Name: minced tissue in compressed collagen: a cell-containing biotransplant for single-staged reconstructive repair
Uploaded: 2016-02-24T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Minced Tissue in Compressed Collagen: A Cell-containing Biotransplant for Single-staged Reconstructive Repair at JoVE.com

The authors thank the Swedish Society for Medical Research, the Promobilia Foundation, the Crown Princess Lovisa Foundation, the Freemason Foundation for Children&#8217;s Welfare, the Swedish Society of Medicine, the Solstickan Foundation, Karolinska Institutet, and the Stockholm City Council for financial support.

Все протоколы животных были предварительно одобрены графства комитета Стокгольме животных и все процедуры соответствовали нормативам по использованию животных, а также соответствующими федеральными законами. 1. Процедуры животных <ol><li> Подготовка животных для хирур...

<ol>
	<li>Rheinwald, J. G., Green, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+cultivation+of+strains+of+human+epidermal+keratinocytes:+the+formation+of+keratinizing+colonies+from+single+cells.">Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells.</a> Cell. 6, 331-343 (1975).</li><li>Fossum, M., Nordenskjold, A., Kratz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+of+multilayered+urinary+tissue+in+vitro.">Engineering of multilayered urinary tissue in vitro.</a> Tissue Engineering. 10, 175-180 (2004).</li><li>Salmikangas, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manufacturing,+characterization+and+control+of+cell-based+medicinal+products:+challenging+paradigms+toward+commercial+use.">Manufacturing, characterization and control of cell-based medicinal products: challenging paradigms toward commercial use.</a> Regen Med. 10, 65-78 (2015).</li><li>Fossum, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minced+skin+for+tissue+engineering+of+epithelialized+subcutaneous+tunnels.">Minced skin for tissue engineering of epithelialized subcutaneous tunnels.</a> Tissue Engineering. Part A. 15, 2085-2092 (2009).</li><li>Fossum, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minced+urothelium+to+create+epithelialized+subcutaneous+conduits.">Minced urothelium to create epithelialized subcutaneous conduits.</a> The Journal of Urology. 184, 757-761 (2010).</li><li>Reinfeldt Engberg, G., Lundberg, J., Chamorro, C. L., Nordenskjold, A., Fossum, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+autologous+minced+bladder+mucosa+for+a+one-step+reconstruction+of+a+tissue+engineered+bladder+conduit.">Transplantation of autologous minced bladder mucosa for a one-step reconstruction of a tissue engineered bladder conduit.</a> BioMed Research International. 2013, 212734 (2013).</li><li>Meek, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+microdermagrafting+using+the+Meek-Wall+microdermatome.">Successful microdermagrafting using the Meek-Wall microdermatome.</a> Am J Surg. 96, 557-558 (1958).</li><li>Tanner, J. C., Vandeput, J., Olley, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mesh+skin+graft.">The Mesh skin graft.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 34, 287-292 (1964).</li><li>Svensjo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+skin+transplantation:+comparison+of+minced+skin+to+other+techniques.">Autologous skin transplantation: comparison of minced skin to other techniques.</a> The Journal of Surgical Research. 103, 19-29 (2002).</li><li>Ajalloueian, F., Zeiai, S., Rojas, R., Fossum, M., Hilborn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-stage+tissue+engineering+of+bladder+wall+patches+for+an+easy-to-use+approach+at+the+surgical+table.">One-stage tissue engineering of bladder wall patches for an easy-to-use approach at the surgical table.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 19, 688-696 (2013).</li><li>Engelhardt, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+collagen-poly(lactic+acid-co-varepsilon-caprolactone)+hybrid+scaffold+for+bladder+tissue+regeneration.">A collagen-poly(lactic acid-co-varepsilon-caprolactone) hybrid scaffold for bladder tissue regeneration.</a> Biomaterials. 32, 3969-3976 (2011).</li><li>Brown, R. A., Wiseman, M., Chuo, C. B., Cheema, U., Nazhat, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrarapid+engineering+of+biomimetic+materials+and+tissues:+fabrication+of+nano-+and+microstructures+by+plastic+compression.">Ultrarapid engineering of biomimetic materials and tissues: fabrication of nano- and microstructures by plastic compression.</a> Adv Funct Mater. 15, 1762-1770 (2005).</li><li>Fumagalli Romario, U., Puccetti, F., Elmore, U., Massaron, S., Rosati, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-gripping+mesh+versus+staple+fixation+in+laparoscopic+inguinal+hernia+repair:+a+prospective+comparison.">Self-gripping mesh versus staple fixation in laparoscopic inguinal hernia repair: a prospective comparison.</a> Surg Endosc. 27, 1798-1802 (2013).</li><li>Muangman, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+Wound+Management+Utilizing+an+Artificial+Dermal+Matrix.">Complex Wound Management Utilizing an Artificial Dermal Matrix.</a> Annals of Plastic Surgery. 57, 199-202 (2006).</li><li>Ajalloueian, F., Zeiai, S., Fossum, M., Hilborn, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constructs+of+electrospun+PLGA,+compressed+collagen+and+minced+urothelium+for+minimally+manipulated+autologous+bladder+tissue+expansion.">Constructs of electrospun PLGA, compressed collagen and minced urothelium for minimally manipulated autologous bladder tissue expansion.</a> Biomaterials. 35, 5741-5748 (2014).</li><li>Orabi, H., AbouShwareb, T., Zhang, Y., Yoo, J. J., Atala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-seeded+tubularized+scaffolds+for+reconstruction+of+long+urethral+defects:+a+preclinical+study.">Cell-seeded tubularized scaffolds for reconstruction of long urethral defects: a preclinical study.</a> Eur Urol. 63, 531-538 (2013).</li><li>Blais, M., Parenteau-Bareil, R., Cadau, S., Berthod, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concise+review:+tissue-engineered+skin+and+nerve+regeneration+in+burn+treatment.">Concise review: tissue-engineered skin and nerve regeneration in burn treatment.</a> Stem Cells Transl Med. 2, 545-551 (2013).</li><li>Serpooshan, V., Muja, N., Marelli, B., Nazhat, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+contractility+and+growth+in+plastic+compressed+collagen+gel+scaffolds+with+microstructures+correlated+with+hydraulic+permeability.">Fibroblast contractility and growth in plastic compressed collagen gel scaffolds with microstructures correlated with hydraulic permeability.</a> J Biomed Mater Res A. 96, 609-620 (2011).</li></ol>

