Name: identification of rare bacterial pathogens by 16s rrna gene sequencing and maldi-tof ms
Uploaded: 2016-07-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Rare Bacterial Pathogens by 16S rRNA Gene Sequencing and MALDI-TOF MS at JoVE.com

The authors would like to thank Prof. Enno Jacobs for his continuing support.

1. استخراج الحمض النووي البكتيري <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد برنامج تلفزيوني الحل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن 1.65 غرام نا 2 هبو 4 × 2H 2 O، 0.22 غ ناه 2 ص 4 × 2H 2 O و8.80 جم كلوريد الصوديوم في ق...

كلا MALDI-TOF MS و 16S الريباسي التسلسل الجيني تقدم إمكانية لتحديد أعداد كبيرة من البكتيريا المختلفة. MALDI-TOF MS هو طريقة سريعة وغير مكلفة، والتي من السهل التعامل مع ووقواعد البيانات الكبيرة من أطياف الشامل البكتيرية المتاحة. لهذا السبب، MALDI-TOF MS هو، والتكلفة طريقة سريعة فعالة ...

ويعوق تحديد آمن من مسببات الأمراض النادرة في التشخيص الروتيني من خلال حقيقة أن أساليب الثقافية والبيوكيميائية الكلاسيكية هي معقدة ومشكوك فيها في بعض الأحيان. وعلاوة على ذلك، مختبر علم الأحياء الدقيقة التشخيص لديه لمعالجة عدد كبير من مسببات الأمراض، بدءا من بضع مئات إلى عدة آلاف، يوميا، الأمر الذي يتطلب استخدام النظم الآلية. وبالإضافة إلى إدارة إنتاجية يومية عالية، هناك حاجة إلى تحديد دقيق الأنواع البكتيرية. هناك ما يبرر هذا لأنها تختلف في نمط التعرض للميكروبات ويوفر تحديد ولالصحيح الطبيب بالمعلومات الضرورية لاختيار المضادات الحيوية المناسبة (على سبيل المثال، المعوية النيابة.، الراكدة النيابة.) 12،43. الأنظمة الأوتوماتيكية لتحديد الميكروبية (أميس) تنطبق مجموعات موحدة من التفاعلات الإنزيمية لتوصيف خصائص التمثيل الغذائي من العزلات البكتيرية <sup&gt; 13،15،16،26،27. على الرغم من أن الخراطيش المستخدمة في هذه الأنظمة الاستفادة من عدد كبير من التفاعلات الكيميائية الحيوية المختلفة، على سبيل المثال، 47 في بطاقة GN لبعثة الاتحاد الأفريقي المستخدمة في هذه الدراسة 52، هذه التصاريح استراتيجية تحديد آمن فقط لمجموعة محددة من البكتيريا. وعلاوة على ذلك، وقواعد البيانات، ونظام خبير المتقدمة، ويركز بشكل واضح على الكشف عن البكتيريا ذات الصلة وذات أهمية كبيرة من الأهمية الطبية 13،15،16،36. نظامين أخرى، وتستخدم على نطاق واسع في المختبرات، وأيضا تطبيق هذا النهج البيوكيميائية لتحديد البكتيريا. الدراسات الحديثة تثبت دقة تحديد مقارنة بين بعثة الاتحاد الأفريقي المستخدمة في هذه الدراسة واحدة من المنافسين (93.7٪ و 93.0٪ على التوالي)، في حين أن 3 الثالثة بعثة الاتحاد الأفريقي لديه دقة تحديد٪ فقط 82.4 على مستوى الأنواع 35. ويمكن تفسير هذه التناقضات من خلال نوعية من المراجع بيانات تحديد الهوية الأساسية، إصدارات مجموعات والبرمجيات، والاختلافات في METABOlism والكفاءة من الكوادر الفنية 35،36. وهي تستخدم أساسا اثنين الآلي أنظمة MALDI-TOF MS (MALDI-TOF نظام بالميكروبات، MMIS). وتسمح هذه النظم للكشف عن عدد كبير من الأنواع البكتيرية على أساس البروتين الأطياف بصمة كتلتها. على سبيل المثال، في قاعدة بيانات MMIS المستخدمة تحتوي على 6000 الأطياف المرجعية. نظم التعرف على أساس قياس الطيف الكتلي تقدم كشف سريع وموثوق بها مجموعة كبيرة ومتنوعة من الكائنات الحية الدقيقة بما في ذلك مسببات الأمراض النادرة 11،48،51. حتى الآن تتوفر بين MMIS المستخدمة في هذه الدراسة ومنافسيها 19،33 سوى عدد قليل من المقارنات المباشرة. وفقا لDaek وآخرون. وتوفر كلا النظامين ارتفاع معدل مماثل من دقة تحديد الهوية، ولكن MMIS المستخدمة في هذه الدراسة يبدو أن أكثر موثوقية في تحديد الأنواع 19. الجينات متميزة وبالمثل، التقنيات الجزيئية عنونة حفظها بشكل جيد ولكن أيضا ( <em&gt; على سبيل المثال، 16S الحمض النووي المؤتلف أو rpoB) تسمح لتحديد الأنواع واضحا 3،22،61. ومن بين هؤلاء، والحمض النووي المؤتلف 16S هو الأكثر استخداما على نطاق واسع التدبير المنزلي الجينات بسبب وجودها في جميع البكتيريا 34. تظل وظيفتها دون تغيير، وأخيرا، مع ما يقرب من 1500 سنة مضت، كان طويلا بما فيه الكفاية لتكون مناسبة لالحيوي المعلوماتية 14،34. العديد من الباحثين يعتبرون تحليل الجينات 16S الريباسي باسم &quot;الذهب القياسية&quot; لتحديد البكتيريا 21. ويرجع ذلك إلى حقيقة أن بعض المختبرات تستخدم تقنيات التهجين الحمض النووي DNA حتى الآن لتحديد البكتيريا نادرة أو جديدة 14،34 هذا. بالإضافة إلى ذلك، تتوفر والتي يمكن استخدامها لتحليل الجينات 16S الريباسي 50 قواعد بيانات أكثر وأكثر. ومع ذلك، فإنه يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن أنظمة الكشف عن الحمض النووي المؤتلف 16S أساس لها حساسية محدودة مقارنة البروتوكولات PCR القياسية. وعلاوة على ذلك، فإن النهج الجزيئي هو متطور، وقتا طويلا ويتطلب موظفين مدربين تدريبا عاليا وكذلكمرافق المختبرات المخصصة وغير، وبالتالي، لا تنفذ بسهولة في التشخيص الروتيني 55. وعلاوة على ذلك، فقد تبين أن الجمع بين اثنين على الاقل من الطرق المختلفة لتحديد البكتيريا يؤدي إلى تحديد سلالة دقيقة للغاية. مزيج من MALDI-TOF MS و16S الحمض النووي المؤتلف التسلسل يسمح بتحديد أعداد كبيرة من الأنواع البكتيرية المختلفة بدقة عالية. مؤخرا تم تقديم مزيج من التحليل الجيني MALDI-TOF MS و 16S الريباسي لتحديد البكتيريا دراسة المسائل الوبائية ومسببات الأمراض النادرة 56.