Name: assessment of perigenital sensitivity and prostatic mast cell activation in a mouse model of neonatal maternal separation
Uploaded: 2015-08-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation at JoVE.com

The authors would like to thank Janelle Ryals, Rachel Supple, and Frank Wang for technical assistance. This work was supported by NIH grants R03 DK080182 (JAC), R01 DK099611 (JAC), R01 DK103872 (JAC), Center of Biomedical Research Excellence (COBRE) grant P20 GM104936 (JAC), start-up funds and core support from the Kansas Institutional Development Award (IDeA) P20 GM103418, core support from the Kansas IDDRC P30 HD002528, and The Madison and Lila Self Fellowship Program (ANP).

Все эксперименты, описанные в этом протоколе соответствует руководящим принципам NIH в соответствии с руководящими принципами, указанными в Университете Канзаса медицинский центр Уходу за животными и использованию комитета. 1. новорожденных матери Разделение (НМС) <ol><l...

Этот протокол обеспечивает методологию для использования у новорожденных стресс, в форме NMS, чтобы вызвать симптоматику, указывающую CP / ПКЮТО в взрослых самцов мышей. Как взрослые, НМС мыши обнаруживают значительное perigenital механической аллодинии, а также доказательства дегрануляции т...

Хроническая тазовая боль сама по себе не болезнь, а скорее термин, связанный с продолжающимся спонтанным и / или вызывал боли, испытываемой пациентами с диагнозом синдром раздраженного кишечника (СРК), цистит / синдром болезненного мочевого пузыря интерстициальной (IC / PBS), вульводиния, или хронический простатит / синдром хронической тазовой боли (CP / ПКЮТО). Эти синдромы часто сопутствуют и имеют много общих характеристик, что у них нет сопутствующей патологии или выявила основные этиологии, хотя дисфункция в иммунной системе, центральной нервной системы, и периферической нервной системы, как было показано содействовать поддержанию и прогрессирования этих нарушений 1 -3. Пациенты с хронической тазовой болью, скорее всего, представит с симптомами, не входящим в тазовой связанных функциональных расстройств боли и расстройства настроения, в том числе тревоги, депрессии и панического расстройства 4-6, который был связан с изменением функционирования гипоталамо гипофизарнонадпочечников (HPA) оси 7-10. Воздействие стресса начале жизни или травмы значительным фактором риска для развития гПа нарушения и связанные с ними хронические болевые синдромы 10,11 и, как таковой, значительная группа пациентов с функциональными расстройствами тазовых боли сообщают, что испытали негативные события детства, такие как злоупотребления или пренебрежения 12-14. Грызунов модели новорожденных материнской разделения (NMS), которая включает в себя удаление щенков от их плотины в течение установленного периода времени, в течение периода preweaning, были использованы в течение последних двух десятилетий, чтобы изучить результаты раннего стресса жизни. В общем, НМС, как было показано, чтобы увеличить HPA оси активации, и, как следствие тревоги, как поведение, непосредственно влияет на экспрессию генов в гипоталамусе, а также нарушения ниже по потоку от регулирования лимбических структурах 15-18. Нарушение нормального функционирования гПа оси, как было показано способствовать увеличению прямой кишки 19-22 </sup&gt; И вагинальный 16 Чувствительность отображается моделей грызунов NMS, но, несмотря на обширный характеристики долгосрочного эффекта послеродового воспаления мочевого пузыря 23-25, влияние стресса начале жизни в значительной степени пошли неизученным в мочеполовых органах. Таким образом, следующие исследования опишу, как выполнять NMS в мышей, а затем оценить perigenital механическую чувствительность и тучных клеток инфильтрации / активацию в простате, чтобы проверить использование мужских NMS мышей в доклинической модели для CP / СХТБ. Из всех диагностированных хронических тазовых болевых расстройств, CP / ПКЮТО, пожалуй, не менее хорошо признаны и характеризуется синдром, несмотря на то, что распространенность жизни примерно на 14% 26 и ежегодные расходы пациента на сумму $ 4,400 (в два раза, что боли в пояснице или ревматоидный артрит 27). Пациенты с CP / CPPS отчета боли в промежности, прямой кишки, предстательной железы, полового члена, яичек и / или живот 28, опыт приветGher степень психологического стресса, чем пациентов контрольной 29 и обычно присутствует с симптомами или с диагнозом сопутствующих хронической тазовой боли или расстройства настроения 5,29-31. Периодические инфекции, вытекающей эпителий, нейрогенного воспаления, и аутоиммунные все были предположил в качестве потенциальных основных причин CP / КППС 2,32,33, а также активации тучных клеток и дегрануляции 34. Выраженные простаты выделениями из мужчин с CP / ПКЮТО возросло тучных клеток триптазы и фактора роста нервов (ФРН) уровни 34 и более позднее исследование подтвердило, что триптазой и карбоксипептидазы А (CPA3), маркер активации тучных клеток, также увеличилось в Моча больных СР / КППС 35. Потенциальная роль тучных клеток в начале и поддержания СР / СХТБ была основным направлением исследований на животных на этой синдрома до сих пор. Наиболее часто используется модель с грызунами используется для изучения CP / ПКЮТО является экспериментальный аутоиммунный простатит (EAP) модель поколениясоздававшие путем подкожной инъекции антигена простаты в полном адъюванте Фрейнда, что приводит к различным степеням железы воспаления в зависимости от вида и штамма используемых 34,36-39. Мачты инфильтрация и активация / дегрануляции было показано, чтобы увеличить следующий индукцию EAP 34,35,40. Трансгенные мыши с дефицитом либо в тучных клетках 34 или триптазы рецептора par2 35 не развиваются железы тактика чувствительность следующий EAP, в отличие от дикого типа EAP мышей. Хотя это доклинические модель воспроизводит многие из характеристик человеческого CP / СХТБ, протокол индукции не является признаком состояния человека, который имеет различной этиологии и часто не связаны напрямую воспаление, инфекции, травмы или предстательной железы. Влияние стресса начале жизни на развитие CP / СХТБ у людей в основном пропали неизученными; Однако, исследование Ху и др. 41, показали, что мнеп, которые сообщили истории детства физического, эмоционального и / или сексуальное насилие значительно чаще испытывают симптомы, указывающие на CP / СХТБ. Кроме того, они показали, что боль и мочевыводящих оценки были повышены у пациентов с историей физического и эмоционального насилия. Ранее мы показали, что та же НМС парадигма в женской мышей C57BL / 6 производит влагалищное гиперчувствительность и аномальной экспрессии генов в обоих влагалища и мочевого пузыря наводит на мысль о неблагополучных HPA выхода оси 16. Это свидетельство в сочетании с высокой распространенностью CP / пациентов КППС представляющих с другими сопутствующими заболеваниями, в том числе 42 IC / PBS и расстройств настроения, которые более четко было показано, что связано с ранней жизни стресс воздействия 12-14, обеспечивает обоснование использования НМС модель для исследования CP / СПП у мышей.