Name: optimization of the wound scratch assay to detect changes in murine mesenchymal stromal cell migration after damage by soluble cigarette smoke extract
Uploaded: 2015-12-03T10:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract at JoVE

We are grateful to the other members of the lab for their technical assistance in developing the CSE damage assay, and their support and advice during the development of this assay. In addition, we are grateful to the Holy Cross Fenwick Scholar Committee for their support of Nicholas Cormier, and the Holy Cross College Honors program for their support of Alexander Yeo.

नोट: का उपयोग कर, बाहर का फेफड़े के ऊतकों से इस अध्ययन, फेफड़े mesenchymal stromal कोशिकाओं (एलआर-MSCs) के लिए अलग थे तो उनके कोशिका की सतह मार्कर की अभिव्यक्ति (CD45 neg, CD31 neg, SCA-1 उच्च, EpCAM neg) 14,15 पर आधारित explant बाहर वि?...

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	<li>Gough, W., Hulkower, K. I., Lynch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative,+facile,+and+high-throughput+image-based+cell+migration+method+is+a+robust+alternative+to+the+scratch+assay.">A quantitative, facile, and high-throughput image-based cell migration method is a robust alternative to the scratch assay.</a> J. Biomol. Screen. 16 (2), 155-163 (2011).</li><li>Ridley, A. J., Schwartz, M. A., Burridge, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration:+integrating+signals+from+front+to+back.">Cell migration: integrating signals from front to back.</a> Science. 302 (5651), 1704-1709 (2013).</li><li>Sharma, R. R., Pollock, K., Hubel, A., McKenna, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+or+stromal+cells:+a+review+of+clinical+applications+and+manufacturing+practices.">Mesenchymal stem or stromal cells: a review of clinical applications and manufacturing practices.</a> Transfusion. 54 (5), 1418-1437 (2014).</li><li>Booth-Gauthier, E. A., Du, V., Ghibaudo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hutchinson-Gilford+progeria+syndrome+alters+nuclear+shape+and+reduces+cell+motility+in+three+dimensional+model+substrates.">Hutchinson-Gilford progeria syndrome alters nuclear shape and reduces cell motility in three dimensional model substrates.</a> Integr. Biol. (Camb). 5 (3), 569-577 (2013).</li><li>Keese, C. R., Wegener, J., Walker, S. R., Giaever, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+wound-healing+assay+for+cells+in+vitro.">Electrical wound-healing assay for cells in vitro.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (6), 1554-1559 (2004).</li><li>Pinco, K. A., He, W., Yang, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha4beta1+Integrin+Regulates+Lamellipodia+Protrusion+Via+a+Focal+Complex/focal+Adhesion-Independent+Mechanism.">Alpha4beta1 Integrin Regulates Lamellipodia Protrusion Via a Focal Complex/focal Adhesion-Independent Mechanism.</a> Mol. Biol. Cell. 13 (9), 3203-3217 (2002).</li><li>Fronza, M., Heinzmann, B., Hamburger, M., Laufer, S., Merfort, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+the+wound+healing+effect+of+Calendula+extracts+using+the+scratch+assay+with+3T3+fibroblasts.">Determination of the wound healing effect of Calendula extracts using the scratch assay with 3T3 fibroblasts.</a> J. Ethnopharmacol. 126 (3), 463-467 (2009).</li><li>Justus, C. R., Leffler, N., Ruiz-Echevarria, M., Yang, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+cell+migration+and+invasion+assays.">In vitro cell migration and invasion assays.</a> J. Vis. Exp. (88), (2014).</li><li>Walter, M. N., Wright, K. T., Fuller, H. R., MacNeil, S., Johnson, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cell-conditioned+medium+accelerates+skin+wound+healing:+an+in+vitro+study+of+fibroblast+and+keratinocyte+scratch+assays.">Mesenchymal stem cell-conditioned medium accelerates skin wound healing: an in vitro study of fibroblast and keratinocyte scratch assays.