Name: evaluation of lung metastasis in mouse mammary tumor models by quantitative real-time pcr
Uploaded: 2016-01-29T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR at JoVE.com

ये प्रयोगशाला एक अमेरिकन कैंसर सोसायटी संस्थागत अनुसंधान अनुदान (IRG-97-219-14) एक रक्षा विभाग के अनुदान से अनुसंधान के वित्तपोषण के द्वारा, MUSC पर Hollings कैंसर केंद्र के लिए सम्मानित किया (W81XWH-11-2- से अनुसंधान के वित्तपोषण के द्वारा समर्थित है 0229) MUSC पर, और चिंता (ESY करने के लिए) फाउंडेशन से एक पुरस्कार से।

प्रोटोकॉल के दिशा-निर्देशों और दक्षिण कैरोलिना (MUSC) और उसके संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति के चिकित्सा विश्वविद्यालय (IACUC) के जानवरों की देखभाल के मानकों का पालन करती। 1. फेफड़े विच्छेदन <ol><li> स्?...

<ol>
	<li>Gupta, G. P., Massague, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+metastasis:+building+a+framework.">Cancer metastasis: building a framework.</a> Cell. 127 (4), 679-695 (2006).</li><li>Bos, P. D., Nguyen, D. X., Massague, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+metastasis+in+the+mouse.">Modeling metastasis in the mouse.</a> Curr Opin Pharmacol. 10 (5), 571-577 (2010).</li><li>Kim, I. S., Baek, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+breast+cancer+metastasis.">Mouse models for breast cancer metastasis.</a> Biochem Biophys Res Commun. 394 (3), 443-447 (2010).</li><li>Saxena, M., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rebuilding+cancer+metastasis+in+the+mouse.">Rebuilding cancer metastasis in the mouse.</a> Mol Oncol. 7 (2), 283-296 (2013).</li><li>Yang, S., Zhang, J. J., Huang, X. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+tumor+metastasis.">Mouse models for tumor metastasis.</a> Methods Mol Biol. 928, 221-228 (2012).</li><li>Rampetsreiter, P., Casanova, E., Eferl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+modified+mouse+models+of+cancer+invasion+and+metastasis.">Genetically modified mouse models of cancer invasion and metastasis.</a> Drug Discov Today Dis Models. 8 (2-3), 67-74 (2011).</li><li>Condeelis, J., Segall, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+imaging+of+cell+movement+in+tumours.">Intravital imaging of cell movement in tumours.</a> Nat Rev Cancer. 3 (12), 921-930 (2003).</li><li>Massoud, T. F., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+imaging+in+living+subjects:+seeing+fundamental+biological+processes+in+a+new+light.">Molecular imaging in living subjects: seeing fundamental biological processes in a new light.</a> Genes Dev. 17 (5), 545-580 (2003).</li><li>Zinn, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+bioluminescence+imaging+in+small+animals.">Noninvasive bioluminescence imaging in small animals.</a> ILAR J. 49 (1), 103-115 (2008).</li><li>Tseng, J. C., Kung, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+bioluminescence+imaging+of+mouse+tumor+models.">Quantitative bioluminescence imaging of mouse tumor models.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2015 (1), (2015).</li><li>Radonic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guideline+to+reference+gene+selection+for+quantitative+real-time+PCR.">Guideline to reference gene selection for quantitative real-time PCR.</a> Biochem Biophys Res Commun. 313 (4), 856-862 (2004).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल एक जेनोग्राफ्ट माउस मॉडल का उपयोग फेफड़ों को स्तन ट्यूमर सेल मेटास्टेसिस का मूल्यांकन करने के लिए क्यूआरटी पीसीआर के उपयोग का वर्णन। यह bioluminescent इमेजिंग सहित अन्य तकनीकों, उपलब्ध हैं, और यह ...

