Name: orthotopic implantation and peripheral immune cell monitoring in the ii-45 syngeneic rat mesothelioma model
Uploaded: 2015-10-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model at JoVE.com

The syngeneic rat mesothelioma II-45 cell line was a kind gift from A/Prof. Emanuela Felley-Bosco, Zurich University.

動物に関わるすべての手順は、科学的な目的のための動物の管理と使用に関する実践オーストラリアの規範の勧告に従って実施しました。この研究のためのプロトコルは、ロイヤル・ノースショア病院動物実験倫理委員会によって承認されました。女性のフィッシャー344ラット（F344、150〜200グラム）を標準条件（12時間の明/暗サイクルと食料と水を自由に）下カーンズ施設、Kolling研究所で?...

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	<li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+mesothelioma.">Malignant mesothelioma.</a> Intern Med J. 40 (11), 742-7450 (2010).</li><li>Zucali, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+biology+of+malignant+pleural+mesothelioma.">Advances in the biology of malignant pleural mesothelioma.</a> Cancer Treat Rev. 37 (7), 543-558 (2011).</li><li>Olsen, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increasing+incidence+of+malignant+mesothelioma+after+exposure+to+asbestos+during+home+maintenance+and+renovation.">Increasing incidence of malignant mesothelioma after exposure to asbestos during home maintenance and renovation.</a> Med J Aust. 195 (5), 271-274 (2011).</li><li>Zucali, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymidylate+synthase+and+excision+repair+cross-complementing+group-1+as+predictors+of+responsiveness+in+mesothelioma+patients+treated+with+pemetrexed/carboplatin.">Thymidylate synthase and excision repair cross-complementing group-1 as predictors of responsiveness in mesothelioma patients treated with pemetrexed/carboplatin.</a> Clin Cancer Res. 17 (8), 2581-2590 (2011).</li><li>Vogelzang, N. 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Why do most phase III clinical trials fail?.</a> Curr Gene Ther. 9 (5), 368-374 (2009).</li><li>Kamb, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What's+wrong+with+our+cancer+models.">What's wrong with our cancer models.</a> Nat Rev Drug Discov. 4 (2), 161-165 (2005).</li><li>Yakisich, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Algorithm+for+the+Preclinical+Screening+of+Anticancer+Drugs+Effective+against+Brain+Tumors.">An Algorithm for the Preclinical Screening of Anticancer Drugs Effective against Brain Tumors.</a> ISRN Pharmacol. 2012, 513580 (2012).</li><li>Basu, D., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+microenvironments+within+mouse+models+that+enhance+tumor+aggressiveness.">Defining microenvironments within mouse models that enhance tumor aggressiveness.</a> Cancer Biol Ther. 8 (4), 380-381 (2009).</li><li>Abolhassani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+well-established+drugs+targeting+cancer+metabolism:+reproducibility+of+the+efficacy+of+a+highly+effective+drug+combination+in+mice.">Screening of well-established drugs targeting cancer metabolism: reproducibility of the efficacy of a highly effective drug combination in mice.</a> Invest New Drugs. 4 (4), 1331-1342 (2011).</li><li>Hudson, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+a+panel+of+chemo-resistant+mesothelioma+models+for+investigating+chemo-resistance+and+identifying+new+treatments+for+mesothelioma.">Establishing a panel of chemo-resistant mesothelioma models for investigating chemo-resistance and identifying new treatments for mesothelioma.</a> Sci Rep. 4, 6152 (2014).</li><li>Iannaccone, P. M., Jacob, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rats!.">Rats!.</a> Dis Model Mech. 2 (5-6), 206-210 (2009).</li><li>Craighead, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+tumors+and+tumor+cells+cultured+from+experimental+asbestos-induced+mesotheliomas+in+rats.">Characteristics of tumors and tumor cells cultured from experimental asbestos-induced mesotheliomas in rats.</a> Am J Pathol. 129 (3), 448-462 (1987).</li><li>Hunter, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+subset+analysis+by+Boolean+algebra:+a+phenotypic+approach+using+a+cocktail+of+5+antibodies+and+3+color+immunofluorescence.">Lymphocyte subset analysis by Boolean algebra: a phenotypic approach using a cocktail of 5 antibodies and 3 color immunofluorescence.</a> Cytometry. 15 (3), 258-266 (1994).</li><li>Brando, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytofluorometric+methods+for+assessing+absolute+numbers+of+cell+subsets+in+blood.+European+Working+Group+on+Clinical+Cell+Analysis.">Cytofluorometric methods for assessing absolute numbers of cell subsets in blood. European Working Group on Clinical Cell Analysis.</a> Cytometry. 42 (6), 327-346 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TruCount+absolute-count+tubes+for+determining+CD4+and+CD8+cell+numbers+in+human+immunodeficiency+virus-positive+adults.">Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 7 (3), 336-343 (2000).</li><li>Gajkowska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+enumeration+of+CD34++hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+in+leukapheresis+product+and+bone+marrow+for+clinical+transplantation:+a+comparison+of+three+methods.">Flow cytometric enumeration of CD34+ hematopoietic stem and progenitor cells in leukapheresis product and bone marrow for clinical transplantation: a comparison of three methods.</a> Folia Histochem Cytobiol. 44 (1), 53-60 (2006).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144 (5), 646-674 (2011).</li><li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+blood+neutrophil-to-lymphocyte+ratio+is+an+indicator+of+poor+prognosis+in+malignant+mesothelioma+patients+undergoing+systemic+therapy.">High blood neutrophil-to-lymphocyte ratio is an indicator of poor prognosis in malignant mesothelioma patients undergoing systemic therapy.</a> Clin Cancer Res. 16 (23), 5805-5813 (2010).</li><li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+prognostic+factors+in+malignant+pleural+mesothelioma:+a+retrospective+analysis+of+data+from+patients+seeking+compensation+from+the+New+South+Wales+dust+diseases+board.">Validation of prognostic factors in malignant pleural mesothelioma: a retrospective analysis of data from patients seeking compensation from the New South Wales dust diseases board.</a> Clin Lung Cancer. 14 (1), 70-77 (2013).</li><li>Burt, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+and+tumor-infiltrating+myeloid+cells+predict+survival+in+human+pleural+mesothelioma.">Circulating and tumor-infiltrating myeloid cells predict survival in human pleural mesothelioma.</a> Cancer. 117 (22), 5234-5244 (2011).</li><li>Weir, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streptavidin:+a+novel+immunostimulant+for+the+selection+and+delivery+of+autologous+and+syngeneic+tumor+vaccines.">Streptavidin: a novel immunostimulant for the selection and delivery of autologous and syngeneic tumor vaccines.</a> Cancer Immunol Res. 2 (5), 469-479 (2014).</li></ol>

