Name: protocols for analyzing the role of paneth cells in regenerating the murine intestine using conditional cre-lox mouse models
Uploaded: 2015-11-21T14:00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Protocols for Analyzing the Role of Paneth Cells in Regenerating the Murine Intestine using Conditional Cre-lox Mouse Models at JoVE.com

The authors would like to thank Mark Bishop, Mathew Zverev, Victoria Marsh-Durban, Adam Blackwood and Sylvie Robine. This work was funded by a programme grant from Cancer Research UK.

<ol>
	<li>Cheng, H., Origin Leblond, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=differentiation+and+renewal+of+the+four+main+epithelial+cell+types+in+the+mouse+small+intestine.+V.+Unitarian+Theory+of+the+origin+of+the+four+epithelial+cell+types.">differentiation and renewal of the four main epithelial cell types in the mouse small intestine. V. Unitarian Theory of the origin of the four epithelial cell types.</a> Am J Anat. 141 (4), 537-561 (1974).</li><li>Barker, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+stem+cells+in+small+intestine+and+colon+by+marker+gene+Lgr5.">Identification of stem cells in small intestine and colon by marker gene Lgr5.</a> Nature. 449 (7165), 1003-1007 (2007).</li><li>Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The gut, a clonal conveyor belt. , (2015).</li><li>Snippert, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+crypt+homeostasis+results+from+neutral+competition+between+symmetrically+dividing+Lgr5+stem+cells.">Intestinal crypt homeostasis results from neutral competition between symmetrically dividing Lgr5 stem cells.</a> Cell. 143 (1), 134-144 (2010).</li><li>Lopez-Garcia, C., Klein, A. M., Simons, B. D., Winton, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+stem+cell+replacement+follows+a+pattern+of+neutral+drift.">Intestinal stem cell replacement follows a pattern of neutral drift.</a> Science. 330 (6005), 822-825 (2010).</li><li>Buczacki, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+label-retaining+cells+are+secretory+precursors+expressing+Lgr5.">Intestinal label-retaining cells are secretory precursors expressing Lgr5.</a> Nature. 495 (7439), 65-69 (2013).</li><li>Basak, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+early+fate+determination+in+Lgr5++crypt+stem+cells+using+a+novel+Ki67-RFP+allele.">Mapping early fate determination in Lgr5+ crypt stem cells using a novel Ki67-RFP allele.</a> EMBO J. 33 (18), 2057-2068 (2014).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paneth+cells+constitute+the+niche+for+Lgr5+stem+cells+in+intestinal+crypts.">Paneth cells constitute the niche for Lgr5 stem cells in intestinal crypts.</a> Nature. 469 (7330), 415-418 (2011).</li><li>Young, M., Ordonez, L., Clarke, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+are+the+best+routes+to+effectively+model+human+colorectal+cancer.">What are the best routes to effectively model human colorectal cancer.</a> Molecular oncology. 7 (2), 178-189 (2013).</li><li>Sauer, B., Henderson, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Site-specific+DNA+recombination+in+mammalian+cells+by+the+Cre+recombinase+of+bacteriophage+P1.">Site-specific DNA recombination in mammalian cells by the Cre recombinase of bacteriophage P1.</a> Proc Natl Acad Sci U.S.A. 85 (14), 5166-5170 (1988).</li><li>Brault, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+the+beta-catenin+gene+by+Wnt1-Cre-mediated+deletion+results+in+dramatic+brain+malformation+and+failure+of+craniofacial+development.">Inactivation of the beta-catenin gene by Wnt1-Cre-mediated deletion results in dramatic brain malformation and failure of craniofacial development.