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>CHROMASOLV, HPLC grade water, 1 L</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemie, M&#252;nchen, Germany</td>
			<td>270733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Lyser LT</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>85600</td>
			<td>Oscillating Homogenizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass-beads 1,0mm</td>
			<td>VWR International, Darmstadt, Germany</td>
			<td>412-2917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermomixer 5436</td>
			<td>Eppendorf, Hamburg, Germany</td>
			<td>2050-100-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAamp DNA Mini Kit (250)</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>51306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq PCR Core Kit (1000 U)</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>201225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Forward Primer TPU1 (5&#180;-AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG-3&#8217;)</td>
			<td rowspan="2">biomers.net GmbH, Ulm, Germany&#160;</td>
			<td rowspan="2">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Reverse Primer RTU4 (5&#180;-TAC CAG GGT ATC TAA TCC TGT T-3&#180;)</td>
			<td rowspan="2">biomers.net GmbH, Ulm, Germany&#160;</td>
			<td rowspan="2">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mastercycler&#160;</td>
			<td>Eppendorf, Hamburg, Germany</td>
			<td>-&#160;</td>
			<td>Thermocylcer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reaction tube 1.5 mL</td>
			<td>SARSTEDT, N&#252;mbrecht, Germany</td>
			<td>72,692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reaction tube 2 mL</td>
			<td>SARSTEDT, N&#252;mbrecht, Germany</td>
			<td>72,693,005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR 8er-CapStrips</td>
			<td>Biozym Scientific, Hessisch Oldendorf, Germany</td>
			<td>711040X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR 8er-SoftStrips</td>
			<td>Biozym Scientific, Hessisch Oldendorf, Germany</td>
			<td>711030X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp R-ZV11&#160;</td>
			<td>Sharp Electronics, Hamburg, Germany</td>
			<td>-</td>
			<td>Microwave</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titriplex III (EDTA Na2-salt dehydrate; 1 kg)</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>1084211000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SeaKem LE Agarose</td>
			<td rowspan="2">Biozym Scientific, Hessisch Oldendorf, Germany</td>
			<td rowspan="2">849006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(2 x 500 g)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SmartLadder SF - 100 to 1000 bp</td>
			<td>Eurogentec, L&#252;ttich, Belgium</td>
			<td>MW-1800-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromphenol blue (25 g)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemie, M&#252;nchen, Germany</td>
			<td>B0126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene cyanol FF (10 g)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chemie, M&#252;nchen, Germany</td>
			<td>X4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ComPhor L Maxi&#160;</td>
			<td>Biozym, Hessisch Oldendorf, Germany</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium bromide solution 1&#160;%(10 mL)</td>
			<td>Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td>2218.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Doc 2000</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories, M&#252;nchen, Germany</td>
			<td>-</td>
			<td>Gel-documentation system&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ExoSAP-IT (500 reactions)</td>
			<td>Affymetrix UK, Wooburn Green, High Wycombe, United Kingdom</td>
