Name: performing permanent distal middle cerebral with common carotid artery occlusion in aged rats to study cortical ischemia with sustained disability
Uploaded: 2016-02-23T13:00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability at JoVE.com

We would like to thank Prof. I Mhairi Macrae and Dr. Debbie Dewar, University of Glasgow, who kindly hosted CW and DD for training in this procedure. The research leading to these results has received funding from the European Research Council under the European Union's Seventh Framework Programme (FP/2007-2013) / ERC Grant Agreement n. 309731 to LM. This work was also supported by a &#8220;Serendipity Grant&#8221; from The Dunhill Medical Trust to LM [grant number: SA21/0512].

<ol>
	<li>Pendlebury, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Underfunding+of+stroke+research:+a+Europe-wide+problem.">Underfunding of stroke research: a Europe-wide problem.</a> Stroke. 35, 2368-2371 (2004).</li><li>Doyle, S., Bennett, S., Fasoli, S. E., McKenna, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interventions+for+sensory+impairment+in+the+upper+limb+after+stroke.">Interventions for sensory impairment in the upper limb after stroke.</a> Cochrane Database Syst Rev. 6, CD006331 (2010).</li><li>Reep, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rodent+model+for+investigating+the+neurobiology+of+contralateral+neglect.">A rodent model for investigating the neurobiology of contralateral neglect.</a> Cogn Behav Neurol. 17, 191-194 (2004).</li><li>Carey, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+touch+impairment+and+brain+activation+after+lesions+of+subcortical+and+cortical+somatosensory+regions.">Relationship between touch impairment and brain activation after lesions of subcortical and cortical somatosensory regions.</a> Neurorehabil Neural Repair. 25, 443-457 (2011).</li><li>Mohr, J. P., Lazar, R. M., Marshall, R. S., Mohr, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+24.">Ch. 24.</a> Stroke: Pathophysiology, Diagnosis and Management. , 384-424 (2011).</li><li>Sacco, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subarachnoid+and+intracerebral+hemorrhage:+Natural+history,+prognosis,+and+precursive+factors+in+the+Framingham+Study.">Subarachnoid and intracerebral hemorrhage: Natural history, prognosis, and precursive factors in the Framingham Study.</a> Neurology. 34, 847-847 (1984).</li><li>Hossmann, K. A., Heiss, W. D., Brainin, M., Heiss, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+1.">Ch. 1.</a> Textbook of Stroke Medicine. , 1-27 (2009).</li><li>The National Institute of Neurological Disorders and Stroke rt-PA Stroke Study Group. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Plasminogen+Activator+for+Acute+Ischemic+Stroke.">Tissue Plasminogen Activator for Acute Ischemic Stroke.</a> N Engl J Med. 333, 1581-1587 (1995).</li><li>Brott, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurements+of+Acute+Cerebral+Infarction:+Lesion+Size+by+Computed+Tomography.">Measurements of Acute Cerebral Infarction: Lesion Size by Computed Tomography.</a> Stroke. 20, 871-875 (1989).</li><li>L&#246;vblad, K. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+Lesion+Volumes+in+Acute+Stroke+by+Diffusion-Weighted+Magnetic+Resonance+Imaging+Correlate+with+Clinical+Outcome.">Ischemic Lesion Volumes in Acute Stroke by Diffusion-Weighted Magnetic Resonance Imaging Correlate with Clinical Outcome.</a> Ann Neurol. 42, 164-170 (1997).</li><li>Norrving, B., Brainin, M., Heiss, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+2.">Ch. 2.</a> Textbook of Stroke Medicine. , 28-39 (2009).