क्यूआरटी पीसीआर विश्लेषण ट्यूमर मेटास्टेसिस का आकलन करने के लिए एक विधि के रूप में प्रस्तावित किया गया है। इस विधि मेटास्टेसिस का मूल्यांकन करने में रुचि रखते हैं, लेकिन इस तरह के vivo इमेजिंग उपकरण या एक प्रतिदीप्ति सक्षम त्रिविमदर्शी के रूप में विशिष्ट उपकरणों के लिए उपयोग नहीं हो सकता है कि उपयोगकर्ताओं के लिए एक विकल्प के रूप में प्रस्तावित किया गया है। आमतौर पर इस्तेमाल किया तरीकों की चर्चा क्यूआरटी पीसीआर विश्लेषण एक अलग रूप में या मेटास्टेसिस का मूल्यांकन करने के लिए एक साथी की विधि के रूप में भी इस्तेमाल किया जा सकता है कि कैसे के लिए एक प्रदर्शन के बाद प्रस्तुत किया है। यह प्रक्रिया मेटास्टेटिक बोझ का एक मात्रात्मक विश्लेषण प्रदान करने की क्षमता है। एक stereomicroscope के तहत फेफड़ों के दृश्य के साथ ही hematoxylin और eosin द्वारा पीछा धारावाहिक सेक्शनिंग सहित सकल विश्लेषण का मानक तरीकों, फेफड़े के ऊतकों की (एच एंड ई) धुंधला, मात्रात्मक हैं, लेकिन 2-5 की गिनती के लिए उपयोगकर्ता परिभाषित मानकों पर काफी भरोसा है। एक stereomicroscope का उपयोग पूरे फेफड़ों का मूल्यांकन, केवल बड़े सतह मेटास्टेसिस visi हैंble और विश्लेषण एक मेटास्टेटिक घाव का गठन निर्धारित करने के लिए फेफड़ों शारीरिक संरचना का उचित ज्ञान है अन्वेषक की आवश्यकता है। ऐसे GFP और उचित / उत्तेजना उत्सर्जन Maxima (GFP के लिए उदाहरण के पास 470/510 एनएम) के साथ एक प्रकाश घन होता है कि एक stereomicroscope के उपयोग के रूप में एक मार्कर के साथ ट्यूमर कोशिकाओं के फ्लोरोसेंट लेबलिंग इस प्रक्रिया में सहायता करता है, लेकिन केवल सतह ट्यूमर पिंड का पता लगता है । इसके अतिरिक्त, GFP के रूप में एक ही मापदंड के तहत दिखाई दे रहा है, जो रक्त संदूषण से प्रतिदीप्ति, संभव मेटास्टेटिक घावों की झूठी पहचान करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं। फेफड़ों मेटास्टेसिस कल्पना करने के लिए एच एंड ई धुंधला द्वारा पीछा फेफड़ों की सेक्शनिंग micrometastases और प्रतिरक्षा सेल घुसपैठ सहित अन्य सूक्ष्म प्रक्रियाओं का मूल्यांकन करने के लिए एक उपयोगी तरीका है, लेकिन अक्सर आयल एम्बेड, सेक्शनिंग, और धुंधला प्रक्रियाओं के लिए पूरे फेफड़े के ऊतकों के उपयोग की आवश्यकता है। इसलिए, नीचे की ओर प्रक्रियाओं इस metho निम्नलिखित आदर्श नहीं हैंघ। Quantifiable हालांकि, इस प्रक्रिया के विश्लेषण के फेफड़ों की पूरी 3D संरचना के लिए खातों कि यह सुनिश्चित करने के लिए पशु प्रति दाग फेफड़ों वर्गों की एक बड़ी संख्या का मूल्यांकन करने के अन्वेषक की आवश्यकता है। नतीजतन, परीक्षा की इस प्रकार की त्रुटि की गिनती करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं, समय लेने वाली है, और विश्लेषण अन्वेषक विवेक पर निर्भर करता है। (एमआरआई, पीईटी, SPECT उदाहरण के लिए) वर्तमान में प्रदर्शन या प्रयोगात्मक कृंतक मॉडल 8 में जैविक प्रक्रियाओं का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं vivo इमेजिंग तकनीक में कई। में विवो bioluminescent इमेजिंग मेटास्टेसिस 9 की सकल दृश्य प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल एक आम तरीका है। इस तकनीक को आम तौर पर होने के कारण ट्यूमर सेल आरोपण के बाद स्तन ग्रंथि और सहज मेटास्टेसिस पर फेफड़ों की तरह विशिष्ट अंगों में रहते हैं कि एक luciferase प्रतिक्रिया तत्व शामिल करने के लिए इंजीनियर हैं जो ट्यूमर कोशिकाओं, के संचय के लिए luciferase संवाददाता गतिविधि की उपस्थिति का मूल्यांकन करने के लिए लागू किया जाता है 1Luciferase संवाददाता गतिविधि के 0। विज़ुअलाइज़ेशन luciferin सब्सट्रेट (डी luciferin) की उपस्थिति से प्रेरित है। Luciferase bioluminescence पैदा oxyluciferin करने के लिए डी luciferin की ऑक्सीडेटिव डिकार्बोजाइलेशन उत्प्रेरित। सूचनात्मक, वहीं इस विधि सब्सट्रेट स्थिरता (यानी कम आधा जीवन), यह प्रायोगिक पशुओं के लिए दिया जाता है पर निर्भर करता है जो सब्सट्रेट की पर्याप्त वितरण, और पता लगाने के 9 की कम संवेदनशीलता सहित कई कारकों द्वारा सीमित है। इस तकनीक के लिए एक मुख्य योग्यता यह गैर आक्रामक है जीवित पशुओं पर किया जा सकता है, और सामान्य रूप से विच्छेदन 9,10 पर काटा गया है नहीं हो सकता है कि कई अंगों में ट्यूमर सेल मेटास्टेसिस का पता लगाने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं। Vivo इमेजिंग तकनीकों में से एक सकारात्मक पहलू फेफड़े के ऊतकों आयल एम्बेडिंग की तरह माध्यमिक प्रक्रियाओं के लिए अनुमति देने के लिए अबाधित है या यहाँ के रूप में प्रस्तुत किया है, क्यूआरटी पीसीआर विश्लेषण है। हालांकि, क्यूआरटी पीसीआर theoretica है क्योंकिlly का पता लगाने के लिए एक और अधिक संवेदनशील उपाय, सकल मूल्यांकन के फेफड़ों में मौजूद ट्यूमर कोशिकाओं की कम संख्या का खुलासा नहीं कर सकता है। उपयोगी है, जबकि ऊपर वर्णित इमेजिंग तकनीक प्रतिस्थापित किया जा सकता है या वर्तमान में वर्णित क्यूआरटी पीसीआर विधि के साथ पूरक। क्यूआरटी पीसीआर एक फेफड़ों के भीतर ट्यूमर व्युत्पन्न mRNA का एक संवेदनशील उपाय प्रदान करने की क्षमता है।