			<td>78201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffer (10 x) with EDTA&#160;</td>
			<td>Life Technologies, Darmstadt, Germany</td>
			<td>402824</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BigDye Terminator Kit v1.1</td>
			<td>Life Technologies, Darmstadt, Germany</td>
			<td>4337450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hi-Di formamide (25 mL)</td>
			<td>Life Technologies, Darmstadt, Germany</td>
			<td>4311320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DyeEx 2.0 Spin Kit (250)</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>63206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3130 Genetic Analyzer</td>
			<td>Life Technologies, Darmstadt, Germany</td>
			<td>-</td>
			<td>Sequenzer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp optical 96-well reaction plate with barcode</td>
			<td>Life Technologies, Darmstadt, Germany</td>
			<td>4306737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3130 Genetic Analyzer, plate base 96-well</td>
			<td>Life Technologies, Darmstadt, Germany</td>
			<td>4317237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3130 Genetic Analyzer, plate retainer 96-well</td>
			<td>Life Technologies, Darmstadt, Germany</td>
			<td>4317241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3130 Genetic Analyzer, well plate septa</td>
			<td>Life Technologies, Darmstadt, Germany</td>
			<td>4315933</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3130 Genetic Analyzer, POP-7 Polymer, 7 mL</td>
			<td>Life Technologies, Darmstadt, Germany</td>
			<td>4352759</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3130 Genetic Analyzer, 4-Capillary Array, 50 cm</td>
			<td>Life Technologies, Darmstadt, Germany</td>
			<td>4333466</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sequencing Analysis Software 5.4</td>
			<td>Life Technologies, Darmstadt, Germany</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microflex (the MALDI TOF MS maschine)</td>
			<td>Bruker Daltonik, Bremen, Germany</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MALDI Biotyper (the MALDI TOF MS system)</td>
			<td>Bruker Daltonik, Bremen, Germany</td>
			<td>-</td>
			<td>our mMIS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VITEK MS&#160;</td>
			<td>bioM&#233;rieux, N&#252;rtingen, Germany&#160;</td>
			<td></td>
			<td>2nd mMis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flexControl 3.4 (control software)</td>
			<td>Bruker Daltonik, Bremen, Germany</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotyper Realtime Classification 3.1 (RTC), (analysis software)</td>
			<td>Bruker Daltonik, Bremen, Germany</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-cyano-4-hydroxycinnamic acid, HCCA, 1&#160;g</td>
			<td>Bruker Daltonik, Bremen, Germany</td>
			<td>201344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptide Calibration Standard II</td>
			<td>Bruker Daltonik, Bremen, Germany</td>
			<td>222570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MSP 96 target polished steel</td>
			<td>Bruker Daltonik, Bremen, Germany</td>
			<td>8224989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>peqgreen&#160;</td>
			<td>peqlab&#160;</td>
			<td>37-5010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MALDI Biotyper Galaxy&#160;</td>
			<td>Bruker Daltonik, Bremen, Germany</td>
			<td>Part No. 1836007&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitek 2&#160;</td>
			<td>bioM&#233;rieux, N&#252;rtingen, Germany&#160;</td>
			<td></td>
			<td>our aMis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroScan&#160;</td>
			<td>Beckman Coulter&#160;</td>
			<td></td>
			<td>2nd aMis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Phoenix&#8482; Automated Microbiology System</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td>3rd aMis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staphylococcus aureus&#160;subsp.&#160;aureus&#160;Rosenbach (ATCC&#174;&#160;25923&#8482;)</td>
			<td>ATCC&#160;</td>
			<td></td>
			<td>postive control for PCR&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of rare bacterial pathogens by 16s rrna gene sequencing and maldi-tof ms

