Name: eye irritation test (eit) for hazard identification of eye irritating chemicals using reconstructed human cornea-like epithelial (rhce) tissue model
Uploaded: 2015-08-23T14:00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model at JoVE.com

De auteurs willen graag Dr John Harbell bedanken voor zijn wetenschappelijke ondersteuning en de tijd gewijd aan het EIT-project. De auteurs willen ook graag Beiersdorf AG (Duitsland), IIVS (USA), Mary Kay Inc (USA), Avon Products Inc. (VS), Procter &amp; Gamble / Cosmital (Zwitserland), Laboratoire Pierre Fabre (Frankrijk) te bedanken, Harlan Laboratories (Verenigd Koninkrijk), en LVMH Parfum (Frankrijk) voor deelname aan multi-center International Pre-validatie en validatie studies van de oogirritatietest 15.

<ol>
	<li>National Toxicology Program (NTP) Interagency Center for the Evaluation of Alternative Toxicological Methods (NICEATM). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Request+for+Ocular+Irritancy+Test+Data+From+Human,+Rabbit,+and+In+Vitro+Studies+Using+Standardized+Testing+Methods.">Request for Ocular Irritancy Test Data From Human, Rabbit, and In Vitro Studies Using Standardized Testing Methods.</a> Federal Register. 72 (109), 31582-31583 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+(EC)+No+1907/2006+of+the+European+Parliament+and+of+the+Council+of+18+December+2006+concerning+the+Registration,+Evaluation,+Authorisation+and+Restriction+of+Chemicals+(REACH),+establishing+a+European+Chemicals+Agency,+amending+Directive+1999/45/EC+and+repealing+Council+Regulation+(EEC)+No+793/93+and+Commission+Regulation+(EC)+No+1488/94+as+well+as+Council+Directive+76/769/EEC+and+Commission+Directives+91/155/EEC,+93/67/EEC,+93/105/EC+and+2000/21/EC.">Regulation (EC) No 1907/2006 of the European Parliament and of the Council of 18 December 2006 concerning the Registration, Evaluation, Authorisation and Restriction of Chemicals (REACH), establishing a European Chemicals Agency, amending Directive 1999/45/EC and repealing Council Regulation (EEC) No 793/93 and Commission Regulation (EC) No 1488/94 as well as Council Directive 76/769/EEC and Commission Directives 91/155/EEC, 93/67/EEC, 93/105/EC and 2000/21/EC.</a> OJ. L396 (49), 1-849 (2006).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (GHS). , (2013).</li><li>Draize, J. H., Woodard, G., Calvery, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+the+Study+of+Irritation+and+Toxicity+of+Substances+Applied+Topically+to+the+Skin+and+Mucous+Membranes.">Methods for the Study of Irritation and Toxicity of Substances Applied Topically to the Skin and Mucous Membranes.</a> J Pharmacol Exp Ther November. 82, 377-390 (1944).</li><li>Adriaens, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrospective+analysis+of+the+Draize+test+for+serious+eye+damage/eye+irritation:+importance+of+understanding+the+in+vivo+endpoints+under+UN+GHS/EU+CLP+for+the+development+and+evaluation+of+in+vitro+test+methods.">Retrospective analysis of the Draize test for serious eye damage/eye irritation: importance of understanding the in vivo endpoints under UN GHS/EU CLP for the development and evaluation of in vitro test methods.</a> Arch tox. 88, 701-723 (2014).</li><li>Balls, M., Botham, P. A., Bruner, L. H., Spielmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EC/HO+international+validation+study+on+alternatives+to+the+Draize+eye+irritation+test.">The EC/HO international validation study on alternatives to the Draize eye irritation test.</a> Toxicol in Vitro. 9, 871-929 (1995).</li><li>Curren, R. D., Harbell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+safety:+a+silent+(in+vitro)+success+story.">Ocular safety: a silent (in vitro) success story.</a> Altern Lab Anim. 30, 69-74 (2002).</li><li>Wilhelmus, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Draize+Eye+Test.">The Draize Eye Test.</a> Survey of Ophthalmology. 45, 493-515 (2001).</li><li>Curren, R. D., Harbell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+alternatives+for+ocular+irritation.">In vitro alternatives for ocular irritation.</a> Environ health persp. 106, 485-492 (1998).</li><li>McCain, N. E., Binetti, R. R., Gettings, S. D., Jones, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+ocular+irritation+ranges+of+market-leading+cosmetic+and+personal-care+products+using+an+in+vitro+tissue+equivalent.">Assessment of ocular irritation ranges of market-leading cosmetic and personal-care products using an in vitro tissue equivalent.</a> Toxicologist. 66, 243 (2002).</li><li>Niranjan, P., Dang, A. H., January, B. G., Gomez, C., Harbell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+EpiOcular+assay+for+preclinical+qualification+of+formulas+for+human+clinical+studies.">Use of the EpiOcular assay for preclinical qualification of formulas for human clinical studies.</a> Toxicologist. 96, 249 (2007).</li><li>Yin, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+ocular+irritation+potential+of+surfactants-based+formulations+at+different+concentrations+using+the+EpiOcular+model.">Prediction of ocular irritation potential of surfactants-based formulations at different concentrations using the EpiOcular model.</a> Toxicologist. 108, 378 (2009).</li><li>Harbell, J., Curren, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+methods+for+the+prediction+of+ocular+and+dermal+toxicity.">In vitro methods for the prediction of ocular and dermal toxicity.</a> Handbook of Toxicology. , (2001).</li><li>Kaluzhny, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+EpiOcular(TM)+eye+irritation+test+for+hazard+identification+and+labelling+of+eye+irritating+chemicals+in+response+to+the+requirements+of+the+EU+cosmetics+directive+and+REACH+legislation.">Development of the EpiOcular(TM) eye irritation test for hazard identification and labelling of eye irritating chemicals in response to the requirements of the EU cosmetics directive and REACH legislation.</a> Altern Lab Anim. 39, 339-364 (2011).</li><li>Pfannenbecker, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cosmetics+Europe+Multi-Laboratory+Pre-Validation+of+the+EpiOcular+Reconstituted+Human+Tissue+Test+Method+for+the+Prediction+of+Eye+Irritation.">Cosmetics Europe Multi-Laboratory Pre-Validation of the EpiOcular Reconstituted Human Tissue Test Method for the Prediction of Eye Irritation.</a> Toxicol in vitro. , (2013).</li><li>MatTek Corporation. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> EpiOcular™ Eye Irritation Test (OCL-200-EIT) for the prediction of acute ocular irritation of chemicals for use with Reconstructed Human EpiOcular Model (OCL-200-EIT). Protocol#MK-24-007-0055. , (2014).</li><li>Kaluzhny, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EpiOcular+Eye+Irritation+Test+(EIT)+for+Hazard+Identification+and+Labeling+of+Eye+Irritating+Chemicals:+Protocol+Optimization+for+Solid+Materials+and+Extended+Shipment+Times.">EpiOcular Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification and Labeling of Eye Irritating Chemicals: Protocol Optimization for Solid Materials and Extended Shipment Times.</a> Altern Lab Anim. 43 (2), 101-127 (2015).</li><li>Kolle, S. N., Kandarova, H., Wareing, B., van Ravenzwaay, B., Landsiedel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-house+validation+of+the+EpiOcular(TM)+eye+irritation+test+and+its+combination+with+the+bovine+corneal+opacity+and+permeability+test+for+the+assessment+of+ocular+irritation.">In-house validation of the EpiOcular(TM) eye irritation test and its combination with the bovine corneal opacity and permeability test for the assessment of ocular irritation.</a> Altern Lab Anim. 39, 365-387 (2011).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstructed+Human+Cornea-like+Epithelium+(RhCE)+Test+Method+for+Identifying+Chemicals+Not+Requiring+Classification+and+Labelling+for+Eye+Irritation+or+Serious+Eye+Damage.+Draft+proposal+for+a+new+test+guideline..">Reconstructed Human Cornea-like Epithelium (RhCE) Test Method for Identifying Chemicals Not Requiring Classification and Labelling for Eye Irritation or Serious Eye Damage. Draft proposal for a new test guideline..</a> OECD Guideline for the Testing of Chemicals. , (2014).</li><li>Blazka, M. E., Harbell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+the+ocular+irritation+potential+of+54+test+articles+using+the+EpiOcular+Human+tissue+Construct+Model.">Evaluating the ocular irritation potential of 54 test articles using the EpiOcular Human tissue Construct Model.</a> Toxicol. In Vitro. , (2003).</li><li>Kandarova, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EpiDerm+Test+Protocol+for+the+Upcoming+ECVAM+Validation+Study+on+In+Vitro+Skin+Irritation+Tests+&#8212;+An+Assessment+of+the+Performance+of+the+Optimised+Test.">The EpiDerm Test Protocol for the Upcoming ECVAM Validation Study on In Vitro Skin Irritation Tests &#8212; An Assessment of the Performance of the Optimised Test.</a> Altern Lab Anim. 33, 351-367 (2005).</li></ol>

