Name: isolation of sertoli cells and peritubular cells from rat testes
Uploaded: 2016-02-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Sertoli Cells and Peritubular Cells from Rat Testes at JoVE.com

Författarna vill tacka Guido Verhoeven och Ludo Deboel, Leuven, som var mycket hjälpsamma upprättandet isolering av primära Sertoliceller i Meinhardt arbetskraft i Giessen. Monika Fijak, Gießen, är känd för hennes hjälp med figur 1A och råd. Studier stöddes av Deutsche Forschungsgemeinschaft genom bidrag BH 93 / 1-1 (SB) och finansieringen av International Research Graduate College JLU Gießen (Tyskland) / Monash University (Melbourne, Australien) GRK 1871 (SB). Stöd erhölls även från ett bidrag på delstaten Hessen inom programmet &quot;Landes-Offensive Zur Entwicklung Wissenschaftlich-ökonomischer Exzellenz&quot; (LOEWE) kallas &quot;Männliche Infertilität bei Infektion &amp; Entzündung&quot; (MIBIE).

1. Animal Ethics Statement Experiment som beskrivs här utfördes enligt riktlinjer Regierungspräsidium Giessen, Tyskland, som kommunen och bekräfta den tyska uppförandekoden för skötsel och användning av djur för försöksändamål (Tillstånd nr. GI 20/23 Nr A 31 / 2012). 2. Beredning av Media, Enzymlösningar och djur <ol><li> Bered 1% jod alkohol genom att lösa 1 g jod i 100 ml etanol. </li><li> Förbereda 2x 500 ml Dulbecco&#39;s fosfatbuffrad saltlösning (PBS) utan <su...