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Pregnant C57BL/6 female mice&#160;</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>027</td>
			<td>Timed or untimed pregnant females should be monitored daily for in-house birth.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2L glass beaker(s)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS10002L</td>
			<td>Each NMS litter will be held in the same beaker throughout the 21 day separation period.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Forced Air Incubator, Basic</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>414005-124</td>
			<td>The incubator should be held at 33&#176;C and 50% humidity.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Touch Test Sensory Evaluator, Kit of 20 (Semmes-Weinstein Von Frey Aesthesiometer for touch assessment)</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>58011</td>
			<td>The following monofilaments should be used for perigenital sensitivity assessment: 1.65 g, 2.36 g, 2.83 g, 3.22 g, 3.61 g, 4.08 g, 4.31 g, and 4.74 g.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Enclosure (12 mice 6 rats)</td>
			<td>IITC</td>
			<td>435</td>
			<td>Be sure to place a heavy object on top of the individual, acrylic animal enclosures to prevent mice from escaping.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh Stand for mice and rats (12 mice 6 rats)</td>
			<td>IITC</td>
			<td>410</td>
			<td>Place stand on a stable table top for comfortable access.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5493</td>
			<td>Dilute the 10x PBS stock to 1x PBS.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td>A 4% paraformaldehyde solution is needed to intracardially perfuse mice and postfix tissue in preparation for mast cell staining.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5016</td>
			<td>Cryoprotect fixed tissue in 30% sucrose solution at 4&#176;C overnight.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heptane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>246654</td>
			<td>Chill heptane on dry ice to freeze tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Cryomold&#160;</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>4557</td>
			<td>To assist in freezing prostate tissue prior to cryostat sectioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek OCT Compound</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td>12 x 125 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Superfrost Plus Micro Slide</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>48311-703</td>
			<td>75 x 25 x 1 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine Blue O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>198161</td>
			<td>Certified by the Biological Stain Commission. Suitable for use as a metachromatic stain for mast cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, Absolute (200 Proof)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818-4</td>
			<td>Molecular Biology Grade, Fisher Bioreagents; 95% and 100% solutions will be needed to dehydrate stained cryosections before mast cell visualization.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>Acidified NaCl solution should be made fresh before staining cryosections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GeneMate Sterile 50 mL Centrifuge Tubes&#160;</td>
			<td>BioExpress</td>
			<td>C-3394</td>
			<td>Disposable tubes used to mix toulidine blue elements or dip slides into 1xPBS.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin staining dish for 10 slides, with ground glass cover</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-815</td>
			<td>Hold up to 10 standard 3 x 1 in. (75 x 25mm) slides back-to-back. Use separate dishes for Toluidine Blue working solution, 95% EtOH, 100% EtOH, and xylene.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylenes (Histological)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>X3P</td>
			<td>Once dehydrated, tissue is cleared with xylene.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slide Boxes, 100-Place</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>82003</td>
			<td>Boxes can be used for storage and transportation of slides.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Microscope Slide Box</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-400</td>
			<td>These slide boxes are typically small enough to fit inside a cryostate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5516</td>
			<td>Glycerol is a traditional mounting medium.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting Medium, Richard-Allan Scientific</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>4111</td>
			<td>Mounting medium firmly bonds the coverslip to the slide.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Cover Glasses, Rectangular, No. 1</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>48393-106</td>
			<td>A coverslip is placed over the dehydrated and cleared tissue to protect the sample.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>The Advanced Automated Research Microscope Eclipse 90i, used by our lab, has been discontinued and replaced Eclipse Ni-E.&#160;&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of perigenital sensitivity and prostatic mast cell activation in a mouse model of neonatal maternal separation

Хронический простатит / синдром хронической тазовой боли (CP / ПКЮТО) имеет распространенность 14% жизни, и является наиболее распространенным урологическим диагнозом для мужчин моложе 50, но это наименее понятных и учился хронической тазовой боли расстройства. Существенное число пациентов с хронической тазовой боли доклада пережив стресс раннего жизни или злоупотребления, которые могут заметно повлиять на функционирование и регулирование гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой (HPA) оси. Активация тучных клеток, который, как было показано, чтобы быть увеличена в моче и выражены секрета простаты СР пациентов / КППС, частично регулируется вниз по течению активации оси HPA. Неонатальный материнской разделение (НМС) была использована для более чем двух десятилетий, чтобы изучить результаты раннего стресса жизни в моделях грызунов, в том числе изменения в оси HPA и висцеральной чувствительности. Здесь мы предлагаем подробный протокол для использования NMS в доклинической модели CP / ПКЮТО у самцов мышей C57BL / 6. Мы описываем методологиюдля выполнения NMS, оценки perigenital механической аллодинии и гистологические признаки активации тучных клеток. Мы также предоставляем доказательства того, что в начале психологический стресс может иметь долгосрочные последствия на мужской мочеполовой системы у мышей.

Мыши, которые прошли НМС показали поведенческие доказательства, указывающего CP / СХТБ. При тестировании с градуированной серии фон Фрея мононити, 8-недельных мышей NMS (п = 4) отображается perigenital механической аллодинии, когда по сравнению с наивных коллег (п = 5, рис 2). Об этом свидет?...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation at JoVE.com

Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation

Мы измеряем активации perigenital механическую чувствительность и тучных клеток в простате у мужчин C57BL / 6 мышей, которые прошли в начале жизни стресс парадигму - новорожденных материнской разделения, для того, чтобы индуцировать доклинические модель простатита / синдрома хронической тазовой боли хронической.

Оценка чувствительности и Perigenital простаты тучных клеток активации в мышиной модели новорожденных материнской разъединении

Chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome (CP/CPPS) has a lifetime prevalence of 14% and is the most common urological diagnosis for men under the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

Мышь Модель В утробе матери Трансплантации

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Многофотонная изображений опухолевой инвазии сотовый в Ортотопическая Модель мыши устного плоскоклеточный рак

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

A Swine Model of Neonatal Asphyxia

Свиной Модель новорожденных Асфиксия

Annually more than 1 million neonates die worldwide as related to asphyxia. Asphyxiated neonates commonly have multi-organ failure including hypotension, ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Пятачок Модель новорожденных гипоксически-ишемическая энцефалопатия

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Motor and Hippocampal Dependent Spatial Learning and Reference Memory Assessment in a Transgenic Rat Model of Alzheimer's Disease with Stroke

Мотор и гиппокампа зависимости пространственное обучение и оценка памяти Reference в трансгенной Rat модели болезни Альцгеймера с инсультом

Alzheimer&#39;s disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease that results in neurodegeneration and memory loss. While age is a major risk ...

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Неонатальной спинного мозга мыши Сжатие Травма Модель

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

A Battery of Motor Tests in a Neonatal Mouse Model of Cerebral Palsy

Батарея моторных испытаний в неонатальных мышей модели церебральным параличом

As the sheer number of transgenic mice strains grow and rodent models of pediatric disease increase, there is an expanding need for a comprehensive, ...

Myocardial Infarction in Neonatal Mice, A Model of Cardiac Regeneration

Инфаркт миокарда у новорожденных мышей, Модель регенерации сердца

Myocardial infarction induced by coronary artery ligation has been used in many animal models as a tool to study the mechanisms of cardiac repair and ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Изометрические сократимости измерение верхней брыжеечной артерии мыши, с помощью проволоки миография

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

Криотравма модель для изучения инфаркта миокарда в мыши

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...