Name: an endothelial planar cell model for imaging immunological synapse dynamics
Uploaded: 2015-12-24T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Endothelial Planar Cell Model for Imaging Immunological Synapse Dynamics at JoVE.com

We thank Dr. Peter T. Sage for his assistance in generating some of the representative images. This work was supported by an NIH R01 grant to C.V.C. (HL104006).

इस प्रोटोकॉल में वर्णित सभी प्रयोगों प्राथमिक मानव टी कोशिकाओं और व्यावसायिक रूप से उपलब्ध प्राथमिक मानव endothelial कोशिकाओं मानव विषयों को शामिल (चमड़े या फेफड़ों microvascular ईसीएस) .Any अनुसंधान प्रोटोकॉल एक संस्थागत सम...

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	<li>von Andrian, U. H., Mackay, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+function+and+migration.+Two+sides+of+the+same+coin.">T-cell function and migration. Two sides of the same coin.</a> N. Engl. J. Med. 343 (14), 1020-1034 (2000).</li><li>Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesion+receptors+of+the+immune+system.">Adhesion receptors of the immune system.</a> Nature. 346 (6283), 425-434 (1990).</li><li>Shaw, A. S., Dustin, M. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+effector+memory+CD4++T+cells+directly+recognize+allogeneic+endothelial+cells+in+vitro+and+in+vivo.">Human effector memory CD4+ T cells directly recognize allogeneic endothelial cells in vitro and in vivo.</a> J Immunol. 179 (7), 4397-4404 (2007).</li><li>Marelli-Berg, F. M., Okkenhaug, K., Mirenda, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+two-signal+model+for+T+cell+trafficking.">A two-signal model for T cell trafficking.</a> Trends Immunol. 28 (6), 267-273 (2007).</li><li>Carman, C. 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कुल मिलाकर, इस प्रोटोकॉल मैं) understudied शारीरिक APCs के रूप में endothelial कोशिकाओं की जांच के लिए विधियों का वर्णन और ii) &#39;तलीय सेलुलर एपीसी मॉडल&#39; का एक उपन्यास प्रकार के रूप में। पूर्व करने के लिए सम्मान के साथ, यह ते...

टी lymphocytes प्रमुख उतक अनुरूपता जटिल (एमएचसी) के लिए बाध्य कुशलता पेप्टाइड प्रतिजन (एजी) को पहचानने की क्षमता की विशेषता अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली की एक शाखा है उनकी टी सेल रिसेप्टर्स (TCRs) 1 के माध्यम से अणुओं। भोले लिम्फोसाइट अनिवार्यता से विस्थापित और &#39;पेशेवर एजी कोशिकाओं पेश&#39; (APCs, जैसे, वृक्ष के समान कोशिकाओं) स्कैन स्मृति / प्रेरक टी कोशिकाओं को प्रभावी ढंग से परिधीय ऊतकों के भीतर APCs और संभावित लक्ष्य कोशिकाओं की एक अत्यंत व्यापक रेंज सर्वेक्षण करने के लिए जरूरत है, जबकि लिम्फ नोड्स के भीतर। एक एपीसी पर आत्मीय एजी की प्रारंभिक पहचान निम्नलिखित मिनट में, उनके पलायन को गिरफ्तार करने और एक विशेष अंतरंग सेल सेल इंटरफेस में कहा &#39;प्रतिरक्षात्मक अन्तर्ग्रथन&#39; के रूप में शुरू लिम्फोसाइटों (है)। निरंतर (यानी, 30-60 मिनट) संपर्क बढ़ाना और 2-7 संकेत बनाए रखने के लिए आवश्यक हैं। उभरते पढ़ाई के भीतर, यह निरंतर गठन और तेजी R है कि पहचानताकत और प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया 2-7 जिसके परिणामस्वरूप की गुणवत्ता निर्धारित है कि (यानी, एमएचसी / एजी-TCR, एफ actin, आसंजन और संकेतन अणुओं से युक्त) असतत उप सेलुलर संकेत सूक्ष्म समूहों के emodeling। हालांकि, इस प्रक्रिया के गतिशील विवरण और नियामक तंत्र अधूरे 8,9 समझ रहे हैं। यह गहराई से अपेक्षित spatiotemporal इमेजिंग कि सीमा एपीसी सतहों की अनियमित टोपोलॉजी और सेल सेल बातचीत के विमानों के खराब नियंत्रित अभिविन्यास, मुद्दों के साथ जुड़े तकनीकी चुनौतियों से काफी हद तक उपजी 8-10 (Figure1A) दृष्टिकोण। <img alt="आकृति 1" src="/files/ftp_upload/53288/53288fig1.jpg" /> इमेजिंग रोग प्रतिरक्षण Synapse गतिशीलता के लिए चित्रा 1. एक शारीरिक Planar सेल एपीसी मॉडल। योजनाबद्ध एक टी सेल और एक professio के बीच प्रतिरक्षा अन्तर्ग्रथन के पारंपरिक इमेजिंग दिखाता है<html> एनएएल एपीसी (ए) और टी सेल और इस उपन्यास एन्दोथेलिअल तलीय एपीसी मॉडल (सी) की तुलना में एक पारंपरिक तलीय लिपिड bilayer एपीसी मॉडल (बी)। , नाटकीय रूप से यानी स्थानिक (जेड इमेजिंग विमान संकल्प ~ 1 माइक्रोन) और लौकिक (समझौता, जो व्यावसायिक APCs शारीरिक रोग प्रतिरोधक synapses प्रदान करते हैं लेकिन (संकल्प ~ 0.2 माइक्रोन इष्टतम XY इमेजिंग विमान के लिए सम्मान के साथ यानी,) खराब उन्मुख सेल सेल इंटरफेस की पेशकश जरूरत की वजह से बार-बार इमेजिंग का संकल्प) सभी Z इमेजिंग विमानों के माध्यम से स्कैन करने के लिए। Bilayer मॉडल इष्टतम spatiotemporal इमेजिंग संकल्प प्रदान करता है कि एक तलीय टोपोलॉजी है, लेकिन यह भी अत्यधिक, गैर शारीरिक और कठोर सरल कर रहे हैं। इस endothelial सेल मॉडल एक शारीरिक सेटिंग में इष्टतम स्थानिक और लौकिक इमेजिंग संकल्प वितरित करने के लिए एक क्लासिक एपीसी की शारीरिक सब्सट्रेट के साथ लिपिड bilayers के तलीय टोपोलॉजी को जोड़ती है।एम / फ़ाइलें / ftp_upload / 53,288 / 53288fig1large.jpg &quot;लक्ष्य =&quot; _blank &quot;&gt; यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें। पिछला काम आंशिक रूप से इष्टतम XY इमेजिंग के समानांतर है कि एक भी योजना में टी सेल सक्रियण सतह फिक्सिंग के माध्यम से, यानी इष्टतम spatiotemporal संकल्प (प्रदान करते हैं कि विकासशील तलीय सब्सट्रेट मॉडल (यानी, लिपिड bilayers और एंटीबॉडी लेपित सतहों) द्वारा इन बाधाओं को धोखा दिया गया है विमान) 11-15 (चित्रा 1 बी)। इन मॉडलों को गतिशील actin / TCR संकेत सूक्ष्म समूहों 7,11-14 की खोज सहित टी कोशिकाओं में प्रतिजनी संकेतन, कि नियंत्रण आणविक / subcellular गतिशीलता में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि में मदद की है। हालांकि, इस तरह के मॉडल स्वाभाविक oversimplified कर रहे हैं, साथ ही कठोर (चित्रा 1 बी) (3-आयामी topological सुविधाओं के विकास / अध्ययन precluding)। इसलिए, यह बनावट के लिए इस तरह के निष्कर्ष बताते हैं कि संबंधित करने के लिए कैसे अनिश्चित बनी हुई हैsiologic सेल सेल प्रतिरक्षा निगरानी। अभी भी understudied हालांकि, नाड़ी और लसीका endothelial कोशिकाओं के एक बड़े रूप में उभर रहे हैं (यानी, ~ 1,000 गुना से सभी पेशेवर APCs से संख्या में अधिक से अधिक) &#39;अर्द्ध पेशेवर&#39; APCs 16-18 के परिधीय डिब्बे। (जैसे, CD40, LFA3, ICOSL, 4-1BB, OX40L, TL1A, पीडी-एल 1, लेकिन नहीं CD80 और CD86) इन कोशिकाओं MHC-मैं-, एमएचसी-द्वितीय और सह उत्तेजक अणुओं की एक भीड़ को व्यक्त करने और रणनीतिक रूप से कर रहे हैं वे विशेष प्रहरी कार्यों 16-18 की सेवा जहां खून-ऊतक इंटरफेस में तैनात हैं। पिछले अध्ययनों endothelial कोशिकाओं को प्रभावी ढंग से प्रेरक / स्मृति, लेकिन भोले नहीं, टी कोशिकाओं 19-25 फिर से उत्तेजित कर सकते हैं कि प्रदर्शन किया। इस प्रकार, endothelial कोशिकाओं ऐसी टी सेल सक्रियण, भेदभाव, स्मृति और सहिष्णुता 16,17,26 पर स्थानीय प्रभाव के रूप में परिधीय ऊतकों के भीतर अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के प्रेरक चरण में अद्वितीय एपीसी भूमिकाओं खेलने की संभावना है। CRIइन विट्रो में हो गई जब tically, endothelial कोशिकाओं लगभग तलीय सेल रूप और सतहों (फ्लोरोसेंट प्रोटीन पत्रकारों के साथ, उदाहरण के लिए) आसानी transfectable हैं। इन सुविधाओं सेल सेल बातचीत 19,27 दौरान topological गतिशीलता के उच्च spatiotemporal संकल्प इमेजिंग के लिए आदर्श होते हैं। इस प्रकार endothelial कोशिकाओं प्रतिक्रियाओं (चित्रा 1 सी) 19,20 प्रतिजन मान्यता ड्राइव और विनियमित कि आणविक / subcellular पुनर्गठन तंत्र के अध्ययन के लिए साफ़ तौर पर अनुकूल एक शारीरिक &#39;तलीय सेलुलर एपीसी&#39; मॉडल के रूप में काम कर सकता है। इससे पहले आसंजन और transendothelial पलायन 27 के दौरान ल्युकोसैट endothelial बातचीत का ब्यौरा अध्ययन के लिए (प्लाज्मा झिल्ली और साइटोसॉल के फ्लोरोसेंट प्रोटीन निर्माताओं के साथ endothelia कोशिकाओं के अभिकर्मक सहित) पूरक इमेजिंग तकनीक की स्थापना की, ल्यूकोसाइट्स सक्रिय रूप से गतिशील द्वारा अन्तःचूचुक की सतह की जांच से पता चला कि प्रविष्टि एकउप माइक्रोन पैमाने पर की घ त्याग, actin युक्त बेलनाकार उभार (~ व्यास और गहराई में 200-1,000 एनएम) invadosome की तरह उभार (यानी, &#39;ILPS&#39;) 27,28 करार दिया। इन इमेजिंग दृष्टिकोण आगे सूचना 19,20 के रूप में टी सेल endothelial रोग प्रतिरोधक अन्तर्ग्रथन के उच्च spatiotemporal संकल्प इमेजिंग के लिए पहले तरीकों को विकसित करने के लिए एन्दोथेलिअल एपीसी समारोह का लाभ लेने के लिए और आगे इस के साथ साथ वर्णन करने के लिए प्रोटोकॉल के निर्माण के साथ-साथ विस्तारित किया गया है। इस उपन्यास तलीय सेलुलर एपीसी मॉडल से ली गई एक केंद्रीय निष्कर्ष टी सेल ILPS प्रारंभिक एजी का पता लगाने को बढ़ावा देने में और बाद में सिगनल को बनाए रखने में दोनों कार्य करते हैं। दरअसल, (स्थिर है और कैल्शियम प्रवाह प्रारंभिक प्रतिक्रिया में एकत्रित हुई) TCR और सक्रिय संकेतन ऐसे पीकेसी-क्यू, जैप -70, phosphotyrosine और HS1 के विचारोत्तेजक अणुओं में शो संवर्धन कई ILPS की सरणियों। इसलिए, ILPS TCR-संकेत सूक्ष्म करने के लिए एक तीन आयामी शारीरिक बराबर का प्रतिनिधित्व करने लगते हैंतलीय बाईलेयर मॉडल में देखा समूहों। यह दृष्टिकोण, इस प्रकार, संवेदनशीलता का पता चलता है / रिपोर्ट आणविक और वास्तु (और biomechanical गर्भित) गतिशीलता अन्यथा पता लगाने योग्य नहीं। इस के साथ साथ वर्णित विधि अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के बुनियादी तंत्र से पूछताछ करने की हमारी क्षमता को बढ़ाने के क्रम में पेशेवर एपीसी और कृत्रिम एपीसी सब्सट्रेट मॉडलों के बीच के अंतर को पूरा करने के लिए उपयोगी होना चाहिए। यहाँ ध्यान सीडी 4 + Th1 प्रकार प्रेरक / स्मृति सेल की सक्रियता पर है जबकि नीचे चर्चा के रूप में, इस बुनियादी दृष्टिकोण को आसानी से, टी सेल प्रकार और AGS की एक विस्तृत श्रृंखला का अध्ययन करने के लिए संशोधित किया जा सकता है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="914">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">BD Vacutainer stretch latex free tourniquet</td>
			<td style="width:149px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:152px;">367203</td>
			<td style="width:221px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BD alcohol swabs</td>
			<td style="width:149px;">BD Biosciences</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BD Vacutainer Safety-Lok</td>
			<td style="width:149px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:152px;">367861</td>
			<td>K2 EDTA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">BD Vacutainer Push Button Blood Collection Set</td>
			<td style="width:149px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:152px;">367335</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">RPMI-1640</td>
			<td style="width:149px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8758-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ficoll-Paque&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:152px;">GE17-1440-02</td>
			<td>Bring to RT before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">FCS-Optima</td>
			<td style="width:149px;">Atlanta Biologics</td>
			<td>s12450</td>
			<td>Heat inactivated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin-Streptomycin&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>&#160;P4458-100ML&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypan blue</td>
			<td style="width:149px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8154-20ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">staphylococcal enterotoxin B&#160;</td>
			<td>Toxin Technology</td>
			<td>BT202RED</td>
			<td>Stock solution 1mg/ml in PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">toxic shock syndrome toxin 1&#160;</td>
			<td>Toxin Technology</td>
			<td>TT606RED</td>
			<td>Stock solution 1mg/ml in PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">human IL-15</td>
			<td style="width:149px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>247-IL-025</td>
			<td>Stock solution 50ug/ml in PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">PBS</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10010-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:392px;">Fibronectin</td>
			<td style="width:149px;">Life Technologies</td>
			<td>33016-015</td>
			<td>Stock solution 1mg/ml in H20</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HMVEC-d Ad-Dermal MV Endo Cells</td>
			<td style="width:149px;">Lonza</td>
			<td>CC-2543</td>
			<td>Other Human Microvascular ECs can be used, i.e. HLMVECs</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EGM-2 MV bullet kit</td>
			<td style="width:149px;">Lonza</td>
			<td>CC-3202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">Trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:149px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>T-4174</td>
			<td>Stock solution 10x, dilute in PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">amaxa-HMVEC-L Nucleofector Kit</td>
			<td style="width:149px;">Lonza</td>
			<td>vpb1003</td>
			<td>Required Kit for step 4</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:392px;">IFN-g</td>
			<td style="width:149px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>I3265</td>
			<td>Stock solution 1mg/ml in H20</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;">TNF-alpha 10ug, human</td>
			<td style="width:149px;">Life Technologies</td>
			<td>PHC3015</td>
			<td>Stock solution 1mg/ml in H20</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">phenol Red-free HBSS&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Life Technologies</td>
			<td>14175-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hepes</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Scientific</td>
			<td>BP299-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:392px;">Calcium Chloride</td>
			<td style="width:149px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:152px;">C1016-100G</td>
			<td>Stock solution 1M in H20</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:392px;">Magnesium chloride</td>
			<td style="width:149px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:152px;">208337</td>
			<td>Stock solution 1M in H20</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">Human Serum albumin</td>
			<td style="width:149px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6909-10ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immersol 518 F fluorescence free Immersion oil</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Scientific</td>
			<td>12-624-66A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fura-2 AM 20x50ug</td>
			<td style="width:149px;">Life Technologies</td>
			<td>F1221</td>
			<td>Stock solution 1mM in DMSO</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">pEYFP-Mem (Mem-YFP)</td>
			<td style="width:149px;">Clontech</td>
			<td style="width:152px;">6917-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">pDsRed-Monomer (Soluble Cytoplasmic DsRed)</td>
			<td style="width:149px;">Clontech</td>
			<td style="width:152px;">632466</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">pDsRed-Monomer Membrane (Mem-DsRed)</td>
			<td style="width:149px;">Clontech</td>
			<td style="width:152px;">632512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">pEGFP-Actin</td>
			<td style="width:149px;">Clontech</td>
			<td style="width:152px;">6116-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">Alexa Fluor 488 Phalloidin</td>
			<td style="width:149px;">Life Technologies</td>
			<td>A12379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">Formaldehyde solution 37%</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Scientific</td>
			<td>BP531-500</td>
			<td>Toxic, use fumehood</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:149px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:152px;">X100-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">&#160;Falcon 15mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-70C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">Falcon 50mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-49A&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">Falcon Tissue Culture Treated Flasks T25</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Scientific</td>
			<td>10-126-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">&#160;Falcon Tissue Culture Treated Flasks T75</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Scientific</td>
			<td>&#160; 13-680-65</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">&#160;Corning Cell Culture Treated T175</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:152px;">10-126-61&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">Glass coverslips&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:152px;">12-545-85&#160;</td>
			<td>12 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">&#160;Falcon Tissue Culture Plates 24-well</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">Delta-T plates</td>
			<td style="width:149px;">Bioptechs</td>
			<td>04200415B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Wheaton Disposable Pasteur Pipets</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:152px;">13-678-8D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.5 ml Eppendorf tube&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Scientific</td>
			<td>05-402-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">&#160;ICAM1 mouse anti-human</td>
			<td style="width:149px;">BD Biosciences</td>
			<td>555509</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HS1 mouse anti-human</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>610541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-Human CD11a (LFA-1alpha) Purified</td>
			<td>ebioscience</td>
			<td>BMS102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-Human CD3 Alexa Fluor&#174; 488</td>
			<td>ebioscience</td>
			<td>53-0037-41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-MHC Class II antibody&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Abcam</td>
			<td>ab55152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-Talin 1 antibody</td>
			<td style="width:149px;">Abcam</td>
			<td>ab71333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">Anti-PKC theta antibody&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Abcam</td>
			<td>ab109481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">phosphotyrosine (4G10 Platinum)</td>
			<td style="width:149px;">Millipore</td>
			<td>50-171-463</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">Nucleofector II</td>
			<td style="width:149px;">Amaxa Biosystems</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td>Required electroporator for step 4</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:392px;">Zeiss Axiovert</td>
			<td style="width:149px;">Carl Zeiss MicroImaging</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:392px;">Zeiss LSM510&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Carl Zeiss MicroImaging</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:392px;">Zeiss Axiovison Software</td>
			<td style="width:149px;">Carl Zeiss MicroImaging</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">NU-425 (Series 60) Biological Safety Cabinet</td>
			<td style="width:149px;">NuAIRE</td>
			<td style="width:152px;">Nu-425-600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:392px;">&#160;Forma STRCYCLE 37 &#176;C, 5% CO2 Cell culture Incubator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>202370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">Centrifuge 5810</td>
			<td style="width:149px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:152px;">EW-02570-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">Hemocytometer</td>
			<td style="width:149px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:152px;">&#160;Z359629</td>
			<td>Bright-Line Hemocytometer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:392px;">Isotemp Waterbath model 202</td>
			<td style="width:149px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:152px;">15-462-2</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an endothelial planar cell model for imaging immunological synapse dynamics

प्रतिरक्षा अनुकूली टी कोशिकाओं और प्रतिजन कोशिकाओं (&#39;APCs&#39;) के बीच गतिशील बातचीत द्वारा विनियमित &#39;प्रतिरक्षाविज्ञानी synapses&#39; के रूप में जाना जाता है। इन अंतरंग सेल सेल इंटरफेस के भीतर एमएचसी / एजी-TCR, एफ actin, आसंजन के असतत उप सेलुलर समूहों और संकेतन अणुओं के रूप में और तेजी से फिर से तैयार करना। ये गतिशीलता महत्वपूर्ण दक्षता और विकास है कि प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की गुणवत्ता दोनों के निर्धारकों और इसलिए वैकृत उन्मुक्ति बनाम सुरक्षा का माना जाता है। शारीरिक APCs साथ प्रतिरक्षाविज्ञानी synapses के वर्तमान समझ प्राप्य इमेजिंग संकल्प की अपर्याप्तता द्वारा सीमित है। कृत्रिम सब्सट्रेट मॉडल (जैसे, तलीय लिपिड bilayers) उत्कृष्ट संकल्प प्रस्ताव है और बेहद कीमती उपकरण किया गया है, वे स्वाभाविक गैर-शारीरिक और oversimplified हैं। संवहनी और लसीका endothelial कोशिकाओं &#39;अर्द्ध पेशे का एक महत्वपूर्ण परिधीय ऊतक (या स्ट्रोमल) डिब्बे के रूप में उभरा हैअल APCs &#39;। (पेशेवर APCs के आणविक मशीनरी के अधिकांश एक्सप्रेस), जो इन APCs लगभग तलीय कोशिका की सतह के गठन की अनूठी विशेषता है और (फ्लोरोसेंट प्रोटीन पत्रकारों के साथ, उदाहरण के लिए) आसानी transfectable हैं। इस के साथ साथ एक बुनियादी दृष्टिकोण वर्णित किया जाएगा एक उपन्यास और बेहतर इमेजिंग और मौलिक प्रतिजनी संकेतन प्रक्रियाओं की पूछताछ के लिए शारीरिक &#39;तलीय सेलुलर एपीसी मॉडल&#39; के रूप में endothelial कोशिकाओं को लागू करने के लिए।

Endothelial कोशिकाओं का प्रयोग और शारीरिक जटिलता और पेशेवर APCs के विरूपता के साथ तलीय लिपिड bilayers मॉडल का संकल्प लाभ के संयोजन एक उपन्यास इमेजिंग दृष्टिकोण (चित्रा 1) विकसित किया गया था। 2 ?...

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An Endothelial Planar Cell Model for Imaging Immunological Synapse Dynamics

Adaptive immunity is controlled by dynamic 'immunological synapses' formed between T cells and antigen presenting cells. This protocol describes methods for investigating endothelial cells both as understudied physiologic APCs and as a novel type of 'planar cellular APC model'.

इमेजिंग रोग प्रतिरक्षण Synapse गतिशीलता के लिए एक endothelial Planar सेल मॉडल

Adaptive immunity is regulated by dynamic interactions between T cells and antigen presenting cells (&#39;APCs&#39;) referred to as &#39;immunological ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

गतिशील लाइव सेल इमेजिंग के लिए मेजबान पैथोजन सहभागिता के अध्ययन के लिए एक ऑप्टिकल जाल का प्रयोग करें

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and ...

Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

के इमेजिंग एचआईवी -1 लिफाफा प्रेरित virological Synapse और सिंथेटिक लिपिड bilayers पर संकेतन

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

Visualization of the Immunological Synapse by Dual Color Time-gated Stimulated Emission Depletion (STED) Nanoscopy

Visualization of the Immunological Synapse by Dual Color Time-gated Stimulated Emission Depletion STED Nanoscopy

दोहरी रंग समय gated प्रेरित उत्सर्जन रिक्तीकरण (STED) nanoscopy द्वारा रोग प्रतिरक्षण Synapse के दृश्य

Natural killer cells form tightly regulated, finely tuned immunological synapses (IS) in order to lyse virally infected or tumorigenic cells. Dynamic ...

Real-time Imaging of Endothelial Cell-cell Junctions During Neutrophil Transmigration Under Physiological Flow

न्युट्रोफिल स्थानांतरगमन के तहत शारीरिक प्रवाह के दौरान Endothelial सेल सेल जंक्शनों के वास्तविक समय इमेजिंग

During inflammation, leukocytes leave the circulation and cross the endothelium to fight invading pathogens in underlying tissues. This process is known ...

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

एक<em&gt; पूर्व vivo</em&gt; तीव्र मस्तिष्क स्लाइस में एक Oligodendrocyte का निर्देशन टी-सेल हमले के मॉडल

Death of oligodendrocytes accompanied by destruction of neurons and axons are typical histopathological findings in cortical and subcortical grey matter ...

Super-resolution Imaging of the Natural Killer Cell Immunological Synapse on a Glass-supported Planar Lipid Bilayer

एक गिलास समर्थित प्लानर लिपिड bilayer पर प्राकृतिक हत्यारा सेल रोग प्रतिरक्षण अन्तर्ग्रथन की सुपर संकल्प इमेजिंग

The glass-supported planar lipid bilayer system has been utilized in a variety of disciplines. One of the most useful applications of this technique has ...

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

एक<em&gt; इन विट्रो</em&gt; रक्त मस्तिष्क बाधा मुक़ाबला स्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग कर के आदर्श: टी सेल endothelial सेल बातचीत पर ध्यान देने के

Breakdown of the blood-brain barrier (BBB) is a critical step in the development of autoimmune diseases such as multiple sclerosis (MS) and its animal ...

Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens

बैक्टीरियल रोगजनकों के खिलाफ Immunological प्रतिक्रियाओं का आकलन करने के लिए Opsonophagocytic हत्या परख

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental ...

Studying Organelle Dynamics in B Cells During Immune Synapse Formation

प्रतिरक्षा Synapse गठन के दौरान बी कोशिकाओं में Organelle गतिशीलता का अध्ययन

Recognition of surface-tethered antigens&#160;by the B cell receptor (BCR)&#160;triggers the formation of an immune synapse (IS), where both ...

Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice

एथिमिक चूहों में मानव प्लीर मेसोथेलियोमा के ऑर्थोटोपिक मॉडल के पीईटी/सीटी द्वारा प्रत्यारोपण और निगरानी

Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare and aggressive tumor arising in the mesothelium that covers the lungs, the heart, and the thoracic cavity. ...