Name: method of studying palatal fusion using static organ culture
Uploaded: 2015-09-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Method of Studying Palatal Fusion using Static Organ Culture at JoVE.com

The authors do not have any acknowledgements.

يجب تنفيذ جميع الإجراءات المذكورة وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح لاستخدام الحيوانات الفقارية، بما في ذلك الحصول على موافقة مسبقة من لجنة رعاية الحيوان المؤسسية واستخدام المحلية. 1. إعداد أدوات تشريح والثقافة وسائل الإعلام <ol ...

<ol>
	<li>Nawshad, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palatal+seam+disintegration+to+die+or+not+to+die+that+is+no+longer+the+question.">Palatal seam disintegration to die or not to die that is no longer the question.</a> Developmental dynamics an official publication of the American Association of Anatomists. 237, 2643-2656 (2008).</li><li>Strong, E. B., Buckmiller, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+the+cleft+palate.">Management of the cleft palate.</a> Facial plastic surgery clinics of North America. 9, 15-25 (2001).</li><li>Witt, P. D., Marsh, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+assessing+outcome+of+surgical+repair+of+cleft+lip+and+cleft+palate.">Advances in assessing outcome of surgical repair of cleft lip and cleft palate.</a> Plastic and reconstructive surgery. 100, 1907-1917 (1997).</li><li>4miloro, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> principles of oral and maxillofafcial surgery. 209, 231-249 (1984).</li><li>Mima, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+epithelial+adhesion+molecule+CEACAM1+is+important+for+palate+formation.">Regulation of the epithelial adhesion molecule CEACAM1 is important for palate formation.</a> PloS one. 8, e61653 (2013).</li><li>Carette, M. J., Ferguson, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fate+of+medial+edge+epithelial+cells+during+palatal+fusion+in+vitro+an+analysis+by+DiI+labelling+and+confocal+microscopy.">The fate of medial edge epithelial cells during palatal fusion in vitro an analysis by DiI labelling and confocal microscopy.</a> Development (Cambridge, England). 114, 379-388 (1992).</li><li>Ferguson, M. W., Honig, L. S., Slavkin, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+cultured+palatal+shelves+from+alligator+chick+and+mouse+embryos.">Differentiation of cultured palatal shelves from alligator chick and mouse embryos.</a> The Anatomical record. 209, 231-249 (1984).</li><li>San Miguel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ephrin+reverse+signaling+controls+palate+fusion+via+a+PI3+kinase+dependent+mechanism.">Ephrin reverse signaling controls palate fusion via a PI3 kinase dependent mechanism.</a> Developmental dynamics an official publication of the American Association of Anatomists. 240, 357-364 (2011).</li><li>Kang, P., Svoboda, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI+3+kinase+activity+is+required+for+epithelial+mesenchymal+transformation+during+palate+fusion.">PI 3 kinase activity is required for epithelial mesenchymal transformation during palate fusion.</a> Developmental dynamics an official publication of the American Association of Anatomists. 225, 316-322 (2002).</li><li>RD, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Histopathologic Technic and Practical Histochemistry. , (1965).</li><li>Kaufman, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Atlas of Mouse Development. , (1992).</li><li>Taher, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+gene+expression+analysis+of+murine+limb+development.">Global gene expression analysis of murine limb development.</a> PloS one. 6, e28358 (2011).</li></ol>

بروتوكول في هذه المقالة يوفر طريقة لتشريح الرفوف حنكي من الأجنة في اليوم الجنينية 13.5. وكانت الرفوف الحنك من أجنة الفئران مثقف في وسائل الإعلام ثقافة خالية من مصل في جو من 95٪ O 2 5٪ CO 2 عند 37 درجة مئوية. نجاح حنكي تشريح اعتمادا كبيرا على عوامل متعددة في كل خطوة ...