Это исследование представляет собой простой в использовании подход к производству стенки мочевого пузыря пластырей с аутологичной ткани для трансплантации в хирургическом столе. Пластыри образованы комбинацией биоразлагаемого полимера вязания в середине и коллагена с и без фарша т...

Большинство тканевой инженерии исследования по трансплантации кожи и мочеполового тракта включают аутологичных урожаи клеток из здоровых тканей и расширение клеток в специально оборудованных клеточных культивирования объектов 1,2. После расширения клеток, клетки обычно сохраняется для последующего использования, когда пациент готов получить аутотрансплантата. морозильники азота позволяют длительное хранение при низких температурах -150 ° С или ниже. Процесс замораживания должен быть осторожным и контролировать, чтобы не потерять клетки. Один из рисков гибели клеток вне кристаллизация внутриклеточной воды в процессе оттаивания, которое может привести к разрыву клеточных мембран. Сотовый замораживания обычно выполняется путем медленного и регулируемого охлаждения (-1 ° С в мин), используя высокую концентрацию клеток, фетальной бычьей сыворотки и диметилсульфоксида. После оттаивания эти клетки должны быть обработаны снова удаления среды замерзания и культивирование клеток на пластике культуры или егобиоматериала перед трансплантацией обратно пациенту. Все вышеупомянутые шаги трудоемким, трудоемким и дорогостоящим 3. Кроме того, все в пробирке обработка клеток, предназначенных для трансплантации пациенту тщательно регулируются и требует хорошо подготовленных и аккредитованных персонала и лабораторий 4. В общем, чтобы обеспечить безопасную и надежную производственный процесс, технология может быть установлена ​​только в очень небольшом количестве технически передовых центров и более широкое использование в распространенных хирургических заболеваний сомнительна. Для того чтобы преодолеть ограниченность культивирования клеток в лабораторных условиях, понятие пересадки измельченной ткани для расширения клеток в естественных условиях вводят с помощью самого тела как биореактор. Для этих целей, как аутографты преимущественно будут пересажены на 3D плесени в соответствии с формой, которая необходима для окончательного восстановления органа Iпроценты 5-7. Первоначально, идея пересадки фарш эпителий был представлен Миком в 1958 году, когда он описал, как эпителий растет от краев раны. Он показал, что маленький кусочек кожи приведет к увеличению рентабельности и тем самым его потенциал для расширения клеток на 100% за счет сокращения кусок дважды в перпендикулярных направлениях (рисунок 1) 8. Эта теория была поддержана использования отверстиями частичных протезов толщина кожи для трансплантации кожи 9 и в коже ранозаживляющие модели 10. <img alt="Рисунок 1" src="/files/ftp_upload/53061/53061fig1.jpg" width="600" /> Рисунок 1:. Мик теория Согласно теории кроток, в эпителий растет от краев раны. Увеличивая площадь воздействия по технологии мясорубки, измельченной ткани epithelializes раны от многих местах. Настоящее исследование основано на гипо-тезис, что тот же принцип может быть применен к подкожной клетчатке, помещая измельченный эпителий вокруг формы. Эпителиальные клетки мобилизует из рубленого трансплантатов (реорганизовать), охватывают участки раневые (миграцию) и деления (развернуть) для того, чтобы сформировать непрерывную neoepithelium который покрывает область раны и отделяет постороннее тело (пресс-формы) с внутренним корпусом ( Рисунок 2). <img alt="фигура 2" src="/files/ftp_upload/53061/53061fig2.jpg" /> Рисунок 2:. Мультфильм 3D формы с рубленым эпителия для расширения в естественных интракорпоральной ткани в соответствии с теорией Меек При использовании измельченной ткани, размещенный на форме и затем пересаживают в подкожной клетчатке, гипотеза о том, что эпителиальные клетки мигрируют из края фарша ткани, реорганизовать и расширить таким образом, чтобы образовывать непрерывную neoepithelium который покрывает область раны и отделяет постороннее тело (пресс-формы) с внутренним корпусом. Хотя предыдущие исследования в естественных условиях показывают многообещающие результаты, дальнейшие улучшения могут быть достигнуты путем укрепления аутотрансплантатов, так что регенерированный эпителий может выдерживать механическую травму лучше 7. Для этих целей, были определены важные предпосылки для успешного биоматериала, такие как: легкий диффузии питательных веществ и отходов, возможность плесени в 3D образом и легкости хирургического обработки. Выводы были сделаны, что эти потребности могут быть удовлетворены путем добавления композитный биоматериал для фарша ткани. Данное исследование направлено на развитие леску, состоящую из измельченной ткани в пластиковый сжатые коллаген, содержащий армирующий стержень биоразлагаемого материала. С помощью этих средств, жизнеспособные клетки могут мигрировать из рубленого частиц тканей и размножаются с морфологические черты, характерные для оригинальной эпителия (кожи или уротелии). Используя пластиковую сжатие, подмости был снизитьд в размере от 1 см до примерно 420 мкм, как из рубленого частиц были помещены в коллагене верхнего уровня. Ядро ткани может быть любой полимер, но должна быть изменена с гидрофильной поверхностью, с тем чтобы соединяются друг с другом с покрывающими коллагеновых слоев 11. Способ обеспечил повышенную целостность эшафот путем включения вязаную сетку, состоящую из поли (-капролактон) (PCL) в течение двух пластиковых сжатый коллагеновых гелей с использованием его в качестве каркаса для культивирования фарш слизистая оболочка мочевого пузыря или фарш кожу от свиней. Конструкция поддерживалась в условиях культуры клеток до 6 недель в пробирке, демонстрируя успешное формирование слоистой, многослойной уротелии или плоского эпителия кожи на верхней части сплоченный гибридной конструкции. Конструкт был прост в обращении и может быть зашивается в месте для целей дополнения пузыря или покрытия дефектов кожи. Все части эшафот тканевой FDA одобрен и техникаможет быть использован для процедур одноступенчатых путем сбора ткани, мясорубки, пластической сжатия, и трансплантировать обратно пациенту в виде одной-ступенчатую вмешательства. Процедура может быть выполнена для расширения тканей и реконструкции в стерильных условиях в любом общем блоке хирургии.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Silicone catheter 10-French</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM 10X</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31885-023</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well plates</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>08-772-1</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3&#39;3,&#39;5-Triiodothyronine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>IRMM469</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% PFA</td>
			<td>Labmed Solutions</td>
			<td>200-001-8</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Histolab</td>
			<td></td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ABC Elite kit: Biotin -Streptavidin detection kit</td>
			<td>Vector</td>