</a> Development. 128 (8), 1253-1264 (2001).</li><li>Fevr, T., Robine, S., Louvard, D., Huelsken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt/&#946;-catenin+is+essential+for+intestinal+homeostasis+and+maintenance+of+intestinal+stem+cells.">Wnt/&#946;-catenin is essential for intestinal homeostasis and maintenance of intestinal stem cells.</a> Molecular and Cellular Biology. 27 (21), 7551-7559 (2007).</li><li>Ireland, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+Cre-mediated+control+of+gene+expression+in+the+murine+gastrointestinal+tract:+effect+of+loss+of+beta-catenin.">Inducible Cre-mediated control of gene expression in the murine gastrointestinal tract: effect of loss of beta-catenin.</a> Gastroenterology. 126 (5), 1236-1246 (2004).</li><li>Kemp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elimination+of+background+recombination:+somatic+induction+of+Cre+by+combined+transcriptional+regulation+and+hormone+binding+affinity.">Elimination of background recombination: somatic induction of Cre by combined transcriptional regulation and hormone binding affinity.</a> Nucleic Acids Res. 32 (11), e92 (2004).</li><li>Madison, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cis+elements+of+the+villin+gene+control+expression+in+restricted+domains+of+the+vertical+(crypt)+and+horizontal+(duodenum,+cecum)+axes+of+the+intestine.">Cis elements of the villin gene control expression in restricted domains of the vertical (crypt) and horizontal (duodenum, cecum) axes of the intestine.</a> J Biol Chem. 277 (36), 33275-33283 (2002).</li><li>Parry, L., Young, M., El Marjou, F., Clarke, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+a+crucial+role+of+paneth+cells+in+mediating+the+intestinal+response+to+injury.">Evidence for a crucial role of paneth cells in mediating the intestinal response to injury.</a> Stem Cells. 31 (4), 776-785 (2013).</li><li>Soriano, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generalized+lacZ+expression+with+the+ROSA26+Cre+reporter+strain.">Generalized lacZ expression with the ROSA26 Cre reporter strain.</a> Nat Genet. 21 (1), 70-71 (1999).</li><li>el Marjou, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+and+inducible+Cre-mediated+recombination+in+the+gut+epithelium.">Tissue-specific and inducible Cre-mediated recombination in the gut epithelium.</a> Genesis. 39 (3), 186-193 (2004).</li><li>Guillemot, F., Nagy, A., Auerbach, A., Rossant, J., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+of+Mash-2+in+extraembryonic+development.">Essential role of Mash-2 in extraembryonic development.</a> Nature. 371 (6495), 333-336 (1994).</li><li>Gregorieff, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+pattern+of+Wnt+signaling+components+in+the+adult+intestine.">Expression pattern of Wnt signaling components in the adult intestine.</a> Gastroenterology. 129 (2), 626-638 (2005).</li><li>van der Flier, L. G., Haegebarth, A., Stange, D. E., van de Wetering, M., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OLFM4+is+a+robust+marker+for+stem+cells+in+human+intestine+and+marks+a+subset+of+colorectal+cancer+cells.">OLFM4 is a robust marker for stem cells in human intestine and marks a subset of colorectal cancer cells.</a> Gastroenterology. 137 (1), 15-17 (2009).</li><li>Merritt, A., Allen, T., Potten, C., Hickman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+in+small+intestinal+epithelial+from+p53-null+mice:+evidence+for+a+delayed,+p53-independent+G2/M-associated+cell+death+after+gamma-irradiation.">Apoptosis in small intestinal epithelial from p53-null mice: evidence for a delayed, p53-independent G2/M-associated cell death after gamma-irradiation.