Name: assessment of perigenital sensitivity and prostatic mast cell activation in a mouse model of neonatal maternal separation
Uploaded: 2015-08-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation at JoVE.com

The authors would like to thank Janelle Ryals, Rachel Supple, and Frank Wang for technical assistance. This work was supported by NIH grants R03 DK080182 (JAC), R01 DK099611 (JAC), R01 DK103872 (JAC), Center of Biomedical Research Excellence (COBRE) grant P20 GM104936 (JAC), start-up funds and core support from the Kansas Institutional Development Award (IDeA) P20 GM103418, core support from the Kansas IDDRC P30 HD002528, and The Madison and Lila Self Fellowship Program (ANP).

Bu protokol açıklanan tüm deneyler Kansas Tıp Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu Üniversitesi tarafından belirlenen esaslara uygun olarak NIH kurallarına uygundur. 1. Yenidoğan Anne Ayırma (NMS) <ol><li> Çöp doğum günlük hamile baraj izleyin. Not: doğar çöp P0 kabul edilir bir gün. </li><li> P1, ev kafes baraj kaldırmak ve temiz bir kap içine koyun ikincil. </li><li> Evde kafes kokusunu korumak için temiz eldivenli elleri arasına yatak bir avuç...

Bu protokol, yetişkin erkek farelerde CP / KAPS gösterge semptomolojisini indükleme NMS şeklinde neonatal stres kullanmak için bir yöntem sağlar. Yetişkinler olarak NMS fareler önemli düzeyde perigenital mekanik alodinya, hem de prostat dokusu mast hücre degranülasyonunu kanıt gösterir. NMS kullanımı olarak, genellikle kronik pelvik ağrı 12-14 olan hastalar tarafından bildirilen erken yaşam stresi, çoğaltır CP / KPAS bir klinik öncesi bir model geliştirilmesi yanı sıra non-invaziv i...