本論文では、胸膜中皮腫のラット同系同所モデルと縦採血を介して疾患の進行をモニタリングするための簡単​​な方法を生成するための方法を詳述します。 II-45モデルは、アスベスト繊維13にフィッシャー344ラットを暴露することによって開発されました。この暴露は、中皮腫の病因のためのホスト - アスベストの免疫系の相互作用の真のダイナミクスを表し?...

悪性中皮腫（MM）は、膜（中皮）で形質転換された細胞から生じる攻撃的な悪性腫瘍であることライン肺や腹腔、心と内部生殖器官、および肺の空洞または胸膜1,2の最も一般的な原発腫瘍であります。アスベスト繊維への暴露は、全てのMMの80％を占め、およびアスベスト使用の禁止は、ほとんどの西洋諸国で数十年前に導入された一方で、地域社会での広範な使用は、致命的な遺産を残しています。世界保健機関（WHO）は、107,000人が世界的に死亡率が増加し続けると、アスベスト関連疾患から毎年死亡していると推定しています。新しい非職業入射波も浮上している、これは3のピークを迎えたとき、どのようなレベルでのほとんど理解があります。 全身化学療法が唯一の現実的な選択肢4のいずれかを表したとき、MMを持つ人々の大多数は遅く診断されています。最もeffecti化学療法と（シスプラチン5とともにペメトレキセド）現在の「標準治療」をVEのは、10年以上前に同定されました。しかし、この治療の失敗は避けられないと何の実績のある二行目のオプションは、12ヶ月の2の厳しい予後や生存期間の中央値の患者を残して、ありません。したがって、より効果的な治療が緊急に満たされていない必要性が存在します。臨床試験なしでの新しい治療法の数の検査にもかかわらず、実際に変化をもたらしました。これは、一般に、臨床的設定6-8に、異種移植マウスモデルにおいて行わ前臨床結果の低い（5％）転移に一部起因します。このようなモデルを忠実にしばしば機能する免疫系9の非存在下で、非生理的な場所で発生する腫瘍微小環境の複雑な側面を再現しません。 同系同所モデルはCよりもかなり現実的な腫瘍環境を作成します腫瘍が無傷の免疫系10,11で正しい生理場所で起こるようommonly皮下異種移植モデルを使用していました。ラットの大きなサイズは、特にシリアル血液は治療応答および毒性12を評価するために必要とされる描画薬物研究において、齧歯類疾患モデルとしての使用を強化します。さらに、疾患の進行をモニタリングすることにより（例えば、胸腔のように）腫瘍の場所に困難であるモデルにおいて、循環中に見出さ因子を用いて疾患の進行をモニターする能力は、非常に魅力的です。免疫コンピテントラットを用いた胸膜中皮腫の同系同所性モデルの生成について説明します。加えて、循環する免疫細胞を測定することにより、胸膜疾患の進行をモニタリングするための簡単​​で、比較的非侵襲性の方法も記載されています。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>EDTA Collection tube (0.5ml)</td>
			<td>Greiner Bio One GmbH</td>
			<td>450480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat T/B/NK Cell cocktail</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>558509</td>
			<td>anti-Rat CD3&#160; APC (IgM clone 1F4), anti-Rat CD45RA Fitc (IgG1 clone OX-33), anti-Rat CD161a PE (IgG1 Clone 10/78)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-RAT CD8a PE&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>200608</td>
			<td>(IgG1vClone G28)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Rat CD4 FITC (Domain 1)&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>203406</td>
			<td>(IgG1 Clone OX-38)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Rat CD45 PE/Cy7&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>202214</td>
			<td>(IgG1 Clone OX-1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TruCount&#8482; Tubes</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>340334</td>
			<td>Box of 50 absolute counting tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 media</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11875-119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>foetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Scientifix</td>
			<td>FBS500-S (lot# 010101-1)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypsin-EDTA</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS tablets</td>
