Name: assessment of perigenital sensitivity and prostatic mast cell activation in a mouse model of neonatal maternal separation
Uploaded: 2015-08-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation at JoVE.com

The authors would like to thank Janelle Ryals, Rachel Supple, and Frank Wang for technical assistance. This work was supported by NIH grants R03 DK080182 (JAC), R01 DK099611 (JAC), R01 DK103872 (JAC), Center of Biomedical Research Excellence (COBRE) grant P20 GM104936 (JAC), start-up funds and core support from the Kansas Institutional Development Award (IDeA) P20 GM103418, core support from the Kansas IDDRC P30 HD002528, and The Madison and Lila Self Fellowship Program (ANP).

جميع التجارب الموصوفة في هذا البروتوكول تتفق مع المبادئ التوجيهية المعاهد الوطنية للصحة وفقا للمبادئ التوجيهية المحددة من قبل مركز جامعة كانساس الطبية المؤسسي رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام. 1. حديثي الولادة الأم الفصل (NMS) <ol ...

يوفر هذا البروتوكول منهجية لاستخدام الضغط حديثي الولادة، في شكل NMS، للحث على symptomology يدل على CP / CPPS في الفئران الذكور البالغين. كما الكبار، وتعرض الفئران للمرفق آلام جلدية الميكانيكية محيط بالغدد التناسلية كبير، وكذلك دليل على تحبب الخلايا البدينة في أنسجة البروستات?...

