Name: minced tissue in compressed collagen: a cell-containing biotransplant for single-staged reconstructive repair
Uploaded: 2016-02-24T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Minced Tissue in Compressed Collagen: A Cell-containing Biotransplant for Single-staged Reconstructive Repair at JoVE.com

The authors thank the Swedish Society for Medical Research, the Promobilia Foundation, the Crown Princess Lovisa Foundation, the Freemason Foundation for Children&#8217;s Welfare, the Swedish Society of Medicine, the Solstickan Foundation, Karolinska Institutet, and the Stockholm City Council for financial support.

Todos os protocolos de animais foram pré-aprovados pelo Comitê County a Estocolmo em animais e todos os procedimentos conformes com os regulamentos para o uso de animais, bem como leis federais relevantes. 1. Procedimentos de Animais <ol><li> Preparando o animal para a cirurgia <ol><li> Preparar a mesa cirúrgica com todos os materiais e instrumentos necessários para a operação em condições de esterilidade. Realizar a cirurgia exclusivamente sob condições estéreis, para reduzir o...

<ol>
	<li>Rheinwald, J. G., Green, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+cultivation+of+strains+of+human+epidermal+keratinocytes:+the+formation+of+keratinizing+colonies+from+single+cells.">Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells.</a> Cell. 6, 331-343 (1975).</li><li>Fossum, M., Nordenskjold, A., Kratz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+of+multilayered+urinary+tissue+in+vitro.">Engineering of multilayered urinary tissue in vitro.</a> Tissue Engineering. 10, 175-180 (2004).</li><li>Salmikangas, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manufacturing,+characterization+and+control+of+cell-based+medicinal+products:+challenging+paradigms+toward+commercial+use.">Manufacturing, characterization and control of cell-based medicinal products: challenging paradigms toward commercial use.</a> Regen Med. 10, 65-78 (2015).</li><li>Fossum, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minced+skin+for+tissue+engineering+of+epithelialized+subcutaneous+tunnels.">Minced skin for tissue engineering of epithelialized subcutaneous tunnels.</a> Tissue Engineering. 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Part C, Methods. 19, 688-696 (2013).</li><li>Engelhardt, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+collagen-poly(lactic+acid-co-varepsilon-caprolactone)+hybrid+scaffold+for+bladder+tissue+regeneration.">A collagen-poly(lactic acid-co-varepsilon-caprolactone) hybrid scaffold for bladder tissue regeneration.</a> Biomaterials. 32, 3969-3976 (2011).</li><li>Brown, R. A., Wiseman, M., Chuo, C. B., Cheema, U., Nazhat, S. 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G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constructs+of+electrospun+PLGA,+compressed+collagen+and+minced+urothelium+for+minimally+manipulated+autologous+bladder+tissue+expansion.">Constructs of electrospun PLGA, compressed collagen and minced urothelium for minimally manipulated autologous bladder tissue expansion.</a> Biomaterials. 35, 5741-5748 (2014).</li><li>Orabi, H., AbouShwareb, T., Zhang, Y., Yoo, J. J., Atala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-seeded+tubularized+scaffolds+for+reconstruction+of+long+urethral+defects:+a+preclinical+study.">Cell-seeded tubularized scaffolds for reconstruction of long urethral defects: a preclinical study.</a> Eur Urol. 63, 531-538 (2013).</li><li>Blais, M., Parenteau-Bareil, R., Cadau, S., Berthod, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concise+review:+tissue-engineered+skin+and+nerve+regeneration+in+burn+treatment.">Concise review: tissue-engineered skin and nerve regeneration in burn treatment.</a> Stem Cells Transl Med. 2, 545-551 (2013).</li><li>Serpooshan, V., Muja, N., Marelli, B., Nazhat, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+contractility+and+growth+in+plastic+compressed+collagen+gel+scaffolds+with+microstructures+correlated+with+hydraulic+permeability.">Fibroblast contractility and growth in plastic compressed collagen gel scaffolds with microstructures correlated with hydraulic permeability.</a> J Biomed Mater Res A. 96, 609-620 (2011).</li></ol>

Este estudo apresenta uma abordagem easy-to-use para produzir manchas de parede da bexiga com tecido autólogo para o transplante na mesa cirúrgica. As manchas são formados pela combinação de um tricô polímero biodegradável no meio e colagénio com e sem tecido moído nas superfícies exteriores em combinação com compressão de plástico. Compressão plástica é um método previamente descrito por outros autores e pode ser definido como uma expulsão rápida do fluido a partir de géis de colagénio 12,13...