Kronik pelvik ağrı başlı başına bir hastalık değildir, daha ziyade irritabl barsak sendromu (IBS) tanısı hastalar tarafından devam eden spontan ve / veya uyarılmış ağrı, interstisyel sistit / ağrılı mesane sendromu (IC / PBS), vulvodini ile ilgili bir terim, veya kronik prostatit / kronik pelvik ağrı sendromu (CP / CPPS). Bu sendromlar genellikle bağışıklık sistemi, merkezi sinir sistemi ve periferal sinir sistemi içinde işlev bozuklukları bu bozukluklara 1 bakım ve ilerlemesine katkıda gösterilmiştir, ancak bunlar, herhangi bir ilişkili patolojisini veya tespit altta yatan nedeni olduğu birçok özelliklere eşlik eden ve paylaşan -3. Kronik pelvik ağrısı olan hastalar semptomları ile ortaya olasılığı daha yüksektir ek olmayan pelvik ilgili hipotalamik değişmiş işleyişi ile ilişkili bulunmuştur anksiyete, depresyon ve panik bozukluk 4-6 da dahil olmak üzere fonksiyonel ağrı bozuklukları ve duygudurum bozuklukları, hipofizadrenal (HPA) eksen 7-10. Erken yaşam stres veya travma Pozlama HPA anormallikleri ve ilişkili kronik ağrı sendromları 10,11 ve gibi geliştirmek için önemli bir risk faktörüdür, fonksiyonel pelvik ağrı bozukluğu olan hastaların önemli bir alt kümesi gibi istismar veya ihmal gibi olumsuz çocukluk olayları deneyimli rapor 12-14. Sütten kesim öncesi dönemde zaman belirli bir süre için kendi baraj yavrular kaldırmayı içerir neonatal anne ayrılık (NMS), kemirgen modelleri, erken yaşam stresi sonuçlarını incelemek için son iki yıldır kullanılmaktadır. Genel olarak, NMS doğrudan hipotalamus içinde gen ekspresyonunu etkileyebilen yanı sıra, limbik yapılarda 15-18 aşağı akış düzenleme bozulmasıyla, HPA eksen aktivasyonu ve elde edilen anksiyete benzeri davranışları geliştirmek için gösterilmiştir. Doğru HPA ekseninin işleyişinin bozulması artan kolorektal 19-22 katkıda gösterilmiştir </sup&gt; Ve vajinal 16 duyarlılık kemirgen NMS modelleri tarafından görüntülenen, ancak doğum sonrası mesane iltihabı 23-25 ​​uzun vadeli etkisi geniş karakterizasyonu rağmen, erken yaşam stresinin etkisi büyük ölçüde ürogenital organlarda unstudied gitti. Bu nedenle, aşağıdaki çalışma farelerde NMS gerçekleştirmek ve daha sonra CP / KPAS için bir preklinik model olarak erkek NMS farelerin kullanımını doğrulamak için prostat perigenital mekanik duyarlılık ve mast hücre infiltrasyonu / aktivasyonunu değerlendirmek için nasıl anlatacağız. Tanısı kronik pelvik ağrı bozukluklarının tüm CP / CPPS bel ağrısı ya da romatoid o iki belki de yaklaşık% 14 26 yaşam boyu yaygınlığı ve 4.400 $ (tahmini yıllık hasta maliyetlerinin olmasına rağmen en az iyi tanınan ve karakterize sendrom olduğunu artrit 27). Perine, rektum, prostat, penis, testisler ve / veya karın 28, hi deneyim CP / CPPS raporu ağrısı olan hastalarGher kontrol hastalara 29 den psikolojik stres derecesi, ve ya semptomları ile yaygın mevcut komorbid kronik pelvik ağrı ya da duygudurum bozuklukları 5,29-31 ile tanı konur. Tekrarlayan enfeksiyonu, sızan epiteli, nörojenik enflamasyon ve otoimmünite tüm potansiyel yatan / CPPS 2,32,33 CP nedenleri olarak mast hücresi aktivasyonu ve degranülasyonunu 34 olarak tahmin etti edilmiştir. Ayrıca artmıştır, mast hücresi aktivasyonu bir belirteç CP / KPAS&#39;li erkeklerden ifade prostat salgıları mast hücre triptaz ve sinir büyüme faktörü (NGF) seviyeleri 34 artmış ve bir sonraki çalışma triptazın doğruladı ve A (CPA3) carboxypeptidase CP / CPPS hastalarının 35 idrar. başlangıç ​​ve CP / KAPS bakım mast hücreleri için potansiyel rolü bugüne kadar bu sendromun hayvan araştırmalarının önemli bir odak noktası olmuştur. En sık kullanılan kemirgen modeli CP incelemek için kullanılan / CPPS deneysel otoimmün prostatit ise (DAP) modeli gen34,36-39 kullanılan türler ve suşu ile ilgili olarak, prostat iltihabı, çeşitli derecelerde sonuçlanan Tam Freund katkı maddesi, prostat antijeni deri altına enjeksiyon tutulmasıyla oluşturulmuştur. Mast hücresi infiltrasyonu ve aktivasyon / degranülasyon DAP 34,35,40 aşağıdaki indüksiyonu geliştirmek için gösterilmiştir. Mast hücreleri 34 veya triptaz reseptörü PAR2 35 ya eksik transgenik fareler vahşi tipli DAP fareler aksine DAP aşağıdaki prostat taktik duyarlılık geliştirmek yok. Bu preklinik model, insan CP / KPAS özelliklerinin birçoğu çoğaltır ederken, indüksiyon protokolü doğrudan inflamasyon, enfeksiyon ya da prostat yaralanma içermeyen, genellikle farklı etyolojisi vardır ve insan koşulu, göstergesi değildir. İnsanlarda CP / KPAS gelişimine erken yaşam stresinin etkisi büyük ölçüde soruşturulmadan uğramış; Ancak, Hu ve ark. 41 tarafından yapılan bir çalışmada, bana gösterdin çocukluk fiziksel, duygusal öyküsü bildirdi ve / veya cinsel istismar CP / KPAS düşündüren belirtileri yaşamaya anlamlı olarak daha fazlaydı kim. Dahası, onlar acı ve idrar skorları hem fiziksel hem de duygusal istismar öyküsü olan hastalarda artmış olduğunu gösterdi. Biz daha önce dişi C57BL / 6 farelerinde aynı NMS paradigma vajinal hipersensitiviteye ve anormal gen ifadesini ürettiğini göstermiştir hem vajina ve işlevsiz HPA ekseninin çıkışı 16 düşündüren mesane. Daha net erken yaşam strese maruz kalma 12-14 ile bağlantılı olduğu gösterilmiştir IC / PBS ve duygudurum bozuklukları gibi diğer komorbiditeler 42, ile başvuran CP / CPPS hastalarının yüksek prevalans ile birlikte bu delil, bir kullanma gerekçelerini sağlar NMS modeli farelerde CP / KPAS araştırmak.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Pregnant C57BL/6 female mice&#160;</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>027</td>
			<td>Timed or untimed pregnant females should be monitored daily for in-house birth.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2L glass beaker(s)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS10002L</td>
			<td>Each NMS litter will be held in the same beaker throughout the 21 day separation period.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Forced Air Incubator, Basic</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>414005-124</td>
			<td>The incubator should be held at 33&#176;C and 50% humidity.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Touch Test Sensory Evaluator, Kit of 20 (Semmes-Weinstein Von Frey Aesthesiometer for touch assessment)</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>58011</td>
			<td>The following monofilaments should be used for perigenital sensitivity assessment: 1.65 g, 2.36 g, 2.83 g, 3.22 g, 3.61 g, 4.08 g, 4.31 g, and 4.74 g.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Enclosure (12 mice 6 rats)</td>
			<td>IITC</td>
			<td>435</td>
			<td>Be sure to place a heavy object on top of the individual, acrylic animal enclosures to prevent mice from escaping.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh Stand for mice and rats (12 mice 6 rats)</td>
			<td>IITC</td>
			<td>410</td>
			<td>Place stand on a stable table top for comfortable access.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5493</td>
			<td>Dilute the 10x PBS stock to 1x PBS.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td>A 4% paraformaldehyde solution is needed to intracardially perfuse mice and postfix tissue in preparation for mast cell staining.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5016</td>
			<td>Cryoprotect fixed tissue in 30% sucrose solution at 4&#176;C overnight.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heptane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>246654</td>
			<td>Chill heptane on dry ice to freeze tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Cryomold&#160;</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>4557</td>
			<td>To assist in freezing prostate tissue prior to cryostat sectioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek OCT Compound</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td>12 x 125 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Superfrost Plus Micro Slide</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>48311-703</td>
			<td>75 x 25 x 1 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine Blue O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>198161</td>
			<td>Certified by the Biological Stain Commission. Suitable for use as a metachromatic stain for mast cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, Absolute (200 Proof)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818-4</td>
			<td>Molecular Biology Grade, Fisher Bioreagents; 95% and 100% solutions will be needed to dehydrate stained cryosections before mast cell visualization.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>Acidified NaCl solution should be made fresh before staining cryosections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GeneMate Sterile 50 mL Centrifuge Tubes&#160;</td>
			<td>BioExpress</td>
			<td>C-3394</td>
			<td>Disposable tubes used to mix toulidine blue elements or dip slides into 1xPBS.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin staining dish for 10 slides, with ground glass cover</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-815</td>
			<td>Hold up to 10 standard 3 x 1 in. (75 x 25mm) slides back-to-back. Use separate dishes for Toluidine Blue working solution, 95% EtOH, 100% EtOH, and xylene.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylenes (Histological)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>X3P</td>
			<td>Once dehydrated, tissue is cleared with xylene.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slide Boxes, 100-Place</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>82003</td>
			<td>Boxes can be used for storage and transportation of slides.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Microscope Slide Box</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-400</td>
			<td>These slide boxes are typically small enough to fit inside a cryostate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G5516</td>
			<td>Glycerol is a traditional mounting medium.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting Medium, Richard-Allan Scientific</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>4111</td>
			<td>Mounting medium firmly bonds the coverslip to the slide.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Cover Glasses, Rectangular, No. 1</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>48393-106</td>
			<td>A coverslip is placed over the dehydrated and cleared tissue to protect the sample.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>The Advanced Automated Research Microscope Eclipse 90i, used by our lab, has been discontinued and replaced Eclipse Ni-E.&#160;&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of perigenital sensitivity and prostatic mast cell activation in a mouse model of neonatal maternal separation

