Name: a rapid and quantitative fluorimetric method for protein-targeting small molecule drug screening
Uploaded: 2015-10-16T15:00:00
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Y.N.T. would like to acknowledge the Agency for Science, Technology and Research (A*STAR), Singapore for the financial support under the JCO CDA grant 13302FG063.

Attention: S&#39;il vous plaît consulter les fiches de données de sécurité (FDS) de tous les produits chimiques impliqués avant utilisation. L&#39;expérience de criblage de médicaments implique la synthèse et la manipulation des nanomatériaux, qui peut avoir des risques supplémentaires par rapport à leur homologue vrac. S&#39;il vous plaît assurer que toutes les mesures de contrôle nécessaires pour être pratiquées pendant toute l&#39;expérience, y compris l&#39;utilisation des contrôles d&#39;ingénier...

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	<li>Flarakos, J., Morand, K. L., Vouros, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Throughput+Solution-Based+Medicinal+Library+Screening+against+Human+Serum+Albumin.">High-Throughput Solution-Based Medicinal Library Screening against Human Serum Albumin.</a> Anal. Chem. 77, 1345-1353 (2005).</li><li>Vuignier, K., Veuthey, J. -. L., Carrupt, P. -. A., Schappler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Analytical+Strategy+to+Measure+Drug&#8211;Plasma+Protein+Interactions:+From+High-Throughput+to+In-Depth+Analysis.">Global Analytical Strategy to Measure Drug&#8211;Plasma Protein Interactions: From High-Throughput to In-Depth Analysis.</a> Drug Discov. Toda. 18, 1030-1034 (2013).</li><li>Zsila, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subdomain+Ib+Is+The+Third+Major+Drug+Binding+Region+of+Human+Serum+Albumin:+Toward+The+Three-Sites+Model.">Subdomain Ib Is The Third Major Drug Binding Region of Human Serum Albumin: Toward The Three-Sites Model.</a> Mol. Pharm. 10, 1668-1682 (2013).</li><li>Dalvit, C., Fagerness, P. E., Hadden, D. T. A., Sarver, R. W., Stockman, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorine-NMR+Experiments+for+High-Throughput+Screening:+Theoretical+Aspects,+Practical+Considerations,+and+Range+of+Applicability.">Fluorine-NMR Experiments for High-Throughput Screening: Theoretical Aspects, Practical Considerations, and Range of Applicability.</a> J. Am. Chem. Soc. 125, 7696-7703 (2003).</li><li>Ghuman, J., Zunszain, P. A., Petitpas, I., Bhattacharya, A. A., Otagiri, M., Curry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Structural Basis of the Drug-binding Specificity of Human Serum. 353, 38-52 (2005).</li><li>Mao, H., Hajduk, P. J., Craig, R., Bell, R., Borre, T., Fesik, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+Design+of+Diflunisal+Analogues+with+Reduced+Affinity+for+Human+Serum+Albumin.">Rational Design of Diflunisal Analogues with Reduced Affinity for Human Serum Albumin.</a> J. Am. Chem. Soc. 123, 10429-10435 (2001).</li><li>Dalvit, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Throughput+NMR-Based+Screening+with+Competition+Binding+Experiments.">High-Throughput NMR-Based Screening with Competition Binding Experiments.</a> J. Am. Chem. Soc. 124, 7702-7709 (2002).