A maioria dos estudos de engenharia de tecidos de transplante da pele e do tracto urogenital incluem colheitas de células autólogas a partir de tecido saudável e a expansão das células em instalações de cultura de células especialmente equipados 1,2. Após a expansão das células, as células são geralmente armazenadas para utilização posterior quando o paciente está preparado para receber o auto-enxerto. congeladores de azoto permitir o armazenamento a longo prazo a baixas temperaturas de -150 ° C ou inferior. O processo de congelamento deve ser cuidadosa e controlada, a fim de não perder as células. Um risco de morte celular é a cristalização da água intracelular durante o processo de descongelamento, o que pode levar à ruptura das membranas celulares. congelação das células é normalmente realizada por arrefecimento lento e controlado (-1 ° C por minuto), utilizando uma concentração elevada de células, soro fetal de bovino, e sulfóxido de dimetilo. Após descongelação, as células têm de ser processado de novo por remoção do meio de congelamento e cultura em plástico de cultura de células ou umbiomateriais antes da transplantação de volta para o paciente. Todos os passos mencionados acima são demorado, laborioso, dispendioso e 3. Além disso, todo o processamento in vitro de células destinados a transplante do paciente são altamente regulamentado e exige pessoal e laboratórios 4 bem treinados e credenciados. Ao todo, de obter um processo de fabricação segura e confiável, a técnica só poderia ser criada em um número muito pequeno de centros tecnicamente avançados e uma utilização mais ampla em transtornos cirúrgicos comuns é duvidosa. A fim de superar as limitações de cultura de células em ambiente de laboratório, o conceito de transplante de tecido moído para a expansão de células in vivo é introduzido usando o próprio corpo como um biorreactor. Para estes fins, os autoenxertos seria de preferência, ser transplantadas em um molde 3D de acordo com a forma que é necessária para a reconstrução final do órgão de interest 5-7. Originalmente, a idéia de transplantar epitélio picada foi apresentado por Meek em 1958, quando ele descreveu como epitélio cresce a partir das bordas de uma ferida. Ele demonstrou que um pequeno pedaço de pele iria aumentar as suas margens e, assim, o seu potencial para a expansão de células em 100% por corte da peça duas vezes em direcções perpendiculares (Figura 1) 8. A teoria tem sido apoiada pelo uso de enxertos de pele de espessura parcial em malha para o transplante de pele 9 e na pele ferida modelos 10 de cura. <img alt="figura 1" src="/files/ftp_upload/53061/53061fig1.jpg" width="600" /> Figura 1:. Teoria Meek De acordo com a teoria de Meek, epitélio cresce a partir das bordas de uma ferida. Ao aumentar a área exposta pela tecnologia de picagem, tecido moído epithelializes feridas de vários pontos. O presente estudo é baseado no hipotese de que o mesmo princípio pode ser aplicado ao tecido subcutâneo, colocando epitélio picada em torno de um molde. As células epiteliais que mobilizar de transplantes de picada (reorganizar), cobrir as áreas de feridas (migrar) e divisão (expansão), a fim de formar um neoepithelium contínua que cobre a área da ferida e separa o corpo estranho (o molde) do corpo interior ( Figura 2). <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/53061/53061fig2.jpg" /> Figura 2:. Dos desenhos animados de um molde 3D ​​com epitélio picada para a expansão de tecidos in vivo intracorporal de acordo com a teoria de Meek Usando tecido moído colocado sobre um molde e, em seguida transplantadas para o tecido subcutâneo, a hipótese é a de que as células epiteliais migrar a partir da bordos do tecido moído, reorganizar, e expandir de modo a formar um neoepithelium contínua que cobre a área da ferida e separa o corpo estranho (o molde) a partir do corpo interior. Embora estudos anteriores in vivo mostram resultados promissores, mais melhorias poderia ser alcançado através do reforço da auto-enxertos para que o epitélio regenerado poderia suportar trauma mecânico melhor 7. Para esses fins, foram identificados requisitos importantes para um biomaterial de sucesso, tais como: fácil difusão de nutrientes e produtos residuais, possibilidade de molde de uma maneira 3D e facilidade de manipulação cirúrgica. Conclusões foram feitas que essas necessidades podem ser satisfeitas através da adição de um biomaterial compósito para o tecido moído. O presente estudo visa o desenvolvimento de um andaime composta de tecido picada em colágeno plástico de comprimido contendo um núcleo de reforço de um tecido biodegradável. Por estes meios, as células viáveis ​​pode migrar das partículas O tecido triturado e proliferar com características morfológicas características originais do epitélio (pele ou urotélio). Utilização de compressão de plástico, o andaime foi reduzird em tamanho de 1 cm a cerca de 420 uM como as partículas foram picados envolto em colagénio da camada superior. O pano de núcleo pode ser qualquer polímero, mas precisa ser modificado com uma superfície hidrófila de modo a interligar com a cobertura 11 camadas de colagénio. O método forneceu um andaime integridade melhorada através da incorporação de uma malha tricotada que consiste em poli (ε-caprolactona) (PCL) no prazo de dois géis de colagénio de plástico comprimida usando-o como um andaime para a cultura de mucosa da bexiga picada ou picada da pele de porcos. A construção foi mantida em condições de cultura de células durante até 6 semanas in vitro, demonstrando a formação bem sucedida de um estratificado em camadas múltiplas urotélio ou epitélio escamoso da pele no topo de uma construção híbrida bem consolidada. O constructo foi fácil de manusear e pode ser suturado no lugar para fins de aumento de bexiga ou recobrimento de defeitos da pele. Todas as partes do andaime de tecido são aprovados pela FDA ea técnicapoderia ser usado para procedimentos de estágio único pela colheita de tecidos, picagem, compactação de plástico, e transplante de volta para o paciente como uma intervenção single-encenado. O procedimento pode ser realizado para a expansão do tecido e reconstrução em condições estéreis em qualquer unidade de cirurgia geral.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Silicone catheter 10-French</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM 10X</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31885-023</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well plates</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>08-772-1</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3&#39;3,&#39;5-Triiodothyronine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>IRMM469</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% PFA</td>
			<td>Labmed Solutions</td>
			<td>200-001-8</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Histolab</td>
			<td></td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ABC Elite kit: Biotin -Streptavidin detection kit</td>
			<td>Vector</td>
			<td>PK6102</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute ethanol</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>1399.01</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8626</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine 25 &#956;g/kg&#160;</td>
