Name: fluorescence and bioluminescence imaging of subcellular ca2+ in aged hippocampal neurons
Uploaded: 2015-12-01T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons at JoVE.com

This work was supported by Ministerio de Econom&#236;a y competitividad (BFU2012-37146) and Junta de Castilla y Le&#242;n (BIO103/VA45/11, VA145U13 and BIO/VA33/13), Spain. MCR was supported by Junta de Castilla y Le&#242;n (Spain) and the European Social Fund. We thank the late Dr. Philippe Br&#251;let (1947-2013) for the mitochondrial GFP Aequorin plasmid.

Etikk Uttalelse: Prosedyrer som involverer dyr fag har blitt håndtert i henhold til protokoller godkjent av Valladolid Universitetet dyr boliger anlegget etter avtale med den europeiske konvensjonen 123 / Europarådet og direktiv 86/609 / EEC. 1. kort og lang sikt Culture of Rat hippocampus nevroner <ol><li> Utarbeidelse av poly-D-lysin belagt, 12 mm dekkglass. <ol><li> Sterilisere 12 mm diameter dekkglass i etanol i minst 24 timer. La dem tørke under sterile betingelser. </li><li> Fordel glassene på...

<ol>
	<li>Sattler, R., Tymianski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+glutamate+receptor-mediated+excitotoxic+neuronal+cell+death.">Molecular mechanisms of glutamate receptor-mediated excitotoxic neuronal cell death.</a> Molecular Neurobiology. 24 (1-3), 107-129 (2001).</li><li>MacDermott, A. B., Mayer, M. L., Westbrook, G. L., Smith, S. J., Barker, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA-receptor+activation+increases+cytoplasmic+calcium+concentration+in+cultured+spinal+cord+neurones.">NMDA-receptor activation increases cytoplasmic calcium concentration in cultured spinal cord neurones.</a> Nature. 321 (6069), 519-522 (1986).</li><li>Choi, D. W., Maulucci-Gedde, M., Kriegstein, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate+neurotoxicity+in+cortical+cell+culture.">Glutamate neurotoxicity in cortical cell culture.</a> The Journal of Neuroscience. 7 (2), 357-368 (1987).</li><li>Kure, S., Tominaga, T., Yoshimoto, T., Tada, K., Narisawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate+triggers+internucleosomal+DNA+cleavage+in+neuronal+cells.">Glutamate triggers internucleosomal DNA cleavage in neuronal cells.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 179 (1), 39-45 (1991).</li><li>Calvo, M., Sanz-Blasco, S., Caballero, E., Villalobos, C., Nunez, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+to+excitotoxicity+in+aged+hippocampal+cultures+and+neuroprotection+by+non-steroidal+anti-inflammatory+drugs:+role+of+mitochondrial+calcium.">Susceptibility to excitotoxicity in aged hippocampal cultures and neuroprotection by non-steroidal anti-inflammatory drugs: role of mitochondrial calcium.</a> Journal of Neurochemistry. 132 (4), 403-417 (2015).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptor+subunits+have+differential+roles+in+mediating+excitotoxic+neuronal+death+both+in+vitro+and+in+vivo.">NMDA receptor subunits have differential roles in mediating excitotoxic neuronal death both in vitro and in vivo.</a> The Journal of Neuroscience. 27 (11), 2846-2857 (2007).</li><li>Zhou, M., Baudry, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+changes+in+NMDA+neurotoxicity+reflect+developmental+changes+in+subunit+composition+of+NMDA+receptors.">Developmental changes in NMDA neurotoxicity reflect developmental changes in subunit composition of NMDA receptors.</a> The Journal of Neuroscience. 26 (11), 2956-2963 (2006).</li><li>Brewer, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+vulnerability+of+hippocampal+neurons+with+age+in+culture:+temporal+association+with+increases+in+NMDA+receptor+current,+NR2A+subunit+expression+and+recruitment+of+L-type+calcium+channels.">Increased vulnerability of hippocampal neurons with age in culture: temporal association with increases in NMDA receptor current, NR2A subunit expression and recruitment of L-type calcium channels.