وهناك عدد من مسببات الأمراض البكتيرية نادرة، وبالتالي، وصفت فيه الكفاية التي تشير التقارير إلى تسبب التهابات شديدة وخاصة في المرضى الذين يعانون من نقص المناعة. في معظم الحالات إلا القليل من البيانات، التي نشرت معظمها تقارير الحالة، تتوفر التي بالتحقيق في دور هذه الجراثيم وكيلا المعدية. ولذلك، من أجل توضيح الطابع الإمراض مثل هذه الكائنات الحية الدقيقة، فمن الضروري إجراء الدراسات الوبائية التي تشمل أعدادا كبيرة من هذه البكتيريا. الأساليب المستخدمة في هذه الدراسة المراقبة يجب أن تفي بالمعايير التالية: التعرف على سلالات أن تكون دقيقة وفقا لتسمية صحيحة، يجب أن يكون من السهل التعامل مع (الشدة)، اقتصادا في التشخيص الروتيني ولديهم لتوليد مقارنة النتائج بين المختبرات المختلفة. عموما، هناك ثلاث استراتيجيات لتحديد السلالات البكتيرية في إعداد الروتيني: 1) تحديد المظهرية التي تميز BIOCHEMICAلتر والتمثيل الغذائي خصائص البكتيريا، 2) التقنيات الجزيئية مثل التسلسل الجيني 16S الريباسي و 3) قياس الطيف الكتلي بوصفه نهجا وبروتيوم الرواية. منذ مطياف الكتلة والنهج الجزيئية هي الأدوات الواعدة لتحديد مجموعة كبيرة ومتنوعة من الأنواع البكتيرية، وصفت هاتين الطريقتين. وتناقش التقدم والقيود والمشاكل المحتملة عند استخدام هذه التقنيات.