			<td>Temgesic, RB Pharmaceuticals, Great Britain</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Azaperone 2&#8201;mg/kg&#160;</td>
			<td>Stresnil, Janssen-Cilag, Pharma, Austria</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety Level 2 hood&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plastic compression; Section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blocking solution:&#160; Normal serum from the same species as the secondary secondary antibody was generated in.</td>
			<td>Vector</td>
			<td>The blocking solution depends of the&#160; origin of&#160; first antibody</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine 45 &#956;g/kg</td>
			<td>Atropin, Mylan Inc, Canonsburg, PA</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen 3&#8201;mg/kg&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>Rimadyl, Orion Pharma, Sweden</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine gluconate&#160;</td>
			<td>Hibiscrub 40&#8201;mg/mL, Regent Medical, England</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera toxin&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin jar: staining jar for boiling</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>6150</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless mold&#160; (33x22x10 mm) custom made</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plastic compression; Section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>3188-5023</td>
			<td>Plastic compression section 4. Keep on ice&#160; when using it in plastic compression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidermal growth factor</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9644</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethilon (non-absorbable monofilament for skin sutures)</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>Surgery, Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437-036</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps (Adison with tooth)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze (Gazin Mullkompresse)&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#180;s F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31765-027</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>1820</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidity chamber</td>
			<td>DALAB</td>
			<td></td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H0888</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide Solution 30%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H1009</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I3536</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane&#160;</td>
			<td>Isoflurane, Baxter, Deerfield, IL</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine 5 mg/ml</td>
			<td>Xylocaine, AstraZeneca, Sweden</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lucose 25&#8201;mg/mL&#160;</td>
			<td>Baxter, Deerfield, IL</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marker pen pap pen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z377821-1EA</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine 25 &#956;g/kg&#160;</td>
			<td>Domitor, Orion Pharma, Sweden</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mincing device</td>
			<td>Applied Tissue Technologies LLC</td>
			<td></td>
			<td>&#160;Minced tissue preparation, section 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monocryl (absorbable monofilament)</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>Surgery, Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH 1N</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>106462</td>
			<td>Plastic compression section 4 and cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh, 110 uM thick pore size 0.04 sqmm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plastic compression; Section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oculentum simplex APL: ointment for eye protection</td>
			<td>APL</td>
			<td>Vnr 336164</td>
			<td>Surgery, Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-094</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenobarbiturate 15&#8201;mg/kg&#160;</td>
			<td>Pentobarbital, APL, Sweden</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLGA Knitted fabric</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plastic compression; Section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat-tail collagen</td>
			<td>First LINK, Ltd, UK</td>
			<td>60-30-810</td>
			<td>Plastic compression section 4, keep on ice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blade - 15</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaving shears</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless stell mesh, 400 uM thick pore size&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plastic compression; Section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steril gloves</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gowns</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile drapes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilium</td>
			<td>Bode Chemie HAMBURG</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Thread Ethilon</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TE-solution (antigen unmasking solution) consist of 10 mM Tris and 1 mM EDTA, pH 9.0</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10 mM Tris/1 mM EDTA,&#160; adjust pH to&#160; 9.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tiletamine hypochloride 2,5&#8201;mg/kg</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transferrin&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8158</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma Base, H2NC&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T6066</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector VIP kit: Enzyme&#160; peroxidase substrate&#160; kit</td>
			<td>Vector</td>
			<td>SK4600</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl (absorbable braded)</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>Surgery, Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris buffer pH 7.6 (washing buffer)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>TE solution: Make 10X&#160; (0,5M Tris, 1,5M NaCl) by mixing: 60,6 g Tris (Trizma Base, H2NC(CH2OH)3, M=121.14 g/mol), add 800 ml&#160; distilled water adjust the pH till 7.6, add 87,7 g NaCl and fill to 1000 ml with&#160; distilled water. Dilute to 1X with distilled water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tra solv (solvent)</td>
			<td>DALAB</td>
			<td>41-5213-810</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6. Use under fume hood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zolazepam hypochloride</td>
			<td>Zoletil, Virbac, France</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory wax strips</td>
			<td>Veet</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Lundbeck</td>
			<td></td>
			<td>Termination, Section 3</td>
		</tr>
	</tbody>
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minced tissue in compressed collagen: a cell-containing biotransplant for single-staged reconstructive repair