<ol>
	<li>Nieschlag, E., Behre, H., Nieschlag, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Andrology. Male Reproductive Health and Dysfunction. , (2010).</li><li>Esaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#220;ber+Kulturen+des+Hodengewebes+der+S&#228;ugetiere+und+&#252;ber+die+Natur+des+interstitiellen+Hodengewebes+und+der+Zwischenzellen.">&#220;ber Kulturen des Hodengewebes der S&#228;ugetiere und &#252;ber die Natur des interstitiellen Hodengewebes und der Zwischenzellen.</a> Z. Mikrosk. Anat. Forsch. 15, 368-404 (1928).</li><li>Hall, P. F., Irby, D. C., De Kretser, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+cholesterol+to+androgens+by+rat+testes:+comparison+of+interstitial+cells+and+seminiferous+tubules.">Conversion of cholesterol to androgens by rat testes: comparison of interstitial cells and seminiferous tubules.</a> Endocrinology. 84, 488-496 (1969).</li><li>Welsh, M. J., Wiebe, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+sertoli+cells:+a+rapid+method+for+obtaining+viable+cells.">Rat sertoli cells: a rapid method for obtaining viable cells.</a> Endocrinology. 96, 618-624 (1975).</li><li>Vitale, R., Fawcett, D. W., Dym, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+normal+development+of+the+blood-testis+barrier+and+the+effects+of+clomiphene+and+estrogen+treatment.">The normal development of the blood-testis barrier and the effects of clomiphene and estrogen treatment.</a> Anat. Rec. 176, 331-344 (1973).</li><li>Dorrington, J. H., Roller, N. F., Fritz, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+follicle-stimulating+hormone+on+cultures+of+Sertoli+cell+preparations.">Effects of follicle-stimulating hormone on cultures of Sertoli cell preparations.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 3, 57-70 (1975).</li><li>Tung, P. S., Skinner, M. K., Fritz, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibronectin+synthesis+is+a+marker+for+peritubular+cell+contaminants+in+Sertoli+cell-enriched+cultures.">Fibronectin synthesis is a marker for peritubular cell contaminants in Sertoli cell-enriched cultures.</a> Biol. Reprod. 30, 199-211 (1984).</li><li>Verhoeven, G., Cailleau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testicular+peritubular+cells+secrete+a+protein+under+androgen+control+that+inhibits+induction+of+aromatase+activity+in+Sertoli+cells.">Testicular peritubular cells secrete a protein under androgen control that inhibits induction of aromatase activity in Sertoli cells.</a> Endocrinology. 123, 2100-2110 (1988).</li><li>Tung, P. S., Dorrington, J. H., Fritz, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+changes+induced+by+follicle-stimulating+hormone+or+dibutyryl+cyclic+AMP+on+presumptive+Sertoli+cells+in+culture.">Structural changes induced by follicle-stimulating hormone or dibutyryl cyclic AMP on presumptive Sertoli cells in culture.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 72, 1838-1842 (1975).</li><li>Teng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+adult+Sertoli+cells+and+their+effects+on+the+function+of+co-cultured+allogeneic+islets+in+vitro.">Isolation and culture of adult Sertoli cells and their effects on the function of co-cultured allogeneic islets in vitro.</a> Chin. Med. J. (Engl.). 118, 1857-1862 (2005).</li><li>Kohno, S., Ziparo, E., Marek, L. F., Tung, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+Sertoli+cells:+major+histocompatibility+antigens+and+glycoconjugates.">Murine Sertoli cells: major histocompatibility antigens and glycoconjugates.</a> J. Reprod. Immunol. 5, 339-350 (1983).</li><li>Dufour, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sertoli+cell+line+lacks+the+immunoprotective+properties+associated+with+primary+Sertoli+cells.">Sertoli cell line lacks the immunoprotective properties associated with primary Sertoli cells.</a> Cell Transplant. 17, 525-534 (2008).</li><li>Majumdar, S. S., Tsuruta, J., Griswold, M. D., Bartke, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+Sertoli+cells+from+the+testes+of+adult+Siberian+hamsters:+analysis+of+proteins+synthesized+and+secreted+by+Sertoli+cells+cultured+from+hamsters+raised+in+a+long+or+a+short+photoperiod.">Isolation and culture of Sertoli cells from the testes of adult Siberian hamsters: analysis of proteins synthesized and secreted by Sertoli cells cultured from hamsters raised in a long or a short photoperiod.</a> Biol. Reprod. 52, 658-666 (1995).</li><li>Zhang, H., Liu, B., Qiu, Y., Fan, J., Yu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pure+cultures+and+characterization+of+yak+Sertoli+cells.">Pure cultures and characterization of yak Sertoli cells.</a> Tissue Cell. 45, 414-420 (2013).</li><li>Ziparo, E., Geremia, R., Russo, M. A., Stefanini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+interaction+in+vitro+between+Sertoli+cells+and+germ+cells+at+different+stages+of+spermatogenesis.">Surface interaction in vitro between Sertoli cells and germ cells at different stages of spermatogenesis.</a> Am. J. Anat. 159, 385-388 (1980).</li><li>Anway, M. D., Folmer, J., Wright, W. W., Zirkin, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Sertoli+cells+from+adult+rat+testes:+an+approach+to+ex+vivo+studies+of+Sertoli+cell+function.">Isolation of Sertoli cells from adult rat testes: an approach to ex vivo studies of Sertoli cell function.</a> Biol. Reprod. 68, 996-1002 (2003).