Name: minced tissue in compressed collagen: a cell-containing biotransplant for single-staged reconstructive repair
Uploaded: 2016-02-24T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Minced Tissue in Compressed Collagen: A Cell-containing Biotransplant for Single-staged Reconstructive Repair at JoVE.com

The authors thank the Swedish Society for Medical Research, the Promobilia Foundation, the Crown Princess Lovisa Foundation, the Freemason Foundation for Children&#8217;s Welfare, the Swedish Society of Medicine, the Solstickan Foundation, Karolinska Institutet, and the Stockholm City Council for financial support.

Todos los animales protocolos fueron aprobados previamente por el Comité del Condado de Estocolmo sobre los animales y todos los procedimientos se ajustaban a las normas para el uso de animales, así como las leyes federales pertinentes. 1. Procedimientos de Animales <ol><li> Preparación del animal para la cirugía <ol><li> Preparar la mesa de operaciones con todos los materiales y los instrumentos necesarios para la operación en condiciones estériles. Realizar la cirugía exclusivamen...

<ol>
	<li>Rheinwald, J. G., Green, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+cultivation+of+strains+of+human+epidermal+keratinocytes:+the+formation+of+keratinizing+colonies+from+single+cells.">Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells.</a> Cell. 6, 331-343 (1975).</li><li>Fossum, M., Nordenskjold, A., Kratz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+of+multilayered+urinary+tissue+in+vitro.">Engineering of multilayered urinary tissue in vitro.</a> Tissue Engineering. 10, 175-180 (2004).</li><li>Salmikangas, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manufacturing,+characterization+and+control+of+cell-based+medicinal+products:+challenging+paradigms+toward+commercial+use.">Manufacturing, characterization and control of cell-based medicinal products: challenging paradigms toward commercial use.</a> Regen Med. 10, 65-78 (2015).</li><li>Fossum, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minced+skin+for+tissue+engineering+of+epithelialized+subcutaneous+tunnels.">Minced skin for tissue engineering of epithelialized subcutaneous tunnels.</a> Tissue Engineering. Part A. 15, 2085-2092 (2009).</li><li>Fossum, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minced+urothelium+to+create+epithelialized+subcutaneous+conduits.">Minced urothelium to create epithelialized subcutaneous conduits.</a> The Journal of Urology. 184, 757-761 (2010).</li><li>Reinfeldt Engberg, G., Lundberg, J., Chamorro, C. L., Nordenskjold, A., Fossum, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+autologous+minced+bladder+mucosa+for+a+one-step+reconstruction+of+a+tissue+engineered+bladder+conduit.">Transplantation of autologous minced bladder mucosa for a one-step reconstruction of a tissue engineered bladder conduit.</a> BioMed Research International. 2013, 212734 (2013).</li><li>Meek, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+microdermagrafting+using+the+Meek-Wall+microdermatome.">Successful microdermagrafting using the Meek-Wall microdermatome.</a> Am J Surg. 96, 557-558 (1958).</li><li>Tanner, J. C., Vandeput, J., Olley, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mesh+skin+graft.">The Mesh skin graft.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 34, 287-292 (1964).</li><li>Svensjo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+skin+transplantation:+comparison+of+minced+skin+to+other+techniques.">Autologous skin transplantation: comparison of minced skin to other techniques.</a> The Journal of Surgical Research. 103, 19-29 (2002).</li><li>Ajalloueian, F., Zeiai, S., Rojas, R., Fossum, M., Hilborn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-stage+tissue+engineering+of+bladder+wall+patches+for+an+easy-to-use+approach+at+the+surgical+table.">One-stage tissue engineering of bladder wall patches for an easy-to-use approach at the surgical table.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 19, 688-696 (2013).</li><li>Engelhardt, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+collagen-poly(lactic+acid-co-varepsilon-caprolactone)+hybrid+scaffold+for+bladder+tissue+regeneration.">A collagen-poly(lactic acid-co-varepsilon-caprolactone) hybrid scaffold for bladder tissue regeneration.</a> Biomaterials. 32, 3969-3976 (2011).</li><li>Brown, R. A., Wiseman, M., Chuo, C. B., Cheema, U., Nazhat, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrarapid+engineering+of+biomimetic+materials+and+tissues:+fabrication+of+nano-+and+microstructures+by+plastic+compression.">Ultrarapid engineering of biomimetic materials and tissues: fabrication of nano- and microstructures by plastic compression.</a> Adv Funct Mater. 15, 1762-1770 (2005).</li><li>Fumagalli Romario, U., Puccetti, F., Elmore, U., Massaron, S., Rosati, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-gripping+mesh+versus+staple+fixation+in+laparoscopic+inguinal+hernia+repair:+a+prospective+comparison.">Self-gripping mesh versus staple fixation in laparoscopic inguinal hernia repair: a prospective comparison.</a> Surg Endosc. 27, 1798-1802 (2013).</li><li>Muangman, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+Wound+Management+Utilizing+an+Artificial+Dermal+Matrix.">Complex Wound Management Utilizing an Artificial Dermal Matrix.</a> Annals of Plastic Surgery. 57, 199-202 (2006).</li><li>Ajalloueian, F., Zeiai, S., Fossum, M., Hilborn, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constructs+of+electrospun+PLGA,+compressed+collagen+and+minced+urothelium+for+minimally+manipulated+autologous+bladder+tissue+expansion.">Constructs of electrospun PLGA, compressed collagen and minced urothelium for minimally manipulated autologous bladder tissue expansion.</a> Biomaterials. 35, 5741-5748 (2014).</li><li>Orabi, H., AbouShwareb, T., Zhang, Y., Yoo, J. J., Atala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-seeded+tubularized+scaffolds+for+reconstruction+of+long+urethral+defects:+a+preclinical+study.">Cell-seeded tubularized scaffolds for reconstruction of long urethral defects: a preclinical study.</a> Eur Urol. 63, 531-538 (2013).</li><li>Blais, M., Parenteau-Bareil, R., Cadau, S., Berthod, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concise+review:+tissue-engineered+skin+and+nerve+regeneration+in+burn+treatment.">Concise review: tissue-engineered skin and nerve regeneration in burn treatment.</a> Stem Cells Transl Med. 2, 545-551 (2013).</li><li>Serpooshan, V., Muja, N., Marelli, B., Nazhat, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+contractility+and+growth+in+plastic+compressed+collagen+gel+scaffolds+with+microstructures+correlated+with+hydraulic+permeability.">Fibroblast contractility and growth in plastic compressed collagen gel scaffolds with microstructures correlated with hydraulic permeability.</a> J Biomed Mater Res A. 96, 609-620 (2011).</li></ol>