Conventional techniques for cell expansion and transplantation of autologous cells for tissue engineering purposes can take place in specially equipped human cell culture facilities. These methods include isolation of cells in single cell suspension and several laborious and time-consuming events before transplantation back to the patient. Previous studies suggest that the body itself could be used as a bioreactor for cell expansion and regeneration of tissue in order to minimize ex vivo manipulations of tissues and cells before transplanting to the patient. The aim of this study was to demonstrate a method for tissue harvesting, isolation of continuous epithelium, mincing of the epithelium into small pieces and incorporating them into a three-layered biomaterial. The three-layered biomaterial then served as a delivery vehicle, to allow surgical handling, exchange of nutrition across the transplant, and a controlled degradation. The biomaterial consisted of two outer layers of collagen and a core of a mechanically stable and slowly degradable polymer. The minced epithelium was incorporated into one of the collagen layers before transplantation. By mincing the epithelial tissue into small pieces, the pieces could be spread and thereby the propagation of cells was stimulated. After the initial take of the transplants, cell expansion and reorganization would take place and extracellular matrix mature to allow ingrowth of capillaries and nerves and further maturation of the extracellular matrix. The technique minimizes ex vivo manipulations and allow cell harvesting, preparation of autograft, and transplantation to the patient as a simple one-stage intervention. In the future, tissue expansion could be initiated around a 3D mold inside the body itself, according to the specific needs of the patient. Additionally, the technique could be performed in an ordinary surgical setting without the need for sophisticated cell culturing facilities.

