Soc. 3, A549 (2006).</li><li>Mitzner, W., Brown, R., Lee, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+measurement+of+lung+volumes+in+mice.">In vivo measurement of lung volumes in mice.</a> Physiol Genomics. 4, 215-221 (2001).</li></ol>

De her beskrevne procedurer har flere fordele. Først det nødvendige udstyr er enkel og billig. For det andet kan intubation hurtigt gøres med få fejl. For det tredje, evnen til at løse lungerne ved et konstant tryk, og derefter måle lungevolumen fast tillader korrekt kvantificering af strukturer eller celler i lungen 10. En mulig nedadrettede til intubation er den mindre operation. Dette kan begrænse muligheden for at gentage proceduren, hvis en 2. instillation e...

For en række årsager, lungekræft ikke har været meget undersøgt i mus. En af grundene til dette er, at er meget vanskelig adgang til lungerne in vivo og kvantitativ analyse af faste lunger er ikke almindeligt gjort. Beskrevet i dette papir metoder er designet til at afhjælpe denne situation. Målene heri er at beskrive simple metoder, der i høj grad vil hjælpe til opsætning og analyse af muselunger med lungecancer eller andre patologier. Mens ingen af ​​disse metoder er helt ny, er de ikke blevet præsenteret sammen som enkeltstående metoder i den forenklede måde som beskrevet her. Der har været en række af manuskripter, der har beskrevet fremgangsmåder til intubation af muselunge primært med det formål at gøre gentagen lungefunktion eller bronchoalveolær udskylning i individuelle mus i langsgående undersøgelser. Siden den oprindelige papir, har der været flere andre papirer, der har beskrevet forskellige tilgange til musene intubation 1 -9. Mens alle disse metoder kan anvendes med succes, de normalt kræver betydelig træning, og er ofte ikke uden en nontrivial fejlrate. Desuden, med henblik på at udføre målinger af lungefunktionen, kanylen skal passe luftrøret tæt nok til, at der ikke er nogen utætheder. , En anden praktisk anvendelse til intubation er imidlertid at levere specifikke midler (cancerceller eller andre fornærmelser) eller terapeutiske lægemidler direkte til lungerne. En sådan procedure kræver ikke en tætsluttende kanyle eller nogen sofistikeret lungefunktion udstyr. Det hidtil ukendte træk ved denne fremgangsmåde er vist her involverer et mindre kirurgisk procedure, der gør det muligt for intubation uden mulighed for kanylen ind i spiserøret. Denne enkle tilgang gør det muligt vellykket intubation med relativt lidt uddannelse eller erfaring. Så mange som 30 mus / h kan behandles ved hjælp af denne metode med en fejlrate nærmer sig nul. Når than mus er klar til at blive aflivet, tilskadekomne eller kræft lunger kan derefter fjernes til histologisk og patologisk analyse. , Med henblik på korrekt kvantificere eventuelle histologiske variabler til sammenligning med andre lunger, er det vigtigt at standardisere de fikseringen og ordentligt kvantificere lungevolumen 10 fast. Dette papir beskriver detaljeret de enkle procedurer, som giver standardiserede fikseringen samt en måde at måle lungevolumen fast. Lydstyrken er en væsentlig parameter i kvantificeringen af histologi, da, kan måles 10 uden en sådan volumen bestemmelse kun relative tætheder. Når lungevolumen er imidlertid kendt, kan derefter kvantificeres absolutte målinger af celler og andre strukturelle målinger i lungen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Laboratory Balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>Adventurer Pro Model AV 313&#160;</td>
			<td>Other balances can be used if they have a range of 1 - 300g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 g Luer intravenous catheter</td>
			<td>Insylte</td>
			<td></td>
			<td>Several other possible vendors, e.g., Jelco Optiva</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500 mL laboratory bottle</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>Several other possible vendors</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research