Kronik prostatit / kronik pelvik ağrı sendromu (CP / CPPS)% 14 yaşam boyu yaygınlığı vardır ve 50 yaşın altındaki erkeklerde en sık ürolojik tanı, henüz en az anlaşılan ve çalışılan kronik pelvik ağrı bir hastalıktır. Kronik pelvik ağrı raporu ile hastaların önemli bir alt kümesi belirgin hipotalamus-hipofiz-adrenal (HPA) eksen işleyişi ve düzenlenmesini etkileyen erken yaşam stresi ya da kötüye, deneyimli. Gösterilmiştir mast hücresi aktivasyonu, kısmen HPA ekseninin alt aktivasyonu ile düzenlenir, her iki idrar artmış ve CP / CPPS hastanın prostat salgıları ifade edilmesi. Yenidoğan anne ayırma (NMS) HPA eksenin ve visseral duyarlılık değişiklikleri de dahil olmak üzere, kemirgen modellerinde erken yaşam stresi sonuçlarını incelemek için iki yıldan uzun bir süredir kullanılmaktadır. Burada erkek C57BL / 6 farelerinde CP / KAPS preklinik model olarak NMS kullanılarak ayrıntılı protokol sağlar. Biz metodoloji tarifperigenital mekanik allodini ve mast hücresi aktivasyonu histolojik kanıtları değerlendirirken, NMS gerçekleştirmek için. Biz de erken psikolojik stres farelerde erkek ürogenital sistem üzerinde uzun süreli etkilere sahip olduğuna dair kanıt sağlamaktadır.