آلام الحوض المزمنة ليست في حد ذاتها مرضا، بل هو مصطلح يرتبط مع الألم المستمر عفوية و / أو استحضر التي يعاني منها المرضى الذين شخصت مع متلازمة القولون العصبي (IBS)، والتهاب المثانة الخلالي / متلازمة المثانة المؤلمة (IC / PBS)، التهاب الأعضاء الأنثوية، أو التهاب البروستاتا المزمن / متلازمة آلام الحوض المزمنة (CP / الهادئ). وغالبا ما المرضية هذه المتلازمات ومشاركة العديد من الخصائص في أنه ليس لديهم علم الأمراض المرتبطة بها أو تحديد المسببات الكامنة، وإن كان قد أظهرت ضعف في جهاز المناعة والجهاز العصبي المركزي، والجهاز العصبي المحيطي للمساهمة في صيانة وتطور هذه الاضطرابات 1 -3. المرضى الذين يعانون من ألم مزمن في الحوض أكثر عرضة للتقديم مع أعراض إضافية، واضطرابات الألم الوظيفية واضطرابات المزاج، بما في ذلك القلق، والاكتئاب، واضطراب الهلع 4-6 والذي ارتبط مع سير تغير من hypothalamic- غير ذات صلة الحوض- pituitary-الغدة الكظرية (HPA) المحور 10/07. التعرض لضغوط الحياة في وقت مبكر أو الصدمة هو عامل خطر كبير لتطوير تشوهات HPA وما يرتبط بها من متلازمات الألم المزمن 10،11 وعلى هذا النحو، مجموعة فرعية كبيرة من المرضى الذين يعانون من اضطرابات آلام الحوض وظيفية بأنهن شهدت أحداث الطفولة السلبية مثل سوء المعاملة أو الإهمال 12-14. نماذج القوارض الفصل حديثي الولادة الأمهات (NMS)، والتي تنطوي على إزالة الجراء من السد لفترة معينة من الوقت خلال فترة preweaning، وقد استخدمت على مدى العقدين الماضيين لدراسة نتائج ضغوط الحياة في وقت مبكر. بشكل عام، وقد تبين NMS لزيادة HPA محور التنشيط، والسلوكيات مثل القلق الناتجة، التي تؤثر بشكل مباشر على التعبير الجيني داخل منطقة ما تحت المهاد، فضلا عن عرقلة تنظيم المصب من الهياكل الحوفي 15-18. وقد تبين أن تعطل سير السليم محور HPA للمساهمة في زيادة القولون والمستقيم 19-22 </sup&gt; والمهبل 16 حساسية المعروضة من قبل القوارض NMS النماذج، ولكن على الرغم من توصيف واسعة من تأثير على المدى الطويل بعد الولادة التهاب المثانة 23-25، وتأثير ضغوط الحياة في وقت مبكر قد ذهب إلى حد كبير غير مدروسة في الأجهزة التناسلية. ولذلك، فإن الدراسة التالية تصف كيفية أداء NMS في الفئران وبعد ذلك تقييم حساسية الميكانيكية محيط بالغدد التناسلية وتسلل الخلايا البدينة / التنشيط في البروستاتا للتحقق من استخدام الفئران الذكور للمرفق كنموذج قبل السريرية لCP / الهادئ. لجميع المزمنة اضطرابات ألم الحوض تشخيص، CP / CPPS ربما تكون متلازمة الأقل المعترف بها جيدا، وتميزت، على الرغم من وجود انتشار عمر ما يقرب من 14٪ 26 و تكاليف المريض سنوية تقدر ب 4400 $ (مرتين أن آلام أسفل الظهر أو المفاصل التهاب المفاصل 27). المرضى الذين يعانون من CP / CPPS الألم تقرير في العجان والمستقيم والبروستاتا والقضيب والخصيتين، و / أو البطن 28، تجربة مرحبايتم تشخيص درجة gher من الضغط النفسي من المرضى التحكم 29، والحاضر عادة مع أعراض أو مع الحوض المزمنة الألم أو الإضطرابات المزاجية المرضية 5،29-31. العدوى المتكررة، ظهارة تتسرب منها المياه، والتهاب الأنسجة العصبية، وأمراض المناعة الذاتية كلها قد يظن كأسباب محتملة الكامنة وراء CP / CPPS 2،32،33، فضلا عن تنشيط الخلايا البدينة وتحبب 34. وإفرازات البروستاتا وأعرب عن الرجال مع CP / CPPS زادت تريبتاز الخلايا البدينة وعامل نمو الأعصاب (NGF) مستويات 34، وأكدت دراسة لاحقة أن تريبتاز وكربوكسي ببتيداز A (CPA3)، علامة على تنشيط الخلايا البدينة، وزادت أيضا في البول للمرضى CP / CPPS 35. لقد كان دور محتمل للالخلايا البدينة في بداية وصيانة CP / الهادئ محورا رئيسيا من البحوث الحيوانية على هذه المتلازمة حتى الآن. نموذج القوارض الأكثر استخداما تستخدم لدراسة CP / الهادئ هو التهاب البروستات الذاتية التجريبية (EAP) نموذج جنرالerated عن طريق الحقن تحت الجلد من مستضد البروستاتا في مساعد كاملة فرويند، الذي ينتج في درجات مختلفة من التهاب البروستاتا حسب الأنواع والسلالة المستخدمة 34،36-39. وقد تبين تسلل الخلايا البدينة وتفعيل / تحبب لزيادة الحث التالية من EAP 34،35،40. الفئران المعدلة وراثيا نقص في أي من الخلايا البدينة 34 أو مستقبلات تريبتاز PAR2 35 لا تتطور حساسية تكتيك البروستاتا التالية EAP، على عكس الفئران wildtype EAP. في حين أن هذا النموذج قبل السريرية يعيد العديد من خصائص CP البشرية / الهادئ، وبروتوكول الاستقراء هو لا يدل على حالة الإنسان، والتي لديها مسببات متنوعة، وغالبا ما لا تنطوي على التهاب المباشر، والعدوى، او الاصابة البروستات. تأثير ضغوط الحياة في وقت مبكر على تطوير CP / CPPS في البشر إلى حد كبير ذهب بدون تحقيق. ومع ذلك، فإن الدراسة التي هو جين تاو، وآخرون. 41، أثبتت أن لين الذين أفادوا تاريخ الجسدية في مرحلة الطفولة، والعاطفية، و / أو كان الاعتداء الجنسي بشكل ملحوظ أكثر احتمالا للتعرض لأعراض توحي CP / الهادئ. علاوة على ذلك، أظهرت أن كلا من الألم وعشرات البولية وزيادة في المرضى الذين لديهم تاريخ من الإساءة الجسدية والعاطفية. لقد أثبتنا سابقا أن نفس النموذج NMS في الإناث C57BL / 6 الفئران تنتج الحساسية عن طريق المهبل والشاذ التعبير الجيني في كل من المهبل والمثانة توحي HPA مختلة الناتج محور 16. هذه الأدلة جنبا إلى جنب مع ارتفاع معدل انتشار CP / المرضى الهادئ مع تقديم التواكب المرضي أخرى 42، بما في ذلك IC / PBS واضطرابات المزاج، والتي أكثر وضوحا ثبت أن تكون مرتبطة مع الحياة في وقت مبكر التعرض الإجهاد 12-14، ويوفر الأساس المنطقي لاستخدام نموذج NMS للتحقيق CP / CPPS في الفئران.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Pregnant C57BL/6 female mice&#160;</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>027</td>
			<td>Timed or untimed pregnant females should be monitored daily for in-house birth.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2L glass beaker(s)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS10002L</td>
			<td>Each NMS litter will be held in the same beaker throughout the 21 day separation period.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Forced Air Incubator, Basic</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>414005-124</td>
			<td>The incubator should be held at 33&#176;C and 50% humidity.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Touch Test Sensory Evaluator, Kit of 20 (Semmes-Weinstein Von Frey Aesthesiometer for touch assessment)</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>58011</td>
			<td>The following monofilaments should be used for perigenital sensitivity assessment: 1.65 g, 2.36 g, 2.83 g, 3.22 g, 3.61 g, 4.08 g, 4.31 g, and 4.74 g.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Enclosure (12 mice 6 rats)</td>
			<td>IITC</td>
			<td>435</td>
			<td>Be sure to place a heavy object on top of the individual, acrylic animal enclosures to prevent mice from escaping.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh Stand for mice and rats (12 mice 6 rats)</td>
			<td>IITC</td>
			<td>410</td>
			<td>Place stand on a stable table top for comfortable access.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5493</td>
			<td>Dilute the 10x PBS stock to 1x PBS.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td>A 4% paraformaldehyde solution is needed to intracardially perfuse mice and postfix tissue in preparation for mast cell staining.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5016</td>
			<td>Cryoprotect fixed tissue in 30% sucrose solution at 4&#176;C overnight.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heptane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>246654</td>
			<td>Chill heptane on dry ice to freeze tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Cryomold&#160;</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>4557</td>
			<td>To assist in freezing prostate tissue prior to cryostat sectioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek OCT Compound</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td>12 x 125 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Superfrost Plus Micro Slide</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>48311-703</td>
			<td>75 x 25 x 1 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine Blue O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>198161</td>
			<td>Certified by the Biological Stain Commission. Suitable for use as a metachromatic stain for mast cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, Absolute (200 Proof)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818-4</td>
			<td>Molecular Biology Grade, Fisher Bioreagents; 95% and 100% solutions will be needed to dehydrate stained cryosections before mast cell visualization.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>Acidified NaCl solution should be made fresh before staining cryosections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GeneMate Sterile 50 mL Centrifuge Tubes&#160;</td>
			<td>BioExpress</td>
			<td>C-3394</td>
			<td>Disposable tubes used to mix toulidine blue elements or dip slides into 1xPBS.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin staining dish for 10 slides, with ground glass cover</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-815</td>
			<td>Hold up to 10 standard 3 x 1 in. (75 x 25mm) slides back-to-back. Use separate dishes for Toluidine Blue working solution, 95% EtOH, 100% EtOH, and xylene.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylenes (Histological)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>X3P</td>
			<td>Once dehydrated, tissue is cleared with xylene.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slide Boxes, 100-Place</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>82003</td>
			<td>Boxes can be used for storage and transportation of slides.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Microscope Slide Box</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-400</td>
			<td>These slide boxes are typically small enough to fit inside a cryostate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5516</td>
			<td>Glycerol is a traditional mounting medium.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting Medium, Richard-Allan Scientific</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>4111</td>
			<td>Mounting medium firmly bonds the coverslip to the slide.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Cover Glasses, Rectangular, No. 1</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>48393-106</td>
			<td>A coverslip is placed over the dehydrated and cleared tissue to protect the sample.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>The Advanced Automated Research Microscope Eclipse 90i, used by our lab, has been discontinued and replaced Eclipse Ni-E.&#160;&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of perigenital sensitivity and prostatic mast cell activation in a mouse model of neonatal maternal separation