<table fo:keep-together.within-page="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP176-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>EN0521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GeneJet RNA Isolation Kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>K0732</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iScript Reverse Transcription Supermix for QRT-PCR</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1708841</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iTaq Universal SYBR Green Supermix&#160;</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>172-5121&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrimePCR SYBR Green Assay: ERBB2, Human&#160;</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>100-25636&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrimePCR Template for SYBR Green Assay: ERBB2, Human&#160;</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>100-25716&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gapdh Primer Sequence</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For-ATGGTGAAGGTCGGTGTGAACG Rev-CGCTCCTGGAAGATGGTGATGG</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of lung metastasis in mouse mammary tumor models by quantitative real-time pcr

Metastatic रोग दूर के एक अंग के लिए प्राथमिक कैंसर साइट से घातक ट्यूमर कोशिकाओं के प्रसार को और कैंसर जुड़े मौत 1 का प्राथमिक कारण है। मेटास्टेटिक प्रसार के आम साइटों फेफड़े, लिम्फ नोड, मस्तिष्क, और हड्डी 2 शामिल हैं। मेटास्टेसिस ड्राइव तंत्र है कि कैंसर अनुसंधान के तीव्र क्षेत्र हैं। मेटास्टेसिस के दूर साइटों कैंसर अनुसंधान के लिए महत्वपूर्ण भूमिका निभाई है में नतीजतन, प्रभावी assays के मेटास्टेटिक बोझ को मापने के लिए। स्तन ट्यूमर मॉडल में फेफड़ों मेटास्टेसिस का मूल्यांकन आम तौर पर विच्छेदन के बाद फेफड़े के ऊतकों के सकल गुणात्मक अवलोकन द्वारा किया जाता है। मेटास्टेसिस के मूल्यांकन के मात्रात्मक तरीकों वर्तमान में पूर्व vivo करने और उपयोगकर्ता परिभाषित मानकों की आवश्यकता है कि vivo इमेजिंग तकनीक पर आधारित में सीमित कर रहे हैं। इन तकनीकों के कई बल्कि सेलुलर स्तर 3-6 से पूरे जीव के स्तर पर हैं। बहु फोटॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग नए तरीकों इमेजिंग METAS मूल्यांकन करने में सक्षम हैं, यद्यपिसेलुलर स्तर 7 बजे tasis, इन बेहद सुरुचिपूर्ण प्रक्रियाओं प्रसार के तंत्र के बजाय मेटास्टेटिक बोझ से मात्रात्मक मूल्यांकन का मूल्यांकन करने के लिए अधिक अनुकूल हैं। इधर, मात्रात्मक मेटास्टेसिस का आकलन करने के लिए एक सरल इन विट्रो विधि प्रस्तुत किया है। मात्रात्मक वास्तविक समय का उपयोग करते हुए पीसीआर (क्यूआरटी पीसीआर), ट्यूमर सेल विशिष्ट mRNA माउस फेफड़े के ऊतकों के भीतर का पता लगाया जा सकता है।

