Name: instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research
Uploaded: 2015-08-31T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research at JoVE.com

Den følgende protokollen beskriver et system som fungerer godt i 20-35 g mus. Fremgangsmåten kan lett kunne tilpasses større eller mindre mus bare ved å endre kateteret størrelse. Alle dyre protokoller ble godkjent av Johns Hopkins-universitetet Animal Care og bruk komité. 1. Lung Instillasjon <ol><li> Velg en kommersiell one-tommers lang 20 g intravenøs kanyle skal brukes for intubasjon. </li><li> Endre kateterspissen manuelt å bøye den til å generere en svak krumning på spisse...

<ol>
	<li>Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+of+endotracheal+intubation+and+pulmonary+functional+assessment+for+repeated+studies+in+mice.">A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice.</a> J Appl Physiol. 87, 2362-2365 (1999).</li><li>Walters, D. M., Wills-Karp, M., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+cellular+profile+and+lung+function+with+repeated+bronchoalveolar+lavage+in+individual+mice.">Assessment of cellular profile and lung function with repeated bronchoalveolar lavage in individual mice.</a> Physiol Genomics. 2, 29-36 (2000).</li><li>Hamacher, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+wire+guide-based+orotracheal+mouse+intubation:+description,+evaluation+and+comparison+with+transillumination.">Microscopic wire guide-based orotracheal mouse intubation: description, evaluation and comparison with transillumination.</a> Laboratory animals. 42, 222-230 (2008).</li><li>Spoelstra, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+simple+method+for+endotracheal+intubation+of+mice.">A novel and simple method for endotracheal intubation of mice.</a> Laboratory. 41, 128-135 (2007).</li><li>Zhao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+retrograde+intubation+in+mice.">A technique for retrograde intubation in mice.</a> Lab animal. 35, 39-42 (2006).</li><li>Rivera, B., Miller, S., Brown, E., Price, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+endotracheal+intubation+of+mice+and+rats+used+in+imaging+studies.">A novel method for endotracheal intubation of mice and rats used in imaging studies.</a> Contemporary topics in laboratory animal science / American Association for Laboratory Animal Science. 44, 52-55 (2005).</li><li>Vergari, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+of+orotracheal+intubation+in+mice.">A new method of orotracheal intubation in mice.</a> European review for medical and pharmacological sciences. 8, 103-106 (2004).</li><li>Vergari, A., Polito, A., Musumeci, M., Palazzesi, S., Marano, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Video-assisted+orotracheal+intubation+in+mice.">Video-assisted orotracheal intubation in mice.</a> Laboratory animals. 37, 204-206 (2003).</li><li>Hastings, R. H., Summers-Torres, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Laryngoscopy+in+Mice.">Direct Laryngoscopy in Mice.</a> Contemporary topics in laboratory animal science / American Association for Laboratory Animal Science. 38, 33-35 (1999).</li><li>Hsia, C. C., Hyde, D. M., Ochs, M., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+official+research+policy+statement+of+the+American+Thoracic+Society/European+Respiratory+Society:+standards+for+quantitative+assessment+of+lung+structure.">An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure.</a> Am J Respir Crit Care Med. 181, 394-418 (2010).</li><li>Foster, W. M., Walters, D. M., Longphre, M., Macri, K., Miller, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodology+for+the+measurement+of+mucociliary+function+in+the+mouse+by+scintigraphy.">Methodology for the measurement of mucociliary function in the mouse by scintigraphy.</a> J Appl Physiol. 90, 1111-1117 (2001).</li><li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung.">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50601 (2013).</li><li>Das, S., Macdonald, K., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+of+mouse+lung+intubation.">A simple method of mouse lung intubation.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2013).</li><li>MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+simple+method+of+mouse+lung+intubation.">An improved simple method of mouse lung intubation.</a> J Appl Physiol. 106, 984-987 (2009).</li><li>Lum, H., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+10%+formalin+fixation+on+fixed+lung+volume+and+lung+tissue+shrinkage.">Effects of 10% formalin fixation on fixed lung volume and lung tissue shrinkage.</a> American Reveiw of Respiratory Diseases. 132, 1078-1083 (1985).</li><li>Bishai, J., Fields, M. J., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Mouse+Lung+Volumes+Inflated+with+Air+and+Instilled+Fixatives.">Comparison of Mouse Lung Volumes Inflated with Air and Instilled Fixatives.</a> Proc Am Thorac Soc. 3, A549 (2006).</li><li>Mitzner, W., Brown, R., Lee, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+measurement+of+lung+volumes+in+mice.">In vivo measurement of lung volumes in mice.</a> Physiol Genomics. 4, 215-221 (2001).</li></ol>

Fremgangsmåtene som beskrives her har flere fordeler. Først nødvendig utstyr er enkel og rimelig. For det andre kan den intubasjon raskt gjøres med få feil. For det tredje, kan evnen til å feste lungene ved et konstant trykk, og deretter måle den faste lungevolumet riktig kvantifisering av strukturer eller celler i lungen 10. En mulig ulempe til intubasjon er mindre operasjon. Dette kan begrense muligheten til å gjenta prosedyren dersom en 2 nd drypping er nødv...