</a> Oncogene. 14 (23), 2759-2766 (1997).</li><li>Marshman, E., Ottewell, P., Potten, C., Watson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase+activation+during+spontaneous+and+radiation-induced+apoptosis+in+the+murine+intestine.">Caspase activation during spontaneous and radiation-induced apoptosis in the murine intestine.</a> J Pathol. 195 (3), 285-292 (2001).</li><li>Fevr, T., Robine, S., Louvard, D., Huelsken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt/beta-catenin+is+essential+for+intestinal+homeostasis+and+maintenance+of+intestinal+stem+cells.">Wnt/beta-catenin is essential for intestinal homeostasis and maintenance of intestinal stem cells.</a> Mol Cell Biol. 27 (21), 7551-7559 (2007).</li><li>Barker, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crypt+stem+cells+as+the+cells-of-origin+of+intestinal+cancer.">Crypt stem cells as the cells-of-origin of intestinal cancer.</a> Nature. 457 (7229), 608-611 (2009).</li><li>Tian, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reserve+stem+cell+population+in+small+intestine+renders+Lgr5-positive+cells+dispensable.">A reserve stem cell population in small intestine renders Lgr5-positive cells dispensable.</a> Nature. 478 (7368), 255-259 (2011).</li><li>Yilmaz, O. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mTORC1+in+the+Paneth+cell+niche+couples+intestinal+stem-cell+function+to+calorie+intake.">mTORC1 in the Paneth cell niche couples intestinal stem-cell function to calorie intake.</a> Nature. 486 (7404), 490-495 (2012).</li><li>Adolph, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paneth+cells+as+a+site+of+origin+for+intestinal+inflammation.">Paneth cells as a site of origin for intestinal inflammation.</a> Nature. 503 (7475), 272-276 (2013).</li><li>Marsh, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+Pten+is+dispensable+for+intestinal+homeostasis+but+suppresses+adenoma+development+and+progression+after+Apc+mutation.">Epithelial Pten is dispensable for intestinal homeostasis but suppresses adenoma development and progression after Apc mutation.</a> Nat Genet. 40 (12), 1436-1444 (2008).</li><li>Jard&#233;, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+and+in+vitro+models+for+the+therapeutic+targeting+of+Wnt+signaling+using+a+Tet-O&#916;N89&#946;-catenin+system.">In vivo and in vitro models for the therapeutic targeting of Wnt signaling using a Tet-O&#916;N89&#946;-catenin system.</a> Oncogene. 32 (7), 883-893 (2013).</li><li>Hung, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+mouse+model+for+sporadic+and+metastatic+colon+tumors+and+its+use+in+assessing+drug+treatment.">Development of a mouse model for sporadic and metastatic colon tumors and its use in assessing drug treatment.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (4), 1565-1570 (2010).</li><li>Dacquin, R., Starbuck, M., Schinke, T., Karsenty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+alpha1(I)-collagen+promoter+is+the+best+known+promoter+to+drive+efficient+Cre+recombinase+expression+in+osteoblast.">Mouse alpha1(I)-collagen promoter is the best known promoter to drive efficient Cre recombinase expression in osteoblast.</a> Dev Dyn. 224 (2), 245-251 (2002).</li><li>Hinoi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+colonic+adenoma-carcinoma+progression+based+on+somatic+Apc+inactivation.">Mouse model of colonic adenoma-carcinoma progression based on somatic Apc inactivation.</a> Cancer Res. 67 (20), 9721-9730 (2007).