Este estudio presenta un enfoque fácil de usar para producir parches pared de la vejiga con tejido autólogo para el trasplante en la mesa quirúrgica. Los parches están formados por la combinación de un tejido de punto de polímero biodegradable en el medio y el colágeno, con y sin tejido picado en las superficies exteriores en combinación con la compresión de plástico. Compresión de plástico es un método descrito previamente por otros autores y se puede definir como una rápida expulsión de fluido a partir ...

La mayoría de los estudios de ingeniería de tejidos en el trasplante a la piel y el tracto urogenital incluyen cosechas de células autólogas a partir de tejido sano y la expansión de células en los centros de cultivo de células especialmente equipados 1,2. Después de la expansión de células, las células se suelen almacenar para su uso posterior, cuando se prepara al paciente para recibir el autoinjerto. congeladores de nitrógeno permiten el almacenamiento a largo plazo a bajas temperaturas de -150 ° C o inferior. El proceso de congelación debe ser cuidadoso y controlado con el fin de no perder las células. Uno de los riesgos de la muerte celular es la cristalización del agua intracelular durante el proceso de descongelación, lo que puede conducir a la ruptura de las membranas celulares. congelación de células se realiza generalmente por un enfriamiento lento y controlado (-1 ° C por minuto), utilizando una alta concentración de células, suero bovino fetal, y sulfóxido de dimetilo. Después de la descongelación, las células necesitan ser procesados ​​de nuevo mediante la eliminación del medio de congelación y el cultivo sobre plástico de cultivo de células o unabiomaterial antes del trasplante de nuevo al paciente. Todas las etapas mencionadas anteriormente requieren mucho tiempo, laboriosa y costosa 3. Además, todo el procesamiento in vitro de células destinados a trasplantes paciente son altamente regulado y requiere de personal y laboratorios 4 bien entrenados y acreditados. Con todo, para procurar un proceso de fabricación seguro y fiable, la técnica sólo se puede establecer en un número muy reducido de centros de tecnología avanzada y un uso más amplio de trastornos quirúrgicos comunes es dudosa. Con el fin de superar las limitaciones de cultivo de células en el entorno de laboratorio, el concepto de trasplantar tejido picado para la expansión de células in vivo se introduce por el uso del cuerpo como un biorreactor. A estos efectos, los autoinjertos preferentemente se trasplantaron en un molde 3D de acuerdo a la forma que se necesita para la reconstrucción final del órgano de interés 5-7. Originalmente, la idea de trasplantar epitelio picada fue presentado por Meek en 1958 cuando describió cómo el epitelio crece a partir de los bordes de una herida. Demostró que un pequeño trozo de piel aumentaría sus márgenes y por lo tanto su potencial para la expansión de células en un 100% por el corte de la pieza dos veces en direcciones perpendiculares (Figura 1) 8. La teoría ha sido apoyado por el uso de injertos de piel de espesor parcial en malla para el trasplante de piel 9 y en la piel de la herida modelos 10 de cicatrización. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/53061/53061fig1.jpg" width="600" /> Figura 1:. Teoría Meek Según la teoría de Meek, epitelio crece a partir de los bordes de una herida. Al aumentar el área expuesta por la tecnología de picar carne, tejido picado epithelializes heridas de muchos puntos. El presente estudio se basa en el hipotesis de que el mismo principio podría aplicarse al tejido subcutáneo mediante la colocación de epitelio picada alrededor de un molde. Las células epiteliales se movilizarían de trasplantes picados (reorganizar), cubren las áreas de heridas (migrar) y dividir (ampliar) con el fin de formar un neoepithelium continua que cubre el área de la herida y separa el cuerpo extraño (el molde) del cuerpo interior ( la Figura 2). <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/53061/53061fig2.jpg" /> Figura 2:. Dibujos animados de un molde 3D ​​con epitelio picada para la expansión del tejido in vivo intracorporal según la teoría de Meek Mediante el uso de tejido picado colocado en un molde y luego trasplantadas en el tejido subcutáneo, la hipótesis es que las células epiteliales migran desde el bordes del tejido picado, reorganizan, y se expanden con el fin de formar un neoepithelium continua que cubre el área de la herida y se separa el cuerpo extraño (el molde) del cuerpo interior. Aunque estudios previos in vivo muestran resultados prometedores, mejoras adicionales podrían alcanzarse mediante el refuerzo de los autoinjertos de modo que el epitelio regenerado podría soportar trauma mecánico mejor 7. A estos efectos, se identificaron requisitos importantes para un biomaterial éxito, tales como: fácil difusión de nutrientes y productos de desecho, posibilidad de molde de una manera 3D y facilidad de manejo quirúrgico. Conclusiones Se hicieron que estas necesidades podrían satisfacerse mediante la adición de un biomaterial compuesto al tejido picado. El estudio tuvo como