Name: orthotopic implantation and peripheral immune cell monitoring in the ii-45 syngeneic rat mesothelioma model
Uploaded: 2015-10-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model at JoVE.com

The syngeneic rat mesothelioma II-45 cell line was a kind gift from A/Prof. Emanuela Felley-Bosco, Zurich University.

동물과 관련된 모든 절차는 과학적인 목적을위한 동물의 관리 및 사용을위한 연습의 호주 코드의 권장 사항에 따라 수행되었다. 본 연구의 프로토콜은 로얄 노스 쇼어 병원 동물 관리 및 윤리위원회에 의해 승인되었다. 여성 피셔 344 쥐 (F344, 1백50-2백그램)가 컨즈 시설 유지하고, 표준 조건 (12 시간 빛 / 어둠 사이클과 음식과 물을 무료로 이용할 수)에서 Kolling 연구소. 참고 : ...

<ol>
	<li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+mesothelioma.">Malignant mesothelioma.</a> Intern Med J. 40 (11), 742-7450 (2010).</li><li>Zucali, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+biology+of+malignant+pleural+mesothelioma.">Advances in the biology of malignant pleural mesothelioma.</a> Cancer Treat Rev. 37 (7), 543-558 (2011).</li><li>Olsen, N. 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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+tumors+and+tumor+cells+cultured+from+experimental+asbestos-induced+mesotheliomas+in+rats.">Characteristics of tumors and tumor cells cultured from experimental asbestos-induced mesotheliomas in rats.</a> Am J Pathol. 129 (3), 448-462 (1987).</li><li>Hunter, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+subset+analysis+by+Boolean+algebra:+a+phenotypic+approach+using+a+cocktail+of+5+antibodies+and+3+color+immunofluorescence.">Lymphocyte subset analysis by Boolean algebra: a phenotypic approach using a cocktail of 5 antibodies and 3 color immunofluorescence.</a> Cytometry. 15 (3), 258-266 (1994).</li><li>Brando, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytofluorometric+methods+for+assessing+absolute+numbers+of+cell+subsets+in+blood.+European+Working+Group+on+Clinical+Cell+Analysis.">Cytofluorometric methods for assessing absolute numbers of cell subsets in blood. European Working Group on Clinical Cell Analysis.</a> Cytometry. 42 (6), 327-346 (2000).</li><li>Schnizlein-Bick, C. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144 (5), 646-674 (2011).</li><li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+blood+neutrophil-to-lymphocyte+ratio+is+an+indicator+of+poor+prognosis+in+malignant+mesothelioma+patients+undergoing+systemic+therapy.">High blood neutrophil-to-lymphocyte ratio is an indicator of poor prognosis in malignant mesothelioma patients undergoing systemic therapy.</a> Clin Cancer Res. 16 (23), 5805-5813 (2010).</li><li>Kao, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+prognostic+factors+in+malignant+pleural+mesothelioma:+a+retrospective+analysis+of+data+from+patients+seeking+compensation+from+the+New+South+Wales+dust+diseases+board.">Validation of prognostic factors in malignant pleural mesothelioma: a retrospective analysis of data from patients seeking compensation from the New South Wales dust diseases board.</a> Clin Lung Cancer. 14 (1), 70-77 (2013).</li><li>Burt, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+and+tumor-infiltrating+myeloid+cells+predict+survival+in+human+pleural+mesothelioma.">Circulating and tumor-infiltrating myeloid cells predict survival in human pleural mesothelioma.</a> Cancer. 117 (22), 5234-5244 (2011).</li><li>Weir, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streptavidin:+a+novel+immunostimulant+for+the+selection+and+delivery+of+autologous+and+syngeneic+tumor+vaccines.">Streptavidin: a novel immunostimulant for the selection and delivery of autologous and syngeneic tumor vaccines.</a> Cancer Immunol Res. 2 (5), 469-479 (2014).</li></ol>

이 논문은 흉막 중피종의 쥐 동계 동 소성 모델과 종 채혈을 통해 질병의 진행을 모니터링하기위한 간단한 방법의 생성하는 방법을 자세히 설명합니다. II-45 모델은 석면 섬유 (13)에 피셔 344 래트를 노광에 의해 개발되었다. 이 노출 중피종의 발병 기전에 대한 호스트 석면 면역 체계의 상호 작용의 진정한 역학을 나타내고 있지만, 긴 지연 시간 (생성하는 년을 복용)?...

