Name: eye irritation test (eit) for hazard identification of eye irritating chemicals using reconstructed human cornea-like epithelial (rhce) tissue model
Uploaded: 2015-08-23T14:00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model at JoVE.com

Die Autoren bedanken sich bei Dr. John Harbell für seine wissenschaftliche Unterstützung und Zeit für das ETI-Projekt gewidmet danken. Die Autoren möchte auch danken, Beiersdorf AG (Deutschland), IIVS (USA), Mary Kay Inc. (USA), Avon Products Inc. (USA), Procter &amp; Gamble / Cosmital (Schweiz), Laboratoire Pierre Fabre (Frankreich), Harlan Laboratories (Vereinigtes Königreich), und LVMH Parfume (Frankreich) für die Teilnahme an multizent Internationale Pre-und Validierungsstudien der Test auf Augenreizung 15.

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	<li>National Toxicology Program (NTP) Interagency Center for the Evaluation of Alternative Toxicological Methods (NICEATM). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Request+for+Ocular+Irritancy+Test+Data+From+Human,+Rabbit,+and+In+Vitro+Studies+Using+Standardized+Testing+Methods.">Request for Ocular Irritancy Test Data From Human, Rabbit, and In Vitro Studies Using Standardized Testing Methods.</a> Federal Register. 72 (109), 31582-31583 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+(EC)+No+1907/2006+of+the+European+Parliament+and+of+the+Council+of+18+December+2006+concerning+the+Registration,+Evaluation,+Authorisation+and+Restriction+of+Chemicals+(REACH),+establishing+a+European+Chemicals+Agency,+amending+Directive+1999/45/EC+and+repealing+Council+Regulation+(EEC)+No+793/93+and+Commission+Regulation+(EC)+No+1488/94+as+well+as+Council+Directive+76/769/EEC+and+Commission+Directives+91/155/EEC,+93/67/EEC,+93/105/EC+and+2000/21/EC.">Regulation (EC) No 1907/2006 of the European Parliament and of the Council of 18 December 2006 concerning the Registration, Evaluation, Authorisation and Restriction of Chemicals (REACH), establishing a European Chemicals Agency, amending Directive 1999/45/EC and repealing Council Regulation (EEC) No 793/93 and Commission Regulation (EC) No 1488/94 as well as Council Directive 76/769/EEC and Commission Directives 91/155/EEC, 93/67/EEC, 93/105/EC and 2000/21/EC.</a> OJ. L396 (49), 1-849 (2006).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (GHS). , (2013).</li><li>Draize, J. H., Woodard, G., Calvery, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+the+Study+of+Irritation+and+Toxicity+of+Substances+Applied+Topically+to+the+Skin+and+Mucous+Membranes.">Methods for the Study of Irritation and Toxicity of Substances Applied Topically to the Skin and Mucous Membranes.</a> J Pharmacol Exp Ther November. 82, 377-390 (1944).</li><li>Adriaens, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrospective+analysis+of+the+Draize+test+for+serious+eye+damage/eye+irritation:+importance+of+understanding+the+in+vivo+endpoints+under+UN+GHS/EU+CLP+for+the+development+and+evaluation+of+in+vitro+test+methods.">Retrospective analysis of the Draize test for serious eye damage/eye irritation: importance of understanding the in vivo endpoints under UN GHS/EU CLP for the development and evaluation of in vitro test methods.</a> Arch tox. 88, 701-723 (2014).</li><li>Balls, M., Botham, P. A., Bruner, L. H., Spielmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EC/HO+international+validation+study+on+alternatives+to+the+Draize+eye+irritation+test.">The EC/HO international validation study on alternatives to the Draize eye irritation test.</a> Toxicol in Vitro. 9, 871-929 (1995).</li><li>Curren, R. D., Harbell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+safety:+a+silent+(in+vitro)+success+story.">Ocular safety: a silent (in vitro) success story.</a> Altern Lab Anim. 30, 69-74 (2002).</li><li>Wilhelmus, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Draize+Eye+Test.">The Draize Eye Test.</a> Survey of Ophthalmology. 45, 493-515 (2001).</li><li>Curren, R. D., Harbell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+alternatives+for+ocular+irritation.">In vitro alternatives for ocular irritation.</a> Environ health persp. 106, 485-492 (1998).</li><li>McCain, N. E., Binetti, R. R., Gettings, S. D., Jones, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+ocular+irritation+ranges+of+market-leading+cosmetic+and+personal-care+products+using+an+in+vitro+tissue+equivalent.">Assessment of ocular irritation ranges of market-leading cosmetic and personal-care products using an in vitro tissue equivalent.</a> Toxicologist. 66, 243 (2002).</li><li>Niranjan, P., Dang, A. H., January, B. G., Gomez, C., Harbell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+EpiOcular+assay+for+preclinical+qualification+of+formulas+for+human+clinical+studies.">Use of the EpiOcular assay for preclinical qualification of formulas for human clinical studies.</a> Toxicologist. 96, 249 (2007).</li><li>Yin, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+ocular+irritation+potential+of+surfactants-based+formulations+at+different+concentrations+using+the+EpiOcular+model.">Prediction of ocular irritation potential of surfactants-based formulations at different concentrations using the EpiOcular model.</a> Toxicologist. 108, 378 (2009).</li><li>Harbell, J., Curren, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+methods+for+the+prediction+of+ocular+and+dermal+toxicity.">In vitro methods for the prediction of ocular and dermal toxicity.</a> Handbook of Toxicology. , (2001).</li><li>Kaluzhny, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+EpiOcular(TM)+eye+irritation+test+for+hazard+identification+and+labelling+of+eye+irritating+chemicals+in+response+to+the+requirements+of+the+EU+cosmetics+directive+and+REACH+legislation.">Development of the EpiOcular(TM) eye irritation test for hazard identification and labelling of eye irritating chemicals in response to the requirements of the EU cosmetics directive and REACH legislation.</a> Altern Lab Anim. 39, 339-364 (2011).</li><li>Pfannenbecker, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cosmetics+Europe+Multi-Laboratory+Pre-Validation+of+the+EpiOcular+Reconstituted+Human+Tissue+Test+Method+for+the+Prediction+of+Eye+Irritation.">Cosmetics Europe Multi-Laboratory Pre-Validation of the EpiOcular Reconstituted Human Tissue Test Method for the Prediction of Eye Irritation.</a> Toxicol in vitro. , (2013).</li><li>MatTek Corporation. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> EpiOcular™ Eye Irritation Test (OCL-200-EIT) for the prediction of acute ocular irritation of chemicals for use with Reconstructed Human EpiOcular Model (OCL-200-EIT). Protocol#MK-24-007-0055. , (2014).</li><li>Kaluzhny, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EpiOcular+Eye+Irritation+Test+(EIT)+for+Hazard+Identification+and+Labeling+of+Eye+Irritating+Chemicals:+Protocol+Optimization+for+Solid+Materials+and+Extended+Shipment+Times.">EpiOcular Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification and Labeling of Eye Irritating Chemicals: Protocol Optimization for Solid Materials and Extended Shipment Times.</a> Altern Lab Anim. 43 (2), 101-127 (2015).</li><li>Kolle, S. N., Kandarova, H., Wareing, B., van Ravenzwaay, B., Landsiedel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-house+validation+of+the+EpiOcular(TM)+eye+irritation+test+and+its+combination+with+the+bovine+corneal+opacity+and+permeability+test+for+the+assessment+of+ocular+irritation.">In-house validation of the EpiOcular(TM) eye irritation test and its combination with the bovine corneal opacity and permeability test for the assessment of ocular irritation.</a> Altern Lab Anim. 39, 365-387 (2011).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstructed+Human+Cornea-like+Epithelium+(RhCE)+Test+Method+for+Identifying+Chemicals+Not+Requiring+Classification+and+Labelling+for+Eye+Irritation+or+Serious+Eye+Damage.+Draft+proposal+for+a+new+test+guideline..">Reconstructed Human Cornea-like Epithelium (RhCE) Test Method for Identifying Chemicals Not Requiring Classification and Labelling for Eye Irritation or Serious Eye Damage. Draft proposal for a new test guideline..</a> OECD Guideline for the Testing of Chemicals. , (2014).</li><li>Blazka, M. E., Harbell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+the+ocular+irritation+potential+of+54+test+articles+using+the+EpiOcular+Human+tissue+Construct+Model.">Evaluating the ocular irritation potential of 54 test articles using the EpiOcular Human tissue Construct Model.</a> Toxicol. In Vitro. , (2003).</li><li>Kandarova, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EpiDerm+Test+Protocol+for+the+Upcoming+ECVAM+Validation+Study+on+In+Vitro+Skin+Irritation+Tests+&#8212;+An+Assessment+of+the+Performance+of+the+Optimised+Test.">The EpiDerm Test Protocol for the Upcoming ECVAM Validation Study on In Vitro Skin Irritation Tests &#8212; An Assessment of the Performance of the Optimised Test.</a> Altern Lab Anim. 33, 351-367 (2005).</li></ol>

Publikationskosten für diesen Artikel wurden von MatTek Corporation, bezahlt.

Wir haben den Test auf Augenreizung (Abbildung 1), die für die EpiOcular Gewebemodell entwickelt wurde, vorgestellt. Das ETI ist in der Lage, die Augen reizenden und ätzenden Stoffen (GHS Kategorien 1 und 2 kombiniert) aus Materialien, die keine Kennzeichnung (GHS Keine Kategorie) mit hoher Sensitivität und Spezifität 17. Das EIT zu trennen, wie sie hier vorgestellt wird nicht zwischen GHS-Kategorie unterscheiden 1 von Kategorie 2 Chemikalien. Das EIT wurde für die Einstufung und Kennzeichnung von Augenreizungspotenzial von einer breiten Palette von Chemikalien, einschließlich kosmetischen und pharmazeutischen Inhaltsstoffen validiert. In Verbindung mit anderen in vitro-Tests wird das EIT als Ersatz für die in-vivo-Kaninchenaugenreiztest dienen. Das EIT verwendet zwei ähnliche, aber unterschiedliche Protokolle für flüssige und feste Materialien, die in der Länge der Exposition und der Nachbelichtung Inkubationszeiten (Figur 1) variieren. Die in der EIT verwendet Endpunktist die Lebensfähigkeit des Gewebes, durch das MTT-Assay, der zuvor in validierten menschlichen Epithelgewebe Modelle 20,21 verwendet wurde bestimmt. Um diesen Test durchzuführen, wird keine spezielle Ausrüstung neben Standard-Zellkultur Ausrüstung benötigt. Aufgrund der hohen Gewebe zu Gewebe Reproduzierbarkeit, n = 2 Geweben anstelle der Regel empfohlen, n = 3 verwendet. Der Fähigkeit zur Nutzung n = 2 Geweben ist ein kritischer Aspekt des Protokolls, denn sie erlaubt es einem erfahrenen Bediener, zwei Gewebe gleichzeitig zu verarbeiten, wodurch die Variabilität des Assays, die entstehen, minimiert aufgrund der unterschiedlichen Handhabung von einzelnen Tissues 14. Auch durch Verwendung von n = 2 Geweben pro Testartikel, die Reizwirkung von 10 Testsubstanzen der gleichen physikalischen Zustand (flüssig oder fest), zusammen mit den positiven und negativen Kontrollen, unter Verwendung von einem Satz (24 Gewebe) ausgewertet werden. Andere wichtige Punkte, die zuverlässige Klassifizierung von Materialien gewährleisten Spezifikationen für die positive Kontroll substance (Gewebeviabilität ≤50.0%), Reproduzierbarkeit zwischen doppelte Gewebe (Differenz &lt;20,0%) und negative Kontrolle OD-Ablesungen (&gt; 0,8 und &lt;2,5). Bei der Durchführung des EIT-Test, ist es wichtig, auf die validierten Protokoll und der vorgeschlagenen Dosierung und Spülen Pläne (Tabellen 3 und 4) zu halten, da Abweichung vom Protokoll oder Änderungen der Inkubationszeiten kann zu veränderten Ergebnissen führen. Ebenso werden Abweichungen von der 3 Stunden Zeit für MTT Inkubation in verschiedenen MTT Lesungen führen und Assay-Ergebnis auswirken. Gelegentlich kann eine Testchemikalie müssen optische oder andere Eigenschaften, die mit MTT Gewebelebensfähigkeitstest oder verursachen Reduktion von MTT stören können. Zum Beispiel kann eine Testchemikalie direkt MTT in blau-lila-Reaktionsprodukt, oder sie kann eine gefärbte Substanz, die Licht in der gleichen Größenordnung wie MTT Formazan (~ 570 nm) absorbiert werden. Allerdings werden diese Testchemikalien prESENT nur ein Problem, wenn zum Zeitpunkt des MTT-Tests, ist immer noch eine ausreichende Menge des Materials auf den heutigen (oder absorbiert) des Gewebes. Um diese Störungen zu vermeiden, sind umfangreiche Spülvorgänge in den EIT-Protokoll einbezogen. Wenn Spülen nicht entfernen Sie die TA und die TA stört MTT-Reduktion, müssen zusätzliche Kontrollen verwendet werden, zu erkennen und zu korrigieren ist. Kurz gesagt, wenn eine direkte MTT-Reduktion der Prüfsubstanz wird vermutet, 50 ul (oder 50 mg für Feststoffe) der betreffenden Chemikalie wird 3 h mit Arbeits MTT-Lösung bei SCC (NC 50 ul sterilem, entionisiertem Wasser inkubiert wird, sollte gleichzeitig laufen). Wenn der MTT Lösung blau-violett, ist der Testgegen vermutlich das MTT reduziert. In diesem Fall ist eine Funktionsprüfung mit gefrier getötet Gewebekontrollen durchgeführt werden sollte, um zu bewerten, ob das Testmaterial auf die Gewebebindung und zu einer falschen MTT-Reduktionssignal. Wenn es nennens MTT-Reduktion in der TA-ausgesetzt, getötet Gewebekontrolle(relativ zu der Menge bei der unbehandelten lebensfähiges Gewebe), muß die mittlere Gewebelebensfähigkeit des Testgegenstands durch Subtrahieren der mittleren Überlebensfähigkeit des getötet Steuerung korrigiert werden. Das EIT irrt auf der Seite der Sicherheit, wie durch die niedrige Inzidenz von falsch negativen Klassifikationen 14,15,18 gezeigt. Wichtig ist, dass keiner der GHS-Kategorie 1 Chemikalien, die ätzend auf die Augen sind und stellen den schwersten Augengefahr, wurden als nicht reizend in diesem Assay 14,15,18,19 klassifiziert. Schließlich ist einer der Hauptvorteile des RhCE in vitro-Testverfahren die Möglichkeit der Prüfung reine Flüssigkeit und festen Materialien (die nicht mit zweidimensionaler, untergetaucht Zellkulturen möglich ist). Das EIT wird bei der Bestimmung des Augenreizungspotenzial von einer breiten Palette von Materialien gemäß der UN GHS Einstufung und Kennzeichnung System einen wichtigen Beitrag. Der Ersatz von Tieren o bestimmen,sondere Toxizität ist seit vielen Jahren ein Ziel der toxikologischen Forschung. Das EIT Testmethode hat eine formelle Validierungsstudie durch EURL ECVAM unterstützt im Jahr 2014 abgeschlossen und die EpiOcular EIT wurde im Jahr 2015 in den Testleitlinien der OECD OECD TG 492 implementiert.

Consumer-Produkte wie Kosmetika, Wasch- und Reinigungsmitteln umfassen eine Vielzahl von Chemikalien, die schwere Schäden verursachen können, wenn sie Kontakt mit den Augen. Daher ist die Prüfung dieser Mittel zur Augenreizung durch die US- und EU-Aufsichtsbehörden erforderlich ist, um die Sicherheit der Verbraucher zu gewährleisten 1. Eine Bewertung der Augenreizung Potenzial der Mischungen und Formulierungen ist auch eine Voraussetzung für die Einhaltung der REACH (Registrierung, Bewertung, Zulassung und Beschränkung chemischer Stoffe) Rechtsvorschriften für die Etikettierung von kosmetischen Inhaltsstoffen im Rahmen der EU-Kosmetik-Richtlinie für den Transport von Chemikalien und für die Kennzeichnung von Pflanzenschutzmitteln und Haushaltsprodukte 2. Derzeit Aufsichtsbehörden verlangen, Augengefährdungsbeurteilung unter Verwendung des Global Harmonisierte System zur Einstufung und Kennzeichnung von Chemikalien (GHS) 3. GHS basiert hauptsächlich auf der Draize Augenreiztest basiert, die am weitesten verbreitete Augenreizung Assay, in dem Fremdstoffe und mixtures werden direkt in den Bindehautsack des Kaninchenauges 4 eingeleitet. Nach GHS-Einstufung, GHS-Kategorie 1 (augenverätzender) bezieht sich auf Chemikalien, die schwere anfänglichen Schädigung der Augengewebe oder schwere Schäden am Auge und Vision, die nicht innerhalb von 21 Tagen nach der Exposition 3,5 vollständig reversibel verursachen testen. GHS Kategorie 2 bezieht sich auf Chemikalien, die wesentlichen Änderungen des Auges, die innerhalb von 21 Tagen nach der Exposition vollständig reversibel sind produzieren zu testen. Testchemikalien, die keine korrosive oder Reizstoffe werden als GHS Keine Kategorie bezeichnet. Seit mehr als 40 Jahren hat sich die Kaninchenaugentest Draize für seinen Mangel an Reproduzierbarkeit, Überschätzung der menschlichen Reaktionen, und der Einsatz von lebenden Tieren 08.05 kritisiert worden. Diese Bedenken wurden viele Vorschläge zur Verfeinerung, Verringerung und Ersetzung der in-vivo-Test 9 gefördert. Der Bedarf an validierten ohne Tier Alternativen weiter gestärktdurch die Annahme der siebten Änderung der Kosmetik-Richtlinie, die die Verwendung von Tieren in die Sicherheitsbewertung kosmetischer Mittel (2005) verboten und Zutaten (in 2009) 2. Seit 1996 ist der rekonstruierte Cornea artigen Gewebemodell wurde in großem Umfang von der kosmetischen Industrie verwendet, um das Reizpotential der Rohstoffe, tensidhaltigen Formulierungen zu bewerten und compoundierten Mischungen, die zur Verwendung in ausgelegt sind, oder in der Nähe von, dem Auge 10-13. Die Nutzung der RhCE Gewebemodell ermöglicht die direkte topische Anwendung des Testmaterials auf die Gewebeoberfläche in seiner nativen, unverdünnt. Auf diese Weise können nicht-wasserlösliche Formulierungen, ohne sie mit Lösungsmitteln verdünnt getestet werden. Als Reaktion auf EURL ECVAM (EU-Referenzlabor Europäische Zentrum für die Validierung alternativer Methoden) Anforderung für eine breite Anwendung, einfache und wirtschaftliche Methode der Test auf Augenreizung (EIT), das eine singl nutzte Belichtungszeit und ist in der Lage, die Augen reizenden und ätzenden Stoffen aus Materialien, die nicht Kennzeichnung erfordern getrennt wurde (Abbildung 1) 14 entwickelt. Basierend auf den Ergebnissen für die 83 Chemikalien (44 Flüssigkeiten und 39 Feststoffe) erzielte das EIT 95.5 / 68.2 / und 81,8% Sensitivität / Spezifität und Genauigkeit (SS &amp; A) für Flüssigkeiten, 100,0 / 68,4 / 84,6% SS &amp; A für Feststoffe und 97,6 / 68,3 / 83,1% und für die gesamte SS &amp; A. Im Jahr 2007, ein Multi-Labor vor, eine Validierungsstudie durch Cosmetics Europe (ehemals Colipa) unter der Schirmherrschaft der EURL ECVAM gesponserte bewertet die Relevanz und Zuverlässigkeit des EIT mit dem Ziel, es zu formellen Validierung 15 bringen. In dieser Studie wurden 298 unabhängige Studien in sieben unabhängigen Labors durchgeführt. Die Ergebnisse der Studie zeigten 99,7% Zustimmung bei der Vorhersage mit niedrigen Variationskoeffizienten für alle teilnehmenden Laboratorien 15. Als Ergebnis im Jahr 2010 die EIT-Protokoll trat eine formelle EURL ECVAMValidierungsprogramm. Die Validierungsstudie verwendet 104 codierte Testchemikalien, einschließlich Einzelstoffe und Mischungen von Chemikalien, für die in-vivo-Referenzdaten (Draize-Augenreizungsdaten) zur Verfügung standen. Basierend auf dem Erfolg dieser Arbeit wurde ein OECD-Prüfrichtlinie Entwurf 2014 vorgelegt Es wird erwartet, dass das EIT wird wesentlich zur Einstufung von Augenreizungspotenzial von einer breiten Palette von Materialien gemäß der UN GHS Einstufung und Kennzeichnung Systems beitragen.

eye irritation test (eit) for hazard identification of eye irritating chemicals using reconstructed human cornea-like epithelial (rhce) tissue model

Um mit dem siebten Änderung der EU-Kosmetikrichtlinie und der EU-REACH-Verordnung zu erfüllen, sind validierte tierversuchsfreien Alternativmethoden für eine zuverlässige und genaue Bewertung der okulare Toxizität beim Menschen erforderlich. Um diesen Bedarf anzusprechen, haben wir eine Augenreizung (EIT), die ein dreidimensionales rekonstruiertes menschlichen Hornhaut artigen Epithelzellen (RhCE) Gewebemodells, die auf normalen menschlichen Zellen basiert, nutzt entwickelt. Das ETI ist in der Lage, die Augen reizenden und ätzenden Stoffen (GHS Kategorien 1 und 2 kombiniert) und jene, die keine Kennzeichnung (GHS Keine Kategorie) zu trennen. Der Test verwendet zwei getrennte Protokolle, eine für flüssige Chemikalien, und ein zweites, ähnliches Protokoll für feste Testartikel konzipiert. Das EIT Vorhersagemodell verwendet einen einzelnen Expositionszeit (30 min für Flüssigkeiten, 6 Stunden für Feststoffe) und eine einzelne Gewebelebensfähigkeit cut-off (60,0%, wie durch den MTT-Test bestimmt). Basierend auf den Ergebnissen für 83 Chemikalien (44 Flüssigkeiten und Feststoffen 39) EIT erreicht 95,5 / 68,2 / 81,8% sensitivity / Spezifität und Genauigkeit (SS &amp; A) für Flüssigkeiten, 100,0 / 68,4 / 84,6% und SS &amp; A für Feststoffe und 97,6 / 68,3 / 83,1% und für die gesamte SS &amp; A. Das EIT wird wesentlich zur Klassifizierung des Augenreizungspotenzial von einer breiten Palette von flüssigen und festen Chemikalien, ohne die Verwendung von Tieren zu regulatorischen Testanforderungen gerecht zu leisten. Die EpiOcular EIT-Verfahren wurde im Jahr 2015 in den OECD-Prüfungsrichtlinien als TG 492 implementiert.

Repräsentative EIT Ergebnisse mit 10 Testartikel (TA) und Negativ- und Positivkontrollen durchgeführt, sind in Tabelle 6 und Abbildung 3 dargestellt. Der OD = 1,31 für die NC entspricht 100% Gewebelebensfähigkeit, damit der PC (mittlere OD = 0,41) hatten relativen Gewebelebensfähigkeit von 31,2%. Wenn das EIT-Protokoll wurde in 15 gültigen unabhängigen Experimenten in 7 Labors unter Verwendung des flüssigen Exposition Protokoll und in 8 unabhängige gültige Versuche in 4 Labors, unter Verwendung der festen Exposition Protokoll durchgeführt, die durchschnittliche Gewebelebensfähigkeit für den PC mit der Flüssigkeit Protokoll betrug 36,4 ± 4,0 % bzw. 32,3 ± 6,4% in der Feststoff Protokoll. In allen Fällen waren die positiven Kontrollergebnisse unterhalb des Cut off-Wert von 60,0% 15. Wie in Figur 3, TA1, TA2, TA4, TA7 gezeigt und TA8 hatten Gewebelebensfähigkeiten&gt; 60,0% und wurden daher als &quot;NI&quot; klassifiziert. TA3, TA5, TA6, hatte TA9 und TA10 Gewebe Bewohnbarkeit X04; 60,0% und damit als &quot;I&quot; klassifiziert. Die Differenz der Gewebelebensfähigkeit zwischen doppelte Gewebe war &lt;20,0% für alle TAs mit Ausnahme von TA2. Daher Ergebnisse für alle Test Artikel, mit Ausnahme von TA2, wurden als &quot;qualifiziert&quot;, da sie alle EIT Akzeptanzkriterien (Abschnitt 10.2) erfüllt. Wegen der hohen Variabilität zwischen doppelte Gewebe für TA2 in der anfänglichen Experiment wurde ein zweites Experiment notwendig, qualifizierte EIT Ergebnisse zu erhalten. Das EIT Testverfahren wie hierin beschrieben, unter Verwendung der RhCE Gewebemodell wurde für die Bewertung der Augenreizung in mehreren multilaboratory Validierungsstudien, einschließlich der formellen Bestätigung durch EURL ECVAM / Cosmetics Europe 15,17-19 verwendet. In allen Studien wurde der EIT gezeigt reproduzierbar sein und konnte Chemikalien (beide Stoffe und Gemische) die Einstufung und Kennzeichnung für Augenreizungen oder schwere Augenschäden ac ohne eigenes korrekt zu identifizierenCording zu UN GHS 15,17-19. Das EIT Testverfahren erfüllt die Akzeptanzkriterien der Validation Management Group (VMG) für die Augenreizung für Sensitivität, Spezifität und Gesamtgenauigkeit und derzeit anhängig ist es formale Umsetzung als teilweiser Ersatz für die in vivo Kaninchen Draize-Test 19. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/52979/52979fig1.jpg" /> Abbildung 1: Überblick über die EIT-Protokoll für flüssige und feste Testartikel verwendete Abkürzungen: AM, Assay-Medium;. SCC, Standardkulturbedingungen; PBS Dulbecco Phosphat-gepufferter Saline; RT Raumtemperatur. <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/52979/52979fig2.jpg" /> Abb. 2: Die standardisierte 96-Well-Platte-Konfiguration für das MTT Gewebeviabilität Test zwei 200 ul Aliquots sind train die entsprechenden Vertiefungen einer pre-markierten 96-Well-Platte nsferred. Verwendete Abkürzungen: NC, negative Kontrolle; PC, Positivkontrolle; TA1-TA20, Testartikel 20.01; Blank, Extraktionsmittellösung. 96- MTT Plattenkonfiguration ist mit Excel-Tabelle zur RhCE Gewebelebensfähigkeit und EIT Ergebnisse zu berechnen. <img alt="Figur 3" src="/files/ftp_upload/52979/52979fig3.jpg" /> Abbildung 3: EIT-Ergebnisse für 10 Test Artikel, NC und PC-Steuerungen mit RHCE-Gewebemodell erhalten Die Grafik wird aus einer Excel-Tabelle zur EIT Ergebnisse zu präsentieren generiert.. Testchemikalien, die Lebensfähigkeit des Gewebes ≤ 60,0%, bezogen auf NC reduziert werden als Reizstoffe (&quot;I&quot;, TA3, TA5, TA6, TA9 und TA10) und Testchemikalien, die Lebensfähigkeit des Gewebes&gt; 60,0% werden als nicht-Reizstoffe eingestuft hatte (klassifiziert &quot; NI &quot;, TA1, TA2, TA4, TA7 und TA8). <table border="0" cellpadding="0" cellspacing = &quot;0&quot;&gt; <tbody><tr><td colspan="7"> Startzeit für die EIT-Protokoll Arbeitsschritte (ein Tag der Arbeit für einen Operator) </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4"> Jede Zeile entspricht einem Paar von Geweben </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Reihenfolge der Schritte: </td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td><td> 6 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Flüssigkeiten: </td><td> PBS </td><td> TA Belichtung </td><td> Post- Durchnässen </td><td> Post- <td> MTT Reaktion </td><td> MTT Extraktion </td><td> Maßnahme </td></tr><tr><td></td><td> 30 Minuten </td><td> 30 Minuten </td><td> 12 min </td><td> 120 min </td><td> 180 min </td><td> 120 min </td><td> OD </td></tr><tr><td> NC </td><td> 9.00 </td><td> 9.30 </td><td> 10.00 </td><td> 10.12 </td><td> 0.12 </td><td> 15.12 </td><td> nach </td></tr><tr><td> PC </td><td> 9.01 </td><td> 9.31 </td><td> 10.01 </td><td> 10.13 </td><td> 0.13 </td><td> 15.13 </td><td> 17.30 </td></tr><tr><td> TA-1 </td><td> 9.02 </td><td> 9.32 </td><td> 10.02 </td><td> 10.14 </td><td> 0.14 </td><td> 15.14 </td><td></td></tr><tr><td> TA-2 &lt;/ strong&gt; </td><td> 9.03 </td><td> 9.33 </td><td> 10.03 </td><td> 10.15 </td><td> 0.15 </td><td> 15.15 </td><td></td></tr><tr><td> TA-3 </td><td> 9.04 </td><td> 9.34 </td><td> 10.04 </td><td> 10.16 </td><td> 0.16 </td><td> 15.16 </td><td></td></tr><tr><td> TA-4 </td><td> 9.05 </td><td> 9.35 </td><td> 10.05 </td><td> 10.17 </td><td> 0.17 </td><td> 15.17 </td><td></td></tr><tr><td> TA-5 </td><td> 9.06 </td><td> 9.36 </td><td> 10.06 </td><td> 10.18 </td><td> 0.18 </td><td> 15.18 </td><td></td></tr><tr><td> TA-6 </td><td> 9.07 </td><td> 9.37 </td><td> 10.07 </td><td> 10.19 </td><td> 0.19 </td><td> 15.19 </td><td></td></tr><tr><td> TA-7 </td><td> 9.08 </td><td> 9.38 </td><td> 10.08 </td><td> 10.20 </td><td> 0.20 </td><td> 15.20 </td><td></td></tr><tr><td><stro<html> ng&gt; TA-8 </td><td> 9.09 </td><td> 9.39 </td><td> 10.09 </td><td> 10.21 </td><td> 0.21 </td><td> 15.21 </td><td></td></tr><tr><td> TA-9 </td><td> 9.10 </td><td> 9.40 </td><td> 10.10 </td><td> 10.22 </td><td> 0.22 </td><td> 15.22 </td><td></td></tr><tr><td> TA-10 </td><td> 9.11 </td><td> 9.41 </td><td> 10.11 </td><td> 10.23 </td><td> 0.23 </td><td> 15.23 </td><td></td></tr></tbody></table> Tabelle 3:. Beispiel Zeitplan für die Prüfung von flüssigen Testartikel Protocol Schritte einschließlich Vorbenetzung die Gewebe mit DPBS, Anwendung von Test-Artikel (TAS), Spülen und Post-tränken, Post-Inkubationszeit MTT-Test, Extraktion von MTT, und Messung der MTT OD in Spalten dargestellt. Zeiten für die Doppelgewebe in Reihen organisiert. Der gesamte Test Test 10 TAs und Kontrollen können in einem Tag abgeschlossen werden. e_content &quot;&gt; <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" height="439" width="582"><tbody><tr><td colspan="6"> Startzeit für das EIT Protokollschritte (2 Tage arbeiten für einen Operator) </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4"> Jede Zeile entspricht einem Paar von Geweben </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tag 1 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="2"> Tag 2 (am nächsten Tag) </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Reihenfolge der Schritte: </td><td> 1 </strong&gt; </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td><td> 6 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Festkörper: </td><td> PBS </td><td> TA Belichtung </td><td> Post- Durchnässen </td><td> Post- Incubaction </td><td> MTT Reaktion </td><td> MTT Extraktion </td><td> Maßnahme </td></tr><tr><td></td><td> 30 Minuten </td><td> 6 Stunden </td><td> 26 min </td><td> 18 Stunden </td><td> 180 min </td><td> 120 min </td><td> OD </td></tr><tr><td> NC </td><td> 9.00 </td><td> 9.30 </td><td> 15.30 </td><td> 15.56 </td><td> 9.56 </td><td> 0.56 </td&gt; <td> nach </td></tr><tr><td> PC </td><td> 9.02 </td><td> 9.32 </td><td> 15.32 </td><td> 15.58 </td><td> 09.58 </td><td> 0.58 </td><td> 15.30 </td></tr><tr><td> TA-1 </td><td> 9.04 </td><td> 9.34 </td><td> 15.34 </td><td> 16.00 </td><td> 10.00 </td><td> 13.00 </td><td></td></tr><tr><td> TA-2 </td><td> 9.06 </td><td> 9.36 </td><td> 15.36 </td><td> 16.02 </td><td> 10.02 </td><td> 13.02 </td><td></td></tr><tr><td> TA-3 </td><td> 9.08 </td><td> 9.38 </td><td> 15.38 </td><td> 16.04 </td><td> 10.04 </td><td> 13.04 </td><td></td></tr><tr><td> TA-4 </td><td> 9.10 </td><td> 9.40 </td><td> 15.40 </td><td> 16.06 </td><td> 10.06 </td><td> 13.06 </td><td></td></tr><tr><td> TA-5 </td><td> 9.12 </td><td> 9.42 </td><td> 15.42 </td><td> 16.08 </td><td> 10.08 &lt;/ td&gt; <td> 13.08 </td><td></td></tr><tr><td> TA-6 </td><td> 9.14 </td><td> 9.44 </td><td> 15.44 </td><td> 16.10 </td><td> 10.10 </td><td> 13.10 </td><td></td></tr><tr><td> TA-7 </td><td> 9.16 </td><td> 9.46 </td><td> 15.46 </td><td> 16.12 </td><td> 10.12 </td><td> 13.12 </td><td></td></tr><tr><td> TA-8 </td><td> 9.18 </td><td> 9.48 </td><td> 15.48 </td><td> 16.14 </td><td> 10.14 </td><td> 13.14 </td><td></td></tr><tr><td> TA-9 </td><td> 9.20 </td><td> 09.50 </td><td> 15.50 </td><td> 16.16 </td><td> 10.16 </td><td> 13.16 </td><td></td></tr><tr><td> TA-10 </td><td> 9.22 </td><td> 9.52 </td><td> 15.52 </td><td> 16.18 </td><td> 10.18 </td><td> 13.18 </td><td></td></tr></tbody></table> Tabelle 4: Beispiel-Zeitplan für die Prüfung von festen Testartikel. Protokoll Schritte einschließlich Vorbenetzung die Gewebe mit DPBS, Anwendung von Test-Artikel, Spülen und Post-tränken, Post-Inkubationszeit MTT-Test, Extraktion von MTT und Messung der MTT OD in Spalten dargestellt. Zeiten für die Doppelgewebe in Reihen organisiert. Der gesamte Test testet 10 TAs und Kontrollen über einen Zeitraum von zwei Tagen durchgeführt. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Höhe </td><td> Reagens </td><td> Lagerbedingungen </td><td> Ursprung </td><td> Bezeichnung </td><td> Ablaufdatum </td></tr><tr><td> 1 Flasche, 2 ml </td><td> MTT-Konzentrat (MTT-100-CON) </td><td> Unter Lichtschutz (-20 ° C) </td><td> MatTek </td><td> Gefrorene MTT-Konzentrat </td><td> 2 Monate </td></tr><tr><td> 1 Flasche, 8 ml </td><td> MTT Verdünnungs </td><td> 2-8 &amp;# 186; C </td><td> MatTek </td><td> Zum Verdünnen MTT Konzentrat vor der Verwendung in dem MTT-Assay verwenden </td><td> 2 Monate </td></tr><tr><td> 1 Flasche, 60 ml </td><td> Isopropanol (CAS # 67-63-0) </td><td> RT </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> Extraktionslösung </td><td> N / A </td></tr></tbody></table> Tabelle 5: MTT-100 Assay Kit Components. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Code N ° </td><td> Gewebe </td><td colspan="2"> Rohdaten </td><td colspan="2"> Blank korrigierten Daten </td><td rowspan="2"> Mittelwert der OD </td><td rowspan="2"> % Der Lebensfähigkeit </td></tr><tr><td></td><td> n </td><td> Aliq. 1 </td><td> Aliq. 2 </td><td> Aliq. 1 </td><td> Aliq. 2 </td></tr><tr><td> NC </td><td>1 </td><td> 1,316 </td><td> 1,352 </td><td> 1,316 </td><td> 1,352 </td><td> 1,334 </td><td> 101,6 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 1,277 </td><td> 1,309 </td><td> 1,277 </td><td> 1,309 </td><td> 1,293 </td><td> 98,4 </td></tr><tr><td> PC </td><td> 1 </td><td> 0,379 </td><td> 0,397 </td><td> 0,379 </td><td> 0,397 </td><td> 0,388 </td><td> 29,6 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,419 </td><td> 0,442 </td><td> 0,419 </td><td> 0,442 </td><td> 0,431 </td><td> 32,8 </td></tr><tr><td> TA1 </td><td> 1 </td><td> 1,213 </td><td> 1,244 </td><td> 1,213 </td><td> 1,244 </td><td> 1,229 </td><td> 93,5 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 1,355 </td><td> 1,355 </td><td> 1,355 </td><td> 1,355 </td><td> 1,355 </td><td> 103,2 </td></tr><tr><td> TA2 </td><td> 1 </td><td> 1,210 </td><td> 1,122 </td><td> 1,210 </td><td> 1,122 </td><td> 1,166 </td><td> 88,7 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,828 </td><td> 0,837 </td><td> 0,828 </td><td> 0,837 </td><td> 0,833 </td><td> 63,4 </td></tr><tr><td> TA3 </td><td> 1 </td><td> 0,167 </td><td> 0,168 </td><td> 0,167 </td><td> 0,168 </td><td> 0,167 </td><td> 12,7 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,138 </td><td> 0,136 </td><td> 0,138 </td><td> 0,136 </td><td> 0,137 </td><td> 10.4 </td></tr><tr><td> TA4 </td><td> 1 </td><td> 1,137 </td><td> 1,160 </td><td> 1,137 </td><td> 1,160 </td><td> 1,149 </td><td> 87,4 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 1,262 </td><td> 1,191 </td><td> 1,262 </td><td> 1,191 </td><td> 1,227 </td><td> 93,4 </td></tr><tr><td> TA5 </td><td> 1 </td><td> 0,610 </td><td> 0,621 </td><td> 0,610 </td><td> 0,621 </td><td> 0,616 </td><td> 46,9 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,480 </td><td> 0,484 </td><td> 0,480 </td><td> 0,484 </td><td> 0,482 </td><td> 36,7 </td></tr><tr><td> TA6 </td><td> 1 </td><td> 0,502 </td><td> 0,513 </td><td> 0,502 </td><td> 0,513 </td><td> 0,508 </td><td> 38,7 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,396 </td><td> 0,407 </td><td> 0,396 </td><td> 0,407 </td><td> 0,402 </td><td> 30,6 </td></tr><tr><td> TA7 </td><td> 1 </td><td> 1,048 </td><td> 1.050 </td><td> 1,048 </td><td> 