</li><li>Scarpino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+method+of+Sertoli+cell+isolation+by+DSA+lectin,+allowing+mitotic+analyses.">A rapid method of Sertoli cell isolation by DSA lectin, allowing mitotic analyses.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 146, 121-127 (1998).</li><li>Mather, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+two+distinct+mouse+testicular+epithelial+cell+lines.">Establishment and characterization of two distinct mouse testicular epithelial cell lines.</a> Biol. Reprod. 23, 243-252 (1980).</li><li>Korbutt, G. S., Elliott, J. F., Rajotte, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cotransplantation+of+allogeneic+islets+with+allogeneic+testicular+cell+aggregates+allows+long-term+graft+survival+without+systemic+immunosuppression.">Cotransplantation of allogeneic islets with allogeneic testicular cell aggregates allows long-term graft survival without systemic immunosuppression.</a> Diabetes. 46, 317-322 (1997).</li><li>Fritz, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+cell-germ+cell+relationships+in+mammalian+testes+during+development+and+spermatogenesis.">Somatic cell-germ cell relationships in mammalian testes during development and spermatogenesis.</a> Ciba Found. Symp. 182, 271-281 (1994).</li><li>Whaley, P. D., Chaudhary, J., Cupp, A., Skinner, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+specific+response+elements+of+the+c-fos+promoter+and+involvement+of+intermediate+transcription+factor(s)+in+the+induction+of+Sertoli+cell+differentiation+(transferrin+promoter+activation)+by+the+testicular+paracrine+factor+PModS.">Role of specific response elements of the c-fos promoter and involvement of intermediate transcription factor(s) in the induction of Sertoli cell differentiation (transferrin promoter activation) by the testicular paracrine factor PModS.</a> Endocrinology. 136, 3046-3053 (1995).</li><li>Bhushan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uropathogenic+Escherichia+coli+block+MyD88-dependent+and+activate+MyD88-independent+signaling+pathways+in+rat+testicular+cells.">Uropathogenic Escherichia coli block MyD88-dependent and activate MyD88-independent signaling pathways in rat testicular cells.</a> J. Immunol. 180, 5537-5547 (2008).</li><li>Meinhardt, A., Hedger, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological,+paracrine+and+endocrine+aspects+of+testicular+immune+privilege.">Immunological, paracrine and endocrine aspects of testicular immune privilege.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 335, 60-68 (2011).</li><li>Fijak, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+Testosterone+on+Inflammatory+Response+in+Testicular+Cells+and+Expression+of+Transcription+Factor+Foxp3+in+T+Cells.">Influence of Testosterone on Inflammatory Response in Testicular Cells and Expression of Transcription Factor Foxp3 in T Cells.</a> Am. J. Reprod. Immunol. , 12-25 (2015).</li><li>Mamidi, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+passing+mesenchymal+stem+cells+through+smaller+bore+size+needles+for+subsequent+use+in+patients+for+clinical+or+cosmetic+indications.">Impact of passing mesenchymal stem cells through smaller bore size needles for subsequent use in patients for clinical or cosmetic indications.</a> J. Transl. Med. 10, 229 (2012).</li><li>Ito, S., Karnovsky, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formaldehyde-glutaraldehyde+fixatives+containing+trinitro+compounds.">Formaldehyde-glutaraldehyde fixatives containing trinitro compounds.</a> J. Cell. Biol. 39, 168-169 (1968).</li><li>Galdieri, M., Ziparo, E., Palombi, F., Russo, M. A., Stefanini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pure+Sertoli+cell+cultures:+a+new+model+for+the+study+of+somatic-germ+cell+interactions.">Pure Sertoli cell cultures: a new model for the study of somatic-germ cell interactions.</a> J. Androl. 5, 249-254 (1981).</li><li>Fijak, M., Meinhardt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+testis+in+immune+privilege.">The testis in immune privilege.</a> Immunol. Rev. 213, 66-81 (2006).</li><li>Jegou, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Sertoli+cell+in+vivo+and+in+vitro.">The Sertoli cell in vivo and in vitro.</a> Cell Biol. Toxicol. 8, 49-54 (1992).</li><li>Pineau, C., Le Magueresse, B., Courtens, J. L., Jegou, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+in+vitro+the+phagocytic+function+of+Sertoli+cells+in+the+rat.">Study in vitro the phagocytic function of Sertoli cells in the rat.</a> Cell Tissue Res. 264, 589-598 (1991).</li><li>Ren, Y., Savill, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis:+the+importance+of+being+eaten.">Apoptosis: the importance of being eaten.</a> Cell Death Differ. 5, 563-568 (1998).</li><li>Ducray, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+mouse+Sertoli+cell+line+producing+rat+androgen-binding+protein+(ABP).">Establishment of a mouse Sertoli cell line producing rat androgen-binding protein (ABP).</a> Steroids. 63, 285-287 (1998).</li><li>Konrad, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+Sertoli+cells+express+epithelial+but+also+mesenchymal+genes+after+immortalization+with+SV40.">Rat Sertoli cells express epithelial but also mesenchymal genes after immortalization with SV40.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1722, 6-14 (2005).</li></ol>