</li><li>Sansom, O. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+Apc+allows+phenotypic+manifestation+of+the+transforming+properties+of+an+endogenous+K-ras+oncogene+in+vivo.">Loss of Apc allows phenotypic manifestation of the transforming properties of an endogenous K-ras oncogene in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U.S.A. 103 (38), 14122-14127 (2006).</li><li>Wong, V. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lrig1+controls+intestinal+stem-cell+homeostasis+by+negative+regulation+of+ErbB+signalling.">Lrig1 controls intestinal stem-cell homeostasis by negative regulation of ErbB signalling.</a> Nat Cell Biol. 14 (4), 401-408 (2012).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>van de Wetering, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+Derivation+of+a+Living+Organoid+Biobank+of+Colorectal+Cancer+Patients.">Prospective Derivation of a Living Organoid Biobank of Colorectal Cancer Patients.</a> Cell. 161 (4), 933-945 (2015).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

שימוש בעכברים הטרנסגניים Cre-לקס מותנים לנתח את הפונקציה של גנים ותאים הוא גישה נפוץ. מודלים אלה היו בשימוש בהצלחה רבה במעי לזהות ולאפיין את תאי גזע 2,4-6 ולהבין את תפקידם במחלה 25. כדי לנצל באופן מלא דגמים אלה מחייב אפיון מקיף של המערכת כדי לאפשר נתונים להתפרש בצורה נכונה. הבנה של מערכות אלה מלאים היא קשה להשגה בשל גנים לעתים רחוקות להיות ספציפיים לסוג תא בודד או מיקום, חוסר ידע וחוסר היעילות של המערכות המשמשות כדי לעודד ביטוי Cre ביולוגיים. השיטות שתוארו כאן להדגים כיצד אנו להתגבר על בעיות אלה באמצעות עיצוב ויישום של ידע הקיים ניסיוניים. למרות שאנו משתמשים בשיטות אלה כדי לענות על שאלת מחקר ספציפית הטכניקות מוצגות כאן הנן גנריים וניתן לנצל לכל מחקר חוקר את Muriמעי ne. הכנת רקמת מעי הצעד החיוני להבטחת תוצאות חזקות הוא הקצירה והעיבוד של הרקמות, אשר צריך להיות מעובד באופן פרוטוקולים וקיבעון בזמן דבק בקפדנות. נושאים כמו כמעט כל משמעותיים במורד הזרם ניתן לייחס לחפצים הקשורים לייבוש הרקמות החוצה ו / או קיבעון שלם. העיתוי הוא קריטי כדי למנוע השפלה של אדריכלות רקמות ו / או חומצות גרעין וחלבונים. קיבעון שלם או נלהב מדי יכול לגרום לאובדן של הרזולוציה histochemical. קיבעון שלם בשל זמן או חלקים עבים מדי כדי לאפשר חדירה מקבע יכולה לגרום לאובדן של רזולוציה בתוך מאורות המעי שיכול להיות שנצפו כ&quot; סימן גאות &quot;על ניתוח IHC מספיק. בהמשך זה קריטי, כי קיבעון לא להאריך יותר מדי זמן, כמו β-קטנין הגרעיני יכול לפזר מתוך הגרעין, אלא אם כן באופן מיידי פרוcessed והשעווה המוטבעת הבאים קיבעון פורמלין. תפקיד של תאי פנט בנישת ISC הנתונים המוצגים כאן ביעילות להראות את החשיבות של תאי פנט בהתחדשות קריפטה במעי המבוגר הבאה אובדן ISC. עם זאת נותר האפשרות שאה-Cre חוסך אוכלוסייה של ISCs שמטרות T2 ויל-Cre-ER. טיאן et al. 26 באלגנטיות הוכיח כי ISCs היי Lgr5 מוחלפים על ידי אוכלוסייה של ISCs המילואים Lgr5 lo. סביר להניח כי ISCs אלה חסכו במערכת אה-Cre בשל אוכלוסיית המילואים שזוהתה כמבשרי תא הפרשת 6,7 עכשיו. חשיבותו של תא פנט הבוגר בתמיכת מבשרי תא הפרשה אלה בעת הצורך לחזור למדינת ISC נותרת ענתה. כתאי פנט מהווים אניהנישה SC 8 ולשחק תפקידים בויסות תגובות ISC לצריכת קלוריות 27 ודלקת 28 הוא נשאר סביר להניח כי פונקציות הסיעוד שלהם תהיה להאריך למבשרים שלהם. גישות וטכנולוגיות ליעילות המודל אנושי של סרטן המעי הגס חדשות הגילוי של ISC הוביל לזיהוי של גנים עכשיו שנמצא בשימוש כדי ליצור מודלים עכבר חדשים לחקירה את התפקידים של גנים ותאים בביולוגיה מעיים ומחלות, נסקרה על ידי קלארק ואח &#39;9. המגבלות רק לטכניקה זו היא זיהוי של גנים לבטא חלבון Cre. נכון לעכשיו ISCs באופן שיגרתי נחקר באמצעות עכברים הטרנסגניים מותנים המבוססים על תבנית ביטוי גני Lgr5. עכברים אשר מבטאים Cre מאמרגן Lgr5 שימשו למחוק APC, הגן שעבר מוטציה הנפוצה ביותר בסרטן מעי גס (CRC), הממחיש את ISC כתא ממוצא 