			<td>PK6102</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute ethanol</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>1399.01</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8626</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine 25 &#956;g/kg&#160;</td>
			<td>Temgesic, RB Pharmaceuticals, Great Britain</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Azaperone 2&#8201;mg/kg&#160;</td>
			<td>Stresnil, Janssen-Cilag, Pharma, Austria</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety Level 2 hood&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plastic compression; Section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blocking solution:&#160; Normal serum from the same species as the secondary secondary antibody was generated in.</td>
			<td>Vector</td>
			<td>The blocking solution depends of the&#160; origin of&#160; first antibody</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine 45 &#956;g/kg</td>
			<td>Atropin, Mylan Inc, Canonsburg, PA</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen 3&#8201;mg/kg&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>Rimadyl, Orion Pharma, Sweden</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine gluconate&#160;</td>
			<td>Hibiscrub 40&#8201;mg/mL, Regent Medical, England</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera toxin&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin jar: staining jar for boiling</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>6150</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless mold&#160; (33x22x10 mm) custom made</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plastic compression; Section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>3188-5023</td>
			<td>Plastic compression section 4. Keep on ice&#160; when using it in plastic compression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidermal growth factor</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9644</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethilon (non-absorbable monofilament for skin sutures)</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>Surgery, Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437-036</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps (Adison with tooth)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze (Gazin Mullkompresse)&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#180;s F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31765-027</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>1820</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidity chamber</td>
			<td>DALAB</td>
			<td></td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H0888</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide Solution 30%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H1009</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I3536</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane&#160;</td>
			<td>Isoflurane, Baxter, Deerfield, IL</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine 5 mg/ml</td>
			<td>Xylocaine, AstraZeneca, Sweden</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lucose 25&#8201;mg/mL&#160;</td>
			<td>Baxter, Deerfield, IL</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marker pen pap pen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z377821-1EA</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine 25 &#956;g/kg&#160;</td>
			<td>Domitor, Orion Pharma, Sweden</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mincing device</td>
			<td>Applied Tissue Technologies LLC</td>
			<td></td>
			<td>&#160;Minced tissue preparation, section 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monocryl (absorbable monofilament)</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>Surgery, Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH 1N</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>106462</td>
			<td>Plastic compression section 4 and cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh, 110 uM thick pore size 0.04 sqmm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plastic compression; Section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oculentum simplex APL: ointment for eye protection</td>
			<td>APL</td>
			<td>Vnr 336164</td>
			<td>Surgery, Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-094</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenobarbiturate 15&#8201;mg/kg&#160;</td>
			<td>Pentobarbital, APL, Sweden</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLGA Knitted fabric</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plastic compression; Section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat-tail collagen</td>
			<td>First LINK, Ltd, UK</td>
			<td>60-30-810</td>
			<td>Plastic compression section 4, keep on ice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blade - 15</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaving shears</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless stell mesh, 400 uM thick pore size&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plastic compression; Section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steril gloves</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gowns</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile drapes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilium</td>
			<td>Bode Chemie HAMBURG</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Thread Ethilon</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TE-solution (antigen unmasking solution) consist of 10 mM Tris and 1 mM EDTA, pH 9.0</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10 mM Tris/1 mM EDTA,&#160; adjust pH to&#160; 9.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tiletamine hypochloride 2,5&#8201;mg/kg</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transferrin&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8158</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma Base, H2NC&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T6066</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector VIP kit: Enzyme&#160; peroxidase substrate&#160; kit</td>
			<td>Vector</td>
			<td>SK4600</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl (absorbable braded)</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>Surgery, Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris buffer pH 7.6 (washing buffer)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>TE solution: Make 10X&#160; (0,5M Tris, 1,5M NaCl) by mixing: 60,6 g Tris (Trizma Base, H2NC(CH2OH)3, M=121.14 g/mol), add 800 ml&#160; distilled water adjust the pH till 7.6, add 87,7 g NaCl and fill to 1000 ml with&#160; distilled water. Dilute to 1X with distilled water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tra solv (solvent)</td>
			<td>DALAB</td>
			<td>41-5213-810</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6. Use under fume hood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zolazepam hypochloride</td>
			<td>Zoletil, Virbac, France</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory wax strips</td>
			<td>Veet</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Lundbeck</td>
			<td></td>
			<td>Termination, Section 3</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

