Name: bioluminescence imaging of an immunocompetent animal model for glioblastoma
Uploaded: 2016-01-15T14:00:00
Duration: 9 min 17 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bioluminescence Imaging of an Immunocompetent Animal Model for Glioblastoma at JoVE.com

We would like to thank Rajwant Kaur for technical assistance. We would like to thank Maxwell Tom for assistance with lentivirus preparation. This work was supported by the Reza and Georgianna Khatib Endowed Chair in Skull Base Tumor Surgery at UCSF, and the Michael J. Marchese Professor and Chair at Northwestern University.

<ol>
	<li>Clark, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosurgical+management+and+prognosis+of+patients+with+glioblastoma+that+progresses+during+bevacizumab+treatment.">Neurosurgical management and prognosis of patients with glioblastoma that progresses during bevacizumab treatment.</a> Neurosurgery. 70 (2), 361-370 (2012).</li><li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> N Engl J Med. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Grossman, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+of+patients+with+newly+diagnosed+glioblastoma+treated+with+radiation+and+temozolomide+in+research+studies+in+the+United+States.">Survival of patients with newly diagnosed glioblastoma treated with radiation and temozolomide in research studies in the United States.</a> Clin Cancer Res. 16 (8), 2443-2449 (2010).</li><li>Sughrue, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+considerations+of+modern+animal+models+of+malignant+primary+brain+tumors.">Immunological considerations of modern animal models of malignant primary brain tumors.</a> J Transl Med. 7 (84), (2009).</li><li>Ausman, J. I., Shapiro, W. R., Rall, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+chemotherapy+of+experimental+brain+tumors:+development+of+an+experimental+model.">Studies on the chemotherapy of experimental brain tumors: development of an experimental model.</a> Cancer Res. 30 (9), 2394-2400 (1970).</li><li>Zagzag, D., Zhong, H., Scalzitti, J. M., Laughner, E., Simons, J. W., Semenza, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+hypoxia-inducible+factor+1alpha+in+brain+tumors:+association+with+angiogenesis,+invasion,+and+progression.">Expression of hypoxia-inducible factor 1alpha in brain tumors: association with angiogenesis, invasion, and progression.</a> Cancer. 88 (11), 2606-2618 (2000).</li><li>Cha, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic,+contrast-enhanced+perfusion+MRI+in+mouse+gliomas:+correlation+with+histopathology.">Dynamic, contrast-enhanced perfusion MRI in mouse gliomas: correlation with histopathology.</a> Magn Reson Med. 49 (5), 848-855 (2003).</li><li>Ksendzovsky, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+immunosuppressive+mechanisms+in+a+mouse+glioma+model.">Investigation of immunosuppressive mechanisms in a mouse glioma model.</a> J Neurooncol. 93 (1), 107-114 (2009).</li><li>Biollaz, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Site-specific+anti-tumor+immunity:+differences+in+DC+function,+TGF-beta+production+and+numbers+of+intratumoral+Foxp3++Treg.">Site-specific anti-tumor immunity: differences in DC function, TGF-beta production and numbers of intratumoral Foxp3+ Treg.</a> Eur J Immunol. 39 (5), 1323-1333 (2009).