MALDI-TOF MS رواية، طريقة سريعة وغير مكلفة لتشخيص الروتينية الميكروبيولوجية. تحديد أنواع البكتيريا عن طريق MALDI-TOF MS تنتج أطياف تتكون أساسا من البروتينات الريباسي ولكن أيضا غيرها من &quot;البروتينات الحفاظ جدا مع وظائف التدبير المنزلي تتأثر إلى حد أدنى من ا?...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Rare Bacterial Pathogens by 16S rRNA Gene Sequencing and MALDI-TOF MS at JoVE.com

Identification of Rare Bacterial Pathogens by 16S rRNA Gene Sequencing and MALDI-TOF MS

Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) and molecular techniques (16S rRNA gene sequencing) permit the identification of rare bacterial pathogens in routine diagnostics. The goal of this protocol lies in the combination of both techniques which leads to more accurate and reliable data.

تحديد مسببات الأمراض البكتيرية النادرة التي 16S الريباسي جين تسلسل وMALDI-TOF MS

There are a number of rare and, therefore, insufficiently described bacterial pathogens which are reported to cause severe infections especially in ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

'Bioluminescent' Reporter Phage for the Detection of Category A Bacterial Pathogens

&#39;Bioluminescent&#39; بالعاثية مراسل للكشف عن مسببات الأمراض البكتيرية الفئة أ

Yersinia pestis and Bacillus anthracis are Category A bacterial pathogens that are the causative agents of the plague and anthrax, respectively 1. ...

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

إصابة الأجنة الزرد مع مسببات الأمراض البكتيرية بين الخلايا

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Single Cell Measurements of Vacuolar Rupture Caused by Intracellular Pathogens

القياسات خلية واحدة من تمزق رغوي الناجمة عن مسببات الأمراض بين الخلايا

Shigella flexneri are pathogenic bacteria that invade host cells entering into an endocytic vacuole. Subsequently, the rupture of this membrane-enclosed ...

Whole-cell MALDI-TOF Mass Spectrometry is an Accurate and Rapid Method to Analyze Different Modes of Macrophage Activation

خلية كاملة MALDI-TOF الطيف الكتلي هو الطريقة السريعة لدقة وتحليل أنماط مختلفة من تنشيط البلاعم

MALDI-TOF is an extensively used mass spectrometry technique in chemistry and biochemistry. It has been also applied in medicine to identify molecules and ...

Discovery of New Intracellular Pathogens by Amoebal Coculture and Amoebal Enrichment Approaches

اكتشاف جديد بين الخلايا مسببات الأمراض عن طريق Amoebal Coculture والمناهج Amoebal التخصيب

Intracellular pathogens such as legionella, mycobacteria and Chlamydia-like organisms are difficult to isolate because they often grow poorly or not at ...

Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

التعرف السريع على البكتيريا سالبة الجرام من ثقافة الدم في مرق عن طريق MALDI-TOF الطيف الكتلي

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

Biolistic Transformation of a Fluorescent Tagged Gene into the Opportunistic Fungal Pathogen Cryptococcus neoformans

التحول Biolistic من نيون معلم جين إلى القناص الفطرية مسببات الأمراض<em&gt; المستخفية المورمة</em

The basidiomycete Cryptococcus neoformans, an invasive opportunistic pathogen of the central nervous system, is the most frequent cause of fungal ...

In Situ Detection of Bacteria within Paraffin-embedded Tissues Using a Digoxin-labeled DNA Probe Targeting 16S rRNA

In Situ Detection of Bacteria within Paraffin-embedded Tissues Using a Digoxin-labeled DNA Probe Targeting 16S rRNA

الكشف الموضعي من البكتيريا داخل أنسجة البارافين جزءا لا يتجزأ من استخدام المسمى الديجوكسين DNA التحقيق استهداف 16S الريباسي

The presence of bacteria within the pocket epithelium and underlying connective tissue in gingival biopsies from patients with periodontitis has been ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

جيل ومتعدد المظهري فحص عالية المحتوى من<em&gt; الكوكسيلا البورنيتية</em&gt; المسوخ ينقول

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

كشف الإنتاجية العالية للجهاز التنفسي مسببات الأمراض في العينات الحيوانية التي كتبها النانو PCR

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...