</a> Exp. Cell Res. 316 (7), 1271-1281 (2010).</li><li>Goetsch, K. P., Niesler, C. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+scratch+assay+for+in+vitro+skeletal+muscle+wound+healing+analysis.">Optimization of the scratch assay for in vitro skeletal muscle wound healing analysis.</a> Anal. Biochem. 411 (1), 158-160 (2011).</li><li>Chung, C. A., Chen, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cell+sedimentation+on+measuring+chondrocyte+population+migration+using+a+Boyden+chamber.">The effect of cell sedimentation on measuring chondrocyte population migration using a Boyden chamber.</a> J. Theor. Biol. 261 (4), 610-625 (2009).</li><li>Fabbri, M., Bianchi, E., Fumagalli, L., Pardi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+lymphocyte+traffic+by+adhesion+molecules.">Regulation of lymphocyte traffic by adhesion molecules.</a> Inflamm. Res. 48 (5), 239-246 (1999).</li><li>Saez, A., Ghibaudo, M., Buguin, A., Silberzan, P., Ladoux, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rigidity-driven+growth+and+migration+of+epithelial+cells+on+microstructured+anisotropic+substrates.">Rigidity-driven growth and migration of epithelial cells on microstructured anisotropic substrates.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104 (20), 8281-8286 (2007).</li><li>Paxson, J. A., Gruntman, A. M., Davis, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age+Dependence+of+Lung+Mesenchymal+Stromal+Cell+Dynamics+Following+Pneumonectomy.">Age Dependence of Lung Mesenchymal Stromal Cell Dynamics Following Pneumonectomy.</a> Stem Cells Dev. 22 (24), 3214-3225 (2013).</li><li>McQualter, J. L., Brouard, N., Williams, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+fibroblastic+progenitor+cells+in+the+adult+mouse+lung+are+highly+enriched+in+the+sca-1+positive+cell+fraction.">Endogenous fibroblastic progenitor cells in the adult mouse lung are highly enriched in the sca-1 positive cell fraction.</a> Stem Cells. 27 (3), 623-633 (2009).</li><li>Hoffman, A. M., Paxson, J. A., Mazan, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung-Derived+Mesenchymal+Stromal+Cell+Post-Transplantation+Survival,+Persistence,+Paracrine+Expression,+and+Repair+of+Elastase-Injured+Lung.">Lung-Derived Mesenchymal Stromal Cell Post-Transplantation Survival, Persistence, Paracrine Expression, and Repair of Elastase-Injured Lung.</a> Stem Cells Dev. 20 (10), 1779-1792 (2011).</li><li>Beane, O. S., Fonseca, V. C., Cooper, L. L., Koren, G., Darling, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+aging+on+the+regenerative+properties+of+bone+marrow-,+muscle-,+and+adipose-derived+mesenchymal+stem/stromal+cells.">Impact of aging on the regenerative properties of bone marrow-, muscle-, and adipose-derived mesenchymal stem/stromal cells.</a> PLoS One. 9 (12), e115963 (2014).</li><li>Chen, L., Ge, Q., Tjin, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cigarette+smoke+extract+on+human+airway+smooth+muscle+cells+in+COPD.">Effects of cigarette smoke extract on human airway smooth muscle cells in COPD.</a> Eur. Respir. J. 44 (3), 634-646 (2014).</li><li>Itahana, K., Campisi, J., Dimri, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+to+detect+biomarkers+of+cellular+senescence:+the+senescence-associated+beta-galactosidase+assay.">Methods to detect biomarkers of cellular senescence: the senescence-associated beta-galactosidase assay.</a> Methods Mol. Biol. 371, 21-31 (2007).</li></ol>

यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल प्रदर्शन और खरोंच assays के विश्लेषण करने के लिए एक मात्रात्मक मजबूत, मानकीकृत तरीका प्रदान करता है। सरल खरोंच assays नियमित तौर पर सेलुलर प्रवास जांच करने के लिए अध्ययन के कई अलग अलग क्?...