objetivo desarrollar un andamio compuesto de tejido colágeno en picada plástico comprimido que contiene un núcleo de refuerzo de un tejido biodegradable. Por estos medios, las células viables podrían migrar de las partículas de tejido desmenuzado y proliferar con características morfológicas característica del epitelio original (piel o urotelio). Uso de la compresión de plástico, el andamio era reducird en tamaño de 1 cm a alrededor de 420 micras como las partículas picadas se encerrado en el colágeno de la capa superior. El tejido básico podría ser cualquier polímero pero necesita ser modificado con una superficie hidrófila con el fin de interconectar con las capas de colágeno que cubren 11. El método proporciona una integridad andamio mejorada mediante la incorporación de una malla tejida que consiste en poli (ε-caprolactona) (PCL) dentro de los dos geles de colágeno de plástico comprimido de usarlo como un andamio para el cultivo de la mucosa de la vejiga o de la piel picada picada a partir de cerdos. La construcción se mantiene en condiciones de cultivo celular para un máximo de 6 semanas in vitro, lo que demuestra la formación con éxito de una, de varias capas urotelio o epitelio estratificado escamoso de piel en la parte superior de una construcción híbrida bien consolidada. La construcción era fácil de manejar y puede ser suturado en su lugar con fines de aumento de la vejiga o de cobertura de defectos de la piel. Todas las partes del andamio de tejido están aprobados por la FDA y la técnicapodría ser utilizado para los procedimientos de una sola etapa por la recolección de tejido, picado, compresión de plástico, y el trasplante de nuevo al paciente como una intervención por etapas sola. El procedimiento puede ser realizado por la expansión del tejido y la reconstrucción en condiciones estériles en cualquier unidad de cirugía general.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Silicone catheter 10-French</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM 10X</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31885-023</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well plates</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>08-772-1</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3&#39;3,&#39;5-Triiodothyronine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>IRMM469</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% PFA</td>
			<td>Labmed Solutions</td>
			<td>200-001-8</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Histolab</td>
			<td></td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ABC Elite kit: Biotin -Streptavidin detection kit</td>
			<td>Vector</td>
			<td>PK6102</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute ethanol</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>1399.01</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8626</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine 25 &#956;g/kg&#160;</td>
			<td>Temgesic, RB Pharmaceuticals, Great Britain</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Azaperone 2&#8201;mg/kg&#160;</td>
			<td>Stresnil, Janssen-Cilag, Pharma, Austria</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety Level 2 hood&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plastic compression; Section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blocking solution:&#160; Normal serum from the same species as the secondary secondary antibody was generated in.</td>
			<td>Vector</td>
			<td>The blocking solution depends of the&#160; origin of&#160; first antibody</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine 45 &#956;g/kg</td>
			<td>Atropin, Mylan Inc, Canonsburg, PA</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen 3&#8201;mg/kg&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>Rimadyl, Orion Pharma, Sweden</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine gluconate&#160;</td>
			<td>Hibiscrub 40&#8201;mg/mL, Regent Medical, England</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera toxin&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8052</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin jar: staining jar for boiling</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>6150</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless mold&#160; (33x22x10 mm) custom made</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plastic compression; Section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>3188-5023</td>
			<td>Plastic compression section 4. Keep on ice&#160; when using it in plastic compression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidermal growth factor</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9644</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethilon (non-absorbable monofilament for skin sutures)</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>Surgery, Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437-036</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps (Adison with tooth)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze (Gazin Mullkompresse)&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#180;s F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31765-027</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>1820</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidity chamber</td>