</li><li>Truelsen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke+incidence+and+prevalence+in+Europe:+a+review+of+available+data.">Stroke incidence and prevalence in Europe: a review of available data.</a> Eur J Neurol. 13, 581-598 (2006).</li><li>Ord, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+impact+of+pre-stroke+surgery+on+survival+following+transient+focal+ischemia+in+hypertensive+rats.">Positive impact of pre-stroke surgery on survival following transient focal ischemia in hypertensive rats.</a> J Neurosci Methods. 211, 305-308 (2012).</li><li>Chen, S. T., Hsu, C. Y., Hogan, E. L., Maricq, H., Balentine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+focal+ischemic+stroke+in+the+rat:+reproducible+extensive+cortical+infarction.">A model of focal ischemic stroke in the rat: reproducible extensive cortical infarction.</a> Stroke. 17, 738-743 (1986).</li><li>Montoya, C. P., Campbell-Hope, L. J., Pemberton, K. D., Dunnett, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+'staircase+test':+a+measure+of+independent+forelimb+reaching+and+grasping+abilities+in+rats.">The 'staircase test': a measure of independent forelimb reaching and grasping abilities in rats.</a> J Neurosci Methods. 36, 219-228 (1991).</li><li>Adams, F. S., Schwarting, R. K., Huston, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+neurochemical+asymmetries+following+unilateral+trephination+of+the+rat+skull:+is+this+control+operation+always+appropriate?.">Behavioral and neurochemical asymmetries following unilateral trephination of the rat skull: is this control operation always appropriate?.</a> Physiol Behav. 55, 947-952 (1994).</li><li>Macrae, I. M., U, D. i. r. n. a. g. l. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+5.">Ch. 5.</a> Rodent Models of Stroke, Neuromethods. 47, 41-53 (2010).</li><li>Gerriets, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+Quantification+of+Brain+Edema+and+the+Space-Occupying+Effect+in+Rat+Stroke+Models+Using+Magnetic+Resonance+Imaging.">Noninvasive Quantification of Brain Edema and the Space-Occupying Effect in Rat Stroke Models Using Magnetic Resonance Imaging.</a> Stroke. 35, 566-571 (2004).</li><li>Paxinos, G., Watson, C. R., Emson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AChE-stained+horizontal+sections+of+the+rat+brain+in+stereotaxic+coordinates.">AChE-stained horizontal sections of the rat brain in stereotaxic coordinates.</a> J Neurosci Methods. 3, 129-149 (1980).</li><li>Faul, F., Erdfelder, E., Buchner, A., Lang, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistical+power+analyses+using+G*Power+3.1:+tests+for+correlation+and+regression+analyses.">Statistical power analyses using G*Power 3.1: tests for correlation and regression analyses.</a> Behav Res Methods. 41, 1149-1160 (2009).</li><li>Button, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Power+failure:+why+small+sample+size+undermines+the+reliability+of+neuroscience.">Power failure: why small sample size undermines the reliability of neuroscience.</a> Nature Reviews Neuroscience. 14, 365-376 (2013).</li><li>Fox, G., Gallacher, D., Shevde, S., Loftus, J., Swayne, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomic+variation+of+the+middle+cerebral+artery+in+the+Sprague-Dawley+rat.">Anatomic variation of the middle cerebral artery in the Sprague-Dawley rat.</a> Stroke. 24, 2087-2093 (1993).</li><li>Tamura, A., Graham, D. I., McColloch, J., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischemia+in+the+rat:+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Focal cerebral ischemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 1, 53-60 (1981).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