For en rekke grunner, lungekreft har ikke blitt omfattende undersøkt i mus. En grunn til dette er at tilgang til lungen er meget vanskelig in vivo, og kvantitativ analyse av faste lungene vanligvis ikke utført. Metodene som beskrives i denne artikkelen er konstruert for å avhjelpe denne situasjonen. Målene her er å beskrive enkle metoder som vil i stor grad hjelpe til oppsett og analyse av muse lungene med lungekreft eller annen patologi. Mens ingen av disse metodene er helt nytt, de har ikke blitt presentert sammen som frittstående metoder i forenklet måte som beskrevet her. Det har vært en rekke manuskripter som er beskrevet fremgangsmåter for intubasjon av musen lunge primært i den hensikt å gjøre repetisjons lungefunksjon eller bronkoalveolar lavage på individuelle mus i de langsgående studier. Siden den opprinnelige papir, har det vært flere andre papirer som har beskrevet ulike tilnærminger til mouse intubasjon 1 -9. Mens alle disse metodene kan brukes med hell, de vanligvis krever betydelig trening, og er ofte ikke uten en nontrivial strykprosent. I tillegg, for å utføre lungemålinger funksjon, må kanylen for å passe inn i luftrøret godt nok slik at det ikke er noen luftlekkasje. Imidlertid er en annen praktisk anvendelse for intubasjon å levere spesifikke midler (kreftceller eller andre fornærmelser) eller terapeutiske legemidler direkte til lungene. En slik fremgangsmåte krever ikke en tettsittende kanyle og heller ikke noen avansert lungefunksjon utstyr. Det nye trekk ved denne fremgangsmåten vist her omfatter et mindre kirurgisk inngrep som tillater intubasjon uten noen mulighet for kanylen inn i spiserøret. Denne enkle tilnærmingen gjør vellykket intubasjon med relativt lite trening eller erfaring. Så mange som 30 mus / time kan behandles ved hjelp av denne tilnærmingen med en feilrate som nærmer seg null. Når tHan-mus er klar til å bli ofret, skadde eller kreft i lungene kan deretter bli fjernet for histologisk og patologisk analyse. Imidlertid, for å oppnå ønsket kvantifisere noen histologiske variabler for sammenligning med andre lungene, er det viktig å standardfesteprosedyrer og riktig kvantifisere den faste lungevolum 10. Dette dokumentet beskriver i detalj de enkle prosedyrer som tillater standardiserte festeprosedyrer, så vel som en metode for å måle den faste lungevolum. Volumet er en viktig metrisk i kvantifiseringen av histologi, siden uten et slikt volum bestemmelse, kan bare relative tettheter måles 10. Når lungevolumet er kjent, men absolutte målinger av celler og andre strukturelle målinger i lungen kan deretter kvantifiseres.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Laboratory Balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>Adventurer Pro Model AV 313&#160;</td>
			<td>Other balances can be used if they have a range of 1 - 300g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 g Luer intravenous catheter</td>
			<td>Insylte</td>
			<td></td>
			<td>Several other possible vendors, e.g., Jelco Optiva</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500 mL laboratory bottle</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>Several other possible vendors</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research