The seminiferous tubules are bounded by a circular layer of peritubular cells and a basal lamina on the luminal side. Sertoli cells are resting on the basal lamina, establish the blood testis barrier through formation of occluding junctions between adjacent cells and provide the structural framework for the organisation of the seminiferous epithelium. Sertoli cells and adjacent spermatogenic cells maintain intimate contacts throughout germ cell development providing physical contact and communication alike. Therefore, wh...

Testiklarna producerar manliga könsceller och könshormoner, det vill säga, androgener. Orgeln är sammansatt av två avdelningar. I interstitialrummet representerar att ungefär 10-12% av den totala testikelvolym 1, steroid sker inom Leydigceller. Det rörformiga facket utgör ungefär 60-80% av den testikelvolymen 1 och innehåller könsceller och två typer av somatiska celler - peritubulära celler och Sertoliceller. Testiklarna delas av bindväv septa i 250-300 lobules, vardera innehållande 1-3 mycket invecklade sädeskanalerna. Dessa tubuli är omslutna av en basal membran, ett ark av kollagen, och ett periferiskikt av peritubulära celler (Figur 1A). Den germinala epitel är belägen på den luminala sidan av basalmembranet. Sertoliceller är stora avlånga celler som spänner över hela embryon epitel från basalmembranet till lumen. De är starkt ATTvärkte till basalmembranet och bildar en sammanhängande cellulär ark genom basolaterala organiserade tight junctions som täpper till stilbildande epitel från interstitium och representerar blodtestikelbarriären. Sertoliceller har framträdande cytoplasmiska utsprång och förgreningar som gör det möjligt för dem att komma in i tät morfologiska och funktionella kontakt med en artspecifik men konstant antal könsceller. Diploida embryon stamceller föröka sig och differentierar till spermatogonier. Under meios I kortlivade tetraploida spermatocyter genereras som utvecklas ytterligare i fyra haploida spermatider under meios II. Alla könsceller är sammankopplade genom cytoplasmatiska bryggor så att de bildar ett cellulärt nät. Den huvudsakliga händelse under mognaden av spermatider är extrudering av stora delar av cytoplasman och bildar resterande organ, i en process som kallas spermiogenesen. Rest kroppar fagocyteras av Sertoliceller. Sena spermatider frigörs sedan in ide rörformiga lumen och transporteras till bitestiklarna för ytterligare mognad. Sertoliceller och könsceller verkar ömsesidigt samordna spermatogenes topografiskt och funktionellt. Framställning av enskilda testikelcelltyper började nästan ett sekel sedan när små testikel bitar odlades och celltyper identifieras genom mikroskopi 2. Genom noggrann dissektion av tubuli efter öppning tunica albuginea använder spetsig pincett var det senare möjligt att separera rörformiga och mellanliggande fack 3. 1975 introducerade Welsh och Wiebe en kollagenasbehandling för att befria de tubuli från att vidhäfta interstitiell vävnad och en pankreatin behandling för avlägsnande av den yttre peritubulära cellskiktet 4. Från tidigt unga omogna råttor (cirka 20 dagar gamla) hade använts i vilken Sertolicellerna utgör en stor del av den rörformiga cellpopulationen eftersom spermatogenes inte har börjat ännu. I den här åldern råtta Sertoli-celler att upphöra att dela sig, och tight junctions mellan grannceller bildar så att blod-testikelbarriären är etablerad 5. Oberoende av Welsh och Wiebe Dorrington et al. Infört en kombination av trypsin och deoxiribonukleas följt av soybeen trypsininhibitor och kollagenas behandling som publicerades samma år 6. Båda grupperna har också använt mekanisk kraft (ritning de spjälkade tubulära fragment upprepade gånger genom en sprutnål eller en pasteurpipett respektive) i syfte att producera en homogen cellsuspension för plätering som innehåller cirka 70% Sertoliceller. Efter 3 dagar i odling, med användning av ett medium som är serumfritt, ökar den procentuella andelen av Sertoliceller till cirka 90%. Detta kan till stor del hänföras till döden av kontaminerande könsceller. Rest peritubulära celler (PTC), dock hålla stadigt fastsatt via deras extracellulära matrisen. PTC, men inte Sertoliceller, är kända för att producerafibronektin som kan fungera som ett markörprotein för att uppskatta förorening med PTC. Därför Tung et al. motiverat att en ytterligare hyaluronidas behandling kan förbättra renheten av Sertoli cellfraktionen 7. I själva verket kunde de visa att en ytterligare behandling kunde minska föroreningen av PTC cirka 20 gånger, vilket blir särskilt tydligt när i jämförelse ett seruminnehållande medium används för odling renade Sertoliceller. Från och med då det förbättrade förfarandet enligt Tung et al. blev den rådande protokollet och i stor utsträckning används av andra stora grupper inom åtta (Figur 1B). Under kollagenas behandling majoriteten av PTC frigörs och kan isoleras i parallellt med Sertoliceller. Medan PTC kraftigt föröka och inte svarar på follikelstimulerande hormon (FSH), do Sertoliceller inte genomgå mitos längre och svara på FSH genom karakteristiska morfologiska förändringaroch en ökning av cykliskt adenosinmonofosfat (cAMP) koncentration 9. Mycket liknande enzymatiska digereringsprotokoll kan användas för isolering av primära Sertoliceller från andra djur som människa 10, mus 11,12, sibirisk hamster 13 eller jak 14. För avlägsnande av stora mängder av kontaminerande könsceller en hypoton chock kan användas vid slutet av isoleringsförfarandet 15. Detta gör också att en effektiv isolering av Sertoliceller från vuxen råtta testiklar 16. En berikad Sertolicellen suspension kan också separeras från könsceller genom plätering av suspensionen på lektin skålar belagda med Datura stramonium-agglutinin 17. Endast