समय से परे यह प्रयोगात्मक जानवर में और यदि ट्यूमर कोशिकाओं के प्रारंभिक टीका प्रदर्शन करने के लिए ले जाता है प्रदर्शन, विवो ट्यूमर विश्लेषण, ऊतक फसल, शाही सेना, अलगाव और क्यूआरटी पीसीआर...

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR at JoVE.com

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR

इस प्रोटोकॉल माउस फेफड़े के ऊतकों के भीतर मेटास्टेसिस का प्रतिनिधित्व कर ट्यूमर सेल विशिष्ट mRNA पता लगाने के लिए मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर (क्यूआरटी पीसीआर) का उपयोग करने के लिए कैसे करें।

मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर द्वारा माउस स्तन ट्यूमर मॉडल में फेफड़ों मेटास्टेसिस का मूल्यांकन

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

रीयल टाइम में ट्यूमर में Nanoparticle तेज intravital इमेजिंग का प्रयोग का मूल्यांकन

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

स्तन कैंसर मस्तिष्क मेटास्टेसिस के ट्यूमर Hypoxia गतिशीलता के vivo bioluminescence इमेजिंग में एक माउस मॉडल में

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

MicroRNA Detection in Prostate Tumors by Quantitative Real-time PCR (qPCR)

MicroRNA Detection in Prostate Tumors by Quantitative Real-time PCR qPCR

MicroRNA प्रोस्टेट ट्यूमर में मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर (qPCR) द्वारा जांच

MicroRNAs (miRNAs) are single-stranded, 18&#x2013;24 nucleotide long, non-coding RNA molecules. They are involved in virtually every cellular process ...

Models of Bone Metastasis

अस्थि मेटास्टेसिस के मॉडल

Bone metastases are a common occurrence in several malignancies, including breast, prostate, and lung. Once established in bone, tumors are responsible ...

Live Imaging of Drug Responses in the Tumor Microenvironment in Mouse Models of Breast Cancer

स्तन कैंसर के माउस मॉडल में ट्यूमर microenvironment में दवा प्रतिक्रियाओं की इमेजिंग जीते

The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर का उपयोग करने के लिए एक प्रतियोगी murine अस्थि मज्जा प्रत्यारोपण के मॉडल में दाता कोशिका engraftment निर्धारित

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

A Simple Method of Mouse Lung Intubation

माउस फेफड़े इंटुबैषेण का एक सरल तरीका

A  simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would  have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or  ...

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

स्तन कैंसर के एक उपन्यास ट्रांसजेनिक माउस मॉडल: Adenovirus-Cre साथ Ductal उपकला के लक्षित करके metastatic स्तन कार्सिनोमा की शुरूआत

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

Cerebrospinal Fluid MicroRNA Profiling Using Quantitative Real Time PCR

मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर का उपयोग मस्तिष्कमेरु द्रव MicroRNA रूपरेखा

MicroRNAs (miRNAs) constitute a potent layer of gene regulation by guiding RISC to target sites located on mRNAs and, consequently, by modulating their ...

Primary Tumor and MEF Cell Isolation to Study Lung Metastasis

प्राथमिक ट्यूमर और फेफड़े मेटास्टेसिस अध्ययन करने के लिए MEF सेल अलगाव

In breast tumorigenesis, the metastatic stage of the disease poses the greatest threat to the affected individual. Normal breast cells with altered ...