सेल प्रवास ऐसी ऊतक विकास, मरम्मत और उत्थान, साथ ही इस तरह के कैंसर मेटास्टेसिस और धमनीकाठिन्य 1 के रूप में रोग प्रक्रियाओं के रूप में कई शारीरिक प्रक्रियाओं को अत्यधिक समन्वित और महत्वपूर्ण है। सेल प्रवास की समझ क्षतिग्रस्त ऊतकों की मरम्मत और कोशिका प्रत्यारोपण प्रौद्योगिकियों और कृत्रिम ऊतक 2 ग्राफ्टिंग सहित रोग की स्थिति, इलाज के लिए इस्तेमाल उभरते उपचार के लिए विशेष रूप से प्रासंगिक है। , ऊतकों की मरम्मत 3 मध्यस्थता कड़ाई से, मात्रात्मक अनुकूलनीय, और लागत प्रभावी ब्याज की बात यह है कि एक परख का उपयोग कर इन कोशिकाओं के प्रवासी क्षमता बढ़ाता में mesenchymal stromal कोशिकाओं (MSCs) की भूमिका में मौजूदा ब्याज को देखते हुए। महत्वपूर्ण बात है, इस तरह के एक परख क्षति के बाद सेलुलर प्रवासी क्षमता में अपेक्षाकृत सूक्ष्म परिवर्तन का पता लगाने के लिए पर्याप्त रूप से संवेदनशील होना चाहिए। खरोंच assays, ट्रांस-अच्छी तरह से पलायन assays, सेल प्रवास बढ़ाता सहित के लिए मौजूदा तरीकों (Boyden चर्चाAmbers), micropillar सरणियों, और सेल अपवर्जन क्षेत्र assays के reproducibility, customizability, मात्रा का ठहराव, और लागत प्रभावशीलता 1,4,5 में सीमाओं की एक सीमा होती है। यहाँ वर्णित अनुकूलित खरोंच परख मजबूत परिणामों, मात्रात्मक और छवि के आधार पर विश्लेषण क्षमताओं, लागत प्रभावशीलता, और अन्य अनुप्रयोगों के लिए अनुकूलन क्षमता को दर्शाता है। स्क्रैच assays के विभिन्न प्रयोगात्मक शर्तों 5 के तहत सेल प्रवास और प्रसार का आकलन करने के लिए कई क्षमताओं में इस्तेमाल किया गया है। परख या पास संगम को पूरा करने के लिए उन्हें बढ़ रही है, नामित कोशिकाओं बोने, और एक बाँझ सुई या pipet टिप 6 के साथ परिणामी monolayer scratching पर जोर देता। विश्लेषण सबसे आम तौर पर बेतरतीब ढंग से चयनित स्थानों 7-9 पर कई बार अंक से अधिक खरोंच की चौड़ाई की तुलना द्वारा किया जाता है। इसकी प्रमुख उपयोग के बावजूद, खरोंच परख reproducibility और मात्रा का ठहराव के साथ मुद्दों से चकित है। में परिवर्तनशीलताखरोंच की पीढ़ी न केवल कोशिकाओं के microenvironment को बदल देता है, लेकिन यह भी प्लेट की सतह और अंतर्निहित कोशिकी मैट्रिक्स 5 को नुकसान पहुँचाए से सेल प्रवास बाधित कर सकते हैं। Assays अक्सर हालांकि धीमी प्रवास और अब परख बार प्रदर्शित सेल लाइनों के लिए, 12 घंटा के लिए 7 पर आयोजित कर रहे हैं, प्रसार एक confounding चर 7,10 हो जाता है। अन्त में, scratching प्रक्रिया द्वारा उत्पन्न वृद्ध होनेवाला कोशिकाओं monolayer 1 में अंतर को बंद करने के लिए आवश्यक बाह्य संकेतन के साथ हस्तक्षेप करने वाले कारकों में जारी कर सकते हैं। खरोंच परख अनुकूलन परख समय की लंबाई को कम करने, और हेरफेर के दौरान अवांछित कोशिका मृत्यु को रोकने, सतह के गुणों के साथ हस्तक्षेप नहीं करता है कि एक सुसंगत अंतराल के सृजन की आवश्यकता है। डाट आधारित परख के लिए एक सेल अपवर्जन क्षेत्र परख के एक अनुकूलन है। इस परख सेल के विकास को शामिल नहीं है कि अच्छी तरह से के बीच में रखा एक डाट इस्तेमाल करता है, लेकिन कोशिकाओं केंद्रीय अपवर्जन क्षेत्र के आसपास चढ़ाया जा करने के लिए अनुमति देता है।पलायन का आकलन करने के लिए, डाट निकाल दिया जाता है, और उसके एवज में अपवर्जन क्षेत्र पलायन घटित करने के लिए एक सतह प्रदान करता है। हालांकि, इस परख अनुकूलित या 10 अनुकूल करने के लिए मुश्किल होता है और कुछ अनुप्रयोगों के लिए, इस तकनीक को भी अत्यधिक लागत हो सकता है। खरोंच assays और उनके डेरिवेटिव, ट्रांस-अच्छी तरह से पलायन assays के (या Boyden कक्ष assays) के विपरीत कीमोटैक्टिक एजेंटों 8,11 युक्त एक कक्ष में, एक microporous फिल्टर झिल्ली के माध्यम से, एक कक्ष से कदम है कि कोशिकाओं की संख्या बढ़ाता द्वारा पलायन का आकलन, 12। झरझरा झिल्ली के माध्यम से पलायन के बाद, कोशिकाओं कीमोटैक्टिक एजेंटों के संपर्क झिल्ली पक्ष का पालन करना, और सही ढंग से यों के लिए मुश्किल हो सकता है, क्योंकि इस तकनीक MSCs तरह पक्षपाती कोशिकाओं के लिए उपयोगिता सीमित है। परख कुछ तीन आयामी प्रवास पैटर्न की जांच करने में सक्षम है, वहीं प्रतिबंधित प्रकार की कोशिकाओं, जिसके लिए यह सही सेल प्रवास की सीमा इसकी उपयोगिता यों करने में सक्षम है 10। खरोंच assays के लिए एक अन्य विकल्प ख़राब करना और एक किराए के रूप सरणी में विस्थापित करने के लिए कोशिकाओं की क्षमता का उपयोग कर एक तीन आयामी अंतरिक्ष के माध्यम से सेलुलर