MCAO במכרסמים הוא טכניקה המשמש לעתים קרובות מודל שבץ אדם. האם יש מודל זה יש כמה פרטים לציין בפרוטוקול. ראשית, זה הכרחי כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של בעל החיים לאורך הניסוי כמו זה משפיע על גודל האוטם ומספר תמותה במחקר. ייתכן שניתן יהיה להפסיק isoflurane במהלך החסימה החולפת של זכות CCA ולשמור חולדות בסביבה התחממה, שקטה כדי להגדיל את שיעורי הישרדות על ידי הקטנת חשיפת isoflurane. חוקר לבחון האם תקופת הרדמה קצרה עולה על הלחץ של אינדוקציה נוספת. כלי הדם (למשל, MCA הסתעפות) של חולדות משתנה בתוך ובין קבוצות של בעלי חיים 22. חשוב לזכור זאת כאשר מתחילים מחקר חדש. פעמי חסימת CCA שונות ניתן להעריך (למשל, 30, 45, 60 ו -90 דקות). במחקר זה זמן ספיגה של 60 דק &#39;משמש. במחקרים אחרים מצאנו כי 45חסימות דקות לגרום אוטם קליפת מוח בגודל דומה אבל עם ראיות אנקדוטיות שיעורי הישרדות משופרות. בהתאם לכך, יש המנתחים להתחיל עם זמן חסימה קצרה (למשל, 30 דקות) כדי לראות אם כרכי נגע נאותים (ו / או גירעונות התנהגותי חובה) מתקבלים ורק אז להגדיל פעמי חסימה במידת הצורך. גירעונות התנהגות, אין הן מאוששים חולדות מבוגרות בהשוואה לחולדות קשישים עם פעמי חסימה זהות. MRI יכול לשמש כדי לשפוט אם (לאחר זמן ספיג מסוים) כרכי נגע מתאימים מטרות המחקר. פצע קטן היה span פחות מעשרה 0.5 מ&quot;מ פרוסות עטרה (מתוך 40). פצע בגודל בינוני היה span בין עשר לעשרים פרוסות עטרה. פצע גדול היה span בין עשרים לשלושים פרוסות עטרה. פצע גדול מאוד היה היקף יותר משלושים של הפרוסות הארבעים. מניסיוננו, חולדות עם נגעים גדולים מאוד (יותר משלושים פרוסות) ו / או עדות acros הבקיעהיש ים קו האמצע בדרך כלל פרוגנוזה גרועה: פעמי חסימה קצרות עשויים להיחשב. MRI הוא גם שימושי להערכת מיקום האוטם: חלקם יותר caudally ממוקם וחלקם יותר rostrally ממוקם. לטפל נוספת כאשר מפרידים העצב התועה משני עורקי הראש המשותף. Rales (צורם) עלולה להתרחש לאחר הניתוח שבץ זה יכול להיות בגלל נזק עצבי אצל בעלי חיים מסוימים, אם כי הסיבה היא כיום ברור: מניסיוננו, הפרוגנוזה היא גרועה מאוד עבור החיות האלה וזה בדרך כלל מומלץ להרוג אותם בצורה אנושית. תוצאות המודל קבע דיאתרמיה MCAO ב אוטמים קורטיקליים לשחזור ושיעורי ההישרדות שלאחר הניתוח מקובל אצל חולדות קשישים. הטכניקה עושה, לעומת זאת, דורשת ניתוח פולשני תחת סטראו. חשוב לשמור על הטכניקה aseptic מבעלי חיים כאשר הם להתאושש היטב מהניתוח. יש להקפיד שלא לפגוע MCA תוך חשיפת ו קרישה העורק,ו נזק למשטח קליפת המוח צריך להיות ממוזער אחרת באזור החשוף של קליפת עשוי להוות חלק באזור האוטם. מומלץ לקבל ניסיון ככל האפשר כדי לבסס את ההליך כדי להשיג אוטמים עקביים ולקבוע פעמי חסימה לפני מחקר מתבצע על מנת לבדוק טיפולים מועמדים, למשל. מבצעי הניסוי צריך באקראי כל הטיפולים במהלך פעילויות ניתוח ( &quot;אקראיות בלוק&quot;) במידת האפשר. ראוי לציין כי מודל זה אינו כרוך reperfusion MCA (אלא קשירת חולף MCA משמש במקום דיאתרמיה). תמותה יכול להיות גבוה בחולדות קשישים עם אוטמים קורטיקליים הגדולות האלה אבל זה צריך להיות אפשרי כדי להפחית תמותה באמצעות פעמים חסימה קצרה ועל ידי צמצום החשיפה להרדמה כללית במידת האפשר (למשל, במהלך חסימה). השימוש 70% N 2 O ו 30% O 2 כנשא עשוי לאפשר רמות נמוכות יותר של isoflurane לשמש: חשיפה מופחת זה isofluRANE עלול לגרום סיכויי הישרדות גבוהים יותר. נקודה נוספת שיש לקחת בחשבון הוא כי טרשת עורקים היא תהליך הדרגתי, ואילו בפרוטוקול זה אנו לדמות את זה עם חסימה חריפה CCA. עם זאת, הצמצום משמעותי בזרימת דם וגירעונות מתמשכים לדמות occlusions טנדם המתרחש בחולי שבץ רבים. MCAO דיסטלי קבועה ללא טנדם חסימת CCA בחולדות לא מצליחה לגרום שבץ reproducibly 14: יתר על כן, ללא חסימת טנדם CCA, מוצאים אנו החלמה ספונטנית ניכרת מתרחשת דרך שמבטלים להערכה התנהגותית לטווח הארוך של טיפולי שבץ במשך 8 שבועות. לעומת זאת, אנו מראים כי דיסטלי MCAO עם טנדם חסימת CCA גורמת גירעונות לטווח ארוך בחולדות קשישים. לסיכום, הליך זה בחולדות גורם משיכות הדומים בגודל ובמיקום לאלו לראות את מצבו של האדם, עם נכות מתמשכת שאפשר להשתמש בו כדי לאפשר בדיקה של טיפולים והבהרה הרומן מחדשמנגנוני זוג לאחר שבץ איסכמי.