Publicatie kosten voor dit artikel werden betaald door MatTek Corporation.

We hebben de oogirritatietest (figuur 1), die is ontwikkeld voor de EpiOcular weefsel model gepresenteerd. Het EIT is in staat om oculaire irriterende en bijtende stoffen (GHS-categorieën 1 en 2 gecombineerd) te scheiden van materialen die niet etikettering (GHS Geen categorie) met een hoge mate van gevoeligheid en specificiteit 17. Het EIT vereisen zoals hierin gepresenteerd maakt geen onderscheid tussen GHS Categorie 1 van categorie 2 chemicaliën. Het EIT werd gevalideerd voor de indeling en etikettering van oogirritatie potentieel van een breed scala van chemische stoffen, met inbegrip van cosmetische en farmaceutische ingrediënten. In combinatie met andere in vitro testen, de EIT dienen als een vervanger voor de in vivo konijnen oogirritatie. De EIT gebruikt twee vergelijkbare maar verschillende protocollen voor vloeibare en vaste stoffen, die verschillen in de duur van de blootstelling en na blootstelling incubatieperiode (figuur 1). Het eindpunt gebruikt in de EITis levensvatbaarheid van het weefsel, bepaald met de MTT-bepaling, die eerder gebruikt in relevante menselijke epitheelweefsel modellen 20,21. Om deze test uit te voeren, is geen speciale apparatuur naast standaard celkweek apparatuur nodig. Vanwege de hoge weefsel tot weefsel reproduceerbaarheid, n = 2 weefsels in plaats van het normale aanbevolen n = 3 worden gebruikt. Het vermogen om gebruik n = 2 weefsels is een kritisch aspect van het protocol, aangezien het een ervaren operator twee weefsels tegelijkertijd verwerken, waardoor de variabiliteit van de test die kan optreden minimaliseren vanwege de verschillende behandeling van individuele weefsels 14. Ook, door n = 2 per weefsels testvoorwerp, de irriterende werking van 10 teststoffen van dezelfde fysische toestand (vloeibaar of vast), samen met de positieve en negatieve controles, kunnen worden geëvalueerd met een kit (24 weefsels). Andere belangrijke punten die betrouwbare classificatie van de materialen zorgen zijn specificaties voor de positieve controle substance (levensvatbaarheid van het weefsel ≤50.0%), reproduceerbaarheid tussen dubbele weefsels (verschil &lt;20,0%) en negatieve controle OD (&gt; 0,8 en &lt;2,5). Bij het ​​uitvoeren van de EIT test, is het belangrijk zich te houden aan de gevalideerde protocol en de voorgestelde dosering en schema spoelen (tabellen 3 en 4), omdat afwijking van het protocol of veranderingen in de incubatieperiode kan resulteren in gewijzigde afloop. Evenzo zullen afwijkingen van het 3 uur tijd MTT incubatietijd resulteren in verschillende MTT waarden en kunnen assayresultaat beïnvloeden. Af en toe kan een test chemische optische of andere eigenschappen die kunnen interfereren met de MTT weefsel levensvatbaarheid assay of de oorzaak reductie van MTT te hebben. Bijvoorbeeld, kan een chemische teststof direct verminderen MTT in blauwpaarse reactieproduct, of kan een gekleurde stof die licht absorbeert in hetzelfde bereik als MTT formazan (~ 570 nm) zijn. Echter, deze test stoffen prESENT probleem alleen wanneer op het tijdstip van de MTT-bepaling, een voldoende hoeveelheid van het materiaal nog aanwezig (of geabsorbeerd door) het weefsel. Om deze storing te voorkomen, worden uitgebreid spoelen procedures opgenomen in de EIT-protocol. Als het spoelen niet verwijderen van de TA en de TA interfereert met MTT-reductie, moeten aanvullende controles worden gebruikt om te detecteren en te corrigeren voor het. In het kort, indien rechtstreekse MTT vermindering van de teststof wordt vermoed, 50 gl (of 50 mg vaste stof) van de betrokken chemische stof wordt gedurende 3 uur met werken MTT oplossing bij SCC (NC, 50 ul steriel gedeïoniseerd water, moet draaien gelijktijdig). Als de MTT-oplossing wordt blauw-paars, is de test artikel geacht te hebben verminderd de MTT. In dit geval een functiecontrole behulp gevries- gedood weefsel controles moeten worden uitgevoerd om te beoordelen of het testmateriaal binding aan het weefsel en tot een foutieve verlaging MTT signaal. Als er aanzienlijke reductie van MTT in de TA-blootgestelde gedood weefselcontrole(betrokken op de hoeveelheid in de onbehandelde levende weefsel), de gemiddelde levensvatbaarheid weefsel van het testvoorwerp worden gecorrigeerd door het aftrekken van de gemiddelde levensvatbaarheid van de gedode control. Het EIT ten onrechte aan de kant van de veiligheid, zoals aangetoond door de lage incidentie van vals-negatieve classificaties 14,15,18. Belangrijk is dat geen van de GHS-categorie 1 chemische stoffen, die bijtend voor de ogen en die vertegenwoordigen de meest ernstige oculaire gevaar, werden geclassificeerd als niet-irriterend in deze test 14,15,18,19. Tenslotte, een van de grote voordelen van het RHCE in vitro testmethode is de mogelijkheid testen keurige vloeibare en vaste stoffen (wat niet mogelijk is met tweedimensionale, ondergedompelde celculturen). Het EIT zal een belangrijke bijdrage leveren bij het bepalen van de oogirritatie potentieel van een breed scala van materialen volgens de VN-GHS-indeling en etikettering systeem. De vervanging van dieren o bepalenname op toxiciteit is een doel van het toxicologisch onderzoek voor vele jaren. Het EIT testmethode is een formele valideringsstudie ondersteund door EURL ECVAM voltooid in 2014 en de EpiOcular EIT werd in 2015 in de OESO-richtlijnen als de OESO TG 492 geïmplementeerd.