</li><li>Krenzel, E. S., Chen, Z., Hamilton, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correspondence+of+Fatty+Acid+and+Drug+Binding+Sites+on+Human+Serum+Albumin:+A+Two-Dimensional+Nuclear+Magnetic+Resonance+Study.">Correspondence of Fatty Acid and Drug Binding Sites on Human Serum Albumin: A Two-Dimensional Nuclear Magnetic Resonance Study.</a> Biochemistr. 52, 1559-1567 (2013).</li><li>Lee, Y., Zeng, H., Ruedisser, S., Gossert, A. D., Hilty, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+Magnetic+Resonance+of+Hyperpolarized+Fluorine+for+Characterization+of+Protein&#8211;Ligand+Interactions.">Nuclear Magnetic Resonance of Hyperpolarized Fluorine for Characterization of Protein&#8211;Ligand Interactions.</a> J. Am. Chem. Soc. 134, 17448-17451 (2012).</li><li>Salvi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boosting+the+Sensitivity+of+Ligand&#8211;Protein+Screening+by+NMR+of+Long-Lived+States.">Boosting the Sensitivity of Ligand&#8211;Protein Screening by NMR of Long-Lived States.</a> J. Am. Chem. Soc. 134, 11076-11079 (2012).</li><li>Zsila, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circular+Dichroism+Spectroscopic+Detection+of+Ligand+Binding+Induced+Subdomain+IB+Specific+Structural+Adjustment+of+Human+Serum+Albumin.">Circular Dichroism Spectroscopic Detection of Ligand Binding Induced Subdomain IB Specific Structural Adjustment of Human Serum Albumin.</a> J. Phys. Chem. 117, 10798-10806 (2013).</li><li>Navratilova, I., Hopkins, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fragment+Screening+by+Surface+Plasmon+Resonance.">Fragment Screening by Surface Plasmon Resonance.</a> ACS Med. Chem. Lett. 1, 44-48 (2010).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+Phase+SPR+Biosensor+for+Efficient+Targeted+Drug+Screening+with+High+Sensitivity+and+Stability.">Investigation of Phase SPR Biosensor for Efficient Targeted Drug Screening with High Sensitivity and Stability.</a> Sensor. Actuat. B-Che. 209, 313-322 (2015).</li><li>Lu, Y., Chen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sub-Nanometre+Sized+Metal+Clusters:+From+Synthetic+Challenges+to+The+Unique+Property+Discoveries.">Sub-Nanometre Sized Metal Clusters: From Synthetic Challenges to The Unique Property Discoveries.</a> Chem. Soc. Rev. 41, 3594-3623 (2012).</li><li>Yu, Y., Yao, Q., Luo, Z., Yuan, X., Lee, J. Y., Xie, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precursor+Engineering+and+Controlled+Conversion+for+The+Synthesis+of+Monodisperse+Thiolate-Protected+Metal+Nanoclusters.">Precursor Engineering and Controlled Conversion for The Synthesis of Monodisperse Thiolate-Protected Metal Nanoclusters.</a> Nanoscal. 5, 4606-4620 (2013).</li><li>Jin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantum+Sized,+Thiolate-Protected+Gold+Nanoclusters.">Quantum Sized, Thiolate-Protected Gold Nanoclusters.</a> Nanoscal. 2, 343-362 (2010).</li><li>Jiang, D. -. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Expanding+Universe+of+Thiolated+Gold+Nanoclusters+and+Beyond.">The Expanding Universe of Thiolated Gold Nanoclusters and Beyond.</a> Nanoscal. 5, 7149-7160 (2013).</li><li>Aikens, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electronic+Structure+of+Ligand-Passivated+Gold+and+Silver+Nanoclusters.">Electronic Structure of Ligand-Passivated Gold and Silver Nanoclusters.