Sertoliceller och några rest PTC följa lektin plattorna. Primär Sertoli cellkulturer, främst från råtta har använts initialt för att undersöka känslighet för hormoner eller upprättandet cellinjer som mus Sertolicellen line TM4 18. Denna cellinje har undersökts i mer än hundra studier fram till idag. I en translationell tillvägagångssätt Sertoliceller har använts för immunskydd av samodlade celler och vävnader som i co-transplantation av främlings- eller allogena pankreasöar för långsiktig graft överlevnad utan systemisk immunsuppression 19. Isolerade Sertoliceller har också använts i samarbete kultur experiment för att studera epitel-mesenkymala (Sertoliceller - PTCc) och somatisk-könsceller (Sertoliceller - könsceller) interaktioner 20, 21. Nyligen primära Sertoliceller har använts för att undersöka uttryck av Toll-liknande receptorer och utsöndringen av proinflammatoriska cytokiner liksom signaltransduktionskaskader leder till cytokinexpression efter infektion med icke-patogena och uropatogen E. coli 22. Andra nya undersökningar använde Sertoliceller för att studera testikelimmun privilege 23 och visade att testosteron förbehandling undertrycker LPS-inducerad inflammatoriskt svar 24.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="813">
	<tbody>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:289px;">Actin (smooth muscle) antibody clone 1A4</td>
			<td style="width:111px;">Dako</td>
			<td style="width:124px;">M0851</td>
			<td style="width:289px;">Monoclonal mouse anti human antibody. 
			Use 1:100 dilution for immunofluorescence.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:289px;">Albumin bovine fraction V 
			Standard grade, lyophilized</td>
			<td style="width:111px;">Serva</td>
			<td style="width:124px;">11930.04</td>
			<td style="width:289px;">Filter (0.45 &#181;m) BSA solutions used for immunofluorescence.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Corning&#8482; Cell Strainers 70&#160;&#181;m</td>
			<td style="width:111px;">Corning</td>
			<td style="width:124px;">431751</td>
			<td>White color</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:289px;">Collagenase A from Clostridium histolyticum</td>
			<td style="width:111px;">Roche</td>
			<td style="width:124px;">10103586001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">DAPI mountant ProLong&#174; Gold Antifade</td>
			<td style="width:111px;">Life technologies</td>
			<td style="width:124px;">P-36931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">D-glucose</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:124px;">G8644</td>
			<td>100 g/l</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Dulbecco&#180;s PBS without Ca2+/Mg2+</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:124px;">14190-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">DNase I</td>
			<td style="width:111px;">Roche</td>
			<td style="width:124px;">10104159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Electron microscope</td>
			<td style="width:111px;">Zeiss</td>
			<td>EM 109S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Fluorescence microscope</td>
			<td style="width:111px;">Zeiss</td>
			<td style="width:124px;">Axioplan 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Hyaluronidase from bovine testis</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:124px;">H3506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Inverted light microscope</td>
			<td style="width:111px;">Olympus</td>
			<td style="width:124px;">CKX41</td>
			<td>Routine cell culture microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:289px;">Mouse IgG / IgM (H+L) polyclonal 
			secondary Antibody&#160;</td>
			<td style="width:111px;">Life technologies</td>
			<td style="width:124px;">A-10684</td>
			<td>Alexa Fluor&#174; 488 conjugate</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:289px;">Oil Red O</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:124px;">O0625</td>
			<td style="width:289px;">Has replaced Sudan III and Sudan IV 
			because of brighter color.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:124px;">P6148</td>
			<td style="width:289px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:289px;">Penicillin (5,000&#160;U/ml)/ 
			Streptomycin (5,000 &#181;g/ml)</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:124px;">15070-063</td>
			<td>100x solution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">RPMI-1640</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:124px;">21875-034</td>
			<td>Contains 300 mg/L L-glutamine</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Trypsin from porcine pancreas</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:124px;">T5266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Trypan Blue Stain (0.4%)</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:124px;">15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:289px;">Trypsin inhibitor from soybean</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:124px;">T6522</td>
			<td style="width:289px;">The Sigma product is considerably cheaper than the previously used 
			BPTI (Aprotinin) from Roche.</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:289px;">Vimentin antibody (V9)</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:124px;">V6630</td>
			<td style="width:289px;">Monoclonal mouse anti pig vimentin antibody.&#160; Use 1:100 dilution for immunofluorescence.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:289px;">Wistar WU rats</td>
			<td style="width:111px;">Charles River</td>
			<td style="width:124px;">N/A</td>
			<td>Should be 19 days old on day of experiment.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of sertoli cells and peritubular cells from rat testes

