Name: orthotopic implantation and peripheral immune cell monitoring in the ii-45 syngeneic rat mesothelioma model
Uploaded: 2015-10-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model at JoVE.com

The syngeneic rat mesothelioma II-45 cell line was a kind gift from A/Prof. Emanuela Felley-Bosco, Zurich University.

Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono stati eseguiti in conformità alle raccomandazioni del Codice di condotta australiano per la cura e l&#39;uso di animali a scopi scientifici. Il protocollo per questo studio è stato approvato dal ospedale cura degli animali e Comitato Etico Royal North Shore. Femmina ratti Fischer 344 (F344, 150-200 g) sono stati mantenuti presso l&#39;impianto di Kearns, Kolling Istituto in condizioni standard (cicli giorno / notte 12 ore di luce e il libero accesso a cibo e acqua). ...

<ol>
	<li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+mesothelioma.">Malignant mesothelioma.</a> Intern Med J. 40 (11), 742-7450 (2010).</li><li>Zucali, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+biology+of+malignant+pleural+mesothelioma.">Advances in the biology of malignant pleural mesothelioma.</a> Cancer Treat Rev. 37 (7), 543-558 (2011).</li><li>Olsen, N. 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Why do most phase III clinical trials fail?.</a> Curr Gene Ther. 9 (5), 368-374 (2009).</li><li>Kamb, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What's+wrong+with+our+cancer+models.">What's wrong with our cancer models.</a> Nat Rev Drug Discov. 4 (2), 161-165 (2005).</li><li>Yakisich, J. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+subset+analysis+by+Boolean+algebra:+a+phenotypic+approach+using+a+cocktail+of+5+antibodies+and+3+color+immunofluorescence.">Lymphocyte subset analysis by Boolean algebra: a phenotypic approach using a cocktail of 5 antibodies and 3 color immunofluorescence.</a> Cytometry. 15 (3), 258-266 (1994).</li><li>Brando, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytofluorometric+methods+for+assessing+absolute+numbers+of+cell+subsets+in+blood.+European+Working+Group+on+Clinical+Cell+Analysis.">Cytofluorometric methods for assessing absolute numbers of cell subsets in blood. European Working Group on Clinical Cell Analysis.</a> Cytometry. 42 (6), 327-346 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Gajkowska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+enumeration+of+CD34++hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+in+leukapheresis+product+and+bone+marrow+for+clinical+transplantation:+a+comparison+of+three+methods.">Flow cytometric enumeration of CD34+ hematopoietic stem and progenitor cells in leukapheresis product and bone marrow for clinical transplantation: a comparison of three methods.</a> Folia Histochem Cytobiol. 44 (1), 53-60 (2006).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144 (5), 646-674 (2011).</li><li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+blood+neutrophil-to-lymphocyte+ratio+is+an+indicator+of+poor+prognosis+in+malignant+mesothelioma+patients+undergoing+systemic+therapy.">High blood neutrophil-to-lymphocyte ratio is an indicator of poor prognosis in malignant mesothelioma patients undergoing systemic therapy.</a> Clin Cancer Res. 16 (23), 5805-5813 (2010).</li><li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+prognostic+factors+in+malignant+pleural+mesothelioma:+a+retrospective+analysis+of+data+from+patients+seeking+compensation+from+the+New+South+Wales+dust+diseases+board.">Validation of prognostic factors in malignant pleural mesothelioma: a retrospective analysis of data from patients seeking compensation from the New South Wales dust diseases board.</a> Clin Lung Cancer. 14 (1), 70-77 (2013).</li><li>Burt, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+and+tumor-infiltrating+myeloid+cells+predict+survival+in+human+pleural+mesothelioma.">Circulating and tumor-infiltrating myeloid cells predict survival in human pleural mesothelioma.</a> Cancer. 117 (22), 5234-5244 (2011).</li><li>Weir, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streptavidin:+a+novel+immunostimulant+for+the+selection+and+delivery+of+autologous+and+syngeneic+tumor+vaccines.">Streptavidin: a novel immunostimulant for the selection and delivery of autologous and syngeneic tumor vaccines.</a> Cancer Immunol Res. 2 (5), 469-479 (2014).</li></ol>

Dettagli Questo documento un metodo per la generazione di un ratto singenici modello ortotopico di mesotelioma pleurico e un metodo semplice per monitorare la progressione della malattia attraverso longitudinale prelievo di sangue. Il modello II-45 è stato sviluppato da esponendo ratti Fischer 344 alle fibre di amianto 13. Anche se questa esposizione rappresenta le vere dinamiche delle interazioni ospite-amianto sistema-immunitario per il mesotelioma patogenesi, ha un ritardo di ...