انشقاقات فموي وجهي هي الاكثر السائدة العيوب الخلقية القحفي. أيضا، مع الأخذ في الاعتبار جميع العيوب القحفي ممكنة، وهذه هي ثاني الشذوذ الولادة الأكثر شيوعا في الأطفال حديثي الولادة 2. تحدث الأذواق المشقوقة في حوالي 1 في كل 700 ولادة في الولايات المتحدة (US) من كل عام، وقوع الحنك يساوي 475 الأطفال الذين ولدوا مع الأذواق المشقوقة شهريا أو 15 طفلا شقوقا في يوم 3. ما يقرب من 1٪ من الأطفال الذين ولدوا في جميع أنحاء العالم كل عام المعرض شكلا من أشكال dysmorphology القحفي. شقوق في سقف الحلق والشفة تحتاج إلى إجراء مكلفة جدا ومعقدة مع تداعيات مدى الحياة للمرضى الذين لديهم هذا الشذوذ. التكلفة التقديرية لكل مريض مع شق طريق الفم هو حوالي 100،000 $ 4. علاج للمريض مع الشفة المشقوقة والحنك يتطلب فريقا من الأطباء الجراحين بما في ذلك القحفي، otolaryngologists، والهندسة الوراثية، التخدير،النطق واللغة الأطباء وخبراء التغذية، تقويم الأسنان، prosthodontists وعلماء النفس والأعصاب، وأطباء العيون. في palatogenesis، ينشأ الحنك الثانوي الامتداد المقترنة، التي تنمو في البداية عموديا والخضوع لحنكي الرف الارتفاع فوق ظهر اللسان. بعد الارتفاع، ورفوف حنكي يقترن تنمو نحو خط الوسط (في E14.5 -E15 في الفئران والأسبوع 9 في البشر). ظهارة حافة وسطي (MEE) الذي يغطي طرف الجرف تلتزم تشكيل التماس خط الوسط الظهارية. ويعقب ذلك الظهارية للانتقال الوسيطة و / أو موت الخلايا المبرمج للسماح الوسيطة التقاء. التصاق معارضة MEE هو الحدث الأساسي الذي يسبب الحنك التغيير. ومع ذلك، حققت فقط عدد قليل من الدراسات التصاق الأولي من الرفوف حنكي 5. أشكال الحنك الصلبة التي تمايز خلايا اللحمة المتوسطة في بناء العظم. تطوير شاذة من الحنك يمكن أن تنتج المفتاحر الأذواق مع أو دون تدخل من الشفة. وقد استخدمت تقنيات زراعة الأعضاء الحنك على نطاق واسع لكثير من المختبرات على مدى السنوات ال 30 الماضية 6،7. في هذا البروتوكول وصفنا في تفاصيل طريقة لتشريح حنكي والثقافة الجهاز ثابتة. الاستفادة من ثقافة بلا حراك الجهاز هو أنه يتيح الرفوف الحنك لتلتحم. وقد استخدمت هذه التقنية بنجاح في المختبر لدينا لكثير من الانصهار ويشير التجارب 8،9. إلا أن نطاق هذه التقنية واسع ويمكن استخدامها كلما مطلوب نظام الثقافة الجهاز ثابتة، بما في ذلك تقييم الاستجابات لعوامل كيميائية خارجي، وآثار عوامل النمو التنظيمية في مسارات مختلفة، وبروتينات معينة. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/53063/53063fig1.jpg" /> الشكل 1. ماوس Palatogenesis. مراحل تطور الحنك الفئران. (BF) الضوئي ايلىالميكروسكوب ctron (SEM) من الحنك الثانوي في فترات النمو التمثيلية. السهام الحمراء: وتظهر بالجزء الأول من التصاق حنكي والانصهار. الأسهم الصفراء: أشر إلى الفضاء بين أذواق الابتدائية والثانوية التي سوف تختفي بعد الانصهار (نقلا عن كوفمان 11 بإذن من بلوس وان).

&#160;
<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BGJb</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Lonza Inc.</td>
			<td>17-602E</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-088</td>
			<td>100x15mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Center-well organ culture dish</td>
			<td>Falcon&#160;</td>
			<td>#353037</td>
			<td>60x15 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire triangular grid</td>
			<td>Custom made with stainless steel wire mesh to fit the organ culture dish well.&#160;&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polycarbonate filter</td>
			<td>GE&#38; Water and Process Technologies</td>
			<td>K04BP04700</td>
			<td>Black 0.4 micron, 47 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>ZEISS&#160; Stemi SR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture hood</td>
			<td>NUAIRE Laminar Flow</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdissecting forceps</td>
			<td>Dumont Medical&#160;</td>
			<td></td>
			<td>#5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdissecting scissors</td>
			<td>Kent Scientific Corporation</td>
			<td>INS14003-G</td>
			<td>Vannas Scissors, straight, 8cm long, 0.1mm tips, 5mm blades, German made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdissecting scissors</td>
			<td>Kent Scientific Corporation</td>
			<td>INS500086</td>
			<td>Vannas Scissors, straight, 8.5cm long, 0.025mm x 0.015mm tips, 7mm blades</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Microdissecting scissors</td>
			<td rowspan="2">Kent Scientific Corporation</td>
			<td rowspan="2">INS14127-G</td>
			<td rowspan="2">Spring scissors curved curved, 10.5cm long, 8mm blades, German made</td>
		</tr>
		<tr>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical currete (spoon spatula)</td>
			<td>Hu-friedy</td>
			<td></td>
			<td>CM 2/4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protector laboratory hood</td>
			<td>Labconco</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="3">Incubator</td>
			<td rowspan="3">Thermo Scientific</td>
			<td rowspan="3"></td>
			<td>Farma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Series11 water Jacket</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Co2 incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS&#160;</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>10010-023&#160;</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber optic Light source</td>
			<td>Fiber-light&#160; Dolan-Jenner</td>
			<td>PL-750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding cassette&#160;</td>
			<td>Statlab</td>
			<td>EC301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Kim Wipes</td>
			<td rowspan="2">VWR</td>
			<td rowspan="2">470173-504</td>
			<td rowspan="2"></td>
		</tr>
		<tr>
		</tr>
	</tbody>
</table>