</a> Brain Research. 1151, 20-31 (2007).</li><li>Berridge, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+signalling+remodelling+and+disease.">Calcium signalling remodelling and disease.</a> Biochemical Society Transactions. 40 (2), 297-309 (2012).</li><li>Stout, A. K., Raphael, H. M., Kanterewicz, B. I., Klann, E., Reynolds, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate-induced+neuron+death+requires+mitochondrial+calcium+uptake.">Glutamate-induced neuron death requires mitochondrial calcium uptake.</a> Nature Neuroscience. 1 (5), 366-373 (1998).</li><li>Pivovarova, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excitotoxic+calcium+overload+in+a+subpopulation+of+mitochondria+triggers+delayed+death+in+hippocampal+neurons.">Excitotoxic calcium overload in a subpopulation of mitochondria triggers delayed death in hippocampal neurons.</a> The Journal of Neuroscience. 24 (24), 5611-5622 (2004).</li><li>Morris, R. G., Garrud, P., Rawlins, J. N., O'Keefe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Place+navigation+impaired+in+rats+with+hippocampal+lesions.">Place navigation impaired in rats with hippocampal lesions.</a> Nature. 297 (5868), 681-683 (1982).</li><li>Geinisman, Y., Detoledo-Morrell, L., Morrell, F., Heller, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+markers+of+age-related+memory+dysfunction:+behavioral,+electrophysiological+and+morphological+perspectives.">Hippocampal markers of age-related memory dysfunction: behavioral, electrophysiological and morphological perspectives.</a> Progress in Neurobiology. 45 (3), 223-252 (1995).</li><li>Sodero, A. O., Weissmann, C., Ledesma, M. D., Dotti, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+stress+from+excitatory+neurotransmission+contributes+to+cholesterol+loss+in+hippocampal+neurons+aging+in+vitro.">Cellular stress from excitatory neurotransmission contributes to cholesterol loss in hippocampal neurons aging in vitro.</a> Neurobiology of Aging. 32 (6), 1043-1053 (2011).</li><li>Brini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfected+aequorin+in+the+measurement+of+cytosolic+Ca2++concentration+([Ca2+]c).+A+critical+evaluation.">Transfected aequorin in the measurement of cytosolic Ca2+ concentration ([Ca2+]c). A critical evaluation.</a> The Journal of Biological Chemistry. 270 (17), 9896-9903 (1995).</li><li>Villalobos, C., Alonso, M. T., Garc&#236;a-Sancho, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+imaging+of+calcium+oscillations+inside+intracellular+organelles.">Bioluminescence imaging of calcium oscillations inside intracellular organelles.</a> Methods in Molecular Biology. 574, 203-214 (2009).</li><li>Villalobos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Redistribution+of+Ca2++among+cytosol+and+organella+during+stimulation+of+bovine+chromaffin+cells.">Redistribution of Ca2+ among cytosol and organella during stimulation of bovine chromaffin cells.</a> FASEB Journal. 16, 343-353 (2002).</li><li>Rogers, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+local+Ca2++dynamics+with+genetically+encoded+bioluminescent+reporters.">Visualization of local Ca2+ dynamics with genetically encoded bioluminescent reporters.</a> The European Journal of Neuroscience. 21 (3), 597-610 (2005).</li><li>Barreto-Chang, O. L., Dolmetsch, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+imaging+of+cortical+neurons+using+Fura-2+AM.">Calcium imaging of cortical neurons using Fura-2 AM.</a> Journal of Visualized Experiments. (23), 1067 (2009).</li></ol>

