Name: instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research
Uploaded: 2015-08-31T14:00:00
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Il protocollo che segue descrive un sistema che funziona bene in 20-35 g topi. Il metodo può essere facilmente adattabile a topi grandi o più piccoli semplicemente modificando la dimensione del catetere. Tutti i protocolli di animali sono stati approvati dalla Università cura e l&#39;uso degli animali Comitato Johns Hopkins. 1. Lung instillazione <ol><li> Selezionare un lungo 20 g cannula commerciale un pollice endovenosa da utilizzare per l&#39;intubazione. </li><li> Modificare il cate...

<ol>
	<li>Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+of+endotracheal+intubation+and+pulmonary+functional+assessment+for+repeated+studies+in+mice.">A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice.</a> J Appl Physiol. 87, 2362-2365 (1999).</li><li>Walters, D. M., Wills-Karp, M., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+cellular+profile+and+lung+function+with+repeated+bronchoalveolar+lavage+in+individual+mice.">Assessment of cellular profile and lung function with repeated bronchoalveolar lavage in individual mice.</a> Physiol Genomics. 2, 29-36 (2000).</li><li>Hamacher, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+wire+guide-based+orotracheal+mouse+intubation:+description,+evaluation+and+comparison+with+transillumination.">Microscopic wire guide-based orotracheal mouse intubation: description, evaluation and comparison with transillumination.</a> Laboratory animals. 42, 222-230 (2008).</li><li>Spoelstra, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+simple+method+for+endotracheal+intubation+of+mice.">A novel and simple method for endotracheal intubation of mice.</a> Laboratory. 41, 128-135 (2007).</li><li>Zhao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+retrograde+intubation+in+mice.">A technique for retrograde intubation in mice.</a> Lab animal. 35, 39-42 (2006).</li><li>Rivera, B., Miller, S., Brown, E., Price, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+endotracheal+intubation+of+mice+and+rats+used+in+imaging+studies.">A novel method for endotracheal intubation of mice and rats used in imaging studies.</a> Contemporary topics in laboratory animal science / American Association for Laboratory Animal Science. 44, 52-55 (2005).</li><li>Vergari, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+of+orotracheal+intubation+in+mice.">A new method of orotracheal intubation in mice.</a> European review for medical and pharmacological sciences. 8, 103-106 (2004).</li><li>Vergari, A., Polito, A., Musumeci, M., Palazzesi, S., Marano, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Video-assisted+orotracheal+intubation+in+mice.">Video-assisted orotracheal intubation in mice.</a> Laboratory animals. 37, 204-206 (2003).</li><li>Hastings, R. H., Summers-Torres, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Laryngoscopy+in+Mice.">Direct Laryngoscopy in Mice.</a> Contemporary topics in laboratory animal science / American Association for Laboratory Animal Science. 38, 33-35 (1999).</li><li>Hsia, C. C., Hyde, D. M., Ochs, M., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+official+research+policy+statement+of+the+American+Thoracic+Society/European+Respiratory+Society:+standards+for+quantitative+assessment+of+lung+structure.">An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure.</a> Am J Respir Crit Care Med. 181, 394-418 (2010).</li><li>Foster, W. M., Walters, D. M., Longphre, M., Macri, K., Miller, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodology+for+the+measurement+of+mucociliary+function+in+the+mouse+by+scintigraphy.">Methodology for the measurement of mucociliary function in the mouse by scintigraphy.</a> J Appl Physiol. 90, 1111-1117 (2001).</li><li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung.">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50601 (2013).</li><li>Das, S., Macdonald, K., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+of+mouse+lung+intubation.">A simple method of mouse lung intubation.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2013).</li><li>MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+simple+method+of+mouse+lung+intubation.">An improved simple method of mouse lung intubation.</a> J Appl Physiol. 106, 984-987 (2009).</li><li>Lum, H., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+10%+formalin+fixation+on+fixed+lung+volume+and+lung+tissue+shrinkage.">Effects of 10% formalin fixation on fixed lung volume and lung tissue shrinkage.</a> American Reveiw of Respiratory Diseases. 132, 1078-1083 (1985).</li><li>Bishai, J., Fields, M. J., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Mouse+Lung+Volumes+Inflated+with+Air+and+Instilled+Fixatives.">Comparison of Mouse Lung Volumes Inflated with Air and Instilled Fixatives.</a> Proc Am Thorac Soc. 3, A549 (2006).</li><li>Mitzner, W., Brown, R., Lee, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+measurement+of+lung+volumes+in+mice.">In vivo measurement of lung volumes in mice.</a> Physiol Genomics. 4, 215-221 (2001).</li></ol>

Le procedure qui descritte hanno diversi vantaggi. Innanzitutto l&#39;attrezzatura necessaria è semplice e poco costoso. In secondo luogo, l&#39;intubazione può essere rapidamente fatto con pochi errori. In terzo luogo, la possibilità di fissare i polmoni a pressione costante, e quindi misurare il volume polmonare numeri consente un&#39;adeguata quantificazione delle strutture o cellule nel polmone 10. Un possibile inconveniente: l&#39;intubazione è la chirurgia minore. Ciò p...