			<td>Medicago AB</td>
			<td>09-9400-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23Gx1&#188; Needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>302008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1mL Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>302 100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fischer 344 Rat</td>
			<td>Animal Resources Centre, Perth Australia</td>
			<td>F344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>I.S.O (Isoflurane USP)</td>
			<td>Veterinary Companys Australia (VCA)&#160;</td>
			<td>B7058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>II-45 Rat Mesothelioma line</td>
			<td>Zurich University</td>
			<td></td>
			<td>Note: The cell line was given as a gift and is not commercially available at the ATCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSCalibur&#8482; 4 colour</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>342975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIS-HCL</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>T3253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Chloride</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>9718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaesthetic Machine (The stinger)</td>
			<td>Advanced Anaesthesia specialists</td>
			<td>#00449</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic implantation and peripheral immune cell monitoring in the ii-45 syngeneic rat mesothelioma model

このようなワクチンおよび免疫チェックポイント阻害剤として癌の免疫ベースの治療に関心の巨大な盛り上がり、一括前臨床試験のための免疫適格同所モデルの必要性を指し、治療応答における腫瘍微小環境の役割の理解を増加これらの新しい治療法の。本論文では、胸膜悪性中皮腫の同所性免疫能のラットモデルを確立する方法を示しています。同所性モデルで監視疾患の進行は、腫瘍の内部の位置によって混乱されます。縦方向に疾患の進行およびこれと他の癌のラットモデルにおける免疫細胞の循環に及ぼす影響を監視するために、単一のチューブは、全血が記載されているだけで25μLを必要とするフローサイトメトリーアッセイ。総リンパ球、単球および好中球、ならびにT細胞サブセット、CD4およびCD8、B細胞およびナチュラルキラー細胞：これは7免疫パラメータの正確な定量化を提供します。別の潜水艦これらのパラメータのETSは、中皮腫モデルにおける疾患の進行をモニタリングするための最大の有用性を有するリンパ球の比率に好中球で、異なる状況やモデルにも有用です。この単一チューブ法を用いて、免疫細胞の循環レベルの分析はまた、免疫系の治療に対する応答をモニターし、治療の成功または失敗を引き起こす根底にあるメカニズムを理解することを助けることができます。

II-45細胞を用いた胸膜中皮腫の同所性モデルを生成するために、本論文で使用した方法には、ラットは、注入法のために死んでいないで、再現性と迅速な時間枠内で中皮腫に屈した動物をもたらしました。 1×10 3個の細胞が完全に浸透モデル（100％生着）に必要な最小数であると判断した移植細胞の数の滴定。ラットに移植された細胞の異なる数は、疾患の重症度に影響を与えるよう...

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Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model

免疫適格ラットの胸膜腔にII-45中皮腫細胞の移植による胸膜悪性中皮腫の同所性ラットモデルの生成が示されています。 25μlの血液試料から、これらの動物において7の免疫細胞サブセットを分析するためのフローサイトメトリー方法も記載されています。

II-45同系ラット中皮腫モデルにおける同所移植と末梢免疫細胞の監視

The enormous upsurge of interest in immune-based treatments for cancer such as vaccines and immune checkpoint inhibitors, and increased understanding of ...

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