गतिशीलता उपाय जो एक माइक्रो-स्तंभ सरणी का उपयोग करता है। Polydimethlysiloxane (PDMS) elastomers एक सटीक मोल्ड पर ठीक हो और ओजोन के साथ इलाज किया और फ़ाइब्रोनेक्टिन एक समरूप और गैर degradable microenvironment पैदा करता है। सरणी 4 दर्ज करने के लिए कोशिकाओं की क्षमता आंकने के लिए जरूरत के रूप माइक्रो-स्तंभ रिक्ति भी अलग किया जा सकता है। ढालना उच्च पहलू अनुपात सरणी 13 की नकारात्मक संस्करण बनाने के लिए सिलिकॉन वेफर्स के गहरे प्रतिक्रियाशील आयन नक़्क़ाशी के माध्यम से बनाई गई है। परख अपनी customizability से मजबूत है, वहीं क्षमता पलायन कोशिकाओं के प्रत्यक्ष दृश्य के माध्यम से तीन आयामी प्रवास, और विश्लेषण करने के लिए मॉडल, माइक्रो-स्तंभ सरणियों बनाने में कठिनाई आर्थिक रूप से इसकी व्यापक उपयोग में बाधा उत्पन्न करती। इस प्रोटोकॉल में वर्णित अनुकूलित खरोंच परख एक कुशल, क्योंकि प्रदान करता हैस्वतंत्र रूप से उपलब्ध सॉफ्टवेयर का उपयोग कर विश्लेषण किया जा सकता है कि लगातार खरोंच के उत्पादन के लिए टी-प्रभावी तरीका। इसके बजाय पहले और सेल प्रवास के बाद खरोंच भर में किए गए सरल चौड़ाई माप की, सॉफ्टवेयर से पहले और प्रवास के बाद कुल खरोंच क्षेत्रों का निर्धारण करने के लिए उपयोगकर्ता सक्षम बनाता है। यह उन्नति जहां चौड़ाई माप लिया जाना चाहिए खरोंच निर्धारित करने की कोशिश करने के मुद्दे को सीमित करता है, और खरोंच की चौड़ाई कि क्या यह लंबाई के साथ एक समान है। इसके अलावा, सेल नंबर, सेल संगम और प्रकार और कोशिकाओं को दिए गए नुकसान की डिग्री से सावधान अनुकूलन आगे परख का अनुकूलन करने के क्रम में चर्चा की है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1143">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">DMEM (high glucose, no added glutamine)</td>
			<td style="width:221px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:88px;">31053-036</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">Fetal Bovine Serum, Thermo Scientific HyClone</td>
			<td style="width:221px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:88px;">SH3091002</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">Antibiotic/antimycotic, Thermo Scientific HyClone&#160;</td>
			<td style="width:221px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:88px;">SV3007901</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:527px;">Glutamine, 200mM, Thermo Scientific HyClone</td>
			<td style="width:221px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:88px;">SH3003401</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">TypeLE cell dissociation reagent</td>
			<td style="width:221px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:88px;">12563-01</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline, Thermo Scientific HyClone&#160;</td>
			<td style="width:221px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:88px;">SH3002802</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">Falcon standard 60mm tissue culture dishes</td>
			<td style="width:221px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:88px;">08-772B</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">Fisherbrand Sterile 200ul pipet tips</td>
			<td style="width:221px;">Fisher Scientific</td>
			<td>02-707-502</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">Inverted light microscope with camera attachment</td>
			<td style="width:221px;">Variable</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:527px;">ImageJ software&#160;</td>
			<td style="width:221px;">http://imagej.nih.gov/ij/</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:527px;">MRI_Wound_Healting plugin</td>
			<td style="width:221px;"><a href="http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Wound_Healing_Tool">http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Wound_Healing_Tool</a></td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:527px;">Statistical analysis software</td>
			<td style="width:221px;">Microsoft Excel</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