method of studying palatal fusion using static organ culture

الشفة المشقوقة والحنك هي من بين الأكثر شيوعا من جميع العيوب الخلقية. أشكال الحنك الثانوية من الرفوف الوسيطة مغطاة ظهارة أن تلتزم تشكل خط التماس خط الوسط الظهارية (MES). النظريات تشير إلى أن الخلايا MES اتباع الظهارية للانتقال الوسيطة (EMT)، موت الخلايا المبرمج والهجرة، مما يجعل الحنك تنصهر 1. تفكك كامل للMES هو المرحلة الأساسية النهائية للحنكي التقاء مع توضيح خلايا اللحمة المتوسطة. ونحن نقدم طريقة لثقافة الجهاز الحنك. الدول المتقدمة في بروتوكول المختبر يسمح للدراسة العمليات البيولوجية والجزيئية خلال الانصهار. تطبيقات هذه التقنية متعددة، بما في ذلك تقييم الردود على العوامل الكيميائية خارجي، وآثار العوامل التنظيمية والنمو وبروتينات معينة. الثقافة الجهاز الحنك لديها عدد من المزايا بما في ذلك التلاعب في مراحل مختلفة من التنمية لم يكن ذلك ممكنا باستخدام الدراسات المجراة.

<html> ويمكن تطبيق هذه التقنية لأنواع مختلفة من experiments.The الدراسة التالية تم تصميمها لاختبار تأثير ماسخ من النيكوتين في المختبر على حنكي الانصهار. واستخدمت سلالتين من الفئران لهذه التجربة، وعولج CD1 والأنسجة C57.Palatal مع 0.06 و 6 ملي تركيزات من hemisulfate النيكوتين. ولوحظ أن أن...

Watch this Scientific Journal Video about Method of Studying Palatal Fusion using Static Organ Culture at JoVE.com

Method of Studying Palatal Fusion using Static Organ Culture

هي الدافع دراسات التنمية الحنك قبل حدوث الشق الحلقي وهو عيب خلقي الذي يفرض عبئا صحية هائلة، ويمكن أن يترك تشوهات دائمة. علينا أن نظهر هنا تقنية لرفوف الثقافة حنكي التي يمكن استخدامها لدراسة مسارات الإشارات المختلفة المشاركة في التنمية حنكي والانصهار.

طريقة دراسة حلقي فيوجن باستخدام ثابت الجهاز الثقافة

Cleft lip and palate are among the most common of all birth defects. The secondary palate forms from mesenchymal shelves covered with epithelium that ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culture and Co-Culture of Mouse Ovaries and Ovarian Follicles

الثقافة والمشارك ثقافة ماوس المبايض وحويصلات المبيض

The mammalian ovary is composed of ovarian follicles, each follicle consisting of a single oocyte surrounded by somatic granulosa cells, enclosed together ...

Studying Wnt Signaling During Patterning of Conducting Airways

دراسة إشارات Wnt خلال الزخرفة من إجراء الخطوط الجوية

Wnt signaling pathways play critical roles during development of the respiratory tract. Defining precise mechanisms of differentiation and morphogenesis ...

Generation of Parabiotic Zebrafish Embryos by Surgical Fusion of Developing Blastulae

جيل من التعايش الالتصاقي الزرد الأجنة التي كتبها فيوجن الجراحي لتطوير الأريمات

Surgical parabiosis of two animals of different genetic backgrounds creates a unique scenario to study cell-intrinsic versus cell-extrinsic roles for ...

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

إنتاج واسع النطاق العضلية من الخلايا الجذعية متعددة القدرات البشرية باستخدام تكرار للغاية الصغيرة وبناء جزيء بروتوكول التمايز

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

Organ Culture and Whole Mount Immunofluorescence Staining of Mouse Wolffian Ducts

هيئة الثقافة والجامع جبل المناعي تلون ماوس وولف القنوات

Tubal morphogenesis is a fundamental requirement for the development of most mammalian organs, including the male reproductive system. The epididymis, an ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

تصوير لايف من ماوس الثانوي باليت فيوجن

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

أسلوب الثقافة أورجانوتيبيك لدراسة تطوير الأنسجة الجنينية الدجاج

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Three-dimensional Angiogenesis Assay System using Co-culture Spheroids Formed by Endothelial Colony Forming Cells and Mesenchymal Stem Cells

نظام فحص تكوين الأوعية ثلاثي الأبعاد باستخدام Spheroids الثقافة المشتركة التي شكلتها الخلايا المكونة للمستعمرة البطانية والخلايا الجذعية Mesenchymal

Studies in the field of angiogenesis have been aggressively growing in the last few decades with the recognition that angiogenesis is a hallmark of more ...

A Static Self-Directed Method for Generating Brain Organoids from Human Embryonic Stem Cells

طريقة ثابتة ذاتية التوجيه لتوليد الأعضاء الدماغية من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية

Human brain organoids differentiated from embryonic stem cells offer the unique opportunity to study complicated interactions of multiple cell types in a ...

Cell-cell Fusion of Genome Edited Cell Lines for Perturbation of Cellular Structure and Function

خلايا خليه الانصهار من الجينوم تحرير خطوط الخلايا لاضطراب الهيكل الخلوي والوظيفة

Life is spatially partitioned within lipid membranes to allow the isolated formation of distinct molecular states inside cells and organelles. Cell fusion ...