Testiklarna, och i synnerhet hangamet utmanar immunsystemet på ett unikt sätt, eftersom differentierade spermier först visas vid tidpunkten för puberteten - mer än tio år efter införandet av systemisk immuntolerans. Spermatogenescykler celler uttrycker ett antal proteiner som kan ses som icke-själv av immunsystemet. Testiklarna måste då kunna etablera tolerans mot dessa neo-antigener, å ena sidan, men ändå kunna skydda sig mot infektioner och tumörutveckling å andra sidan. Därför testiklarna är en av ett fåtal immun privilegierade platser i kroppen som tål främmande antigener utan att framkalla en skadlig inflammatorisk immunsvar. Sertoliceller spelar en nyckelroll för upprätthållandet av detta immun privilegierad miljö av testiklarna och även förlänga överlevnaden av cotransplanted celler i en främmande miljö. Därför primära Sertoliceller är ett viktigt verktyg för att studera immun förmånen att testikeln som inte kan vara easily ersättas med etablerade cellinjer eller andra cellulära modeller. Här presenterar vi en detaljerad och omfattande protokoll för isolering av Sertoliceller - och peritubulära celler om så önskas - från rått testiklar i en enda dag.

Den beskrivna proceduren tillåter isolering av ca 12 x 10 7 Sertoliceller från 10 rått testiklar. 3 x 10 6 celler stryks per brunn på en 6-brunnsplatta så att sex till sju 6-brunnars plattor är tillgängliga för experiment på dag 7. Trypsin-DNas I digerering är det mest kritiska steget under Sertoli cellisolering. Om nedbrytning vid denna punkt går framåt för långt, förhållandet mellan könsceller / Sertoliceller kommer oproportionerligt öka fram til...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Sertoli Cells and Peritubular Cells from Rat Testes at JoVE.com

Isolation of Sertoli Cells and Peritubular Cells from Rat Testes

Primära Sertoliceller krävs för att studera testikel-immun privilegium, signaltransduktion under inflammation eller infektion, och utnyttjande av deras immun egenskaper. Här beskriver vi en enzym-baserat protokoll för isolering av höggradigt renade primära Sertoliceller och peritubulära celler från rått testiklar.

Isolering av Sertoliceller och peritubulär Celler från Rat Testiklar

The testis, and in particular the male gamete, challenges the immune system in a unique way because differentiated sperm first appear at the time of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

Isolering av Mouse bukhålan celler

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Isolation of Functional Cardiac Immune Cells

Isolering av Funktionell Cardiac immunceller

Cardiac immune cells are gaining interest for the roles they play in the pathological remodeling in many cardiac diseases.1-5  These immune cells, which ...

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Efter Cell-öde i<em&gt; E. E. coli</em&gt; Efter infektion av fag lambda

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Isolering av Dendritiska Mouse lungceller

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Primary Microglia Isolation from Mixed Glial Cell Cultures of Neonatal Rat Brain Tissue

Primär Mikroglia Isolering från Blandade gliaceller Kulturer av nyfödda råttor Brain Tissue

Microglia account for approximately 12% of the  total cellular population in the mammalian brain. While neurons and astrocytes are considered  the major ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Isolering och karakterisering av dendritiska celler och makrofager från mus tarm

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Isolation of Adipose Tissue Immune Cells

Isolering av immun fettvävnad celler

The discovery of increased macrophage infiltration in  the adipose tissue (AT) of obese rodents and humans has led to an  intensification of interest in ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

Isolering av myeloida dendritiska celler och epitelceller från Human Thymus

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Isolation of Double Negative &#945;&#946; T Cells from the Kidney

Isolation of Double Negative ÃƒÅ½Ã‚Â±ÃƒÅ½Ã‚Â² T Cells from the Kidney

Isolering av Double Negative αβ T-celler från njure

There is currently no standard protocol for the isolation of DN T cells from the non-lymphoid tissues despite their increasingly reported involvement in ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Isolering av murint Lymph Node stromaceller

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...