optimization of the wound scratch assay to detect changes in murine mesenchymal stromal cell migration after damage by soluble cigarette smoke extract

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and inflammatory responses. Given the current interest in the role of mesenchymal stromal cells in mediating tissue repair, we are interested in quantifying the migratory capacity of these cells, and understanding how migratory capacity may be altered after damage. Optimization of a rigorously quantitative migration assay that is both easy to customize and cost-effective to perform is key to answering questions concerning alterations in cell migration in response to various stimuli. Current methods for quantifying cell migration, including scratch assays, trans-well migration assays (Boyden chambers), micropillar arrays, and cell exclusion zone assays, possess a range of limitations in reproducibility, customizability, quantification, and cost-effectiveness. Despite its prominent use, the scratch assay is confounded by issues with reproducibility related to damage of the cell microenvironment, impediments to cell migration, influence of neighboring senescent cells, and cell proliferation, as well as lack of rigorous quantification. The optimized scratch assay described here demonstrates robust outcomes, quantifiable and image-based analysis capabilities, cost-effectiveness, and adaptability to other applications.

यहाँ प्रस्तुत खरोंच assays के murine फेफड़ों निवासी mesenchymal stromal कोशिकाओं (एलआर-MSCs) का उपयोग किया है और प्रोटोकॉल नोट में संदर्भित के रूप में अलग-थलग पड़ गए थे। एलआर-MSCs एक 60 मिमी टिशू कल्चर पकवान में 500,000 से कोशिकाओं के घ?...

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Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

The capacity to migrate is a key function of many different cell types, including mesenchymal stromal cells (MSCs). However, quantifying alterations in migratory capacity after damage is challenging. This protocol describes an easily adaptable migration assay that uses rigorous statistics to quantify changes in MSC migratory capacity after damage.