Per una serie di ragioni, cancro polmonare non è stata ampiamente studiata nel topo. Una ragione di ciò è che l&#39;accesso al polmone in vivo è molto difficile, e l&#39;analisi quantitativa dei polmoni fissi non viene comunemente fatto. I metodi descritti in questo documento sono stati progettati per porre rimedio a questa situazione. Gli obiettivi sono qui per descrivere i metodi semplici che sarà di grande aiuto nella messa a punto e l&#39;analisi dei polmoni del mouse con cancro ai polmoni o altre patologie. Anche se nessuno di questi approcci sono del tutto nuova, che non sono state presentate insieme come metodi autonomi in maniera semplificata come descritto qui. Ci sono stati una serie di manoscritti che sono descritti i metodi per l&#39;intubazione del polmone del mouse principalmente al fine di fare della funzione polmonare di ripetizione o lavaggio broncoalveolare nei singoli topi in studi longitudinali. Dato che la carta originale, ci sono stati diversi altri giornali che hanno descritto i diversi approcci per protocolli d&#39;intesae intubazione 1 -9. Mentre tutti questi metodi possono essere usati con successo, di solito richiedono un notevole addestramento, e non sono spesso senza un tasso di fallimento non banale. Inoltre, al fine di effettuare misure di funzionalità polmonare, la cannula deve misura trachea abbastanza saldamente in modo che non ci siano perdite di aria. Tuttavia, un altro uso pratico per intubazione è quello di fornire agenti specifici (le cellule del cancro o altri insulti) o di farmaci terapeutici direttamente al polmone. Tale procedura non richiede una cannula aderente né sofisticate apparecchiature di funzionalità polmonare. La caratteristica innovativa di questo metodo qui illustrato prevede una procedura chirurgica minore che consente intubazione senza possibilità di cannula entrare nell&#39;esofago. Questo semplice approccio consente intubazione di successo con relativamente poca formazione o esperienza. Fino a 30 topi / ora possono essere trattati con questo approccio con un tasso di fallimento si avvicina allo zero. Una volta che tegli topi sono pronti per essere sacrificato, i polmoni feriti o cancerose possono poi essere rimossi per istologico e l&#39;analisi patologica. Tuttavia, al fine di quantificare correttamente eventuali variabili istologiche per il confronto con altre polmoni, è essenziale standardizzare le procedure di fissaggio e quantificare correttamente il volume polmonare fisso 10. Questo documento descrive in dettaglio le semplici procedure che consentano procedure di fissaggio standardizzati, nonché un metodo per misurare il volume polmonare fisso. Il volume è una metrica essenziale nella quantificazione della istologia, poiché altrimenti la determinazione del volume, solo densità relative possono essere misurati 10. Una volta che il volume polmonare è noto, tuttavia, le misurazioni assolute di cellule e di altre misure strutturali nel polmone possono essere quantificati.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Laboratory Balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>Adventurer Pro Model AV 313&#160;</td>
			<td>Other balances can be used if they have a range of 1 - 300g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 g Luer intravenous catheter</td>
			<td>Insylte</td>
			<td></td>
			<td>Several other possible vendors, e.g., Jelco Optiva</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500 mL laboratory bottle</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>Several other possible vendors</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research

La capacità di infondere agenti dal vivo, cellule o sostanze chimiche direttamente nel polmone senza ferire o uccidere i topi è uno strumento importante per la ricerca sul cancro al polmone. Anche se ci sono una serie di metodi che sono stati pubblicati che mostra come intubare topi per le misure di funzionalità polmonare, nessuno è senza i potenziali problemi per una rapida instillazione tracheale in grandi coorti di topi. Nel presente lavoro, un metodo semplice e rapido è descritto che consente un investigatore effettuare tali instillazioni in modo efficiente. Il metodo non richiede utensili speciali o illuminazione e può essere appreso con molto poca pratica. Si tratta anestetizzante un mouse, una piccola incisione nel collo di visualizzare la trachea, e quindi inserendo direttamente un catetere endovenoso. La piccola incisione viene rapidamente chiuso con tessuto adesivo, ei topi sono autorizzati a recuperare. Uno studente qualificato o tecnico può fare instillazioni ad un tasso medio di 2 min / mouse. Una volta che tegli cancro è stabilito, vi è spesso una necessità di un&#39;analisi istologica quantitativa dei polmoni. Tradizionalmente patologi di solito non si preoccupano di standardizzare inflazione polmone durante la fissazione, e le analisi si basano spesso su un sistema di punteggio che può essere molto soggettiva. Mentre questo può talvolta essere sufficientemente adeguata stime grossolane delle dimensioni di un tumore del polmone, qualsiasi corretta quantificazione stereologica struttura polmone o cellule richiede una procedura di fissazione riproducibile e la successiva volume polmonare. Qui si descrive semplici procedure affidabili per entrambi, che fissa i polmoni sotto pressione e poi misurare con precisione il volume polmonare fisso. L&#39;unico requisito è una bilancia da laboratorio che è accurato in un range di 1 mg-300 g. Le procedure qui presentate quindi potrebbero migliorare notevolmente la capacità di creare, trattare e analizzare tumori polmonari nei topi.

Il procedimento descritto nel primo protocollo non di per sé portare ad alcun risultato generalizzati. Esso descrive solo un mezzo molto affidabili per infondere sostanze direttamente nella trachea. Figura 7 mostra un esempio di un polmone in cui è stato instillato trypan blu con il metodo qui descritto. Vi è un&#39;ampia distribuzione del colorante, simile a quanto già visto con altri coloranti o traccianti forniti direttamente in trachea o topi 11,12. Abbiamo usato questo metodo per for...

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Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research

L&#39;obiettivo di questo lavoro è quello di descrivere i metodi semplici che sarà di grande aiuto nella messa a punto e l&#39;analisi dei polmoni del mouse con cancro ai polmoni o altre patologie. Vi presentiamo 3 protocolli modo semplice e affidabile per effettuare instillazioni polmone, la fissazione, e misurazioni del volume polmonare.

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