minced tissue in compressed collagen: a cell-containing biotransplant for single-staged reconstructive repair

Conventional techniques for cell expansion and transplantation of autologous cells for tissue engineering purposes can take place in specially equipped human cell culture facilities. These methods include isolation of cells in single cell suspension and several laborious and time-consuming events before transplantation back to the patient. Previous studies suggest that the body itself could be used as a bioreactor for cell expansion and regeneration of tissue in order to minimize ex vivo manipulations of tissues and cells before transplanting to the patient. The aim of this study was to demonstrate a method for tissue harvesting, isolation of continuous epithelium, mincing of the epithelium into small pieces and incorporating them into a three-layered biomaterial. The three-layered biomaterial then served as a delivery vehicle, to allow surgical handling, exchange of nutrition across the transplant, and a controlled degradation. The biomaterial consisted of two outer layers of collagen and a core of a mechanically stable and slowly degradable polymer. The minced epithelium was incorporated into one of the collagen layers before transplantation. By mincing the epithelial tissue into small pieces, the pieces could be spread and thereby the propagation of cells was stimulated. After the initial take of the transplants, cell expansion and reorganization would take place and extracellular matrix mature to allow ingrowth of capillaries and nerves and further maturation of the extracellular matrix. The technique minimizes ex vivo manipulations and allow cell harvesting, preparation of autograft, and transplantation to the patient as a simple one-stage intervention. In the future, tissue expansion could be initiated around a 3D mold inside the body itself, according to the specific needs of the patient. Additionally, the technique could be performed in an ordinary surgical setting without the need for sophisticated cell culturing facilities.