Este estudo apresenta um método que mostra como produzir um biomaterial para transplante usando compressão de plástico de colágeno e tecido picada. Mucosa da bexiga e da pele pode ser colhida e, em seguida, triturada mecanicamente em partículas pequenas (Figura 3). Por compressão de plástico, as partículas trituradas são incorporados dentro do andaime compósito composto por um polímero biodegradável colocado centralmente que é mecanicamente forte dentro de camad...

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Minced Tissue in Compressed Collagen: A Cell-containing Biotransplant for Single-staged Reconstructive Repair

A engenharia de tecidos muitas vezes inclui expansão in vitro, a fim de criar auto-enxertos para regeneração de tecidos. Neste estudo, um método para a expansão do tecido, a regeneração, e a reconstrução in vivo, foi desenvolvida de modo a minimizar o processamento de materiais biológicos e as células fora do corpo.

O tecido triturado em Compressed Collagen: Um BioTransplant contendo celular para o reparo Reconstructive Single-encenado

Conventional techniques for cell expansion and transplantation of autologous cells for tissue engineering purposes can take place in specially equipped ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Electric Field-controlled Directed Migration of Neural Progenitor Cells in 2D and 3D Environments

Campo elétrico controlado de migração dirigida de células progenitoras neurais em ambientes 2D e 3D

Endogenous electric fields (EFs) occur naturally in vivo and play a critical role during tissue/organ development and regeneration, including that of the ...

Bioengenharia

Fabrication and Application of Rose Bengal-chitosan Films in Laser Tissue Repair

Fabricação e Aplicação de Rosa Bengala-quitosana Films em Reparo de Tecidos Laser

Photochemical tissue bonding (PTB) is a sutureless technique for tissue repair, which is achieved by applying a solution of rose bengal (RB) between two ...

An Improved Method for the Preparation of Type I Collagen From Skin

Um método aperfeiçoado para a preparação de colágeno tipo I Da Pele

Soluble type 1 collagen (COL1) is used extensively as an adhesive substrate for cell cultures and as a cellular scaffold for regenerative applications. ...

Imaging Denatured Collagen Strands In vivo and Ex vivo via Photo-triggered Hybridization of Caged Collagen Mimetic Peptides

Imaging Denatured Collagen Strands In vivo and Ex vivo via Photo-triggered Hybridization of Caged Collagen Mimetic Peptides

Imagiologia desnaturadas colágeno Vertentes<em&gt; In vivo</em&gt; E<em&gt; Ex vivo</em&gt; Via foto desencadeada Hibridização do Caged Colágeno mimético Peptídeos

Collagen is a major structural component of the extracellular matrix that supports tissue formation and maintenance. Although collagen remodeling is an ...

Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix

Análise da migração celular dentro de uma matriz de colagénio tridimensional

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

Geração de espessura completa tridimensional Pele Equivalente e Automated Ferimento

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Engineering 3D Cellularized Collagen Gels for Vascular Tissue Regeneration

Engenharia 3D celularizados Colágeno Gel para Vascular Regeneração Tecidual

Synthetic materials are known to initiate clinical complications such as inflammation, stenosis, and infections when implanted as vascular substitutes. ...

Engineered 3D Silk-collagen-based Model of Polarized Neural Tissue

Baseada em Silk-colágeno Engineered 3D Model of Tissue polarizada Neural

Despite huge efforts to decipher the anatomy, composition and function of the brain, it remains the least understood organ of the human body. To gain a ...

Layer-by-layer Collagen Deposition in Microfluidic Devices for Microtissue Stabilization

Camada por camada de colágeno Deposição em microfluídicos para Microtissue Estabilização

Although microfluidics provides exquisite control of the cellular microenvironment, culturing cells within microfluidic devices can be challenging. 3D ...

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

aplicações de<em&gt; In Vivo</em&gt; Teste Funcional do Rato tibial anterior para a Avaliação da engenharia de tecidos Repair Músculo Esquelético

Despite the regenerative capacity of skeletal muscle, permanent functional and/or cosmetic deficits (e.g., volumetric muscle loss (VML) resulting from ...