Mesotelioma maligno (MM) è un tumore aggressivo che deriva da cellule trasformate nella membrana (Mesotelio) che riveste la cavità addominale e polmonare, cuore e gli organi riproduttivi interni, ed è il tumore primario più comune della cavità polmonare o pleura 1,2 . L&#39;esposizione a fibre di amianto rappresenta l&#39;80% di tutte le MM, e mentre sono stati introdotti anni fa il divieto di uso di amianto nella maggior parte dei paesi occidentali, il suo uso molto diffuso nella comunità ha lasciato un&#39;eredità letale. L&#39;Organizzazione Mondiale della Sanità ha stimato che 107.000 persone nel mondo muoiono ogni anno per malattie legate all&#39;amianto, con tassi di mortalità continuano ad aumentare. Una nuova ondata di incidenza non professionale è anche emergendo e c&#39;è poca comprensione di quando, ea quale livello questo raggiungerà il picco 3. La maggior parte delle persone con MM viene diagnosticato tardi, quando la chemioterapia sistemica rappresenta una delle uniche opzioni valide 4. La maggior parte effective la chemioterapia e la corrente &#39;standard di cura&#39; (pemetrexed in combinazione con cisplatino 5) è stato identificato più di 10 anni fa. Tuttavia il fallimento di questo trattamento è inevitabile e non ci sono provati opzioni della riga di secondo, lasciando i pazienti con una prognosi infausta e la sopravvivenza mediana di soli 12 mesi 2. Pertanto, non vi è un urgente bisogno insoddisfatto per trattamenti più efficaci. Nonostante l&#39;esame di un numero di nuove terapie in studi clinici, nessuno ha portato a cambiamenti nella pratica. Ciò è dovuto in parte al basso (5%) trasferimento dei risultati pre-clinici, generalmente eseguiti in modelli murini xenotrapianto, per l&#39;impostazione della clinica 6-8. Tali modelli non fedelmente ricapitolano i complessi aspetti del microambiente tumorale si verificano in posizioni non fisiologiche, spesso in assenza di un sistema immunitario funzionante 9. Modelli ortotopici singenico creare un ambiente tumorale significativamente più realistico rispetto alla commonly usato modelli di xenotrapianto sottocutanei come i tumori si verificano nella posizione fisiologica corretta con un intatto 10,11 sistema immunitario. Le maggiori dimensioni del ratto esalta il suo uso come un modello di malattia roditore, soprattutto negli studi di droga in cui il sangue di serie trae sono necessari per valutare la risposta al trattamento e la tossicità 12. Inoltre, in modelli in cui il monitoraggio della progressione della malattia è difficile a causa della posizione dei tumori (come nella cavità pleurica), la possibilità di monitorare la progressione della malattia utilizzando fattori trovati in circolo è estremamente attraente. La generazione di un modello ortotopico singenici del mesotelioma pleurico utilizzando ratti immuno-competenti è descritto. Inoltre, un metodo semplice e relativamente non invasivo per monitorare la progressione della malattia pleurica misurando circolanti cellule immunitarie è anche descritto.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>EDTA Collection tube (0.5ml)</td>
			<td>Greiner Bio One GmbH</td>
			<td>450480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat T/B/NK Cell cocktail</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>558509</td>
			<td>anti-Rat CD3&#160; APC (IgM clone 1F4), anti-Rat CD45RA Fitc (IgG1 clone OX-33), anti-Rat CD161a PE (IgG1 Clone 10/78)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-RAT CD8a PE&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>200608</td>
			<td>(IgG1vClone G28)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Rat CD4 FITC (Domain 1)&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>203406</td>
			<td>(IgG1 Clone OX-38)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Rat CD45 PE/Cy7&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>202214</td>
			<td>(IgG1 Clone OX-1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TruCount&#8482; Tubes</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>340334</td>
			<td>Box of 50 absolute counting tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 media</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11875-119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>foetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Scientifix</td>
			<td>FBS500-S (lot# 010101-1)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypsin-EDTA</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS tablets</td>
			<td>Medicago AB</td>
			<td>09-9400-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23Gx1&#188; Needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>302008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1mL Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>302 100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fischer 344 Rat</td>
			<td>Animal Resources Centre, Perth Australia</td>
			<td>F344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>I.S.O (Isoflurane USP)</td>
			<td>Veterinary Companys Australia (VCA)&#160;</td>
			<td>B7058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>II-45 Rat Mesothelioma line</td>
			<td>Zurich University</td>
			<td></td>
			<td>Note: The cell line was given as a gift and is not commercially available at the ATCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSCalibur&#8482; 4 colour</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>342975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIS-HCL</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>T3253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Chloride</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>9718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaesthetic Machine (The stinger)</td>
			<td>Advanced Anaesthesia specialists</td>
			<td>#00449</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic implantation and peripheral immune cell monitoring in the ii-45 syngeneic rat mesothelioma model