			<td>DALAB</td>
			<td></td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H0888</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide Solution 30%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H1009</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I3536</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane&#160;</td>
			<td>Isoflurane, Baxter, Deerfield, IL</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine 5 mg/ml</td>
			<td>Xylocaine, AstraZeneca, Sweden</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lucose 25&#8201;mg/mL&#160;</td>
			<td>Baxter, Deerfield, IL</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marker pen pap pen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z377821-1EA</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine 25 &#956;g/kg&#160;</td>
			<td>Domitor, Orion Pharma, Sweden</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mincing device</td>
			<td>Applied Tissue Technologies LLC</td>
			<td></td>
			<td>&#160;Minced tissue preparation, section 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monocryl (absorbable monofilament)</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>Surgery, Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH 1N</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>106462</td>
			<td>Plastic compression section 4 and cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh, 110 uM thick pore size 0.04 sqmm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plastic compression; Section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oculentum simplex APL: ointment for eye protection</td>
			<td>APL</td>
			<td>Vnr 336164</td>
			<td>Surgery, Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-094</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Plastic compression section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenobarbiturate 15&#8201;mg/kg&#160;</td>
			<td>Pentobarbital, APL, Sweden</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLGA Knitted fabric</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plastic compression; Section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat-tail collagen</td>
			<td>First LINK, Ltd, UK</td>
			<td>60-30-810</td>
			<td>Plastic compression section 4, keep on ice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blade - 15</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaving shears</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless stell mesh, 400 uM thick pore size&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plastic compression; Section 4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steril gloves</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gowns</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile drapes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilium</td>
			<td>Bode Chemie HAMBURG</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Thread Ethilon</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TE-solution (antigen unmasking solution) consist of 10 mM Tris and 1 mM EDTA, pH 9.0</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10 mM Tris/1 mM EDTA,&#160; adjust pH to&#160; 9.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tiletamine hypochloride 2,5&#8201;mg/kg</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transferrin&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8158</td>
			<td>&#160; In vitro culture; Section 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma Base, H2NC&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T6066</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector VIP kit: Enzyme&#160; peroxidase substrate&#160; kit</td>
			<td>Vector</td>
			<td>SK4600</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl (absorbable braded)</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>Surgery, Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris buffer pH 7.6 (washing buffer)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>TE solution: Make 10X&#160; (0,5M Tris, 1,5M NaCl) by mixing: 60,6 g Tris (Trizma Base, H2NC(CH2OH)3, M=121.14 g/mol), add 800 ml&#160; distilled water adjust the pH till 7.6, add 87,7 g NaCl and fill to 1000 ml with&#160; distilled water. Dilute to 1X with distilled water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tra solv (solvent)</td>
			<td>DALAB</td>
			<td>41-5213-810</td>
			<td>Immunocytochemistry; Section 6. Use under fume hood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zolazepam hypochloride</td>
			<td>Zoletil, Virbac, France</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory wax strips</td>
			<td>Veet</td>
			<td></td>
			<td>Preparing the animal for surgery , Section 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Lundbeck</td>
			<td></td>
			<td>Termination, Section 3</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