악성 중피종 (MM)은 멤브레인 (mesothelium)로 형질 전환 된 세포에서 발생 공격적인 악성하다 라인 복강 폐, 심장 및 내부 생식 기관 및 폐 공동 또는 늑막 1,2- 가장 일반적인 차 종양은 . 석면 섬유에 노출되면 모든 MM의 80 %를 차지하고, 석면 사용에 대한 금지는 대부분의 서방 국가에서 수십 년 전에 도입 된 반면, 지역 사회에서의 광범위한 사용은 치명적인 유산을 남겼습니다. 세계 보건기구 (WHO)는 10만7천명은 전 세계적으로 계속 증가 사망률, 석면 관련 질병으로 매년 죽는 것으로 추정하고있다. 새로운 비 직업 입사 파도 대두되고이 3 피크 때, 어떤 수준에서의 작은 이해가있다. 전신 화학 요법이 유일한 실행 가능한 옵션 4 중 하나를 나타냅니다 때 MM를 가진 사람들의 대부분은 늦은 진단. 가장 effecti화학 요법과 (시스플라틴 (5)과 함께와 pemetrexed) 현재의 &#39;주의 기준&#39;을했습니다 10 년 전에 확인되었다. 이 치료의 그러나 실패는 불가피 만 12개월 2의 냉혹 한 예후 및 평균 생존 환자를 떠나 더 검증 된 제 2 라인 옵션은 존재하지 않는다. 따라서, 더 효과적인 치료법이 절실히 아직은 충족되지 않은 필요성이 존재한다. 임상 시험에서 새로운 치료의 다수의 시험에도 불구하고 아무도 실제로 변화를 초래하지 않았다. 이는 임상 6-8를 설정하는, 일반적으로 이종 이식 마우스 모델에서 수행 전임상 결과 낮은 (5 %) 전입에 부분적으로 기인하는 것으로 여겨진다. 이러한 모델은 충실히 자주 작동 면역계 9의 부재 하에서, 비 - 생리적 인 위치에서 발생하는 종양 미세 환경의 복잡한 양상 요점을 되풀이하지 않는다. 동계 동 소성 모델 C보다 훨씬 더 현실적인 종양 환경을 만들종양이 그대로 면역 시스템 10, 11과 올바른 생리 학적 위치에 발생하는 ommonly 피하 이종 이식의 모델을 사용했다. 쥐의 대형화, 특히 직렬 혈액 치료 반응 및 독성 (12)을 평가하기 위해 요구되는 무 약물 연구에서, 설치류 질병 모델로서 사용을 향상시킨다. 또한, 모델되는 질병 진행 모니터링 순환 인자에서 발견 매우 매력적이다를 사용 질병의 진행을 모니터 할 수있는 능력으로 인해 (예컨대 흉강 에서처럼) 종양의 위치가 어렵다. 면역 능력 쥐를 사용 흉막 중피종의 동계 동 소성 모델의 생성을 설명한다. 또한, 순환하는 면역 세포를 측정하여 흉막 질환 진행을 모니터링하기위한 간단하고 비교적 비 침습적 방법도 설명한다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>EDTA Collection tube (0.5ml)</td>
			<td>Greiner Bio One GmbH</td>
			<td>450480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat T/B/NK Cell cocktail</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>558509</td>
			<td>anti-Rat CD3&#160; APC (IgM clone 1F4), anti-Rat CD45RA Fitc (IgG1 clone OX-33), anti-Rat CD161a PE (IgG1 Clone 10/78)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-RAT CD8a PE&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>200608</td>
			<td>(IgG1vClone G28)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Rat CD4 FITC (Domain 1)&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>203406</td>
			<td>(IgG1 Clone OX-38)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Rat CD45 PE/Cy7&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>202214</td>
			<td>(IgG1 Clone OX-1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TruCount&#8482; Tubes</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>340334</td>
			<td>Box of 50 absolute counting tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 media</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11875-119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>foetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Scientifix</td>
			<td>FBS500-S (lot# 010101-1)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypsin-EDTA</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS tablets</td>
			<td>Medicago AB</td>
			<td>09-9400-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23Gx1&#188; Needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>302008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1mL Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>302 100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fischer 344 Rat</td>
			<td>Animal Resources Centre, Perth Australia</td>
			<td>F344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>I.S.O (Isoflurane USP)</td>
			<td>Veterinary Companys Australia (VCA)&#160;</td>
			<td>B7058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>II-45 Rat Mesothelioma line</td>
			<td>Zurich University</td>
			<td></td>
			<td>Note: The cell line was given as a gift and is not commercially available at the ATCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSCalibur&#8482; 4 colour</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>342975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIS-HCL</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>T3253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Chloride</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>9718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaesthetic Machine (The stinger)</td>
			<td>Advanced Anaesthesia specialists</td>
			<td>#00449</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic implantation and peripheral immune cell monitoring in the ii-45 syngeneic rat mesothelioma model