</li><li>El Andaloussi, A., Han, Y., Lesniak, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolongation+of+survival+following+depletion+of+CD4+++CD25++regulatory+T+cells+in+mice+with+experimental+brain+tumors.">Prolongation of survival following depletion of CD4 + CD25+ regulatory T cells in mice with experimental brain tumors.</a> J Neurosurg. 105 (3), 430-437 (2006).</li><li>Dinca, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+Monitoring+of+Intracranial+Glioblastoma+Xenograft+Response+to+Primary+and+Salvage+Temozolomide+Therapy.">Bioluminescence Monitoring of Intracranial Glioblastoma Xenograft Response to Primary and Salvage Temozolomide Therapy.</a> J. Neurosurg. 107 (3), 610-616 (2007).</li><li>Kaplan, E. L., Meier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-parametric+estimation+from+incomplete+observations.">Non-parametric estimation from incomplete observations.</a> J. Am. Stat. Assoc. 53, 457-481 (1958).</li><li>Peto, R., Peto, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymptotically+efficient+rank+invariant+procedures.">Asymptotically efficient rank invariant procedures.</a> J. R. Stat. Soc. Ser. A. Stat. Soc. 135, 185207 (1972).</li><li>Armitage, P., Berry, G., Matthews, J. N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Statistical Methods in Medical Research. , (2001).</li><li>Newcomb, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+combination+of+ionizing+radiation+and+peripheral+vaccination+produces+long-term+survival+of+mice+bearing+established+invasive+GL261+gliomas.">The combination of ionizing radiation and peripheral vaccination produces long-term survival of mice bearing established invasive GL261 gliomas.</a> Clin Cancer Res. 12 (15), 4730-4737 (2006).</li><li>Pellegatta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurospheres+enriched+in+cancer+stem-like+cells+are+highly+effective+in+eliciting+a+dendritic+cell-mediated+immune+response+against+malignant+gliomas.">Neurospheres enriched in cancer stem-like cells are highly effective in eliciting a dendritic cell-mediated immune response against malignant gliomas.</a> Cancer Res. 66 (21), 10247-10252 (2006).</li><li>Clark, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+luciferase+expression+does+not+alter+immunologic+or+in+vivo+growth+properties+of+GL261+murine+glioma+cells.">Stable luciferase expression does not alter immunologic or in vivo growth properties of GL261 murine glioma cells.</a> J Transl Med. 12, 345-34 (2014).</li><li>Abdelwahab, M. G., Sankar, T., Preul, M. C., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+implantation+with+subsequent+3D+in+vivo+bioluminescent+imaging+of+murine+gliomas.">Intracranial implantation with subsequent 3D in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas.</a> J Vis Exp. (57), e3403 (2011).</li><li>Ozawa, T., James, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+intracranial+brain+tumor+xenografts+with+subsequent+analysis+of+tumor+growth+and+response+to+therapy+using+bioluminescence+imaging.">Establishing intracranial brain tumor xenografts with subsequent analysis of tumor growth and response to therapy using bioluminescence imaging.</a> J Vis Exp. (41), (2010).</li><li>Baumann, B. C., Dorsey, J. F., Benci, J. L., Joh, D. Y., Kao, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereotactic+intracranial+implantation+and+in+vivo+bioluminescent+imaging+of+tumor+xenografts+in+a+mouse+model+system+of+glioblastoma+multiforme.">Stereotactic intracranial implantation and in vivo bioluminescent imaging of tumor xenografts in a mouse model system of glioblastoma multiforme.</a> J Vis Exp. (67), (2012).</li></ol>