Ombygging av intracellulær Ca 2+ homeostase i den aldrende hjernen har vært knyttet til kognitiv tap, økt mottakelighet for iskemisk skade, excitotoxicity og neurodegenerering. For å undersøke denne hypotesen in vitro, Ca 2+ bildebehandling prosedyrer er tilgjengelige. Dessverre, levedyktige kulturer av gamle hippocampus nevroner er ikke pålitelige. Nylig har det blitt observert at langtidskulturer av rotte-hippocampus-neuroner til stede mange av de typiske kjennetegnene ved aldring ...

Eksitotoksisitet er en av de viktigste mekanismer som bidrar til neuronal skade og celledød i nevrologiske fornærmelser slik som iskemi, og i visse nevrodegenerative sykdommer slik som Alzheimers sykdom 1. Denne typen neurotoksisitet er hovedsakelig mediert av glutamat virker på Ca 2+ -permeable, ionotrope NMDA reseptorer (NMDAR) 2. Eksponering av dyrkede neuroner overfor glutamat kan føre til eksitotoksisitet 3, noe som fører til neuronal apoptose 4. Vi og andre har tidligere rapportert at sårbarheten for neuronal NMDA-indusert apoptose kan endre seg med utvikling av in vitro og aldring 5-8. Det er allment akseptert at en økning i cytosol-fri Ca2 + konsentrasjon ([Ca2 +] cyt) fører til celler aktivering. Men hvis denne økningen er for høy og / eller vedvarende nok, kan det utløse celledød 9. Videre har det vært foreslåttsom eksitotoksisitet krever mitokondrielle Ca 2+ opptak 10, ettersom behandle nerveceller med en mitokondriell uncoupler beskyttet neuroner mot glutamat-indusert celledød 11. Dersom mitokondrier ta opp for mye av Ca 2+, kan åpningen av mitokondriell permeabilitet overgangen pore forekomme, som fører til frigivelse av cytokrom c og andre pro-apoptotiske faktorer, og induserer apoptose. Vi har nylig vist at denne mitokondrielle Ca 2+ opptak er direkte relatert til den aldersavhengig følsomhet for eksitotoksisitet, ved å måle NMDA-indusert mitokondrielle Ca 2+ opptaket i enkelt hippocampale neuroner 5, en fremgangsmåte som er rapportert i denne artikkelen. Hippocampus, som er involvert i fysiologiske prosesser som læring, hukommelse og andre kognitive prosesser 12, er svært sårbare for aldring og nevrodegenerative lidelser 13. Det er foreslått at det etter flere uker i vitro, kultiverthippocampus nevroner viser en rekke typiske kjennetegn ved alderen nevroner 14. Følgelig kan langsiktige dyrkede hippocampus nevroner gi en helhetlig modell for å undersøke Ca 2 + medierte mekanismer for forbedret excitotoxicity i aldring. Det overordnede målet med metoden som presenteres er derfor å undersøke vesentlige endringer i intracellulær Ca 2+ homeostase eller Ca 2+ ombygging i den aldrende hjernen inkludert differensial Ca 2+ responser utløst av NMDA reseptor agonister i et langsiktig dyrkede hippocampus nevroner . Fremgangsmåten omfatter en detaljert beskrivelse av kulturen i rotte hippocampus-neuroner og overvåking av cytosoliske og mitokondrielle Ca 2+ konsentrasjon av fluorescens og bioluminescens avbildning i individuelle neuroner, respektivt. Fluorescens avbildning av cytosoliske Ca 2+ i dyrkede nerveceller er en standard prosedyre. Imidlertid er denne metode mindre pålitelige for subcellular Ca 2+ målinger inkludert mitokondrielle Ca 2+. Grunner til dette kan være mangel på riktig målretting av syntetiske prober og upassende affinitet for Ca 2 + konsentrasjoner som kan endre i mitokondriene fra lav mikrometer nivå selv til mM nivå. Bruken av Ca 2+ prober basert på proteiner som for eksempel aequorin, har tillatt målretting til subcellulære organeller og bruk av derivater ulike Ca 2+ slektskap med forskjellige coelenterazines eller muterte sonder mangler spesifikk Ca 2+ bindingsseter 15. På denne måte kan bioluminescens avbildning av celler som uttrykker mitokondrier rettede aequorin tillate overvåking av mitokondrielle Ca 2 + konsentrasjoner i de enkelte neuroner. Likevel kan denne fremgangsmåten krever bruk av fotontelling kameraer eller ultrasensitive CCD-kameraer for bioluminescens avbildning 16-18. Denne metoden kan gi nye resultater som bør bekreftes i flere etablsvekket hjernens aldring modeller som, for eksempel, hjerneskiver fra gamle dyr.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neurobasal Culture Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14170-088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#39;s F-12 medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31330-038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I (from bovine pancreas)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D5025-15KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bobine Serum</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>DE14-801E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 mm glass coverslips</td>
			<td>Labolan</td>
			<td>0111520/20012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS003127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-well multidish plaques</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>176740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petry dishes</td>
			<td>JD Catalan s.l.</td>
			<td>2120044T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>431030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fura2-AM</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>F1201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine2000</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coelenterazine n</td>
			<td>Biotium</td>
			<td>BT-10115-2250 uG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digitonin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D5628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NMDA</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>M3262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>50046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Axiovert S100 TV microscope</td>
			<td>Carl Zeiss Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xcite ilumination system</td>
			<td>EXFO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ORCA ER fluorescence camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VIM photon counting CCD camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VC-8 valve controller</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SH-27B heating system&#160;</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquacosmos Software</td>
			<td>Hamamatsu Photonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fluorescence and bioluminescence imaging of subcellular ca2+ in aged hippocampal neurons