minced tissue in compressed collagen: a cell-containing biotransplant for single-staged reconstructive repair

Conventional techniques for cell expansion and transplantation of autologous cells for tissue engineering purposes can take place in specially equipped human cell culture facilities. These methods include isolation of cells in single cell suspension and several laborious and time-consuming events before transplantation back to the patient. Previous studies suggest that the body itself could be used as a bioreactor for cell expansion and regeneration of tissue in order to minimize ex vivo manipulations of tissues and cells before transplanting to the patient. The aim of this study was to demonstrate a method for tissue harvesting, isolation of continuous epithelium, mincing of the epithelium into small pieces and incorporating them into a three-layered biomaterial. The three-layered biomaterial then served as a delivery vehicle, to allow surgical handling, exchange of nutrition across the transplant, and a controlled degradation. The biomaterial consisted of two outer layers of collagen and a core of a mechanically stable and slowly degradable polymer. The minced epithelium was incorporated into one of the collagen layers before transplantation. By mincing the epithelial tissue into small pieces, the pieces could be spread and thereby the propagation of cells was stimulated. After the initial take of the transplants, cell expansion and reorganization would take place and extracellular matrix mature to allow ingrowth of capillaries and nerves and further maturation of the extracellular matrix. The technique minimizes ex vivo manipulations and allow cell harvesting, preparation of autograft, and transplantation to the patient as a simple one-stage intervention. In the future, tissue expansion could be initiated around a 3D mold inside the body itself, according to the specific needs of the patient. Additionally, the technique could be performed in an ordinary surgical setting without the need for sophisticated cell culturing facilities.

Este estudio presenta un método que muestra cómo producir un biomaterial para el trasplante utilizando la compresión de plástico de colágeno y tejido picado. Mucosa de la vejiga y la piel pueden ser cosechadas mecánicamente y luego picado en pequeñas partículas (Figura 3). Por compresión de plástico, las partículas picadas se incorporan dentro de la armazón de material compuesto compuesta de un polímero biodegradable colocado en posición central que es mecánic...