Evnen til å innpode levende agenter, celler eller kjemikalier direkte inn i lungene uten å skade eller drepe mus er et viktig verktøy i lungekreft forskning. Selv om det er en rekke metoder som har blitt publisert som viser hvordan du intubere mus for lungemålinger funksjon, ingen er uten potensielle problemer for rask tracheal drypping i store årskull av mus. I det foreliggende papir, er en enkel og rask metode som er beskrevet som lar en undersøker for å utføre slike instillasjoner på en effektiv måte. Metoden krever ingen spesielle verktøy eller belysning og kan læres med svært lite praksis. Det innebærer bedøvelse en mus, lage et lite snitt i nakken for å visualisere luftrøret, og deretter innføring av et intravenøst ​​kateter direkte. Den lite snitt er raskt lukket med vevlimet, og musene får lov til å komme seg. En dyktig student eller tekniker kan gjøre instillations til en gjennomsnittlig hastighet på 2 min / mus. Når tHan kreft er etablert, er det ofte et behov for kvantitativ histologisk analyse av lungene. Tradisjonelt patologer vanligvis ikke gidder å standardisere lunge inflasjon under fiksering, og analysene er ofte basert på et poengsystem som kan være ganske subjektiv. Selv om dette kan noen ganger være tilstrekkelig tilfredsstillende for grove beregninger av størrelsen av en lungetumor, en hvilken som helst passende stereological kvantifisering av lunge struktur eller celler krever en reproduserbar fremgangsmåte fiksering og påfølgende lungevolummåling. Her beskriver vi enkle pålitelige rutiner for både fikse lungene under press og deretter nøyaktig måling av fast lungevolum. Det eneste kravet er en laboratorie balanse som er nøyaktig over et område på 1 mg-300 g. Prosedyrene er presentert her og dermed kunne forbedre muligheten til å opprette, behandle og analysere lunge kreft hos mus.

Fremgangsmåten beskriver i den første protokoll ikke i seg selv medføre noen generaliserte resultater. Den beskriver bare en meget pålitelig metode for å innpode stoffer direkte inn i luftrøret. Figur 7 viser et eksempel på en lunge der trypanblått ble innpodet med metoden som er beskrevet her. Det er utbredt fordeling av fargestoffet, i likhet med det som har blitt observert med andre fargestoffer eller sporstoff som gis direkte inn i luftrøret eller mus 11,12. Vi har også brukt de...

Watch this Scientific Journal Video about Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research at JoVE.com

Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research

Målet med denne artikkelen er å beskrive enkle metoder som vil i stor grad hjelpe til oppsett og analyse av muse lungene med lungekreft eller annen patologi. Vi presenterer 3 protokoller for å enkelt og pålitelig utføre lunge instillations, fiksering, og lungevolummålinger.

Drypping og fiksering Nyttig i Mouse Lung Cancer Research

The ability to instill live agents, cells, or chemicals directly into the lung without injuring or killing the mice is an important tool in lung cancer ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Multi-modal Imaging of Angiogenesis in a Nude Rat Model of Breast Cancer Bone Metastasis Using Magnetic Resonance Imaging, Volumetric Computed Tomography and Ultrasound

Multi-modal Imaging av angiogenese i en Nude Rat Model of Breast Cancer Bone Metastase Bruke Magnetic Resonance Imaging, Volumetrisk computertomografi og ultralyd

Angiogenesis is an essential feature of cancer growth and metastasis formation. In bone metastasis, angiogenic factors are pivotal for tumor cell ...

A Simple Method of Mouse Lung Intubation

En enkel metode for Mouse Lung Intubasjon

A  simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would  have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or  ...

Noninvasive Intratracheal Intubation to Study the Pathology and Physiology of Mouse Lung

Noninvasive røret Intubering å studere patologi og fysiologi av Mouse Lung

The use of a model that mimics the condition of lung diseases in humans is critical for studying the pathophysiology and/or etiology of a particular ...

Diagnostic Ultrasound Imaging of Mouse Diaphragm Function

Diagnostic Ultrasound Imaging of Mouse Membran Funksjon

Function analysis of rodent respiratory skeletal muscles, particularly the diaphragm, is commonly performed by isolating muscle strips using invasive ...

The Bovine Lung in Biomedical Research: Visually Guided Bronchoscopy, Intrabronchial Inoculation and In Vivo Sampling Techniques

The Bovine Lung in Biomedical Research: Visually Guided Bronchoscopy, Intrabronchial Inoculation and In Vivo Sampling Techniques

Den Bovine Lung i biomedisinsk forskning: Visuelt Guidet Bronkoskopi, intrabronkial Pode og<em&gt; I Vivo</em&gt; sampling teknikker

There is an ongoing search for alternative animal models in research of respiratory medicine. Depending on the goal of the research, large animals as ...

Intubation-mediated Intratracheal (IMIT) Instillation: A Noninvasive, Lung-specific Delivery System

Intubation-mediated Intratracheal IMIT Instillation: A Noninvasive, Lung-specific Delivery System

Intubasjon-mediert intratrakeal (IMIT) Instillasjon: En Noninvasiv, Lung-spesifikke Delivery System

Respiratory disease studies typically involve the use of murine models as surrogate systems. However, there are significant physiologic differences ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Studerer Bukspyttkjertelkreft Stem Cell Kjennetegn for å utvikle nye behandlingsstrategier

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Arbeide med menneskelig vev for translasjonell kreftforskning

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR

Evaluering av Lung metastaser i Mouse Brysttumormodeller av kvantitativ real-time PCR

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated ...