Name: orthotopic implantation and peripheral immune cell monitoring in the ii-45 syngeneic rat mesothelioma model
Uploaded: 2015-10-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model at JoVE.com

The syngeneic rat mesothelioma II-45 cell line was a kind gift from A/Prof. Emanuela Felley-Bosco, Zurich University.

Alle Verfahren, die Tiere wurden in Übereinstimmung mit den Empfehlungen in der australischen Code of Practice für die Pflege und Verwendung von Tieren zu wissenschaftlichen Zwecken durchgeführt. Das Protokoll für diese Studie wurde von der Royal North Shore Hospital Animal Care und Ethik-Kommission genehmigt. Weiblich Fischer 344 Ratten (F344, 150-200 g) wurden am Kearns Einrichtung gepflegt, Kölling Institute unter Standardbedingungen (12 Stunden Licht / Dunkel-Zyklen und den freien Zugang zu Nahrung und Wasser)....

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	<li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+mesothelioma.">Malignant mesothelioma.</a> Intern Med J. 40 (11), 742-7450 (2010).</li><li>Zucali, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+biology+of+malignant+pleural+mesothelioma.">Advances in the biology of malignant pleural mesothelioma.</a> Cancer Treat Rev. 37 (7), 543-558 (2011).</li><li>Olsen, N. 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Why do most phase III clinical trials fail?.</a> Curr Gene Ther. 9 (5), 368-374 (2009).</li><li>Kamb, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What's+wrong+with+our+cancer+models.">What's wrong with our cancer models.</a> Nat Rev Drug Discov. 4 (2), 161-165 (2005).</li><li>Yakisich, J. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+a+panel+of+chemo-resistant+mesothelioma+models+for+investigating+chemo-resistance+and+identifying+new+treatments+for+mesothelioma.">Establishing a panel of chemo-resistant mesothelioma models for investigating chemo-resistance and identifying new treatments for mesothelioma.</a> Sci Rep. 4, 6152 (2014).</li><li>Iannaccone, P. M., Jacob, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rats!.">Rats!.</a> Dis Model Mech. 2 (5-6), 206-210 (2009).</li><li>Craighead, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+tumors+and+tumor+cells+cultured+from+experimental+asbestos-induced+mesotheliomas+in+rats.">Characteristics of tumors and tumor cells cultured from experimental asbestos-induced mesotheliomas in rats.</a> Am J Pathol. 129 (3), 448-462 (1987).</li><li>Hunter, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+subset+analysis+by+Boolean+algebra:+a+phenotypic+approach+using+a+cocktail+of+5+antibodies+and+3+color+immunofluorescence.">Lymphocyte subset analysis by Boolean algebra: a phenotypic approach using a cocktail of 5 antibodies and 3 color immunofluorescence.</a> Cytometry. 15 (3), 258-266 (1994).</li><li>Brando, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytofluorometric+methods+for+assessing+absolute+numbers+of+cell+subsets+in+blood.+European+Working+Group+on+Clinical+Cell+Analysis.">Cytofluorometric methods for assessing absolute numbers of cell subsets in blood. European Working Group on Clinical Cell Analysis.</a> Cytometry. 42 (6), 327-346 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Gajkowska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+enumeration+of+CD34++hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+in+leukapheresis+product+and+bone+marrow+for+clinical+transplantation:+a+comparison+of+three+methods.">Flow cytometric enumeration of CD34+ hematopoietic stem and progenitor cells in leukapheresis product and bone marrow for clinical transplantation: a comparison of three methods.</a> Folia Histochem Cytobiol. 44 (1), 53-60 (2006).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144 (5), 646-674 (2011).</li><li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+blood+neutrophil-to-lymphocyte+ratio+is+an+indicator+of+poor+prognosis+in+malignant+mesothelioma+patients+undergoing+systemic+therapy.">High blood neutrophil-to-lymphocyte ratio is an indicator of poor prognosis in malignant mesothelioma patients undergoing systemic therapy.</a> Clin Cancer Res. 16 (23), 5805-5813 (2010).</li><li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+prognostic+factors+in+malignant+pleural+mesothelioma:+a+retrospective+analysis+of+data+from+patients+seeking+compensation+from+the+New+South+Wales+dust+diseases+board.">Validation of prognostic factors in malignant pleural mesothelioma: a retrospective analysis of data from patients seeking compensation from the New South Wales dust diseases board.</a> Clin Lung Cancer. 14 (1), 70-77 (2013).</li><li>Burt, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+and+tumor-infiltrating+myeloid+cells+predict+survival+in+human+pleural+mesothelioma.">Circulating and tumor-infiltrating myeloid cells predict survival in human pleural mesothelioma.</a> Cancer. 117 (22), 5234-5244 (2011).</li><li>Weir, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streptavidin:+a+novel+immunostimulant+for+the+selection+and+delivery+of+autologous+and+syngeneic+tumor+vaccines.">Streptavidin: a novel immunostimulant for the selection and delivery of autologous and syngeneic tumor vaccines.</a> Cancer Immunol Res. 2 (5), 469-479 (2014).</li></ol>

Dieses Papier Details eines Verfahrens zur Erzeugung eines Ratten syngenen orthotopische Modell Pleuramesothelioms und ein einfaches Verfahren zur Überwachung der Krankheitsfortschritt durch Längs Blutentnahme. Der II-45-Modell wurde durch Aussetzen Fischer 344 Ratten, die Asbestfasern 13 entwickelt. Obwohl diese Exposition stellt die wahre Dynamik der Host-asbest Immunsystem Wechselwirkungen für Mesotheliom Pathogenese, hat es eine lange Verzögerungszeit (unter Jahre zur Erze...

Malignes Mesotheliom (MM) ist eine aggressive Krebserkrankung, die aus transformierten Zellen in der Membran (Mesothel) entsteht, die Linien der Lunge und der Bauchhöhle, des Herzens und inneren Geschlechtsorgane, und ist die häufigste primäre Tumor der Lunge Hohlraum oder Pleura 1,2 . Die Exposition gegenüber Asbestfasern einen Anteil von 80% der MM, und während Verbote Asbest Verwendung wurden vor Jahrzehnten in den meisten westlichen Ländern eingeführt wurde, hat seine weit verbreitete Verwendung in der Gemeinschaft ein tödliches Erbe hinterlassen. Die Weltgesundheitsorganisation schätzt, dass 107.000 Menschen weltweit sterben jedes Jahr an asbestbedingten Krankheiten, mit Sterblichkeit weiter zu. Eine neue Nichtberufseinfallswelle wird auch Schwellen- und gibt es wenig Verständnis bei, und auf welcher Ebene dies 3 Höhepunkt erreichen. Die Mehrheit der Menschen mit MM spät diagnostiziert, wenn eine systemische Chemotherapie ist eine der einzige praktikable Möglichkeiten 4. Die effective Chemotherapie und aktuelle &quot;Standardtherapie&quot; (zusammen mit Cisplatin 5 Pemetrexed) wurde vor über 10 Jahren identifiziert. Allerdings Scheitern dieser Behandlung ist unvermeidlich, und es gibt keine bewährten zweiten Zeilenoptionen, so dass Patienten mit einem grimmigen Prognose und mediane Überlebenszeit von nur 12 Monate 2. Daher besteht ein dringender ungedeckten Bedarf nach effektiveren Behandlungen. Trotz der Untersuchung einer Reihe von neuartigen Therapien in klinischen Versuchen keine entsprechen Veränderungen in der Praxis geführt. Dies ist zum Teil auf den niedrigen (5%) Übertragung der vorklinischen Ergebnissen, im allgemeinen in Xenotransplantat-Mausmodellen durchgeführt, um die klinische Einstellung 6-8. Solche Modelle nicht getreu rekapitulieren die komplexen Aspekte der Tumor-Mikroumgebung in unphysiologischen Orten auftreten, häufig in Abwesenheit eines funktionierenden Immunsystems 9. Syngenen orthotopen Modelle schaffen eine deutlich realistischere Tumorumgebung als die commonly verwendet subkutane Xenograft-Modellen als die Tumoren in der korrekten physiologischen Ort mit einem intakten Immunsystem 10,11 erfolgen. Der größere Umfang der Ratte erhöht seine Verwendung als Nagetierkrankheitsmodell, vor allem in der Arzneimittelstudien, in denen serielle Blutabnahmen erforderlich sind, um die Behandlung angesprochen und Toxizität 12 zu bewerten. Ferner ist in Modellen, in dem Verlaufskontrolle schwierig ist aufgrund der Lage der Tumoren (wie zum Beispiel in der Pleurahöhle), die Fähigkeit zur Überwachung Krankheitsprogression über Faktoren im Blutkreislauf gefunden ist äußerst attraktiv. Die Erzeugung eines syngenen orthotopen Modell des Pleuramesotheliom mit immunkompetenten Ratten beschrieben. Darüber hinaus ist eine einfache und relativ nicht-invasive Verfahren zur Überwachung pleuralen Fortschreiten der Krankheit durch Messen zirkulierenden Immunzellen beschrieben.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>EDTA Collection tube (0.5ml)</td>
			<td>Greiner Bio One GmbH</td>
			<td>450480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat T/B/NK Cell cocktail</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>558509</td>
			<td>anti-Rat CD3&#160; APC (IgM clone 1F4), anti-Rat CD45RA Fitc (IgG1 clone OX-33), anti-Rat CD161a PE (IgG1 Clone 10/78)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-RAT CD8a PE&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>200608</td>
			<td>(IgG1vClone G28)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Rat CD4 FITC (Domain 1)&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>203406</td>
			<td>(IgG1 Clone OX-38)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Rat CD45 PE/Cy7&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>202214</td>
			<td>(IgG1 Clone OX-1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TruCount&#8482; Tubes</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>340334</td>
			<td>Box of 50 absolute counting tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 media</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11875-119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>foetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Scientifix</td>
			<td>FBS500-S (lot# 010101-1)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypsin-EDTA</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS tablets</td>
			<td>Medicago AB</td>
			<td>09-9400-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23Gx1&#188; Needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>302008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1mL Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>302 100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fischer 344 Rat</td>
			<td>Animal Resources Centre, Perth Australia</td>
			<td>F344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>I.S.O (Isoflurane USP)</td>
			<td>Veterinary Companys Australia (VCA)&#160;</td>
			<td>B7058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>II-45 Rat Mesothelioma line</td>
			<td>Zurich University</td>
			<td></td>
			<td>Note: The cell line was given as a gift and is not commercially available at the ATCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSCalibur&#8482; 4 colour</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>342975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIS-HCL</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>T3253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Chloride</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>9718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaesthetic Machine (The stinger)</td>
			<td>Advanced Anaesthesia specialists</td>
			<td>#00449</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic implantation and peripheral immune cell monitoring in the ii-45 syngeneic rat mesothelioma model

Die enorme Zunahme des Interesses an immun-basierte Behandlungsmethoden für Krebs wie Impfstoffe und Immun Checkpoint-Inhibitoren und einem besseren Verständnis der Rolle der Tumor-Mikroumgebung in Ansprechen auf die Behandlung, die gemeinsam auf den Bedarf an immunkompetenten orthotopen Modelle zur präklinischen Versuchsreihen zeigen dieser neuen Therapien. Dieses Papier zeigt, wie Sie eine orthotope immunkompetenten Ratten-Modell von Pleura malignen Mesotheliom zu etablieren. Verlaufskontrolle in orthotopische Modell wird durch die interne Anordnung der Tumoren confounded. In Längsfortschreiten der Krankheit und ihre Wirkung auf zirkulierende Immunzellen in dieser und anderen Rattenmodellen von Krebs zu überwachen, ein einziges Rohr Durchflusscytometrieassay erfordert nur 25 ul Vollblut beschrieben. Dies stellt eine genaue Quantifizierung von sieben Immunparameter: Gesamt Lymphozyten, Monozyten und Neutrophile, sowie die T-Zell-Untergruppen CD4- und CD8, B-Zellen und natürliche Killerzellen. Verschiedene U-Booteets dieser Parameter sind nützlich bei verschiedenen Umständen und Modelle mit Neutrophilen Lymphozytenverhältnis mit dem größten Nutzen für die Überwachung der Progression der Erkrankung in der Mesotheliom Modell. Analysieren zirkulierenden Immunzellen Ebenen mit diesem einzigen Röhre Verfahren kann auch bei der Überwachung der Reaktion auf immunbasierten Behandlungen und das Verständnis der zugrundeliegenden Mechanismen, die den Erfolg oder Misserfolg der Behandlung zu unterstützen.

Die in dieser Studie für die Erzeugung eines orthotopische Modell Pleuramesothelioms mit II-45-Zellen verwendete Verfahren resultierte in Tieren erliegen Mesotheliom auf reproduzierbare und schnelle Zeitrahmen, wobei keine Ratten sterben aufgrund der Implantationsverfahren. Titration der Anzahl der Zellen bestimmt, dass implantierte 1x 10 3 Zellen war die Mindestanzahl für eine vollständige Penetranz Modell (100% Verpflanzung) nötig. Die unterschiedliche Anzahl von Zellen in den Ratten implantiert veränd...

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Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model

Die Erzeugung eines orthotopischen Rattenmodell der pleuralen malignes Mesotheliom durch Implantation von II-45 Mesotheliomzellen in die Pleurahöhle von immunkompetenten Ratten dargestellt. Eine durchflusszytometrische Verfahren zu sieben Immunzelluntergruppen in diesen Tieren aus einem 25 &amp; mgr; l Blutprobe zu analysieren, wird ebenfalls beschrieben.

Orthotopen Implantation und der peripheren Immunzellenüberwachung in der II-45 Syngene Rat Mesotheliom Modell

The enormous upsurge of interest in immune-based treatments for cancer such as vaccines and immune checkpoint inhibitors, and increased understanding of ...

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