Evnen til at indpode levende midler, celler eller kemikalier direkte i lungerne uden at beskadige eller dræbe musene er et vigtigt redskab i lungekræft forskning. Selv om der er en række metoder, der er blevet offentliggjort viser, hvordan intubationstid mus for lungefunktionen målinger, ingen er uden potentielle problemer for hurtig tracheal instillation i store kohorter af mus. I nærværende papir, er en enkel og hurtig metode beskrevet som muliggør en investigator at udføre sådanne instillationer på en effektiv måde. Metoden kræver ingen specielle værktøjer eller belysning og kan læres med meget lidt praksis. Det indebærer at bedøve en mus, hvilket gør et lille snit i nakken for at visualisere luftrøret, og derefter indsætte en intravenøs kateter direkte. Den lille snit er lukkede hurtigt med vævet klæbemiddel og musene fik lov til at komme sig. En dygtig studerende eller tekniker kan gøre instillationer til en gennemsnitlig hastighed på 2 min / mus. Når tHan cancer er etableret, er der ofte behov for en kvalitativ analyse af histologiske lungerne. Traditionelt patologer normalt ikke gider at standardisere lunge inflation under fiksering og analyser er ofte baseret på et pointsystem, der kan være ganske subjektivt. Mens dette engang kan være tilstrækkeligt tilstrækkelige til grove skøn over størrelsen af ​​en lunge tumor, enhver ordentlig stereologiske kvantificering af lungestrukturen eller celler kræver en reproducerbar fikseringsproceduren og efterfølgende måling lungevolumen. Her beskriver vi enkle pålidelige procedurer for både fastsættelse lungerne under tryk og derefter nøjagtig måling lunge volumen fast. Det eneste krav er et laboratorium balance, er nøjagtig over et område på 1 mg-300 g. Procedurerne præsenteres her kunne derfor i høj grad forbedre evnen til at skabe, behandle og analysere lungekræft i mus.

Proceduren beskriver i den første protokol ikke i sig selv føre til nogen generelle resultater. Det beskriver kun en meget pålidelig middel til at bibringe stoffer direkte ind i luftrøret. Figur 7 viser et eksempel på en lunge, hvor trypanblåt blev indpodet med den her beskrevne fremgangsmåde. Der er udbredt fordeling af farvestoffet, svarende til hvad der er blevet observeret med andre farvestoffer eller sporstoffer gives direkte ind i trachea eller mus 11,12. Vi har også anvendt den...

Watch this Scientific Journal Video about Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research at JoVE.com

Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research

Målet med dette papir er at beskrive enkle metoder, der i høj grad vil hjælpe i setup og analyse af muselunger med lungekræft eller andre patologier. Vi præsenterer 3 protokoller enkelt og pålideligt at udføre lunge instillationer, fiksering og lunge volumen målinger.

Inddrypning og fikseringsmetoder Nyttige i muselunge Cancer Research

The ability to instill live agents, cells, or chemicals directly into the lung without injuring or killing the mice is an important tool in lung cancer ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Multi-modal Imaging of Angiogenesis in a Nude Rat Model of Breast Cancer Bone Metastasis Using Magnetic Resonance Imaging, Volumetric Computed Tomography and Ultrasound

Multi-modal Imaging af angiogenese i en nøgen rotte model af Breast Cancer knoglemetastaser Brug Magnetic Resonance Imaging, Volumetrisk Computed Tomography og Ultralyd

Angiogenesis is an essential feature of cancer growth and metastasis formation. In bone metastasis, angiogenic factors are pivotal for tumor cell ...

A Simple Method of Mouse Lung Intubation

En simpel metode til Mouse Lung Intubation

A  simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would  have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or  ...

Noninvasive Intratracheal Intubation to Study the Pathology and Physiology of Mouse Lung

Noninvasiv Intratracheal Intubation til at studere Patologi og fysiologi Mouse Lung

The use of a model that mimics the condition of lung diseases in humans is critical for studying the pathophysiology and/or etiology of a particular ...

Diagnostic Ultrasound Imaging of Mouse Diaphragm Function

Diagnostisk Ultralydbilleddannelse of Mouse Membran Funktion

Function analysis of rodent respiratory skeletal muscles, particularly the diaphragm, is commonly performed by isolating muscle strips using invasive ...

The Bovine Lung in Biomedical Research: Visually Guided Bronchoscopy, Intrabronchial Inoculation and In Vivo Sampling Techniques

The Bovine Lung in Biomedical Research: Visually Guided Bronchoscopy, Intrabronchial Inoculation and In Vivo Sampling Techniques

Den Bovine Lung i biomedicinsk forskning: Visuelt Guided bronkoskopi, intrabronchial Podning og<em&gt; In Vivo</em&gt; stikprøveteknikker

There is an ongoing search for alternative animal models in research of respiratory medicine. Depending on the goal of the research, large animals as ...

Intubation-mediated Intratracheal (IMIT) Instillation: A Noninvasive, Lung-specific Delivery System

Intubation-mediated Intratracheal IMIT Instillation: A Noninvasive, Lung-specific Delivery System

Intubation-medieret Intratracheal (IMIT) Instillation: en noninvasiv, Lunge-specifik Delivery System

Respiratory disease studies typically involve the use of murine models as surrogate systems. However, there are significant physiologic differences ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Studere i bugspytkirtlen Kræft stamceller Karakteristik for udvikling af nye behandlingsstrategier

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Arbejde med Humane væv til Translationel kræftforskning

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR

Evaluering af lungemetastase i musebrysttumor modeller af kvantitativ real-time PCR

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated ...