Name: intracerebroventricular injection of amyloid-&#946; peptides in normal mice to acutely induce alzheimer-like cognitive deficits
Uploaded: 2016-03-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracerebroventricular Injection of Amyloid-ÃŽÂ² Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits at JoVE.com

Diese Forschung wurde unterstützt durch einen Zuschuss des Korea Health Technology R &amp; D-Projekt durch die Korea Health Industry Development Institute (Khidi) unterstützt, gefördert durch das Ministerium für Gesundheit und Soziales, Republik Korea (Grant-Nummer: H14C04660000).

Alle Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit den National Institutes of Health Guide für die Pflege und Verwendung von Labortieren (NIH Publications No. 8023, überarbeitet 1978) und mit dem Animal Care und Use Committee des Institutional Animal Care und Use Committee durchgeführt von KIST (Seoul, Korea). 1. Vorbereitung der Tiere <ol><li> Bereiten Sie eine Gruppe von 7-Wochen alte männliche ICR-Mäuse (oder C57BL / 6). </li><li> Lassen Sie die Mäuse für 3-7 Tage nach dem Transport einer Eingewöhnung...

<ol>
	<li>Kam, T. I., Gwon, Y., Jung, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid+beta+receptors+responsible+for+neurotoxicity+and+cellular+defects+in+Alzheimer's+disease.">Amyloid beta receptors responsible for neurotoxicity and cellular defects in Alzheimer's disease.</a> Cell Mol Life Sci. 71, 4803-4813 (2014).</li><li>Elder, G. A., Gama Sosa, M. A., De Gasperi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mouse+models+of+Alzheimer's+disease.">Transgenic mouse models of Alzheimer's disease.</a> Mt Sinai J Med. 77, 69-81 (2010).</li><li>Bryan, K. J., Lee, H., Perry, G., Smith, M. A., Casadesus, G., Buccafusco, J. 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P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memantine+rescues+transient+cognitive+impairment+caused+by+high-molecular-weight+abeta+oligomers+but+not+the+persistent+impairment+induced+by+low-molecular-weight+oligomers.">Memantine rescues transient cognitive impairment caused by high-molecular-weight abeta oligomers but not the persistent impairment induced by low-molecular-weight oligomers.</a> J Neurosci. 33, 9626-9634 (2013).</li><li>Haley, T. J., McCormick, W. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlations+of+amyloid-beta+concentrations+between+CSF+and+plasma+in+acute+Alzheimer+mouse+model.">Correlations of amyloid-beta concentrations between CSF and plasma in acute Alzheimer mouse model.</a> Sci Rep. 4, 6777 (2014).</li></ol>

Der wichtigste Schritt in diesem Protokoll ist das ICV-Injektion von Aß. Dieses Protokoll wurde entwickelt , Aß in den ICV - Region von Mäusen ohne stereotaktischen Instrumente 11,12 einzuspritzen. Bevor ein Experiment starten, eine vorläufige Zeit der Praxis Injektionen mit einem blauen Farbstoff anstelle von Aß stattfinden sollte ausreichend Geschicklichkeit zu erreichen. Unmittelbar nach der Injektion, ist es notwendig, ob das Pigment Injektion zu prüfen, wurde ordnungsgemäß durchgeführt. Vorsicht...

Gegeben ist, dass Amyloid-β (Aß) ein pathologisches Merkmal der Alzheimer-Krankheit (AD) ist die Entwicklung von AD Tiermodellen auf neuronale Überexpression von Aß konzentriert. Da Mutationen in Amyloid - Vorläuferprotein (APP) oder Presenilin (PS) , um Störungen des Aß Gleichgewicht führen und letztlich zu der Pathogenese von familiärer AD 1, Maus - Modellen beteiligt APP oder PS - Gen - Mutationen im Allgemeinen angenommen wurden. Zu der breiten Palette von transgenen Mäusen, sind prototypische Mausmodellen die folgenden: TG2576, PDAPP, APP / PS1 und APP23. Im Gehirn zeigen diese Mäuse im allgemeinen Aß Aggregation und schließlich senile Plaques; Plaquebildung wird durch signifikante kognitive Beeinträchtigungen so vor, dass sie eine schlechte Leistung in Verhaltenstests von Lernen und Gedächtnis zeigen. Die Erzeugung von transgenen Mäusen, die natürlich menschliche AD Pathologie nachahmen hat damit zu AD Forschungsgesellschaft bei, indem es uns ermöglicht, den Verlauf der di zu überwachenSease. Jedoch ist transgenen Mäusen unter Verwendung unwirtschaftlich und zeitraubend , weil es Monate für die Mäuse nimmt Aß - Plaques zu entwickeln und sogar länger 2,3 Aß-induzierten synaptischen Abnormalitäten oder Verhaltensstörungen zeigen. Ursprünglich als Alternative entwickelt, die Mängel von transgenen Mausmodellen zu überwinden, nicht-transgene Modelle auch sind häufig aufgrund ihrer klaren Vorteile eingesetzt. Pathogen-induzierte AD Modelle können durch die direkte Injektion von A &amp; bgr; in das Gehirn erzeugt werden, während AD-ähnliche kognitive Defizite können auch durch andere chemische und physikalische Mittel-wie die Injektion von neurotoxischen Verbindungen wie Scopolamin, der Induktion von Läsionen ausgelöst werden in der Erkenntnis relevanten Bereichen wie dem Hippocampus oder durch Rindenschäden 4. Allerdings ist die nicht-pathogene Induktion der kognitiven Beeinträchtigung nicht genau die grundlegenden Pathophysiologie von AD reflektieren; sondern es ahmt nur die symptomatische Ergebnisse. Im Gegensatz dazu ist ein pathogen-induzierte AD-Modell, die A46; -injected Maus-Modell kann nicht nur AD-ähnliche Verhaltensauffälligkeiten zeigen, sondern auch Aß Pathologie aufweisen kann, das gemeinsame Merkmal von familiären und sporadischen AD geteilt. Trotz der Schwierigkeit Aß-Plaques im Gehirngewebe zu visualisieren, der größte Vorteil des Aß-injizierten Modell, das es attraktiv für AD Untersuchung macht, ist ihre Steuerbarkeit. Die Forscher können die individuellen Unterschiede in Mausmodellen auszusondern, die zu fehlerhaften Daten in der Drogen Studien führen kann. Die rechtzeitige medikamentöse Behandlung ist auf den Mechanismus des Kandidaten Droge aktiviert abhängig; zu erarbeiten, kann ein Inhibitor der Aß Aggregation vor der Injektion von A &amp; bgr; angewendet werden. Zusätzlich können Forscher gehen davon aus, dass die pathogene Transformation, die nach der Injektion Aß entsteht aus dem Aß Belichtungs abgeleitet ist, weil die anderen Faktoren streng kontrolliert werden, einschließlich der individuellen Unterschiede. In diesem Protokoll wird eine anschauliche Beschreibung von how einen AD-ähnlichen Phänotyp bei normalen Mäusen über Aß intracerebroventricular (ICV) Injektion ohne stereotaktischen Instrumente zu induzieren vorgestellt. einschub provozierten Schäden an Hirngewebe zu minimieren ist unerlässlich, um die Möglichkeit der strukturellen Schädigung und Läsion induzierten Entzündung zu verhindern. Ein Mangel an Fähigkeiten in der Maus Handhabung führt zu unerwarteten neuronalen Verletzungen. Weiterhin Techniken, die die entsprechenden Winkel und Tiefe ermöglichen, während der Injektion erreicht werden, sind besonders wichtig, häufige Fehler zu umgehen. Zusätzlich zu einer detaillierten, klare Erläuterung der ICV-Injektion, die Zuverlässigkeit des Modells durch das folgende Protokoll hergestellt wird auch in den folgenden Abschnitten dargestellt. Das folgende Protokoll könnte eine zuverlässige und leicht verständlich Werkzeug sein, das zu AD Forschung beiträgt, wodurch ein Sprungbrett bieten, die letztlich zu einer sinnvollen Entdeckung für AD Gesellschaft führen könnte.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1106">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:300px;">ICR mouse</td>
			<td style="width:155px;">Orientbio</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:532px;">male, 6~8 weeks, 27~29 g of body weight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">C57BL/6 mouse</td>
			<td>Orientbio</td>
			<td></td>
			<td>male, 6~8 weeks, 21~23 g of body weight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amyloid-beta1-42</td>
			<td>in house synthesis</td>
			<td>n.a.</td>
			<td>stock concentration: 1 mM/DMSO, injected concentration: 100 &#956;M/10% DMSO and 90% PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ICV injection syringe (26s gauge)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Evans blue dye (EBD)</td>
			<td>abcamBIochemicals</td>
			<td>ab120869</td>
			<td>1 % EBD in PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMSO</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS</td>
			<td>gibco</td>
			<td>10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gradi-GelTM II Gradient PAGE Analysis Kit</td>
			<td>ELPiS Biotech</td>
			<td>EBS-1056</td>
			<td>15% Gel</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Precision Plus ProteinTM Dual Xtra Standards</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0377</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silver-Staining Kit</td>
			<td>GE-Healthcare</td>
			<td>17-1150-01</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intracerebroventricular injection of amyloid-&#946; peptides in normal mice to acutely induce alzheimer-like cognitive deficits