Это исследование представляет собой метод, который показывает, как производить биоматериал для трансплантации с использованием пластиковой сжатие коллагена и измельченной ткани. Слизистой оболочки мочевого пузыря и кожи могут быть собраны, а затем механически измель...

Watch this Scientific Journal Video about Minced Tissue in Compressed Collagen: A Cell-containing Biotransplant for Single-staged Reconstructive Repair at JoVE.com

Minced Tissue in Compressed Collagen: A Cell-containing Biotransplant for Single-staged Reconstructive Repair

При помощи этой технологии часто включает в пробирке расширения, чтобы создать аутотрансплантатов для регенерации ткани. В этом исследовании способ расширения ткани, регенерации, и реконструкции в естественных условиях была разработана для того, чтобы свести к минимуму обработку клеток и биологических материалов вне тела.

Измельченной ткани в сжатом коллагена: Сотовый содержащих Biotransplant одноместным-ступенчатую реконструктивной Ремонт

Conventional techniques for cell expansion and transplantation of autologous cells for tissue engineering purposes can take place in specially equipped ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Electric Field-controlled Directed Migration of Neural Progenitor Cells in 2D and 3D Environments

Электрическое поле контролируемых Режиссер миграции нервных клеток предшественников в 2D и 3D среде

Endogenous electric fields (EFs) occur naturally in vivo and play a critical role during tissue/organ development and regeneration, including that of the ...

Fabrication and Application of Rose Bengal-chitosan Films in Laser Tissue Repair

Изготовление и применение бенгальским розовым-хитозан Фильмы в лазерной восстановления тканей

Photochemical tissue bonding (PTB) is a sutureless technique for tissue repair, which is achieved by applying a solution of rose bengal (RB) between two ...

An Improved Method for the Preparation of Type I Collagen From Skin

Улучшенный способ по подготовке I типа коллагена из кожи

Soluble type 1 collagen (COL1) is used extensively as an adhesive substrate for cell cultures and as a cellular scaffold for regenerative applications. ...

Imaging Denatured Collagen Strands In vivo and Ex vivo via Photo-triggered Hybridization of Caged Collagen Mimetic Peptides

Imaging Denatured Collagen Strands In vivo and Ex vivo via Photo-triggered Hybridization of Caged Collagen Mimetic Peptides

Визуализация денатурированного коллагена Пряди<em&gt; В естественных условиях</em&gt; И<em&gt; Экс естественных</em&gt; Через Фото-срабатывает гибридизации скованного Коллаген Mimetic пептидов

Collagen is a major structural component of the extracellular matrix that supports tissue formation and maintenance. Although collagen remodeling is an ...

Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix

Анализ миграции клеток в трехмерном коллагеновой матрице

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

Генерация трехмерной всю толщину кожи Эквивалент техники и автоматизированных Ранение

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Engineering 3D Cellularized Collagen Gels for Vascular Tissue Regeneration

Инженерные 3D Cellularized Коллаген Гели для сосудистой регенерации ткани

Synthetic materials are known to initiate clinical complications such as inflammation, stenosis, and infections when implanted as vascular substitutes. ...

Engineered 3D Silk-collagen-based Model of Polarized Neural Tissue

Инженерная 3D Шелковый коллагена на основе модели поляризованного нервной ткани

Despite huge efforts to decipher the anatomy, composition and function of the brain, it remains the least understood organ of the human body. To gain a ...

Layer-by-layer Collagen Deposition in Microfluidic Devices for Microtissue Stabilization

Слой за слоем Коллаген осаждения в микрофлюидных Устройства для стабилизации Microtissue

Although microfluidics provides exquisite control of the cellular microenvironment, culturing cells within microfluidic devices can be challenging. 3D ...

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Применения<em&gt; В Vivo</em&gt; Функциональное тестирование Крысы передней большеберцовой для оценки Tissue Engineered скелетной мускулатуре Ремонт

Despite the regenerative capacity of skeletal muscle, permanent functional and/or cosmetic deficits (e.g., volumetric muscle loss (VML) resulting from ...