Consumentenproducten zoals cosmetica, wasmiddelen en schoonmaakmiddelen omvatten een verscheidenheid van chemische stoffen die ernstige schade kan veroorzaken als ze contact met de ogen. Daarom is het testen van deze middelen voor oogirritatie vereist door de VS en de EU regelgevende instanties om de veiligheid van de consument 1 te garanderen. Een beoordeling van de oogirritatie potentieel van mengsels en formuleringen is ook een vereiste voor de naleving van REACH (Registratie, Evaluatie, Autorisatie en beperking van chemische stoffen) wetgeving voor de etikettering van cosmetische ingrediënten in het kader van de EU-cosmetica voor het vervoer van chemische producten, en voor de etikettering van pesticiden en huishoudelijke producten 2. Momenteel, regelgevende instanties nodig oculaire gevaren met behulp van het wereldwijd geharmoniseerd systeem voor de indeling en etikettering van chemische stoffen (GHS) 3. GHS is voornamelijk gebaseerd op de Draize oogirritatie test, de meest gebruikte oogirritatie assay waarin vreemde stoffen en mixtures worden direct ingebracht in de conjunctivale zak van het konijnenoog 4. Volgens GHS-classificatie, GHS-categorie 1 (oculair corrosieve) verwijst naar chemische stoffen die ernstige initiële letsel veroorzaken aan het oog weefsels of ernstige schade aan het oog en de visie die niet volledig reversibel is binnen 21 dagen na blootstelling 3,5 testen. GHS-categorie 2 verwijst naar chemische stoffen die significante veranderingen in het oog dat zijn volledig omkeerbaar binnen 21 dagen van de blootstelling te produceren testen. Chemicaliën test die geen corrosieve of irriterende stoffen worden aangeduid als GHS Geen categorie. Al meer dan 40 jaar, heeft het konijn Draize oogtest is bekritiseerd voor zijn gebrek aan reproduceerbaarheid, overschatting van menselijke reacties, en het gebruik van levende dieren 5-8. Deze zorgen hebben vele voorstellen voor verbetering en vermindering, en vervanging van de in vivo proef 9 aangemoedigd. De behoefte aan gevalideerde niet-dierlijke alternatieven werd verder versterktdoor de goedkeuring van het zevende amendement op de cosmeticarichtlijn, die het gebruik van dieren in de beoordeling van de veiligheid van cosmetische producten (in 2005) verboden en ingrediënten (in 2009) 2. Sinds 1996 is de gereconstrueerde cornea-achtig weefsel model op grote schaal gebruikt door de cosmetische industrie om het irritatie potentieel van grondstoffen, oppervlakteactieve stof gebaseerde formuleringen te evalueren, en samengestelde mengsels die zijn ontworpen voor gebruik in of in de nabijheid van het oog 10-13. Gebruik van het RHCE weefsel model maakt het mogelijk direct actuele toepassing van het testmateriaal op het weefsel oppervlak in zijn oorspronkelijke, onverdunde vorm. Op deze wijze kan niet in water oplosbare preparaten worden getest zonder ze te verdunnen met oplosmiddelen. In antwoord op EURL ECVAM (Europese Unie referentielaboratorium Europees Centrum voor de validatie van alternatieve methoden) verzoek om een ​​breed toepasbaar, eenvoudig, en economische methode van de oogirritatietest (EIT), dat gebruik maakt van een single belichtingstijd en is in staat om oculaire irriterende en bijtende stoffen te scheiden van materialen die niet etikettering nodig hebben ontwikkeld (figuur 1) 14. Op basis van de resultaten van 83 chemicaliën (44 vloeistoffen en 39 vaste stoffen), het EIT bereikte 95,5 / 68,2 / en 81,8% sensitiviteit / specificiteit en nauwkeurigheid (SS &amp; A) voor vloeistoffen, 100,0 / 68,4 / en 84,6% SS &amp; A voor vaste stoffen en 97,6 / 68.3 / en 83,1% voor de totale SS &amp; A. In 2007, een multi-laboratorium pre-validatie studie gesponsord door Cosmetics Europe (voorheen Colipa) onder auspiciën van de EURL ECVAM geëvalueerd de relevantie en betrouwbaarheid van het EIT met het doel om het te brengen formele bevestiging 15. In deze studie werden 298 onafhankelijke studies uitgevoerd in zeven onafhankelijke laboratoria. Studie resultaten toonden 99,7% overeenkomst voorspelling met een lage coëfficiënten van variatie tussen alle deelnemende laboratoria 15. Als gevolg daarvan in 2010 het EIT protocol ging een formele EURL ECVAMvalidatie programma. De validatie studie gebruikte 104 gecodeerd testchemicaliën, met inbegrip van afzonderlijke stoffen en chemische mengsels, die in vivo referentiegegevens (Draize oogirritatie gegevens) beschikbaar waren. Op basis van het succes van dit werk, werd een OESO-ontwerp testrichtsnoer ingediend in 2014. Verwacht wordt dat het EIT aanzienlijk zal bijdragen aan de indeling van oogirritatie potentieel van een breed scala van materialen volgens de VN-GHS-indeling en etikettering systeem.

eye irritation test (eit) for hazard identification of eye irritating chemicals using reconstructed human cornea-like epithelial (rhce) tissue model

Om te voldoen aan de zevende wijziging van de cosmeticarichtlijn en de Europese REACH-wetgeving van de EU, worden gevalideerd niet-dierlijke alternatieve methoden voor een betrouwbare en nauwkeurige evaluatie van oculaire toxiciteit bij de mens nodig. Om aan deze behoefte te pakken, hebben we een oogirritatietest (EIT), dat een driedimensionaal gereconstrueerd menselijk hoornvlies-achtige epitheliale (RHCE) weefsel model dat gebaseerd is op de normale menselijke cellen maakt gebruik ontwikkeld. Het EIT is in staat om oculaire irriterende en bijtende stoffen (GHS-categorieën 1 en 2 gecombineerd) en degenen die geen etikettering (GHS Geen Categorie) vereisen scheiden. De test maakt gebruik van twee afzonderlijke protocollen, die is ontworpen voor vloeibare chemicaliën en een tweede, soortgelijk protocol voor vaste testartikelen. Het EIT voorspellingsmodel maakt gebruik van een enkele periode blootstelling (30 min voor vloeistoffen, 6 uur voor vaste stoffen) en een enkele levensvatbaarheid van het weefsel cut-off (60,0% zoals bepaald door de MTT-test). Op basis van de resultaten van 83 chemicaliën (44 vloeistoffen en vaste stoffen 39) EIT bereikte 95,5 / 68,2 / 81,8% en sensItivity / specificiteit en nauwkeurigheid (SS &amp; A) voor vloeistoffen, 100.0 / 68.4 / en 84,6% SS &amp; A voor vaste stoffen, en 97,6 / 68,3 / en 83,1% voor de totale SS &amp; A. Het EIT zal in belangrijke mate bijdragen aan de indeling van de oogirritatie potentieel van een breed scala van vloeibare en vaste stoffen, zonder het gebruik van dieren voor het testen van de regelgeving te voldoen. De EpiOcular EIT methode werd in 2015 geïmplementeerd in de testrichtsnoeren OESO TG 492.