</a> J. Phys. Chem. Lett. 2, 99-104 (2010).</li><li>Gao, Y., Shao, N., Pei, Y., Chen, Z., Zeng, X. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catalytic+Activities+of+Subnanometer+Gold+Clusters+(Au16&#8211;Au18,+Au20,+and+Au27&#8211;Au35)+for+CO+Oxidation.+ACS.">Catalytic Activities of Subnanometer Gold Clusters (Au16&#8211;Au18, Au20, and Au27&#8211;Au35) for CO Oxidation. ACS.</a> ACS Nan. 5, 7818-7829 (2011).</li><li>Negishi, Y., Nobusada, K., Tsukuda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutathione-Protected+Gold+Clusters+Revisited:+Bridging+the+Gap+between+Gold(I)&#8722;Thiolate+Complexes+and+Thiolate-Protected+Gold+Nanocrystals.">Glutathione-Protected Gold Clusters Revisited: Bridging the Gap between Gold(I)&#8722;Thiolate Complexes and Thiolate-Protected Gold Nanocrystals.</a> J. Am. Chem. Soc. 127, 5261-5270 (2005).</li><li>Zhu, M., Aikens, C. M., Hollander, F. J., Schatz, G. C., Jin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlating+the+Crystal+Structure+of+A+Thiol-Protected+Au25+Cluster+and+Optical+Properties.">Correlating the Crystal Structure of A Thiol-Protected Au25 Cluster and Optical Properties.</a> J. Am. Chem. Soc. 130, 5883-5885 (2008).</li><li>Yu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+Highly+Luminescent+Au22(SG)18+Nanocluster.">Identification of a Highly Luminescent Au22(SG)18 Nanocluster.</a> J. Am. Chem. Soc. 136, 1246-1249 (2014).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidation+at+the+Core&#8211;Ligand+Interface+of+Au+Lipoic+Acid+Nanoclusters+That+Enhances+the+Near-IR+Luminescence.">Oxidation at the Core&#8211;Ligand Interface of Au Lipoic Acid Nanoclusters That Enhances the Near-IR Luminescence.</a> J. Phys. Chem. 118, 20680-20687 (2014).</li><li>Zhu, Y., Qian, H., Jin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Atomic-Level+Strategy+for+Unraveling+Gold+Nanocatalysis+from+the+Perspective+of+Aun(SR)m+Nanoclusters.">An Atomic-Level Strategy for Unraveling Gold Nanocatalysis from the Perspective of Aun(SR)m Nanoclusters.</a> Chem. Eur. J. 16, 11455-11462 (2010).</li><li>Niesen, B., Rand, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thin+Film+Metal+Nanocluster+Light-Emitting+Devices.">Thin Film Metal Nanocluster Light-Emitting Devices.</a> Adv. Mater. 26, 1446-1449 (2014).</li><li>Shang, L., Dong, S. J., Nienhaus, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-Small+Fluorescent+Metal+Nanoclusters:+Synthesis+and+Biological+Applications.">Ultra-Small Fluorescent Metal Nanoclusters: Synthesis and Biological Applications.</a> Nano Toda. 6, 401-418 (2011).</li><li>Wu, X., He, X., Wang, K., Xie, C., Zhou, B., Qing, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasmall+Near-Infrared+Gold+Nanoclusters+for+Tumor+Fluorescence+Imaging+in+Vivo.">Ultrasmall Near-Infrared Gold Nanoclusters for Tumor Fluorescence Imaging in Vivo.</a> Nanoscal. 2, 2244-2249 (2010).</li><li>Archana, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular-Receptor-Specific,+Non-Toxic,+Near-Infrared-Emitting+Au+Cluster-Protein+Nanoconjugates+for+Targeted+Cancer+Imaging.">Molecular-Receptor-Specific, Non-Toxic, Near-Infrared-Emitting Au Cluster-Protein Nanoconjugates for Targeted Cancer Imaging.</a> Nanotechnolog. 21, 055103 (2010).</li><li>Yue, Y., Liu, T. Y., Li, H. W., Liu, Z. Y., Wu, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microwave-Assisted+Synthesis+of+BSA-Protected+Small+Gold+Nanoclusters+and+Their+Fluorescence-Enhanced+Sensing+of+Silver(I)+Ions.">Microwave-Assisted Synthesis of BSA-Protected Small Gold Nanoclusters and Their Fluorescence-Enhanced Sensing of Silver(I) Ions.</a> Nanoscal. 4, 2251-2254 (2012).</li><li>Liu, Y., Ai, K., Cheng, X., Huo, L., Lu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+Nanocluster+Based+Fluorescent+Sensors+for+Highly+Sensitive+and+Selective+Detection+of+Cyanide+in+Water.">Gold Nanocluster Based Fluorescent Sensors for Highly Sensitive and Selective Detection of Cyanide in Water.</a> 20, 951-1907 (2010).</li><li>Liu, J., Yu, M., Zhou, C., Yang, S., Ning, X., Zheng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passive+Tumor+Targeting+of+Renal-Clearable+Luminescent+Gold+Nanoparticles:+Long+Tumor+Retention+and+Fast+Normal+Tissue+Clearance.">Passive Tumor Targeting of Renal-Clearable Luminescent Gold Nanoparticles: Long Tumor Retention and Fast Normal Tissue Clearance.</a> J. Am. Chem. Soc. 135, 4978-4981 (2013).</li><li>Negishi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+Loading+of+Small+Aun+Clusters+(n+=+10&#8211;39)+onto+BaLa4Ti4O15+Photocatalysts:+Toward+an+Understanding+of+Size+Effect+of+Co-Catalyst+on+Water+Splitting+Photocatalytic+Activity.">Controlled Loading of Small Aun Clusters (n = 10&#8211;39) onto BaLa4Ti4O15 Photocatalysts: Toward an Understanding of Size Effect of Co-Catalyst on Water Splitting Photocatalytic Activity.</a> J. Phys. Chem. C. , (2015).</li><li>Xie, J., Zheng, Y., Ying, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-Directed+Synthesis+of+Highly+Fluorescent+Gold+Nanoclusters.">Protein-Directed Synthesis of Highly Fluorescent Gold Nanoclusters.</a> J. Am. Chem. Soc. 131, 888-889 (2009).</li><li>Celej, M. S., Montich, G. G., Fidelio, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+Stability+Induced+by+Ligand+Binding+Correlates+with+Changes+in+Protein+Flexibility.">Protein Stability Induced by Ligand Binding Correlates with Changes in Protein Flexibility.</a> Protein Sci. 12, 1496-1506 (2003).</li><li>Layton, C. J., Hellinga, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermodynamic+Analysis+of+Ligand-Induced+Changes+in+Protein+Thermal+Unfolding+Applied+to+High-Throughput+Determination+of+Ligand+Affinities+with+Extrinsic+Fluorescent+Dyes.">Thermodynamic Analysis of Ligand-Induced Changes in Protein Thermal Unfolding Applied to High-Throughput Determination of Ligand Affinities with Extrinsic Fluorescent Dyes.</a> Biochemistr. 49, 10831-10841 (2010).</li><li>Yu, Y., New, S. Y., Xie, J., Su, X., Tan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-Based+Fluorescent+Metal+Nanoclusters+for+Small+Molecular+Drug+Screening.">Protein-Based Fluorescent Metal Nanoclusters for Small Molecular Drug Screening.</a> Chem. Commun. 50, 13805-13808 (2014).</li><li>Shortridge, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nuclear Magnetic Resonance Affinity Screening Methods for Functional Annotation of Proteins and Drug Discover. , (2010).</li></ol>

Il ya plusieurs étapes critiques qui doivent être mis en évidence dans cette méthode. Dans le protocole de criblage de l&#39;affinité de liaison relative des différents médicaments à petites moléculaires, les étapes 3.1.2, 3.1.3, 3.1.4 et sont essentiels pour obtenir de bons résultats montrant tendance constante pour la force relative de liaison. Dans ces étapes, les actions de l&#39;ajout de produits chimiques et de l&#39;élaboration de solutions de réaction pour la mesure doivent être aussi rapidement q...

Les albumines sériques telles que l&#39;albumine de sérum humain (HSA) et l&#39;albumine de sérum bovin (BSA) sont la protéine la plus abondante dans le plasma et jouent un rôle vital dans le maintien de la pression osmotique du compartiment sang. Ils sont également reconnus comme protéines porteuses pour les petites molécules de faible solubilité dans l&#39;eau, tels que les stéroïdes, les acides gras, les hormones thyroïdiennes, et une grande variété de médicaments. La propriété de liaison (par exemple, les sites de liaison, d&#39;affinité ou force de liaison) de ces molécules au sérum albumines forme un sujet important de la pharmacocinétique. 1-4 Plusieurs méthodes analytiques ont été développées pour étudier les propriétés de liaison de différents médicaments à la sérum albumine, comme cristallographie aux rayons X, 5,6 résonance magnétique nucléaire (RMN), 7-11 et la résonance plasmonique de surface (SPR), 12,13, etc. Cependant, ces méthodes sont limitées soit par un processus d&#39;analyse fastidieux et prend du temps (par exemple, la croissance de monocristal pour cristallographique aux rayons Xétude graphique), l&#39;exigence de l&#39;équipement spécialisé et coûteux (SPR), ou dans le besoin de marquage isotopique coûteuse (RMN) pour la détection. Il est donc hautement souhaitable de développer des moyens alternatifs pour les petites criblage moléculaire de la drogue d&#39;une manière rapide, straight-forward, et rentable. Nanoclusters de l&#39;or (Au ​​CN) sont un type spécial de nanomatériau qui contiennent plusieurs dizaines d&#39;atomes de métal avec des tailles inférieures à 2 nm. 14-17 Ils ont attiré de vastes intérêts de recherche en raison de leur structure électronique discrète et dépendant de la taille, 18, 19 et moléculaire, comme des absorptions et des émissions. 20-23 Ces propriétés des matériaux uniques, en particulier la fluorescence forte, ont trouvé diverses applications telles que la détection et l&#39;imagerie dans des systèmes biologiques. 24-32 Ultrasmall fluorescent Au CN peut être synthétisé en utilisant des protéines fonctionnelles, telles que les albumines sériques, comme matrice. 33 Dans une synthèse typique de protéine sur matrice de<html> Au CN, une certaine quantité de sels sont des Au premier encapsulé à l&#39;intérieur de la protéine et par la suite réduite de la protéine elle-même. Le pouvoir réducteur de la protéine constituant est attribuée à des résidus d&#39;acides aminés fonctionnels (par exemple, tyrosine) qui peuvent être activés en augmentant le pH de la solution à alcalin. Déroulement de la structure de protéine est considérée comme une étape critique pour la formation de Au CN. En effet, dans une protéine dépliée, plusieurs groupes fonctionnels réducteurs peuvent être exposés à l&#39;UA sels encapsulés. Dépliage de la protéine peut être obtenue par traitement thermique ou exposition à des agents dénaturants. Introduction de médicaments à petites moléculaires peut également affecter le processus de déroulement, à savoir la modification de la température de dénaturation milieu et l&#39;enthalpie de déroulement. 34,35 L&#39;effet de tous ces facteurs, à son tour, peut être réfléchie par la cinétique de formation de fluorescente Au CN et manifesté dans l&#39;intensité de fluorescence des résultantes Au CN. 36 e_content &quot;&gt; Cette vidéo montre le procédé de criblage de médicaments par synthèse Au CN en protéines d&#39;albumine médicament chargé à une température élevée (60 ° C) ou en présence d&#39;agents dénaturants (par exemple urée). L&#39;intensité de fluorescence de la résultante Au CN est la lecture du signal. Tout d&#39;abord, Au-CN sont synthétisés dans HSA et BSA modèles traités à 60 ° C ou en présence d&#39;urée pour montrer comment la protéine dépliage (induite par un traitement thermique ou dénaturants) affecte la cinétique de formation de Au CN. Deuxièmement, Au CN sont synthétisés dans les modèles de protéines préchargés avec différents médicaments, et l&#39;effet de chargement de médicament sur les intensités relatives de fluorescence de résultante Au CN est étudié, qui fournissent la mesure de la force relative de liaison. Enfin, le protocole de dépistage Au NC-médicament est modifiée pour la mesure quantitative de protéine-médicament constante de liaison (K D) en faisant varier la teneur en médicament préchargée dans la protéine d&#39;une concentration fixe.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Gold (III) chloride solution, 30%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>484385</td>
			<td>Corrosive, irritant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human serum albumin, 96%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A1887</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum albumin, 96%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ibuprofen, 98%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I4883&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>warfarin, 98%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenytoin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>PHR1139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sulphanilamide, 99%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>urea</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>U5128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>221465</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic stirrer</td>
			<td>IKA</td>
			<td>RT5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>Infinite M200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>384-well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL air displacement pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 mL air displacement pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mL air displacement pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5000 mL Eppendorf tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 mL Eppendorf tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mL Eppendorf tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL micro tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 mL glass vial with screw cap</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mL glass vial with screw cap</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rapid and quantitative fluorimetric method for protein-targeting small molecule drug screening

Nous démontrons une nouvelle méthode de criblage de médicaments pour la détermination de l&#39;affinité de liaison de petites molécules de médicament à une protéine cible par formation d&#39;nanoclusters fluorescentes d&#39;or (Au CN) au sein de la protéine de médicament chargé, sur la base du signal de fluorescence différentielle émis par le Au CN. Des protéines telles que l&#39;albumine de sérum albumine humaine (HSA) et l&#39;albumine de sérum bovin (BSA) sont sélectionnées comme les protéines du modèle. Quatre petits médicaments moléculaires (par exemple, l&#39;ibuprofène, la warfarine, la phénytoïne et sulfanilamides) de différentes affinités de liaison aux protéines d&#39;albumine sont testés. Il a été constaté que le taux de formation de fluorescence Au CN à l&#39;intérieur de la protéine d&#39;albumine de médicament chargée dans des conditions de dénaturation (par exemple, 60 ° C ou en présence d&#39;urée) est plus lente que celle formée dans la protéine intacte (sans médicament). En outre, l&#39;intensité de fluorescence du CN comme formé se trouve être inversement corrélée aux affinités de liaison de ces médicaments contre les protéines d&#39;albumine. En particulier,plus l&#39;affinité de liaison protéine-médicament, le ralentissement de la vitesse de formation Au CN, et donc une intensité de fluorescence inférieure de la résultante Au CN est observée. L&#39;intensité de fluorescence de la résultante Au CN fournit donc une mesure simple de la force de liaison relative des différents médicaments testés. Cette méthode est également extensible pour mesurer la constante de liaison spécifique médicament-protéine (K D) en faisant simplement varier la teneur en médicament préchargée dans la protéine à une concentration en protéine déterminée. Les résultats mesurés correspondent bien avec les valeurs obtenues en utilisant d&#39;autres méthodes de prestige, mais plus compliquées.

Dépliement des protéines est une procédure importante pour la formation de protéines templated Au CN parce que les groupes fonctionnels plus réactifs (par exemple, des résidus de tyrosine) d&#39;une protéine peuvent être exposés à réduire les ions Au encapsulés et donc accélérer le rythme de Au CN de formation. De chauffage et de dénaturation externe agents sont deux moyens communs pour promouvoir le processus de déroulement des protéines. La figure 1 montre l&#39;effet de la c...

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A Rapid and Quantitative Fluorimetric Method for Protein-Targeting Small Molecule Drug Screening

A protocol for small molecular drug screening based on in-situ synthesis of ultrasmall fluorescent gold nanoclusters (Au NCs) using drug-loaded protein as template is presented. This method is simple to determine the binding affinity of drugs to a target protein by a visible fluorescent signal emitted from the protein-templated Au NCs.

Un rapide et quantitative Méthode fluorimétrique pour Small Molecule dépistage du médicament protéique Ciblage

We demonstrate a new drug screening method for determining the binding affinity of small drug molecules to a target protein by forming fluorescent gold ...

Research

JoVE Journal

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