שבץ מוחי הוא כיום הגורם השלישי בשכיחותו למוות בכל העולם ואת הגורם המוביל נכות 1. שבץ איסכמי, המהווה 80% מכל מקרי שבץ, לעתים קרובות תוצאות אוטמות בקליפה גורמת לאובדן בתחושה (למשל, פרופריוספציה), בתפקוד מוטורי וגם לב בצד הפגוע 2-4. עורק המוח האמצעי (MCA) הוא גדול של הכלי שמושך אספקת ממעגל ויליס נובעת עורק התרדמה הפנימי 5. MCA הוא כלי מוחין ביותר האזורים הנגועים ביותר בקרב שבץ איסכמי, עם משיכות בשטח זה והיוו 65% מכלל מקרי שבץ איסכמי 6,7. MCA מספקת הן אזורים קורטיקליים קורטיקליים וחריגות נוירולוגית הנגרמת על ידי שבץ MCA משתנות בהתאם למיקום המדויק של חסימה 7. חסימות MCA הפרוקסימלי להשפיע על השטח העמוק דרך עורקי lenticulostriatal ולגרום אוטמים גדולים המקיף הוא קורטיקאל ואזורים קורטיקליים. לעומת זאת, חסימות דיסטלי יותר כי לשלול אזורים בקליפת המוח אך ורק של זרימת הדם נוטים לייצר אוטמים קורטיקליים קטנים. במחקרי אוכלוסייה גדולים, נגעי שבץ אדם נעים בין 5-14% של חץ כדור ipsilateral 8,9; שבץ ממאיר מהווה 10% ממקרי שבץ ואת המוליד האוטם גדול, הדורשים hemicraniectomy להפחית לחץ תוך גולגולתי, וחולים עם נגעים קטנים נוטים יותר לשרוד 10. אנו מדגימים מודל לשחזור שמייצר נגעים שמעסיקות שיעור דומה של חצי הכדור כמו משיכות אדם רבים. שבץ הוא מחלה הטרוגנית; 75% ממקרי שבץ איסכמי הם המושרה על ידי אחד אוטמי אַגמִימִי (מחסימה של כלי דם קטנים תוך גולגולתי); שבץ cardioembolic; או טרשת עורקים בעורק גדול, המהווה 30% ממקרי השבץ. טרשת עורקים סימפטומטית הוא הנצפה ביותר בנקודה שבה ג נפוצהעורק arotid (CCA) סניפים לתוך עורקי הראש הפנימיים והחיצוניים 11. מודלים פרה-קליני של שבץ צריכים להיות דומים למצב אנושי ככל האפשר כדי לדמות פתופיזיולוגיה שלה וצריך לשלב את גורמי סיכון לשבץ. 92% לשבץ איסכמי מתרחשים אצל אנשים מעל גיל 65, וגורמי סיכון אחרים כוללים השמנה, לחץ דם גבוה, טרשת עורקת, כמו בעבר דנו 12. כדי לייצג בצורה טובה יותר גורמי סיכון אלה, מומלץ להשתמש במודל זה עשוי לשתף חלק מהתכונות pathophysiological של המצב הטבעי. בפרוטוקול זה, יש לנו כלל גילו המתקדם ואת זרימת הדם חסום דרך עורקי הראש. המודל הקלאסי של חסימה בעורק המוח האמצעי (MCAO) הוא מודל נימה intraluminal של חסימה הפרוקסימלי MCA, אשר מפחית את זרימת הדם בתוך הקדמי ועורקים המוח האמצעי. פעמי חסימה קצרות באמצעות מודל זה מתמקדת lesion לאזור קורטיקליים, ואילו פעמים חסימה כבר יכול לגרום נגעים גדולים בגיוס בתחומי הן אזורים בקליפת המוח ואת קורטיקליים, וכתוצאה מכך שיעור תמותה גבוה בחולדות קשישים. לשם השוואה, את המודל המשמש על ידי הקבוצה שלנו כרוך ביצוע craniotomy ופתיחת הדורה ואחריו קרישה של דם והרס של חלק קטן של MCA באמצעות מלקחיים צריבה דו קוטבית. מודל דיאתרמיה זה מותאם מהעיתון 1981 על ידי טאמורה et al. 23 ואת שימוש craniectomy עלול להגביל העלה לחץ תוך גולגולתי, אשר הוא התכונה של גולגולת הסגורה, וכתוצאה מכך השחזור גבוה ושיעור תמותה נמוך במדגם הניתוח שלנו 13 לעומת כמה דגמים אחרים. כדי ליצור אוטמים לשחזור ונכות שנגרמו לנו לצמיתות לחסום את הפרוקסימלי CCA ויוצרת באורח זמני לחסום את CCA דיסטלי לפי חן et al. 14 אנו משתמשים לא פולשנית הדמיה בתהודה מגנטית משוקלל T2 (MRI) כדי להעריך את היקף ומיקום של אוטם מוחי, ומידת המוח נפיחות בקליפת הסנסורית.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Norbrook</td>
			<td>Vm No; 02000/4229</td>
			<td>give 0.25 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine Sulfate</td>
			<td>AmTech</td>
			<td>RXATRINJ-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol swabs</td>
			<td>UHS</td>
			<td align="right">20021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine cream (Emla)</td>
			<td>AstraZeneca</td>
			<td>0012901</td>
			<td>Apply a pea sized drop to the shaved neck and temporal regions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homeothermic Blanket System</td>
			<td>Harvard Instruments</td>
			<td>507222F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11019-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>B506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk sutures</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td align="right">723288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cautery system</td>
			<td>Eschmann</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25 mm Jeweler caurtery forceps</td>
			<td>Eschmann</td>
			<td align="right">8330349</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fine Dumont forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thumb driven saline drip system</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacusafe aspirator system</td>
			<td>INTEGRA BIOSCIENCES</td>
			<td align="right">158320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16 mm coarse diamond coated Steel burrs</td>
			<td></td>
			<td>K801 104 016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handheld dental drill</td>
			<td>NSK</td>
			<td>NSKVMAXVRE (Handpiece NSKEX6B)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvascular scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td align="right">501790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Vicryl sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular clip and applicator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Anaesthesia System Isoflurane K/F Single Gas</td>
			<td>VetTech Solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon Steel Scalpel blades No. 10</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td align="right">201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25g needles</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN-2525R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>syringes (1 ml and 5 ml)</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SS+01T1 / SS*05SE1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline (Sodium Chloride 0.9%)</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>Pl 08828/0178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cotton buds</td>
			<td>Johnson and Johnson</td>
			<td>5000207582502</td>
			<td>sterilize before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sterilize before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Imaging Package (Jim)</td>
			<td>Xinapse</td>
			<td></td>
			<td>Free software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Statistical Parametric Mapping Software (SPM8)</td>
			<td>UCL</td>
			<td></td>
			<td>Free software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power Analysis Software (G*Power)</td>
			<td>Universit&#228;t D&#252;sseldorf</td>
			<td></td>
			<td>Free software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