백신 및 면역 검사 점 억제제, 및 치료 반응에 종양 미세 환경의 역할의 증가 이해 등의 암에 대한 면역 기반 치료에 대한 관심의 거대한 급증, 공동으로 전임상 시험에 대한 면역 능력이 동 소성 모델의 필요성을 가리 이 새로운 치료법. 이 논문은 흉막 악성 중피종의 소성을 면역 능력이 쥐 모델을 수립하는 방법을 보여줍니다. 동 소성 모델 모니터링 질병 진행은 종양의 내부 위치에 의해 혼동된다. 길이 방향으로 질병의 진행이 암의 다른 쥐 모델에서 면역 세포를 순환에 미치는 영향을 모니터링하기 위해 하나의 튜브 25 μL 전혈은 설명을 필요로 분석 유동 세포 계측법. 총 림프구, 단핵구 및 호중구뿐만 아니라, T 세포 서브 세트 CD4 및 CD8, B 세포 및 자연 살해 세포 : 이것은 정확한 일곱 면역 매개 변수의 정량화를 제공한다. 다른 서브 우퍼이러한 매개 변수는 중피종 ETS 모델에서 질병의 진행을 모니터링하기위한 큰 유틸리티를 갖는 림프구 비율 호중구와 다른 상황 및 모델에 유용하다. 또한 면역 - 기반 치료법​​에 대한 응답을 모니터링하고 치료의 성공 또는 실패로 이어지는 근본적인 메커니즘을 이해하는데 도움이 될 하나의 관이 방법을 사용하여 면역 세포 수준을 순환 분석.

II-45 세포를 이용한 흉막 중피종의 소성을, 모델 생성을 위해이 문서에서 사용하는 방법은 쥐 주입법에 의한 사망하지으로, 재현성 및 빠른 시간 내에 중피종에 굴복 동물 결과. 이식 된 세포의 수의 적정 1X 10 3 세포는 완전히 침투 모델 (100 % 생착)에 필요한 최소 수 있다고 판단했다. 쥐에 이식 세포의 수는 다른 질환의 중증도에 영향을 미치는 것으로 나타나없이 질병의 시간 코스를 변경...

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Orthotopic Implantation and Peripheral Immune Cell Monitoring in the II-45 Syngeneic Rat Mesothelioma Model

면역 능력이 쥐의 흉강에 II-45 악성 세포의 이식에 의한 흉막 악성 중피종의 소성을 쥐 모델의 생성이 제공됩니다. 유세포 방법도 기재되어 25 ㎕의 혈액 샘플로부터이 동물 일곱 면역 세포 서브 세트를 분석한다.

II-45 동계 쥐의 Mesothelioma 모델에서 소성을 주입 및 주변 면역 세포 모니터링

The enormous upsurge of interest in immune-based treatments for cancer such as vaccines and immune checkpoint inhibitors, and increased understanding of ...

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