التهاب البروستاتا المزمن / متلازمة آلام الحوض المزمنة (CP / CPPS) يحتوي على انتشار عمر 14٪ و هو التشخيص المسالك البولية الأكثر شيوعا للرجال الذين تقل أعمارهم عن 50 عاما، ومع ذلك هو اضطراب مزمن آلام الحوض لا يقل عن فهمها ودراستها. مجموعة فرعية كبيرة من المرضى الذين يعانون من ألم مزمن في الحوض التقرير بعد أن شهدت ضغوط الحياة في وقت مبكر أو إساءة المعاملة، التي يمكن أن تؤثر بشكل ملحوظ على أداء وتنظيم الغدة النخامية، الغدة الكظرية (HPA) المحور. تنشيط الخلايا البدينة، وهو ما ثبت على أن تزاد في كل من البول وإفرازات البروستاتا أعرب من المرضى CP / الهادئ، وينظم جزئيا تفعيل المصب من محور HPA. وقد استخدم الأطفال حديثي الولادة فصل الأمهات (NMS) لأكثر من عقدين من الزمن لدراسة نتائج ضغوط الحياة في وقت مبكر من نماذج القوارض، بما في ذلك التغيرات في المحور HPA والحساسية الحشوية. نحن هنا نقدم بروتوكول مفصل لاستخدام NMS كنموذج قبل السريرية لCP / CPPS في الذكور C57BL / 6 الفئران. وصفنا منهجيةلأداء NMS، وتقييم آلام جلدية الميكانيكية محيط بالغدد التناسلية، والأدلة النسيجي للتنشيط الخلايا البدينة. ونحن نقدم أيضا أدلة على أن الإجهاد النفسي المبكر يمكن أن يكون لها تأثيرات طويلة الأمد على الجهاز البولي التناسلي الذكور في الفئران.