performing permanent distal middle cerebral with common carotid artery occlusion in aged rats to study cortical ischemia with sustained disability

שבץ בדרך כלל מתרחשת אצל אנשים קשישים עם מגוון של מחלות רקע כולל התרדמה (או עורקים אחרים) טרשת עורקים, לחץ דם גבוה, השמנת יתר וסוכרת. בהתאם לכך, כאשר אנו מעריכים טיפולים לשבץ בחיות, חשוב לבחור דגם עם תוקף פנים מעולה. שבץ איסכמי מהווה 80% מכל מקרי השבץ, ואת רוב אלה להתרחש בשטח של עורק המוח האמצעי (MCA), לעתים קרובות התרמה אוטמים המשפיעים על הקורטקס הסנסורי, גרימת plegia או paresis מתמשך בצד הנגדי של הגוף. אנו מדגימים בסרטון הזה שיטה להפקת שבץ איסכמי בחולדות קשישים, הגורם נכות הסנסורית מתמשכות אוטמי קורטיקליים משמעותיים. באופן ספציפי, אנחנו לגרום לחסימת עורק המוח האמצעית דיסטלי קבעה (MCAO) בחולדות נקבות קשישים באמצעות מלקחי דיאתרמיה כדי לחסום קטע קצר של עורק זה. עורק התרדמה בצד ipsilateral כדי הנגע היה אז permanently occluded ואת העורק הראשי הנגדי היה occluded זמני למשך 60 דקות. אנו מודדים את הגודל האוטם באמצעות תהודה מגנטית T2-weighted מבנית (MRI) ב 24 שעות ו -8 שבועות לאחר אירוע מוחי. במחקר זה, היקף האוטם הממוצע היה 4.5% ± 2.0% (סטיית התקן) של האונה ipsilateral ב 24 שעות (לאחר תיקון המוח נפיחות באמצעות המשוואה של Gerriet, n = 5). המודל זה אינו ריאלי ורלוונטי קליני כפי שהוא מאפשר אינדוקציה של גירעונות הסנסורית מתמשכים, שהנה חשוב להבהרת המנגנונים pathophysiological וטיפולי רומן.