25. סלקטיבי מחיקת גני CRC אחרים בתאים אלה מספק תובנה התקדמות מחלה והתפשטו לדוגמא. PTEN 29. תובנה נוספת לתוך פונקצית ISC מתבצעת תוחזר על ידי ablating במיוחד Lgr5 -expressing תאים בעכברים באמצעות קולטן רעלן דיפתריה האנושית גן (DTR) דפק לLgr5 לוקוס 26. אסטרטגיות אחרות להשתמש במערכת ט-O המאפשרת ביטוי הפיך מתמשך של חלבוני מוטציה 30. שימוש בכלים אלה כדי לשנות גן (ים) בתאים שונים ובמקומות 31 32,33 משמש כדי להבין איך הסרטן ליזום, התקדמות ולשלוח גרורות 34. לחלופין mutagenesis באמצעות מערכת transposon יופי השינה הוא זיהוי נהגים חדשים של CRC. הפיתוח המתמשך של עכברים, טכניקות ואסטרטגיות שינוי גנטיות ממשיך לפתח מודלים רלוונטיים יותר סבלניים. מ &#39;חדשethods פותחו לאפיון של epithelia וISCs המעיים. אפיון של היחס של סוגי תאי האפיתל יכול להיות מושגים באמצעות זרימה מבוסס cytometry על ביטוי ההפרש של קטינים ו -35 CD24. פוטנציאל ההתקדמות הגדולה ביותר בביולוגיה ISC ההבנה ותפקידם במחלה ייעשה באמצעות לשעבר vivo organoid מערכת תרבות 36. מערכת זו מאפשרת ISCs הנורמלי וממאירים לתרבות ב3D, שבו הם לשכפל ולהבדיל באופן יותר רלוונטי מבחינה פיזיולוגית. יש לקוות כי אלה יאפשר בדיקה ישירה של תרופות על דגימות מטופל במבחנה, סוללים את הדרך לרפואה מותאמת אישית 37.

משטח luminal של מעי היונקים תכונות חוזר יחידות של מאורות ואצבע כמו תחזיות, כינה villi, שבולט לתוך הלום. משטח זה הוא גיליון רציף של epithelia שעובר התחדשות עצמית מלאה כל 3 כ - 4 ימים 1. רקמה דינמית זו נתמכת על ידי אוכלוסייה במהירות רכיבה על אופניים בתאי גזע (ISCs; הידוע גם בבסיס קריפטה תאי עמודים), אשר בתחילה זוהו על ידי הביטוי שלהם של גן Lgr5 2,3. תאים אלה קיימים בנישה מיוחדת בתחתית מאורות של Lieberkuhn. בתחילה, הגילוי שהיה רכיבה על אופניים במהירות ISCs היה צורם עם הרעיון הרווח שתאי גזע היו שקטים בטבע. קודם לזיהוי Lgr5 + ISC הוא הניח שאוכלוסייה של תווית שקטה שמירת תאים בעמדה 4, ביחס לבסיס של קריפטה, היו ISCs 1. h המחקר אחרוןכמו עכשיו השלים תצפיות אלה על ידי הוכחה כי בעיקר יש בריכה של רכיבה על אופניים equipotent ISCs בכל כוך שגורלם מוסדרים על ידי שכנותיה 4,5. במקרה שהם איבדו יכולים להיות מוחלפים על ידי תאים אלה שקטים שבדרך מחויבים לשושלת ההפרשה אך יכול לחזור לISCs אם אוכלוסיית ISC פגומה 6. שכנים ISC יכולים להיות או ISCs או תאי הבת שלהם. ISCs לייצר תאי בת נאיביים שרבו ולהתמיין לסוגי תאים מיוחדים המרכיבים את גיליון אפיתל שקווי לומן מעי 1. הגביע, enteroendocrine, enterocytes, ציצה ותאי M להעביר כלפי מעלה אל פני השטח luminal שבו הם מספקים פונקציות הקליטה ורגולטורים שונות, לעומת זאת, תאי פנט יישארו בתחתית הכוך שבו הם קיימים התערבבו עם ISCs. בשנים האחרונות זה כבר הוכיח כי חלקם של daught הנאיבי<html> תאים אה מיועדים לשושלת הפרשה הם תווית שקטה שמירת תאי Lgr5 lo מסוגלים חוזר לISC על פציעת 6,7. בשל חשיבותו בהתחדשות קריפטה עדיפות הונחה על הבנת יחסי הגומלין בין ISCs ושכנותיה, במיוחד תאי פנט. תאי פנט לשחק תפקיד מכריע בנישה שתומכת ISCs 8. בנוסף למוצרי bactericidal תאי פנט לייצר מולקולות איתות המפעילות את המסלולים המסדירים חידוש ISC או בידול. מחקרים קודמים הראו כי Lgr5 + ISCs יכול להתקיים רק כאשר הם יכולים להתחרות על אותות נישה חיוניים הניתנים על ידי תאי פנט בתם 8. מחקרים אלו בדקו את התפקיד של תאי פנט על Lgr5 הרגיל + ISCs ולא במצב שבו הם פגומים ודורשים חידוש מאוכלוסיית Lgr5 lo. class = &quot;jove_content&quot;&gt; כדי להבין מחלה ביולוגיה ומודל מעיים אנו בוחנים את התפקיד הפונקציונלי של תאים ו / או גנים באמצעות מודלים עכבר מהונדסים 9,10. לעתים קרובות מודלים אלה לנצל את טכנולוגית cre-לקס לשנות גן (ים) 9,10 תנאי. Cre (גורם רקומבינציה) recombinase הוא recombinase אתר ספציפי של משפחת אינטגראז, מבודד מP1 bacteriophage. Cre catalyses רקומבינציה הספציפית אתר בין BP המוגדר 34 &#39; לקס P &#39;(χ מוקד P1 מוצלב) אתרים. עכברים מהונדסים גנטית להכיל אתרי LoxP כי האגף אזורים של עניין שעל ביטוי של recombinase Cre הם נכרת. קישור הביטוי של גן Cre לתא או אמרגן