وأظهرت الفئران التي خضعت NMS الأدلة السلوكية يدل على CP / الهادئ. عند اختباره مع سلسلة متدرجة من المجذوذه فون فراي، الفئران للمرفق القديمة أسابيع 8 (ن = 4) ظهور آلام جلدية الميكانيكية محيط بالغدد التناسلية بالمقارنة مع نظرائهم ساذجة (ن = 5، الشكل 2). ويتضح هذا الأمر ...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation at JoVE.com

Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation

نحن قياس حساسية وتنشيط الخلايا البدينة الميكانيكية محيط بالغدد التناسلية في البروستاتا من الذكور C57BL / 6 الفئران التي خضعت في وقت مبكر نموذج ضغوط الحياة - فصل الأمهات حديثي الولادة، وذلك للحث على نموذج ما قبل السريرية لمتلازمة آلام الحوض / المزمنة المزمنة التهاب البروستات.

تقييم محيط بالغدد التناسلية حساسية والبروستات ماست تنشيط خلية في نموذج الفأر من فصل الأمهات حديثي الولادة

Chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome (CP/CPPS) has a lifetime prevalence of 14% and is the most common urological diagnosis for men under the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

نموذج الفأر من في الرحم زراعة

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

متعدد الفوتون التصوير من غزو خلايا الورم في الفأر نموذج مثلي الفم سرطان الخلايا الحرشفية

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

A Swine Model of Neonatal Asphyxia

نموذج الخنازير من الاختناق الوليدي

Annually more than 1 million neonates die worldwide as related to asphyxia. Asphyxiated neonates commonly have multi-organ failure including hypotension, ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

A الخنزير الصغير نموذج من الأطفال حديثي الولادة نقص الأوكسجين، اعتلال الدماغ الإقفاري

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Motor and Hippocampal Dependent Spatial Learning and Reference Memory Assessment in a Transgenic Rat Model of Alzheimer's Disease with Stroke

السيارات والحصين التعلم المكاني تابع وتقييم الذاكرة المرجعي في الفئران المعدلة وراثيا نموذج من مرض الزهايمر مع السكتة الدماغية

Alzheimer&#39;s disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease that results in neurodegeneration and memory loss. While age is a major risk ...

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

وحديثي الولادة ماوس الحبل الشوكي ضغط إصابة نموذج

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

A Battery of Motor Tests in a Neonatal Mouse Model of Cerebral Palsy

مجموعة من الاختبارات للسيارات في ماوس نموذج حديثي الولادة من الشلل الدماغي

As the sheer number of transgenic mice strains grow and rodent models of pediatric disease increase, there is an expanding need for a comprehensive, ...

Myocardial Infarction in Neonatal Mice, A Model of Cardiac Regeneration

احتشاء عضلة القلب في الفئران حديثي الولادة، نموذج للتجديد القلب

Myocardial infarction induced by coronary artery ligation has been used in many animal models as a tool to study the mechanisms of cardiac repair and ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

متساوي القياس كونتراكتيليتي القياس الشريان المساريقي العلوي الماوس باستخدام أسلاك ميوجرافي

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

نموذج الإصابة بالتبريد لدراسة احتشاء عضلة القلب في الماوس

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...