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, progressive accumulation of A&#946; oligomers and plaques is observed. Such A&#946; abnormalities are believed to block long-term potentiation, impair synaptic function, and induce cognitive deficits. Clinical and experimental evidences have revealed that the acute increase of A&#946; levels in the brain allows development of Alzheimer-like phenotypes. Hence, a detailed protocol describing how to acutely generate an AD mouse model via the intracerebroventricular (ICV) injection of A&#946; is necessary in many cases. In this protocol, the steps of the experiment with an A&#946;-injected mouse are included, from the preparation of peptides to the testing of behavioral abnormalities. The process of preparing the tools and animal subjects before the injection, of injecting the A&#946; into the mouse brain via ICV injection, and of assessing the degree of cognitive impairment are easily explained throughout the protocol, with an emphasis on tips for effective ICV injection of A&#946;. By mimicking certain aspects of AD with a designated injection of A&#946;, researchers can bypass the aging process and focus on the downstream pathology of A&#946; abnormalities.

Dieser Abschnitt veranschaulicht Beispiele der Ergebnisse, die durch Bestätigung von Aß Aggregation und Y-maze Bewertung der Gedächtnisdefizite erhalten werden kann. Verwendung des Volllängen - A &amp; bgr; (1-42) Peptid von 42 Aminosäuren, eine Mischung von Aß Monomeren, Oligomeren und Fibrillen (3) hergestellt. Durch die HFIP-induzierten Monomerisierung Schritt relativ homogenen Monomere (Spur B) erhalten. Nach der 7-tägigen Inkubation entwickelt diverse Größe...

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Intracerebroventricular Injection of Amyloid-ÃƒÅ½Ã‚Â² Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Die Amyloid-β (Aß) -injected Tiermodell die Verabreichung einer definierten Menge und Arten von Aß-Fragmente ermöglicht und reduziert individuelle Unterschiede innerhalb der einzelnen Studiengruppe. Dieses Protokoll beschreibt die intracerebroventricular (ICV) Injektion von A &amp; bgr; ohne stereotaktischen Instrumente, die Produktion von Alzheimer-ähnliche Verhaltensstörungen in normalen Mäusen ermöglichen.

Intracerebroventricular Injektion von Amyloid-β-Peptide in normalen Mäusen zu Akut Induce Alzheimer-ähnliche kognitive Defizite

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-&#946; Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

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Intracerebroventricular Viral Injektion der Neonatal Maus Gehirn für anhaltenden und verbreiteten Neuronale Transduction

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

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