घाव स्क्रैच परख का अनुकूलन घुलनशील सिगरेट के धुएं निकालें द्वारा क्षति के बाद Murine Mesenchymal stromal सेल प्रवासन में परिवर्तन का पता लगाने के लिए

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Zebrafish Keratocyte Explants to Study Collective Cell Migration and Reepithelialization in Cutaneous Wound Healing

Zebrafish Keratocyte Explants त्वचीय घाव भरने में कलेक्टिव सेल प्रवास और Reepithelialization अध्ययन करने के लिए

Due to their unique motile properties, fish keratocytes dissociated from explant cultures have long been used to study the mechanisms of single cell ...

Assessment of Endothelial Cell Migration After Exposure to Toxic Chemicals

जहरीले रसायनों को प्रदर्शन के बाद Endothelial सेल प्रवासन का आकलन

Exposure to chemical substances (including alkylating chemical warfare agents like sulfur and nitrogen mustards) cause a plethora of clinical symptoms ...

Development of an In Vitro Assay to Evaluate Contractile Function of Mesenchymal Cells that Underwent Epithelial-Mesenchymal Transition

Development of an In Vitro Assay to Evaluate Contractile Function of Mesenchymal Cells that Underwent Epithelial-Mesenchymal Transition

एक का विकास<em&gt; इन विट्रो</em&gt; परख mesenchymal कोशिकाओं कि कराना पड़ा उपकला-mesenchymal संक्रमण की सिकुड़ा समारोह का मूल्यांकन करने के लिए

Fibrosis is often involved in the pathogenesis of various chronic progressive diseases such as interstitial pulmonary disease. Pathological hallmark is ...

Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem/Stromal Cells Derived from Human Placenta Tissue

अलगाव और mesenchymal स्टेम का विस्तार / stromal कोशिकाओं मानव प्लेसेंटा ऊतकों से निकाली गई

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose ...

Production and Administration of Therapeutic Mesenchymal Stem/Stromal Cell (MSC) Spheroids Primed in 3-D Cultures Under Xeno-free Conditions

Production and Administration of Therapeutic Mesenchymal Stem/Stromal Cell MSC Spheroids Primed in 3-D Cultures Under Xeno-free Conditions

उत्पादन और चिकित्सीय mesenchymal स्टेम के प्रशासन / stromal सेल (एमएससी) Spheroids Primed 3-डी संस्कृतियों में अंडर Xeno मुक्त परिस्थितियों

Mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) hold great promise in bioengineering and regenerative medicine. MSCs can be isolated from multiple adult tissues via ...

Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta

मानव गर्भनाल और भ्रूण प्लेसेंटा से अलगाव और Mesenchymal Stromal कोशिकाओं की विशेषता

The human umbilical cord (UC) and placenta are non-invasive, primitive and abundant sources of mesenchymal stromal cells (MSCs) that have increasingly ...

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

एक 96 अच्छी तरह से थाली में सेल प्रवास / घाव भरने प्रदर्शन के लिए एक डिवाइस

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

The Aortic Ring Co-culture Assay: A Convenient Tool to Assess the Angiogenic Potential of Mesenchymal Stromal Cells In Vitro

The Aortic Ring Co-culture Assay: A Convenient Tool to Assess the Angiogenic Potential of Mesenchymal Stromal Cells In Vitro

महाधमनी अंगूठी सह संस्कृति परख: एक सुविधाजनक उपकरण में Mesenchymal Stromal कोशिकाओं की Angiogenic क्षमता का आकलन करने के लिए इन विट्रो

Angiogenesis is a complex, highly regulated process responsible for providing and maintaining adequate tissue perfusion. Insufficient vasculature ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

सेल एकत्रीकरण परख सीआईएसद्वारा ट्रांस-लाइगैंडों और उसके निषेध के साथ Drosophila पायदान के बंधन का मूल्यांकन करने के लिए-लाइगैंडों

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...

Visualization of Tangential Cell Migration in the Developing Chick Optic Tectum

विकासशील लड़की ऑप्टिक Tectum में स्पर्श सेल प्रवास के दृश्य

Time-lapse imaging is a powerful method to analyze migrating cell behavior. After fluorescent cell labeling, the movement of the labeled cells in culture ...