Mottakelighet for nevron celledød knyttet til neurodegenerering og iskemi er overmåte økte i alderen hjernen, men mekanismene som er ansvarlig er dårlig kjent. Eksitotoksisitet, en prosess som antas å bidra til neuron skade indusert av begge fornærmelser, medieres ved aktivering av glutamatreseptorer som fremmer innstrømning av Ca 2+ og mitokondrielle Ca 2+ overbelastning. En vesentlig endring i intracellulær Ca 2+ homeostase eller ombygging av intracellulær Ca 2+ homeostase kan favorisere nevron skader i gamle nerveceller. For å undersøke Ca 2+ ombygging i aldring har vi brukt levende celle bildebehandling i langsiktige kulturer av rotte hippocampus nevroner som ligner i noen aspekter i alderen nevroner in vivo. For dette formål, hippocampus celler er, i første omgang, fersk spredt fra nye født rotte hippocampi og belagt på poli-D-lysin belagt, dekkglass. Deretter kulturer blir holdt i kontrollerte medier i flere dager eller flere weeks for å undersøke unge og gamle nevroner, henholdsvis. For det andre er dyrkede nerveceller lastet med fura2 og underkastet målinger av cytosoliske Ca 2+ konsentrasjon ved hjelp av digital bildebehandling fluorescens-forholdet. For det tredje, er dyrkede nerveceller transfektert med plasmider som uttrykker en tandem med lav affinitet aequorin og GFP målrettet til mitokondriene. Etter 24 timer er aequorin inne celler rekonstituert med coelenterazine og nevroner er utsatt for bioluminescens avbildning for overvåking av mitokondrielle Ca 2+ konsentrasjon. Denne tre-trinns prosedyre tillater overvåking av cytosolisk og mitokondrielle Ca 2+ responser til relevante stimuli som for eksempel glutamat-reseptor-agonist NMDA og sammenligne hvorvidt disse og andre responser blir påvirket ved aldring. Denne fremgangsmåten kan gi ny innsikt med hensyn til hvordan aldring påvirker cytosoliske og mitokondrielle Ca 2+ respons på utvalgte stimuli, samt testing av utvalgte medikamenter for å forebygge celle neurondødsfall i aldersrelaterte sykdommer.

Her beskriver vi en enkel metode for å vurdere Ca 2+ ombygging og virkningene av NMDA for cytosoliske og mitokondrielle [Ca2 +] i alderen nerveceller. Figur 1 viser skjematisk fremgangsmåten for isolering og dyrking av hippocampus neuroner fra neonatale rotter. Før du starter, må vi forberede sterile, poly-D-lysin belagte, dekkglass og finne dem i en 4-godt parabolen. Deretter blir neonatale rotter drept og hjernen fjernes. Etter isolering av hippocampus, er vevet forsiktig dis...

Watch this Scientific Journal Video about Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons at JoVE.com

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

Intracellular Ca2+ remodeling in aging may contribute to excitotoxicity and neuron damage, processes mediated by Ca2+ overload. We aimed at investigating Ca2+ remodeling in the aging brain using fluorescence and bioluminescence imaging of cytosolic and mitochondrial Ca2+ in long-term cultures of rat hippocampal neurons, a model of neuronal aging.

Fluorescens og Bioluminesens Imaging av subcellulære Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; I Aged hippocampus nevroner

Susceptibility to neuron cell death associated to neurodegeneration and ischemia are exceedingly increased in the aged brain but mechanisms responsible ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) of Fluorescence Tagged Proteins in Dendritic Spines of Cultured Hippocampal Neurons

Fluorescence Recovery After Photobleaching FRAP of Fluorescence Tagged Proteins in Dendritic Spines of Cultured Hippocampal Neurons

FRAP has been used to quantify the mobility of GFP-tagged proteins. Using a strong excitation laser, the fluorescence of a GFP-tagged protein is bleached ...

Neuromodulation and Mitochondrial Transport: Live Imaging in Hippocampal Neurons over Long Durations

To understand the relationship between mitochondrial transport and neuronal function, it is critical to observe mitochondrial behavior in live cultured ...

Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice

Isolering og kultur hippocampus Nerveceller fra Prenatal Mus

Primary cultures of rat and murine hippocampal neurons are widely used to reveal cellular mechanisms in neurobiology. By isolating and growing individual ...

Assaying DNA Damage in Hippocampal Neurons Using the Comet Assay

Analysere DNA-skader i hippocampus Neurons kometsystemet

A number of drugs target the DNA repair pathways and induce cell kill by creating DNA damage. Thus, processes to directly measure DNA damage have been ...

Calcium Phosphate Transfection of Primary Hippocampal Neurons

Kalsium Fosfat Transfection of Primary hippocampus nevroner

Calcium phosphate precipitation is a convenient and economical method for transfection of cultured cells. With optimization, it is possible to use this ...

Imaging Dendritic Spines of Rat Primary Hippocampal Neurons using Structured Illumination Microscopy

Imaging dendrittutløperne av Rat Primary hippocampus nevroner bruker Strukturert Illumination Mikros

Dendritic spines are protrusions emerging from the dendrite of a neuron and represent the primary postsynaptic targets of excitatory inputs in the brain. ...