Representatieve EIT resultaten uitgevoerd met 10 testartikelen (TA) en negatieve en positieve controles worden in tabel 6 en figuur 3. De gemiddelde OD = 1,31 voor de NC overeen met 100% levensvatbaarheid van het weefsel, dus de PC (gemiddelde OD = 0,41) hadden relatieve levensvatbaarheid van het weefsel van 31,2%. Wanneer het EIT protocol werd uitgevoerd in 15 geldige onafhankelijke experimenten in 7 laboratoria met behulp van de vloeistof blootstelling protocol en in 8 onafhankelijke geldige experimenten in 4 laboratoria, met behulp van de vaste belichting protocol, de gemiddelde levensvatbaarheid van het weefsel voor de PC met behulp van de vloeistof protocol was 36,4 ± 4,0 % en 32,3 ± 6,4% van de vaste stoffen protocol. In alle gevallen waren de positieve controleresultaten onder de afgesneden waarde van 60,0% 15. Zoals getoond in figuur 3, TA1, TA2, TA4, TA7 en TA8 had weefsel levensvatbaarheid&gt; 60,0% en werden daarom als &quot;NI&quot;. TA3, TA5, TA6, TA9 en TA10 had weefsel levensvatbaarheid X04, 60,0% en werden daarom als &quot;I&quot;. Het verschil van de levensvatbaarheid van het weefsel tussen dubbele weefsels was &lt;20,0% voor alle TA met uitzondering van TA2. Daarom resultaten voor alle de test artikelen, met uitzondering van de TA2, werden beschouwd als &quot;gekwalificeerd&quot;, omdat zij aan alle EIT acceptatiecriteria (paragraaf 10.2). Vanwege de hoge variabiliteit tussen dubbele weefsels voor TA2 in de eerste experiment werd een tweede experiment was nodig om gekwalificeerde EIT resultaten te verkrijgen. Het EIT testmethode zoals hierin beschreven met behulp van het RHCE weefsel model werd gebruikt voor de beoordeling van oogirritatie in verschillende multilaboratory validatie studies, met inbegrip van formele validering door EURL ECVAM / Cosmetica Europa 15,17-19. In alle studies werd het EIT getoond reproduceerbaar te zijn en was in staat om chemische stoffen (zowel stoffen en mengsels) niet vereist indeling en etikettering voor oogirritatie of ernstig oogletsel ac correct te identificerengens UN GHS 15,17-19. Het EIT testmethode voldeden aan de acceptatiecriteria van de Validation Management Group (VMG) voor irritatie van de ogen voor de gevoeligheid, specificiteit en algemene nauwkeurigheid en momenteel wordt het in afwachting van de formele implementatie als een gedeeltelijke vervanging voor in vivo konijnen Draize-test 19. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/52979/52979fig1.jpg" /> Figuur 1: Overzicht van het EIT protocol voor vloeibare en vaste testartikelen afkortingen gebruikt: AM, assaymedium;. SCC, standaard kweekomstandigheden; PBS, Dulbecco&#39;s fosfaat gebufferde zoutoplossing; RT, kamertemperatuur. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/52979/52979fig2.jpg" /> Figuur 2:. De gestandaardiseerde 96-wells plaat configuratie voor de MTT-test weefsel levensvatbaarheid twee 200 pi aliquots zijn transferred aan de juiste putjes van een gelabelde 96-wells plaat. Afkortingen gebruikt: NC, negatieve controle; PC, positieve controle; TA1-TA20, testen artikelen 1-20; Blanco, extractiemiddeloplossing. 96- MTT plaat configuratie wordt gebruikt met Excel-spreadsheet ontworpen om RHCE levensvatbaarheid van het weefsel en EIT resultaten te berekenen. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/52979/52979fig3.jpg" /> Figuur 3: EIT resultaten verkregen voor 10-test artikelen, NC en PC controle met behulp van het RHCE weefsel model De grafiek wordt gegenereerd op basis van een Excel-spreadsheet ontworpen om EIT resultaten te presenteren.. Chemicaliën test die de levensvatbaarheid van het weefsel verlaagd ≤ 60,0% ten opzichte van NC worden als irriterend ingedeeld (&quot;I&quot;, TA3, TA5, TA6, TA9 en TA10) en test chemische stoffen die had levensvatbaarheid van het weefsel&gt; 60,0% worden geclassificeerd als niet-Irriterende (&quot; NI &quot;, TA1, TA2, TA4, TA7, en TA8). <table border="0" cellpadding="0" cellspacing = &quot;0&quot;&gt; <tbody><tr><td colspan="7"> Starttijd voor het EIT protocol werk stappen (een dag werk voor één operator) </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4"> Elke lijn correspondeert met een paar