קבוע MCAO הושרה על ידי craniotomy ביצוע, ואחריו קרישה והרס של עורק המוח האמצעי ידי דיאתרמיה בשילוב עם חסימה קבועה של עורק התרדמה המשותף ipsilesional ו -60 חסימה דקות של עורק התרדמה המשותף contralesional. סכמטי של ההתקנה של הציוד האפיל MCA מוצג באיור 1, ושל עורקי הראש באיור 2 (לעיל). תוצאת השבץ הוערכה 24 שעות ו -8 שבועות לאחר אירוע מוחי על ידי מדידת היקף האוטמת על 40 x 0.5 מ&quot;מימ פרוסים (מקצה מקורי של נורת חוש ריח כדי הסוף המקורי של חוט שדרה) באמצעות האזור של ערכת כלי ריבית בחבילת תצוגת תמונות רפואית. T2 נציג סריקה MRI מבני המשוקללים עבור אותו בעל החיים ב 24 שעות ו -8 שבועות (איור 3 א). ההיקף האוטם זוהה על-ידי האזורים במוח החולדה מראים אות hyperintense; כמו משקל T2תמונות ed להראות מים או פלזמה כאזור לבן בוהק. זה ידוע כי יש עלייה בצקת במוח הנפיחות לאחר שבץ, וזה יכול להימדד מסריקת T2-weighted אשר כבר מתואמת מדידות היסטולוגית של נפח אוטם 18. עם זאת, בצקת מתנה מוקדם לאחר שבץ (למשל, ב 24 שעות) יכולה להוביל יתר של נפח הנגע הסופי (למשל, אחרי 8 שבועות) ולכן גם אנחנו כרכי אוטם נוכחיים מתכוונים מותאמות באמצעות הנוסחות של Gerriet. האיור 3 ב מציג נתונים ממוצעים מתחילת נפח נגע הגלם (ללא התאמות) ב 24 שעות כמו 62.8 מ&quot;מ 3 (± 25.4 מ&quot;מ 3 SD, גרף עליון); זו תופסת 9.8% של האונה המושפע (SD ± 4.2%, גרף באמצע). כאשר תקנו עבור המוח נפיחות באמצעות נוסחאות &#39;Gerriets ערך זה מצטמצם ל -4.5% (± 2.0% SD, הגרף התחתון). חומרת שבץ גם נמדדה באמצעות מבחן המדרגות מונטויה 15. בקיצור,nimals מולא מראש מאומן לאחזר כדורי סוכר למשך 4 שבועות לפני MCAO ניתוח שבץ, ונבדק במשך 8 שבועות לאחר השבץ (איור 4) כדי לאשר גירעון מתמשך. חולדות הונחו במנגנון המדרג במשך 10 דקות ומספר הכדורים לאחזר נרשם (מתוך 21 כדורים) ומוצג כאחוז (הקבוצה כאמצעי ± סטיות תקן). ניתוח רגרסיה בוצע כדי להתאים את הקו לנתונים. איור 5 מראים את חישוב גודל המדגם באמצעות נתוני נפח אוטם (השפעות פוטנציאליות של טיפולים מועמדים), ונותח באמצעות אלגוריתם תוכנה לניתוח כוח עבור מבחן t באמצעות &quot;הבדל בין שני אמצעי עצמאי (שתי קבוצות)&quot; ושימוש (לא מתוקן אמצעי) וסטיות תקן מהתרשים 3B. המידע באיור 5 ולהראות טבלה 1 כי 12 חולדות יידרשו לכל קבוצה כדי לזהות טיפול המפחית infנפח arct ב -50% ב -24 שעות, בעוד איור 6 מראה &quot;מזימת XY&quot; של כוח מושג באמצעות מספרים של בעלי חיים שונים. טבלה 1 מסכמת חישובי גודל מדגם עבור כל נקודות הזמן. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/53106/53106fig3.jpg" /> איור 3. MRI מבניים משוקלל T2 משמש כדי למדוד את גודל האוטם והמוח נפיחות לאחר שבץ. (א) תמונה תהודה מגנטית משוקלל T2 של hr אותו עכברוש המוח 24 ו -8 שבועות לאחר גיוס של שבץ. האזור הלבן מייצג את הנגע, אלא גם מכיל כמה בצקת vasogenic שפותר ב -8 שבועות. (ב) כרכים אוטמים נמדדו באמצעות אזור תצוגת חבילת תמונה רפואית של Toolkit הריבית, והם זממו על הגרף המייצג את הממוצע ± סטיית התקן 3 נקודות זמן השימוש (n = 6). נפח נגע גלם (לא תקן עבור מוח נפיחות בשל edEMA), הנגע אחוז בחצי הכדור מושפע (שלא תוקנו עבור נפיחות), ואחוז הנגע של האונה תיקן עבור המוח נפיחות באמצעות נוסחאות &#39;Gerriets מוצגים כאן. SD שמש ולא SEM כדי לבצע חישובי גודל מדגם (ראו איור 5). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53106/53106fig3large.jpg" target="_blank">נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/53106/53106fig4.jpg" /> איור 4. המבחן מדרג תערוכות ליקויים לאחוז ואחזור כדוריים. במודל שבץ זה חל החלמה ספונטנית מעט מאוד. שבץ בחולדות קשישים פוגע כשרון בהתמדה, שמוצג על ידי בדיקות שבועיות באמצעות &quot;מבחן המדרגות&quot; של גלולת לכת. הבלעה: תמונה של עכברוש ביצוע מבחן התנהגותי. הגרף מראה את הממוצע (± עמדשגיאת ארד) מספר כדורי לאחזר (מתוך 21, מבוטא באחוזים) בשבוע על ידי בכפו הפגועה. n = 5. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53106/53106fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/53106/53106fig5.jpg" /> איור 5. חישובי גודל מדגם כדי לקבוע מספרי קבוצת החולדות נדרשו לזהות השפעה טיפולית רצויה. צילום מסך זה, לקוחי תוכנת ניתוח כוח, מראה כי 12 חולדות לכל קבוצה תהיינה צורך לזהות טיפול כי הקטין את היקף אוטם ב -50% ב 24 שעות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53106/53106fig5large.jpg" target="_blank">נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/53106/53106fig6.jpg" /><br/&gt; איור 6. כוח מושג באמצעות מספרים כוללים שונים של בעלי חיים. צירוף &quot;עלילת XY עבור מגוון של ערכים&quot; מפני תוכנות ניתוח כוח מראה את הכח שהיה מתקבל עבור ניסויים בעזרת שונים (סה&quot;כ) מספרים של חולדות קשישים, בהתחשב בפרמטרים 5 שמוצג באיור. טבלה 1 מסכמת את כל התוצאות שלנו. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53106/53106fig6highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td rowspan="2"> זמן לאחר שבץ: </td><td colspan="3"> מספר חולדות לכל קבוצה נדרש לזהות ירידה בנפח הנגע של: </td></tr><tr><td align="right"> 75% </td><td align="right"> 50% </td><td align="right"> 25% </td></tr><tr><td> 24 שעות </td><td align="right"> 6 </td><td align="right"> 12 </td><td align="right"> 42 </td></tr><tr><td> 8 שבועות </td><td align="right"> 4 </td><td align="right"> 5 </td><td align="right"> 17 </td></tr></tbody></table> טבלה 1. חישובים של גודל מדגם לכל קבוצת ניסויים עתידיים היפותטי. מחושב באמצעות תוכנת ניתוח כוח (ראה איורים 5 ו -6). טבלה מציג מספר חולדות לכל קבוצה נדרש עבור ניסוי עם שתי קבוצות לזהות 25%, 50% ו -75% ירידה בנפח נגע בכל אחד מן timepoints במחקר זה.