Watch this Scientific Journal Video about Minced Tissue in Compressed Collagen: A Cell-containing Biotransplant for Single-staged Reconstructive Repair at JoVE.com

Minced Tissue in Compressed Collagen: A Cell-containing Biotransplant for Single-staged Reconstructive Repair

La ingeniería de tejidos incluye a menudo la expansión in vitro con el fin de crear autoinjertos para la regeneración de tejidos. En este estudio se desarrolló un método para la expansión del tejido, la regeneración, y la reconstrucción in vivo con el fin de reducir al mínimo el procesamiento de células y materiales biológicos fuera del cuerpo.

Tejido picado en colágeno comprimido: Un Bio Transplant que contiene células para la reparación reconstructiva-puesta en escena individual

Conventional techniques for cell expansion and transplantation of autologous cells for tissue engineering purposes can take place in specially equipped ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Electric Field-controlled Directed Migration of Neural Progenitor Cells in 2D and 3D Environments

Campo eléctrico controlado por migración dirigida de células progenitoras neurales en entornos 2D y 3D

Endogenous electric fields (EFs) occur naturally in vivo and play a critical role during tissue/organ development and regeneration, including that of the ...

Investigación

Bioingeniería

Fabrication and Application of Rose Bengal-chitosan Films in Laser Tissue Repair

Fabricación y Aplicación de Rosa de Bengala-quitosano Films en Tissue Repair Laser

Photochemical tissue bonding (PTB) is a sutureless technique for tissue repair, which is achieved by applying a solution of rose bengal (RB) between two ...

An Improved Method for the Preparation of Type I Collagen From Skin

Un método mejorado para la preparación de colágeno tipo I De Piel

Soluble type 1 collagen (COL1) is used extensively as an adhesive substrate for cell cultures and as a cellular scaffold for regenerative applications. ...

Imaging Denatured Collagen Strands In vivo and Ex vivo via Photo-triggered Hybridization of Caged Collagen Mimetic Peptides

Imaging Denatured Collagen Strands In vivo and Ex vivo via Photo-triggered Hybridization of Caged Collagen Mimetic Peptides

Imaging desnaturalizadas colágeno Strands<em&gt; En vivo</em&gt; Y<em&gt; Ex vivo</em&gt; A través de Photo-desencadenada Hibridación de Caged colágeno Mimetic Péptidos

Collagen is a major structural component of the extracellular matrix that supports tissue formation and maintenance. Although collagen remodeling is an ...

Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix

Análisis de la migración de células dentro de una matriz de colágeno tridimensional

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

Generación de una tridimensional grosor de la piel completa y automatizada Equivalente Heridas

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Engineering 3D Cellularized Collagen Gels for Vascular Tissue Regeneration

Ingeniería 3D Cellularized colágeno Geles para Vascular Regeneración Tisular

Synthetic materials are known to initiate clinical complications such as inflammation, stenosis, and infections when implanted as vascular substitutes. ...

Engineered 3D Silk-collagen-based Model of Polarized Neural Tissue

Modelo de polarizado Neural tisular basada Silk-colágeno-Engineered 3D

Despite huge efforts to decipher the anatomy, composition and function of the brain, it remains the least understood organ of the human body. To gain a ...

Layer-by-layer Collagen Deposition in Microfluidic Devices for Microtissue Stabilization

Capa por capa deposición de colágeno en dispositivos de microfluidos para microtejidos Estabilización

Although microfluidics provides exquisite control of the cellular microenvironment, culturing cells within microfluidic devices can be challenging. 3D ...

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Aplicaciones de la<em&gt; En Vivo</em&gt; Pruebas funcionales de la rata tibial anterior para la evaluación de la ingeniería tisular de reparación del músculo esquelético

Despite the regenerative capacity of skeletal muscle, permanent functional and/or cosmetic deficits (e.g., volumetric muscle loss (VML) resulting from ...