weefsels </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Volgorde van de stappen: </td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td><td> 6 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Vloeistoffen: </td><td> PBS </td><td> TA Belichting </td><td> Post- Soak </td><td> Post- <td> MTT Reactie </td><td> MTT Extractie </td><td> Maatregel </td></tr><tr><td></td><td> 30 min </td><td> 30 min </td><td> 12 min </td><td> 120 min </td><td> 180 min </td><td> 120 min </td><td> OD </td></tr><tr><td> NC </td><td> 09:00 </td><td> 09:30 </td><td> 10:00 </td><td> 10:12 </td><td> 00:12 </td><td> 15:12 </td><td> na </td></tr><tr><td> PC </td><td> 09:01 </td><td> 09:31 </td><td> 10:01 </td><td> 10:13 </td><td> 00:13 </td><td> 15:13 </td><td> 17:30 </td></tr><tr><td> TA-1 </td><td> 09:02 </td><td> 09:32 </td><td> 10:02 </td><td> 10:14 </td><td> 00:14 </td><td> 15:14 </td><td></td></tr><tr><td> TA-2 &lt;/ strong&gt; </td><td> 09:03 </td><td> 09:33 </td><td> 10:03 </td><td> 10:15 </td><td> 00:15 </td><td> 15:15 </td><td></td></tr><tr><td> TA-3 </td><td> 09:04 </td><td> 09:34 </td><td> 10:04 </td><td> 10:16 </td><td> 00:16 </td><td> 15:16 </td><td></td></tr><tr><td> TA-4 </td><td> 09:05 </td><td> 09:35 </td><td> 10:05 </td><td> 10:17 </td><td> 00:17 </td><td> 15:17 </td><td></td></tr><tr><td> TA-5 </td><td> 09:06 </td><td> 09:36 </td><td> 10:06 </td><td> 10:18 </td><td> 00:18 </td><td> 15:18 </td><td></td></tr><tr><td> TA-6 </td><td> 09:07 </td><td> 09:37 </td><td> 10:07 </td><td> 10:19 </td><td> 00:19 </td><td> 15:19 </td><td></td></tr><tr><td> TA-7 </td><td> 09:08 </td><td> 09:38 </td><td> 10:08 </td><td> 10:20 </td><td> 00:20 </td><td> 15:20 </td><td></td></tr><tr><td><stro<html> ng&gt; TA-8 </td><td> 09:09 </td><td> 09:39 </td><td> 10:09 </td><td> 10:21 </td><td> 00:21 </td><td> 15:21 </td><td></td></tr><tr><td> TA-9 </td><td> 09:10 </td><td> 09:40 </td><td> 10:10 </td><td> 10:22 </td><td> 00:22 </td><td> 15:22 </td><td></td></tr><tr><td> TA-10 </td><td> 09:11 </td><td> 09:41 </td><td> 10:11 </td><td> 10:23 </td><td> 00:23 </td><td> 15:23 </td><td></td></tr></tbody></table> Tabel 3:. Sample tijdschema voor het testen van vloeibare testartikelen Protocol stappen inclusief pre-bevochtigen van de weefsels met DPBS, Toepassing van Test Artikelen (TAS), spoelen en Post-weken, Post-incubatieperiode, MTT assay, Winning van MTT, en waardering van MTT OD worden in kolommen. Tijden het duplicaat weefsels zijn georganiseerd in rijen. De gehele test testen 10 TA en controles kunnen worden afgewerkt in een dag. e_content &quot;&gt; <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" height="439" width="582"><tbody><tr><td colspan="6"> Starttijd voor het EIT-protocol stappen (2 dagen werken voor een operator) </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4"> Elke lijn correspondeert met een paar weefsels </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dag 1 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="2"> Dag 2 (de volgende dag) </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Volgorde van de stappen: </td><td> 1 </strong&gt; </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td><td> 6 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Vaste stoffen: </td><td> PBS </td><td> TA Belichting </td><td> Post- Soak </td><td> Post- Incubaction </td><td> MTT Reactie </td><td> MTT Extractie </td><td> Maatregel </td></tr><tr><td></td><td> 30 min </td><td> 6 uur </td><td> 26 min </td><td> 18 hr </td><td> 180 min </td><td> 120 min </td><td> OD </td></tr><tr><td> NC </td><td> 09:00 </td><td> 09:30 </td><td> 15:30 </td><td> 15:56 </td><td> 09:56 </td><td> 00:56 </td&gt; <td> na </td></tr><tr><td> PC </td><td> 09:02 </td><td> 09:32 </td><td> 15:32 </td><td> 15:58 </td><td> 09:58 </td><td> 00:58 </td><td> 15:30 </td></tr><tr><td> TA-1 </td><td> 09:04 </td><td> 09:34 </td><td> 15:34 </td><td> 16:00 </td><td> 10:00 </td><td> 13:00 </td><td></td></tr><tr><td> TA-2 </td><td> 09:06 </td><td> 09:36 </td><td> 15:36 </td><td> 16:02 </td><td> 10:02 </td><td> 13:02 </td><td></td></tr><tr><td> TA-3 </td><td> 09:08 </td><td> 09:38 </td><td> 15:38 </td><td> 16:04 </td><td> 10:04 </td><td> 13:04 </td><td></td></tr><tr><td> TA-4 </td><td> 09:10 </td><td> 09:40 </td><td> 15:40 </td><td> 16:06 </td><td> 10:06 </td><td> 13:06 </td><td></td></tr><tr><td> TA-5 </td><td> 09:12 </td><td> 09:42 </td><td> 15:42 </td><td> 16:08 </td><td> 10:08 &lt;/ td&gt; <td> 13:08 </td><td></td></tr><tr><td> TA-6 </td><td> 09:14 </td><td> 09:44 </td><td> 15:44 </td><td> 16:10 </td><td> 10:10 </td><td> 13:10 </td><td></td></tr><tr><td> TA-7 </td><td> 09:16 </td><td> 09:46 </td><td> 15:46 </td><td> 16:12 </td><td> 10:12 </td><td> 13:12 </td><td></td></tr><tr><td> TA-8 </td><td> 09:18 </td><td> 09:48 </td><td> 15:48 </td><td> 16:14 </td><td> 10:14 </td><td> 13:14 </td><td></td></tr><tr><td> TA-9 </td><td> 09:20 </td><td> 09:50 </td><td> 15:50 </td><td> 16:16 </td><td> 10:16 </td><td> 13:16 </td><td></td></tr><tr><td> TA-10 </td><td> 09:22 </td><td> 09:52 </td><td> 15:52 </td><td> 16:18 </td><td> 10:18 </td><td> 13:18 </td><td></td></tr></tbody></table> Tabel 4: Voorbeeld tijdschema voor het testen van vaste testartikelen. Protocol stappen inclusief pre-bevochtigen van de weefsels met DPBS, Toepassing van Test artikelen, spoelen en Post-weken, Post-incubatieperiode, MTT assay, Winning van MTT, en waardering van MTT OD worden gepresenteerd in kolommen. Tijden het duplicaat weefsels zijn georganiseerd in rijen. De gehele test testen 10 TA en controles wordt uitgevoerd over een periode van twee dagen. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Bedrag </td><td> Reagens </td><td> Opslagcondities </td><td> Bron </td><td> Beschrijving </td><td> Houdbaarheidsdatum </td></tr><tr><td> 1 flacon, 2 ml </td><td> MTT concentraat (MTT-100-CON) </td><td> Beschermd tegen licht (-20ºC) </td><td> MatTek </td><td> Bevroren MTT concentraat </td><td> 2 maanden </td></tr><tr><td> 1 flacon, 8 ml </td><td> MTT verdunner </td><td> 2-8 &amp;# 186; C </td><td> MatTek </td><td> Voor verdunnen MTT concentraat voor gebruik in de MTT assay </td><td> 2 maanden </td></tr><tr><td> 1 fles, 60 ml </td><td> Isopropanol (CAS # 67-63-0) </td><td> RT </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> Extractiemiddeloplossing </td><td> NA </td></tr></tbody></table> Tabel 5: MTT-100 Assay Kit Components. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Code N ° </td><td> Weefsel </td><td colspan="2"> Ruwe gegevens </td><td colspan="2"> Blanco gecorrigeerde gegevens </td><td rowspan="2"> gemiddelde van OD </td><td rowspan="2"> % Van de levensvatbaarheid </td></tr><tr><td></td><td> n </td><td> Aliq. 1 </td><td> Aliq. 2 </td><td> Aliq. 1 </td><td> Aliq. 2 </td></tr><tr><td> NC </td><td>1 </td><td> 1,316 </td><td> 1.352 </td><td> 1,316 </td><td> 1.352 </td><td> 1,334 </td><td> 101.6 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 1,277 </td><td> 1,309 </td><td> 1,277 </td><td> 1,309 </td><td> 1,293 </td><td> 98.4 </td></tr><tr><td> PC </td><td> 1 </td><td> 0,379 </td><td> 0,397 </td><td> 0,379 </td><td> 0,397 </td><td> 0,388 </td><td> 29.6 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,419 </td><td> 0,442 </td><td> 0,419 </td><td> 0,442 </td><td> 0,431 </td><td> 32.8 </td></tr><tr><td> TA1 </td><td> 1 </td><td> 1,213 </td><td> 1,244 </td><td> 1,213 </td><td> 1,244 </td><td> 1,229 </td><td> 93.5 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 1,355 </td><td> 1,355 </td><td> 1,355 </td><td> 1,355 </td><td> 1,355 </td><td> 103.2 </td></tr><tr><td> TA2 </td><td> 1 </td><td> 1.210 </td><td> 1,122 </td><td> 1.210 </td><td> 1,122 </td><td> 1,166 </td><td> 88.7 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,828 </td><td> 0,837 </td><td> 0,828 </td><td> 0,837 </td><td> 0,833 </td><td> 63.4 </td></tr><tr><td> TA3 </td><td> 1 </td><td> 0,167 </td><td> 0,168 </td><td> 0,167 </td><td> 0,168 </td><td> 0,167 </td><td> 12.7 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,138 </td><td> 0,136 </td><td> 0,138 </td><td> 0,136 </td><td> 0,137 </td><td> 10.4 </td></tr><tr><td> TA4 </td><td> 1 </td><td> 1,137 </td><td> 1,160 </td><td> 1,137 </td><td> 1,160 </td><td> 1,149 </td><td> 87.4 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 1.262 </td><td> 1,191 </td><td> 1.262 </td><td> 1,191 </td><td> 1.227 </td><td> 93.4 </td></tr><tr><td> TA5 </td><td> 1 </td><td> 0.610 </td><td> 0,621 </td><td> 0.610 </td><td> 0,621 </td><td> 0,616 </td><td> 46.9 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,480 </td><td> 0,484 </td><td> 0,480 </td><td> 0,484 </td><td> 0,482 </td><td> 36.7 </td></tr><tr><td> TA6 </td><td> 1 </td><td> 0,502 </td><td> 0,513 </td><td> 0,502 </td><td> 0,513 </td><td> 0,508 </td><td> 38.7 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,396 </td><td> 0,407 </td><td> 0,396 </td><td> 0,407 </td><td> 0,402 </td><td> 30.6 </td></tr><tr><td> TA7 </td><td> 1 </td><td> 1,048 </td><td> 1.050 </td><td> 1,048 </td><td> 1.050 </td><td> 1,049 </td><td> 79.9 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 1,149 </td><td> 1.150 </td><td> 1,149 </td><td> 1.150 </td><td> 1.150 </td><td> 87.5 </td></tr><tr><td> TA8 </td><td> 1 </td><td> 1,032 </td><td> 1,034 </td><td> 1,032 </td><td> 1,034 </td><td> 1.033 </td><td> 78.7 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,941 </td><td> 0,935 </td><td> 0,941 </td><td> 0,935 </td><td> 0,938 </td><td> 71.4 </td></tr><tr><td> TA9 </td&gt; <td> 1 </td><td> 0,022 </td><td> 0,022 </td><td> 0,022 </td><td> 0,022 </td><td> 0,022 </td><td> 1.7 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,144 </td><td> 0,149 </td><td> 0,144 </td><td> 0,149 </td><td> 0,147 </td><td> 11.2 </td></tr><tr><td> TA10 </td><td> 1 </td><td> 0.150 </td><td> 0.150 </td><td> 0.150 </td><td> 0.150 </td><td> 0.150 </td><td> 11.4 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,254 </td><td> 0,255 </td><td> 0,254 </td><td> 0,255 </td><td> 0,255 </td><td> 19.4 </td></tr></tbody></table><table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td></td><td> betekenen </td><td> Dif. </td><td> gemiddelde van </td><td> Dif. </td><td> Dif. / 2 </td><td colspan="2"> Classificatie </td></tr><tr><td></td><td> van OD </td><td> van OD </td><td> levensvatbaarheid [%] </td><td> van de levensvatbaarheid </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> NC </td><td> 1,314 </td><td> 0,041 </td><td> 100.0 </td><td> 3.12 </td><td> 1.56 </td><td> NI </td><td> gediplomeerd </td></tr><tr><td> PC </td><td> 0.410 </td><td> 0,043 </td><td> 31.2 </td><td> 3.23 </td><td> 1.62 </td><td> Ik </td><td> gediplomeerd </td></tr><tr><td> TA1 </td><td> 1.292 </td><td> 0,127 </td><td> 98.3 </td><td> 9.63 </td><td> 4.81 </td><td> NI </td><td> gediplomeerd </td></tr><tr><td> TA2 </td><td> 0,999 </td><td> 0,333 </td><td> 76.1 </td><td> 25,36 </td><td> 12,68 </td><td> NI </td><td> D&gt; 20 </td></tr><tr><td> TA3 </td><td> 0,152 </td><td> 0,030 </td><td> 11.6 </td><td> 2.32 </td><td> 1.16 </td><td> Ik </td><td> gediplomeerd </td></tr><tr><td> TA4 </td><td> 1,188 </td><td> 0,078 </td><td> 90.4 </td><td> 5.94 </td><td> 2.97 </td><td> NI </td><td> gediplomeerd </td></tr><tr><td> TA5 </td><td> 0,549 </td><td> 0,134 </td><td> 41.8 </td><td> 10.16 </td><td> 5.08 </td><td> Ik </td><td> gediplomeerd </td></tr><tr><td> TA6 </td><td> 0,455 </td><td> 0,106 </td><td> 34.6 </td><td> 8.07 </td><td> 4.03 </td><td> Ik </td><td> gediplomeerd </td></tr><tr><td> TA7 </td><td> 1.100 </td><td> 0,101 </td><td> 83.7 </td><td> 7.65 </td><td> 3.82 </td><td> NI </td><td> gediplomeerd </td></tr><tr><td> TA8 </td><td> 0,986 </td><td> 0.095 </td><td> 75.0 </td><td> 7.23 </td><td> 3.62 </td><td> NI </td><td> gediplomeerd </td></tr><tr><td> TA9 </td><td> 0,085 </td><td> 0,125 </td><td> 6.4 </td><td> 9.48 </td><td> 4.74 </td><td> Ik </td><td> gediplomeerd </td></tr><tr><td> TA10 </td><td> 0,203 </td><td> 0,105 </td><td> 15.4 </td><td> 7.95 </td><td> 3.98 </td><td> Ik </td><td> gediplomeerd </td></tr></tbody></table> Tabel 6:. EIT resultaten verkregen voor 10-test artikelen, NC en PC-besturingen De tafels zijn produced door een Excel-spreadsheet ontworpen om levensvatbaarheid van het weefsel en het EIT resultaten te berekenen. Chemicaliën test die de levensvatbaarheid van het weefsel verlaagd ≤ 60,0% ten opzichte van NC worden als irriterend ingedeeld (&quot;I&quot;, TA3, TA5, TA6, TA9 en TA10) en test chemische stoffen die had levensvatbaarheid van het weefsel&gt; 60,0% worden geclassificeerd als niet-Irriterende (&quot; NI &quot;, TA1, TA2, TA4, TA7, en TA8).