Watch this Scientific Journal Video about Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability at JoVE.com

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

כאן אנו מציגים פרוטוקול לייצר חסימת עורק המוח אמצעית דיסטלי קבעה חולדות נקבות קשישים עם חסימה זמנית של עורקי הראש כדי ליצור אוטמי קורטיקליים גדולים וגירעונות מתמשכים. אנו מציגים אישור של הגודל הנגע באמצעות MRI מבני ב 24 שעות ו -8 שבועות לאחר אירוע מוחי.

Performing מוחות תיכונים דיסטלי קבוע עם ספיגה עורקת Common הראש אצל חולדות בנים לחקר קורטיקלי איסכמיה עם נכות קבועה זה

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

דוגמנות שבץ בעכברים - העורקים התיכון ספיגה מוחין עם דגם נימה

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Intraluminal העורקים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) מודל שבץ איסכמי עם הדרכה דופלר Flowmetry לייזר עכברים

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

היישום של קשירת העורקים התיכון הקבע מוחין העכבר

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

ספיגה דו צדדי משותף עורק תרדמה כגירוי נפשית מראש מספיק כדי לגרום סובלנות איסכמי מוקדמת לאיסכמיה מוחית מיקוד

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

אנדותלין-1 דגם מושרה מזרח מוחות עורקים ספיגים לשבץ איסכמי עם הדרכת Flowmetry ליזר דופלר בעכברוש

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

ניצול חלון גולגולת לדמיין עורק המוח האמצעי במהלך ספיג אנדותלין-1 מושרה מזרח מוחות עורקים

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

מערכת אופטימלית לניטור זלוף מוחות במודל שבץ העכברוש של חסימת עורק מוח האמצעית intraluminal

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

חסימת כלי דם מוחי בלתי הפיך<em&gt; דרך</em&gt; Ligature וחיתוך רוחב זוגי

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

דוגמנות שבץ בעכברים: קרישה קבועה של עורקי דיסטלי התיכון מוחין

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...