NMS geçiren fareler CP / KPAS göstergesidir davranışsal kanıt gösterdi. Von Frey monofiller, 8 haftalık fareler NMS kademeli bir dizi ile test edildiği zaman (n = 4) saf karşılıkları ile karşılaştırıldığında perigenital mekanik alodinya gösterilmiştir (n = 5, Şekil 2). Monofilament yönelik monofilin uygulama ya da yalama ve ısırma davranışları yanıt olarak canlı bir pislik ya da atlama olarak kaydedilir, pozitif bir davranış yanıtı ortaya çıkardı, mekanik geri çekm...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation at JoVE.com

Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation

Kronik prostatit / kronik pelvik ağrı sendromu bir klinik öncesi modelini teşvik etmek amacıyla yenidoğan anne ayrılık, - Biz bir erken yaşam stresi paradigmasını uygulanan erkek C57BL / 6 farelerin prostat perigenital mekanik duyarlılık ve mast hücre aktivasyonunu ölçüyorlar.

Yenidoğan Anneden Ayrılma Fare Modelinde perigenital Duyarlılık ve Prostat Mast Hücre aktivasyonu Değerlendirilmesi

Chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome (CP/CPPS) has a lifetime prevalence of 14% and is the most common urological diagnosis for men under the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

Bir Fare Modeli Utero Organ Nakli

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Oral Skuamöz Hücre Karsinomu Ortotopik Fare Modeli Tümör Hücre Invasion Multi-foton Görüntüleme

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

A Swine Model of Neonatal Asphyxia

Yenidoğan Asfiksi Bir Domuz Modeli

Annually more than 1 million neonates die worldwide as related to asphyxia. Asphyxiated neonates commonly have multi-organ failure including hypotension, ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Yenidoğan Hipoksik-İskemik Ensefalopati A Piglet Modeli

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Motor and Hippocampal Dependent Spatial Learning and Reference Memory Assessment in a Transgenic Rat Model of Alzheimer's Disease with Stroke

İnme ile Alzheimer Hastalığının bir Transgenik Fare Modelinde Motor ve Hipokampal Bağımlı Mekansal Öğrenme ve Referans Hafıza Değerlendirme

Alzheimer&#39;s disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease that results in neurodegeneration and memory loss. While age is a major risk ...

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Bir Yenidoğan Fare Omurilik Sıkıştırma Yaralanması Modeli

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

A Battery of Motor Tests in a Neonatal Mouse Model of Cerebral Palsy

Cerebral Palsy bir Yenidoğan Fare Modeli Motor Testleri A Pil

As the sheer number of transgenic mice strains grow and rodent models of pediatric disease increase, there is an expanding need for a comprehensive, ...

Myocardial Infarction in Neonatal Mice, A Model of Cardiac Regeneration

Yenidoğan Farelerde Miyokard Enfarktüsü, Kalp Rejenerasyon Bir Model

Myocardial infarction induced by coronary artery ligation has been used in many animal models as a tool to study the mechanisms of cardiac repair and ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

Farede Miyokard Enfarktüsü Çalışması İçin Kriyoyaralanma Modeli

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...