ספציפי התפתחותי מאפשר שינוי להתבצע בצורה מרחבית 9,10, זה שימושי במיוחד בהתגברות על מוטציות קטלניות עובריות. נוסף המקשר את ביטוי Cre למסלול קולט,כי יכול להיות מופעל באופן מלאכותי, מאפשר שינויים זמניים. שימוש בטכנולוגיה זו אנו מומת גן CatnB 11 בepithelia המעיים. β-קטנין, מוצר גן CatnB, הוא רגולטור מרכזי של מסלול איתות Wnt הקנונית אשר מסדיר הומאוסטזיס ISC. שני מחקרים קודמים באמצעות אסטרטגיה זו הניבו תוצאות סותרות 12,13. המחקר על ידי Fevr et al. 12, הפגין אובדן של תאי גזע והומאוסטזיס מעיים. ואילו אירלנד et al. 14 מחקר דיווח כי בעקבות ירידה בכדאיויות תא הציר קריפטה-סיסי היה אוכלס מחדש מהתאים מהסוג בר להביע CatnB. ההבדל העיקרי במחקרים אלה היה האמרגן משמש להביע Cre בepithelia המעיים. Et al Fevr., מחקר השתמש אמרגן גן villin הצמוד לקולטן אסטרוגן שיכול להיות מופעל על ידי מתן tamoxifen (T2 ויל-Cre-ER) 15,16. בניגוד אירלנד et al., ניצלה את אלמנט האמרגן של גן P450A1 ציטוכרום החולדה (CYP1A1) לנהוג ביטוי Cre בתגובה לβ-naphthoflavone xenobiotic (אה-Cre). המאפיינים של המערכות השונות הללו נוצרו שתי השערות לחשבון לתצפיות שונות אלה. הראשון שCatnB נמחק בצורה יעילה יותר בISC באמצעות מערכת T2 ויל-Cre-ER לעומת אה-cre, ובכך להפחית את מספר ISCs לרמות תת-אכלוס. לחלופין היה זה בשל דיפרנציאלי מחיקת CatnB באוכלוסיית התאים המובחן. מטרות מערכת T2 ויל-Cre-ER כל תאי האפיתל של הכוך וסיסי ואילו מערכת אה-Cre מטרות רק תאים-פנט שאינו של הנישה ISC וקריפטה. מערכות אלה סיפקו כלים אידיאליים לבחינת behavIOR של ISCs והאינטראקציה שלהם עם תאי פנט. כאן אנו מציגים כמה פרוטוקולים מפורטים המבוססים על אופן בו אנו משמשים מערכות אלה כדי לקבוע שתאי פנט לשחק תפקיד מכריע בתיווך תגובת המעיים לפציעה 17.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetate buffer</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>To make 100ml: 4.8ml 0.2M Acetic acid, 45.2ml 0.2M Sodium acetate &#38; 50ml distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C/0400/PB17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic anhydride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A6404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic anhydride solution</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>2 M Acetic anhydride in 0.1 M triethanolamine hydrochloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian Blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian Blue ph2.5</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>To make 500ml: 15ml acetic acid, 5g Alcian Blue &#38; 485ml distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-digoxigenin alkaline phosphatase conjugated antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab119345</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B(beta)-Naphthoflavone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N3633</td>
			<td>BNF, inject without allowing the solution to cool too much as compound will drop out of solution. Solution can be re-used &#8211; store at -20&#176;C between uses, do not reheat more than twice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bloxall</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>SP-6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BM purple</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11442074001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4503</td>