There are no conflicts of interest to disclose.

GL261 мышиный Клетки глиомы, при имплантации в сингенных интракраниально иммунокомпетентных мышей C57BL / 6, имеют несколько преимуществ по сравнению с моделями ксенотрансплантата человека животных глиомы. Многие из ксенотрансплантированной опухолей растут в виде инкапсулированных повреждений, которые точно не повторять инвазивный болезни человека. В отличие от этого, опухоли GL261 не только демонстрирует вторжение в соседнее мозга, но и образование новых сосудов, митотических фигур, и глубокое некроза 7. Наиболее важно при изучении иммунологии опухоли или иммунотерапевтических стратегии 15, 16, C57BL / 6 мыши сохраняет нетронутыми иммунной системы 8. Предыдущие исследования показали, надежную экспрессию цитокинов иммуносупрессивной TGF-бета и внутричерепные опухоли содержат иммуносупрессивных Т-регуляторные клетки, похожие на человека глиобластомы 9, 10. Простой метод, описанный здесь позволяет стабильной экспрессии люциферазы по GL261 клеток. Мы недавно сообщили СимиLAR в пробирке и в естественных условиях роста клеток GL261.luc сравнению с GL261 клеток, в дополнение к аналогичным характеристикам опухоли гистологических и иммунной клетки проникают 17. GL261.luc клетки, стабильно выразить люциферазы, который катализирует окисление субстрата люциферин преобразования химической энергии в фотоны и, следовательно, детектируемого света. Люциферин можно безопасно вводить животным и пересекает гематоэнцефалический барьер после внутрибрюшинного или внутривенного введения. В небольших лабораторных животных, таких как мыши, биолюминесценции могут быть обнаружены снаружи в неинвазивным способом 11. Таким образом, рост опухоли может быть оценена последовательно без необходимости принесения в жертву животных или дорогостоящего МРТ или КТ. Критические шаги в протоколе включать, не только Lentiviral трансдукции, но и проверку стабильной экспрессии люциферазы в пробирке до начала каких-либо естественных условиях в эксперименты. Потеря трансдукции может requiRe повторного лентивирусом инфекции. Введение гена резистентности к антибиотику в вектор экспрессии также могут быть использованы для отбора экспрессии люциферазы. Тщательное техники требуется для внутричерепного имплантации воспроизводимо место последовательное число клеток в точном анатомической локализации, чтобы позволить сравнение различных группах лечения. Основное различие между текущей и исследования предыдущих исследований люциферазы экспрессирующих клеток GL261 является использование свободного техники рук для имплантации клеток по сравнению с использованием стереотаксической рамки 18. Ранее мы показали стабильные результаты имплантации свободной технике ручной 19. Преимущество свободной технике ручной является возможность выполнить высокую пропускную способность анализ различных агентов обработки. В наших руках, мы можем имплантировать около 60 животных в 1 ч. После овладения техникой, будущие приложения в технике безграничны. Как GL261 demonstrАтеш повышенные митозы и быстрый рост опухоли похожи на человека глиобластомы, анти-пролиферативные лечения могут быть оценены. Аналогично, анти-инвазивные и антиангиогенные терапии могут быть использованы в качестве GL261 опухоли инвазивных и ангиогенных. С осторожностью следует применять при оценке влияния химиотерапевтических агентов, направленных на человека целей. По сравнению с предыдущими исследованиями с использованием глиобластомы человека, выражающие ксенотрансплантаты люциферазы 20, это будет рассматриваться как ограничение нашей модели. Кроме того, эффект иммунотерапии стратегий роста опухоли могут быть изучены в ксенотрансплантированной модели GL261.

Malignant glioma is the most common and most lethal human brain tumor. Even when treated with maximal surgical resection, radiotherapy, and chemotherapy, median survival remains 15-20 months at major brain tumor referral centers1, 2, 3. The most aggressive form of malignant glioma, glioblastoma, is characterized by mitotic figures, neovascularization, invasion into adjacent brain, and pseudopalisading necrosis. Orthotopic brain tumor xenografts using human brain tumor cells have served an essential function in neuro-oncology research and facilitated pre-clinical translation for testing of new agents, prior to entry into human clinical trials. Whereas most of human xenograft models recapitulate many features of the human disease, a fundamental limitation with all human-based xenograft model systems is the use of immunodeficient animals4. 
The absence of an intact host response clearly modifies tumor growth both in terms of tumor morphology, and efficiency of engraftment. While certain assumptions are acceptable in the interpretation of results from xenografted models, achieving relevant conclusions in the area of therapeutic assessment is a challenge. Certain fundamental biologic features are likely to be similar in immunodeficient and immunocompetent animals, but others such as tumor associated inflammation, tissue invasion, response to injury are probably very different. In contrast, GL261 is a chemically induced murine glioma cell line that accurately recapitulates glioma when implanted into the brains of immunocompetent syngeneic C57BL/6 mice5. Similar to the human disease, intracranial tumor growth rapidly and reproducibly leads to neurologic symptoms and animal demise6-10. 
Subcutaneous tumor growth can be directly measured. Intracranial tumor growth can only be measured with animal sacrifice or with costly imaging studies. Stable expression of the enzyme luciferase allows non-invasive and cost-effective intracranial bioluminescence imaging11. Bioluminescence of luciferase transfected GL261 cells correlates well with intracranial tumor growth. We have recently directly compared GL261 to luciferase modified GL261 cells and demonstrated no difference in in vitro growth and invasion, immunologic cytokine profile, in vivo survival of intracranial tumor bearing C57BL/6 mice, or immune cell infiltrate. This technique is applicable to glioblastoma preclinical studies which involve non-invasive monitoring of tumor growth.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="818">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">D-Luciferin, Potassium Salt</td>
			<td style="width:153px;">Gold Biotechonology</td>
			<td style="width:119px;">LUCK-100</td>
			<td style="width:167px;">Store away from light</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Living Image Software</td>
			<td style="width:153px;">Caliper Life Sciences</td>
			<td style="width:119px;">Contact for Quote</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Xenogen Lumina</td>
			<td style="width:153px;">Caliper Life Sciences</td>
			<td style="width:119px;">Contact for Quote</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">24-well; Standard tissue culture; flat-bottom</td>
			<td style="width:153px;">Falcon</td>
			<td>353047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">CellTiter 96&#174; AQueous One Solution Cell Proliferation Assay&#160;</td>
			<td style="width:153px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">G3582</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Synergy 2 Multi-Mode Reader</td>
			<td style="width:153px;">BioTek</td>
			<td style="width:119px;">Contact for Quote</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:379px;">96 well Assay Plate, Black Plate, Clear bottom with Lid, Tissue culture Tretaed</td>
			<td style="width:153px;">Coster</td>
			<td style="width:119px;">3603</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Ketaset</td>
			<td style="width:153px;">Pfizer</td>
			<td style="width:119px;">NDC 0856-2013-01</td>
			<td>Control substance</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Xylazine</td>
			<td style="width:153px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">23076-35-9</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">28G Needle (with syringe)&#160;</td>
			<td style="width:153px;">Fisher&#160;&#160;</td>
			<td style="width:119px;">22-004-270</td>
			<td>AKA Insulin Syringe</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">2% Chlorhexidine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC9756995</td>
			<td>AKA &#8220;Nolvasan&#8221;</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">3% Hydrogen Peroxide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:119px;">H312P-4</td>
			<td>Store away from light</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Ophthalmic Ointment</td>
			<td style="width:153px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:119px;">1272830</td>
			<td style="width:167px;">AKA &#8220;Akwa Tears&#8221;</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">25G 1 1/2 needle</td>
			<td style="width:153px;">BD Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">305127</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Disposable Scalpels</td>
			<td>Feather</td>
			<td style="width:119px;">2975</td>
			<td style="width:167px;">No. 21</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Gauze</td>
			<td style="width:153px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">22028563</td>
			<td style="width:167px;">Autoclave before use</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Heating Pad</td>
			<td style="width:153px;">Dunlap</td>
			<td style="width:119px;">HP950</td>
			<td style="width:167px;">none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Skin Stapler, Staples, Remover</td>
			<td style="width:153px;">Stoelting</td>
			<td style="width:119px;">59020</td>
			<td style="width:167px;">none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">PDI Alchol Prep Pads</td>
			<td style="width:153px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">23-501-711</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Reflex 7mm Wound Clips 100 pack</td>
			<td style="width:153px;">Brain Tree Scientific, INC</td>
			<td style="width:119px;">203 1000</td>
			<td style="width:167px;">Autoclave before use</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Reflex 7mm Wound Clip Applier</td>
			<td style="width:153px;">Brain Tree Scientific, INC</td>
			<td style="width:119px;">204 1000</td>
			<td style="width:167px;">Autoclave before use</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Reflex 7mm Wound Clip Remover</td>
			<td style="width:153px;">Brain Tree Scientific, INC</td>
			<td>205 1000</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Single Ended Round Tip Swab with Wood handle</td>
			<td style="width:153px;">Qosmedix</td>
			<td style="width:119px;">10107</td>
			<td style="width:167px;">Autoclave before use</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Hanks&#39; Balanced Salt Solution without Ca2+ and Mg2+ (HBSS)</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">14170-112</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Hamilton Syringe</td>
			<td style="width:153px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">80300</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">FuGENE 6 Transfection Reagent</td>
			<td style="width:153px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E2961</td>
			<td>none</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:379px;">Bone Wax</td>
			<td style="width:153px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">599864</td>
			<td>none</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bioluminescence imaging of an immunocompetent animal model for glioblastoma

In contrast to commonly reported human glioma xenograft animal models, GL261 murine glioma xenografts recapitulate nearly all relevant clinical and histopathologic features of the human disease. When GL261 cells are implanted intracranially in syngeneic C57BL/6 mice, the model has the added advantage of maintaining an intact immune microenvironment. Stable expression of luciferase in GL261 cells allows non-invasive cost effective bioluminescence monitoring of intracranial tumor growth. We have recently demonstrated that luciferase expression in GL261 cells does not affect the tumor growth properties, tumor cell immunomodulatory cytokine expression, infiltration of immune cells into the tumor, or overall survival of animals bearing the intracranial tumor. Therefore, it appears that the GL261 luciferase glioma model can be useful in the study of novel chemotherapeutic and immunotherapeutic modalities. Here we report the technique for generating stable luciferase expression in GL261 cells and how to study the in vitro and in vivo growth of the tumor cells by bioluminescence imaging.

GL261 клетки были инфицированы люциферазы, содержащей лентивирус, как описано выше в шагах 1. В пробирке биолюминесценции изображений демонстрирует сильную экспрессию люциферазы, похожий на уровнях положительного контроля U87.luc линии клеток глиобластомы человека (рис 1). Как и ожидалось, неинфицированных клеток GL261 не демонстрируют выражение фон люциферазы. Этот шаг является простой, но решающее значение для выполнения до дальнейших исследований с использованием зараженного клеточную линию, чтобы подтвердить стабильную экспрессию люциферазы. Люциферазы выражение после внутричерепного имплантации. Перед внутричерепного имплантации, мы не выявили никакой разницы в пробирке темпов роста по сравнению с GL261.luc GL261 клеток (рисунок 2). Для внутричерепного роста и анализа выживаемости клетки вводили в брAINS из мышей C57BL / 6 согласно протоколу Шаг 3. Рост опухоли у мышей, несущих опухоли GL261.luc серийно анализировали изображений биолюминесценции использованием протокола шаг 4 и продемонстрировали обнаруживаемого роста опухоли (фиг.3А). Мыши быстро и последовательно, несущие опухоли GL261.luc стал умирающий и умерщвляли. Важно отметить, что нет никакой разницы в общей выживаемости между GL261.luc и GL261 животных с опухолью (фиг.3В). Поэтому в естественных условиях биолюминесценции изображений может быть использован для мониторинга ответа на экспериментальных процедур глиобластомы. Быстрое надежное рост опухоли и короткий общей выживаемости может дать большие объемы данных в относительно короткий промежуток времени. <img alt="Рисунок 1" src="/files/ftp_upload/53287/53287fig1.jpg" /> Рисунок 1. Активность люциферазы в клетках GL261.luc. U87.luc, GL261.luc и GL261 (отрицательный контроль) клетки высевали при плотности1.0 х 10 6, 5,0 х 10 5 2,5 х 10 5 1,0 х 10 5 5,0 х 10 4 и 2,5 х 10 4 клеток / лунку слева направо. Люминесценция (фотон / сек / SR / см 2) была измерена с помощью изображений Lumina станции. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53287/53287fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a> <img alt="фигура 2" src="/files/ftp_upload/53287/53287fig2.jpg" /> Рисунок 2. Выражение люциферазы не влияет пролиферацию клеток GL261. GL261.luc клетки не вызывают Разница в пролиферации, как показано на МТС клеточной пролиферации. График показывает кратное увеличение, по отношению к 1 день, а определяется путем сравнения среднее значение оптической плотности (среднее ± SEM) в момент времени thespecified к среднему значению в 1 день (неспаренных значения Т для -test сравнениймежду каждой клеточной линии: Р = 0,7796) 14. Усы представляют собой средние значения (среднее ± SEM) от четырех экземплярах образцов на каждый день. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53287/53287fig2large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a> <img alt="Рисунок 3" src="/files/ftp_upload/53287/53287fig3.jpg" /> Рисунок 3. Выражение люциферазы дозы не влияет на в естественных условиях роста опухоли и выживания животного. (А) контроль Биолюминесценция демонстрирует поступательный рост внутричерепного опухоли GL261.luc в C57BL / 6 мышей. (Б) анализ выживаемости Каплана-Мейера не демонстрирует никакой разницы в общей выживаемости для мышей, имплантированных интракраниально либо с GL261 (сплошная линия) или GL261.luc клеток (пунктир).Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Watch this Scientific Journal Video about Bioluminescence Imaging of an Immunocompetent Animal Model for Glioblastoma at JoVE.com

Bioluminescence Imaging of an Immunocompetent Animal Model for Glioblastoma

GL261 glioma cells provide a useful immunocompetent animal model of glioblastoma. The goals of this protocol are to demonstrate proper techniques for monitoring intracranial tumor growth using in vivo bioluminescence imaging, and to verify the utility of luciferase-modified GL261 cells for studying tumor immunology and immunotherapeutic approaches for treating glioblastoma.

Биолюминесценция изображений из иммунокомпетентных животной модели для глиобластомы

In contrast to commonly reported human glioma xenograft animal models, GL261 murine glioma xenografts recapitulate nearly all relevant clinical and ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Monitoring Tumor Metastases and Osteolytic Lesions with Bioluminescence and Micro CT Imaging

Мониторинг опухоли Метастазы и остеолитические Поражения с биолюминесценции и микро-КТ

Following intracardiac delivery of MDA-MB-231-luc-D3H2LN cells to Nu/Nu mice, systemic metastases developed in the injected animals. Bioluminescence ...

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

В естественных условиях Биолюминесценция изображения опухоли Гипоксия Динамика груди метастазы рака мозга у мышей

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Биомаркеры в животной модели для выявления нервных, гематологических, и поведенческие корреляты посттравматического стрессового расстройства

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Использование животных Модель Сепсис для оценки Роман травяной терапии

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Стереотаксическая имплантация и внутричерепных<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Bioluminescent Визуализация опухолевых ксенотрансплантатов в системе мышиной модели глиобластомы

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

Ортотопическая Глиобластома мышь Модель Поддержание Мозг паренхимы физических ограничений и подходит для прижизненной Двухфотонное микроскопии

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

An Isolated Working Heart System for Large Animal Models

Изолированная система работы сердца для крупных животных моделях

Since its introduction in the late 19th century, the Langendorff isolated heart perfusion apparatus, and the subsequent development of the working heart ...

Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging

Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging

Candida Albicans биопленки развития на медицинской актуальных инородных тел в мышиной подкожной модели с последующим биолюминесценции изображений

Candida albicans biofilm development on biotic and/or abiotic surfaces represents a specific threat for hospitalized patients. So far, C. albicans ...

Bioluminescence and Near-infrared Imaging of Optic Neuritis and Brain Inflammation in the EAE Model of Multiple Sclerosis in Mice

Биолюминесценции и ближней инфракрасной области визуализации неврита зрительного нерва и мозга Воспаление в EAE модели рассеянного склероза у мышей

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in SJL/J mice is a model for relapsing-remitting multiple sclerosis (RRMS). Clinical EAE scores describing ...

A Chronic Cardiac Ischemia Model in Swine Using an Ameroid Constrictor

Хроническая сердечная ишемия модель в свиней, с помощью Ameroid удав

Cardiovascular disease remains the number one cause of mortality in the United States. There are numerous approaches to treating these diseases, but ...