1.050 </td><td> 1,049 </td><td> 79,9 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 1,149 </td><td> 1.150 </td><td> 1,149 </td><td> 1.150 </td><td> 1.150 </td><td> 87,5 </td></tr><tr><td> TA8 </td><td> 1 </td><td> 1,032 </td><td> 1,034 </td><td> 1,032 </td><td> 1,034 </td><td> 1,033 </td><td> 78,7 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,941 </td><td> 0,935 </td><td> 0,941 </td><td> 0,935 </td><td> 0,938 </td><td> 71,4 </td></tr><tr><td> TA9 </td&gt; <td> 1 </td><td> 0,022 </td><td> 0,022 </td><td> 0,022 </td><td> 0,022 </td><td> 0,022 </td><td> 1.7 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,144 </td><td> 0,149 </td><td> 0,144 </td><td> 0,149 </td><td> 0,147 </td><td> 11.2 </td></tr><tr><td> TA10 </td><td> 1 </td><td> 0,150 </td><td> 0,150 </td><td> 0,150 </td><td> 0,150 </td><td> 0,150 </td><td> 11.4 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 0,254 </td><td> 0,255 </td><td> 0,254 </td><td> 0,255 </td><td> 0,255 </td><td> 19,4 </td></tr></tbody></table><table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td></td><td> bedeuten </td><td> Dif. </td><td> Mittelwert </td><td> Dif. </td><td> Dif. / 2 </td><td colspan="2"> Klassifikation </td></tr><tr><td></td><td> der OD </td><td> der OD </td><td> Bewohnbarkeit [%] </td><td> der Bewohnbarkeit </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> NC </td><td> 1,314 </td><td> 0,041 </td><td> 100,0 </td><td> 3.12 </td><td> 1.56 </td><td> NI </td><td> qualifiziert </td></tr><tr><td> PC </td><td> 0,410 </td><td> 0,043 </td><td> 31,2 </td><td> 3.23 </td><td> 1.62 </td><td> ICH </td><td> qualifiziert </td></tr><tr><td> TA1 </td><td> 1,292 </td><td> 0,127 </td><td> 98,3 </td><td> 9.63 </td><td> 4.81 </td><td> NI </td><td> qualifiziert </td></tr><tr><td> TA2 </td><td> 0,999 </td><td> 0,333 </td><td> 76,1 </td><td> 25,36 </td><td> 12.68 </td><td> NI </td><td> D&gt; 20 </td></tr><tr><td> TA3 </td><td> 0,152 </td><td> 0,030 </td><td> 11,6 </td><td> 2.32 </td><td> 1.16 </td><td> ICH </td><td> qualifiziert </td></tr><tr><td> TA4 </td><td> 1,188 </td><td> 0,078 </td><td> 90,4 </td><td> 5.94 </td><td> 2.97 </td><td> NI </td><td> qualifiziert </td></tr><tr><td> TA5 </td><td> 0,549 </td><td> 0,134 </td><td> 41,8 </td><td> 10,16 </td><td> 5.08 </td><td> ICH </td><td> qualifiziert </td></tr><tr><td> TA6 </td><td> 0,455 </td><td> 0,106 </td><td> 34,6 </td><td> 8.07 </td><td> 4.03 </td><td> ICH </td><td> qualifiziert </td></tr><tr><td> TA7 </td><td> 1.100 </td><td> 0,101 </td><td> 83,7 </td><td> 7.65 </td><td> 3.82 </td><td> NI </td><td> qualifiziert </td></tr><tr><td> TA8 </td><td> 0,986 </td><td> 0,095 </td><td> 75,0 </td><td> 7.23 </td><td> 3.62 </td><td> NI </td><td> qualifiziert </td></tr><tr><td> TA9 </td><td> 0,085 </td><td> 0,125 </td><td> 6.4 </td><td> 9.48 </td><td> 4.74 </td><td> ICH </td><td> qualifiziert </td></tr><tr><td> TA10 </td><td> 0,203 </td><td> 0,105 </td><td> 15,4 </td><td> 7.95 </td><td> 3.98 </td><td> ICH </td><td> qualifiziert </td></tr></tbody></table> Tabelle 6:. Für 10 Testartikel erhalten EIT Ergebnisse, NC und PC-Steuerungen Die Tische sind proddurch eine Excel-Tabelle entworfen, um die Lebensfähigkeit des Gewebes und EIT Ergebnisse zu berechnen uced. Testchemikalien, die Lebensfähigkeit des Gewebes ≤ 60,0%, bezogen auf NC reduziert werden als Reizstoffe (&quot;I&quot;, TA3, TA5, TA6, TA9 und TA10) und Test-Chemikalien, die Lebensfähigkeit des Gewebes&gt; 60,0% werden als nicht-Reizstoffe eingestuft hatte (klassifiziert &quot; NI &quot;, TA1, TA2, TA4, TA7 und TA8).

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Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

Wir haben einen Test auf Augenreizung, die einen dreidimensionalen rekonstruierten menschlichen Hornhaut artigen Epithelzellen (RhCE) Gewebemodell nutzt entwickelt. Der Test ist in der Lage, zwischen den Augenreizstoffes und ätzende Stoffe (GHS Kategorien 1 und 2 kombiniert) und diejenigen, die nicht die Kennzeichnung (GHS Keine Kategorie) erfordern, zu unterscheiden.

Test auf Augenreizung (EIT) zur Kennzeichnung der Gefahr von Augen Reizt Chemicals mit rekonstruierter menschlicher Hornhaut-ähnlichen Epithelial (RhCE) Gewebemodell

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

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