L&#39;enorme aumento di interesse nei trattamenti immuno-based per il cancro, come i vaccini e gli inibitori checkpoint del sistema immunitario, e una maggiore comprensione del ruolo del microambiente tumorale in risposta al trattamento, collettivamente puntare l&#39;esigenza di modelli ortotopici immuno-competenti per i test pre-clinici di queste nuove terapie. Questo documento dimostra come stabilire un modello di topo immuno-competenti ortotopico di pleurico mesotelioma maligno. La progressione della malattia di monitoraggio nei modelli ortotopici è confuso dalla posizione interna dei tumori. Per monitorare longitudinalmente progressione della malattia e il suo effetto sulle cellule immunitarie circolanti in questo e altri modelli di ratto di cancro, un unico tubo citometria a flusso saggio che richiede solo 25 ml di sangue intero è descritto. Ciò fornisce la quantificazione accurata dei sette parametri immunitari: linfociti totali, monociti e neutrofili, così come i sottoinsiemi di cellule T CD4 e CD8, cellule B e le cellule natural killer. Diversi Subsets di questi parametri sono utili in diverse circostanze e modelli, con il neutrofili rapporto dei linfociti, con il massimo di utilità per monitorare la progressione della malattia nel modello mesotelioma. Analizzare i livelli circolanti di cellule immunitarie che utilizzano questo metodo del tubo singolo può anche aiutare a monitorare la risposta ai trattamenti immuno-based e la comprensione dei meccanismi sottostanti che determinano il successo o il fallimento del trattamento.

Il metodo usato in questo documento per la generazione di un modello ortotopico di mesotelioma pleurico utilizzando cellule II-45 ha determinato animali soccombono a mesotelioma in tempi riproducibile e rapido, senza ratti morire a causa del metodo di impianto. Titolazione del numero di cellule impiantate determinato che 1x 10 3 cellule era il numero minimo richiesto per modello pienamente penetrante (100% attecchimento). Il diverso numero di cellule impiantate nei ratti cambiato il decorso della malattia sen...

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Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model

La generazione di un modello di ratto ortotopico di pleurico mesotelioma maligno da impianto di II-45 cellule di mesotelioma nella cavità pleurica di topi immunocompetenti è presentato. Metodo citometria di flusso per analizzare sette sottoinsiemi di cellule immunitarie di questi animali da un campione di sangue di 25 ml è anche descritto.

Ortotopico impianto e periferico immunitario monitoraggio cellulare nel Modello II-45 Singenico Rat mesotelioma

The enormous upsurge of interest in immune-based treatments for cancer such as vaccines and immune checkpoint inhibitors, and increased understanding of ...

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