Watch this Scientific Journal Video about Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model at JoVE.com

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

We hebben een oogirritatie test die een driedimensionaal gereconstrueerd menselijk hoornvlies-achtige epitheliale (RHCE) weefsel model maakt gebruik ontwikkeld. De test is in staat onderscheid te maken tussen oculaire irriterende en bijtende stoffen (GHS-categorieën 1 en 2 gecombineerd) en degenen die geen etikettering (GHS geen categorie) vereisen.

Test op oogirritatie (EIT) voor Risico oog irriterende stoffen met gereconstrueerde humane Cornea-achtige Epithelial (RHCE) Tissue Model

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

Evaluatie van polymere Gene Delivery Nanodeeltjes door Nanodeeltje Tracking Analyse en High-throughput Flow cytometrie

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Tissue Engineering van een Menselijke 3D<em&gt; In vitro</em&gt; Tumor Test System

Cancer is one of the leading causes of death worldwide.  Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture  systems, which ...

Human Cartilage Tissue Fabrication Using Three-dimensional Inkjet Printing Technology

Human kraakbeenweefsel Fabrication behulp van drie-dimensionale Inkjet Printing Technology

Bioprinting, which is based on thermal inkjet printing, is one of the most attractive enabling technologies in the field of tissue engineering and ...

Combination of Microstereolithography and Electrospinning to Produce Membranes Equipped with Niches for Corneal Regeneration

Combinatie van Microstereolithography en Electrospinning naar Membranen Uitgerust met Niches voor cornearegeneratie Produce

Corneal problems affect millions of people worldwide reducing their quality of life significantly. Corneal disease can be caused by illnesses such as ...

Assessing Leukocyte-endothelial Interactions Under Flow Conditions in an Ex Vivo Autoperfused Microflow Chamber Assay

Assessing Leukocyte-endothelial Interactions Under Flow Conditions in an Ex Vivo Autoperfused Microflow Chamber Assay

Het beoordelen Leukocyte-endotheliale Interacties Onder stroomtoestanden in een<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Autoperfused microflow Kamer Assay

Leukocyte-endothelial interactions are early and critical events in acute and chronic inflammation and can, when dysregulated, mediate tissue injury ...

Production, Characterization and Potential Uses of a 3D Tissue-engineered Human Esophageal Mucosal Model

Productie, karakterisering en toepassingsmogelijkheden van een 3D Tissue-engineered Human Slokdarmkanker Mucosale Model

The incidence of both esophageal adenocarcinoma and its precursor, Barrett&#8217;s Metaplasia, are rising rapidly in the western world. Furthermore ...

Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye

Ingekapselde celtechnologie voor de levering van biologics aan het muisoog

Many current therapeutics under development for diseases of the posterior pole of the eye are biologics. These drugs need to be administered frequently, ...

Growth of Human and Sheep Corneal Endothelial Cell Layers on Biomaterial Membranes

Groei van menselijke en schapen hoornvlies endotheliale cellagen op biomateriële membranen

Corneal endothelial cell cultures have a tendency to undergo epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) after loss of cell-to-cell contact. EMT is ...

Cultivating a Three-dimensional Reconstructed Human Epidermis at a Large Scale

Het cultiveren van een driedimensionale gereconstrueerde menselijke epidermis op grote schaal

A three-dimensional human epidermis model reconstructed from neonatal primary keratinocytes is presented. Herein, a protocol for the cultivation process ...

Quantifying Fibrillar Collagen Organization with Curvelet Transform-Based Tools

Het kwantificeren van fibrillar collageen organisatie met Curvelet transform-based tools

Fibrillar collagens are prominent extracellular matrix (ECM) components, and their topology changes have been shown to be associated with the progression ...