			<td>Bovine serum albumin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C/4920/17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer/Antigen Unmasking Solution</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-3300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corn oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Demucifiying solution</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>For 500ml: 50ml glycerol, 50ml Tris 0.1M pH8.8, 100ml EtOH, 300ml saline (0.9% NaCl in water), DTT 1.7g.&#160; Demucifying solution can be made in advance and stored, but DTT sholud be added just before incubation (340mg/100ml).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DEPC treated water</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>750023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DTT</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>101509944</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>O3690</td>
			<td>0.5M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>E/0650DF/17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>3000917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F8775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SLBL11382V</td>
			<td>Neutral buffered formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehye</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G6257</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2O2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>216763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Haematoxylin</td>
			<td>Raymond A Lamb</td>
			<td>12698616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175-053</td>
			<td>HBSS (-MgCl2+; -CaCl2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridisation buffer</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>&#160;5&#215; SSC, 50% formamide, 5% SDS, 1 mg/ml heparin, 1 mg/ml calf liver tRNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroquinone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H9003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Peroxidase</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immpress HRP Anti-Mouse IgG Kit</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>MP-7402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immpress HRP Anti-Rabbit IgG Kit</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>MP-7401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intestinal tissue powder</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>The small intestines of 5 adult mice were combined and homogenised in the minimum volume of ice cold PBS. 4 volumes of ice cold acetone were added to the homogenised intestine, which was mixed thoroughly and incubated on ice for 30 minutes. This was centrifuged and the pellet was washed using ice cold acetone. This was further centrifuged and the resulting pellet spread onto filter paper and allowed to dry. Once thoroughly dry the material was ground to a fine powder using a pestle and mortar.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K-ferricyanide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P-3667</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K-ferrocyanide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3289</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Levamisole</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L0380000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methacarn</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>60% Methanol:30% Chloroform:10% Acetic acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M/4000/17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal goat serum</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>S-1012</td>
			<td>NGS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal rabbit serum</td>
			<td>Dako</td>
			<td>X0902</td>
			<td>NRS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NTMT</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>100 mM NaCl, 100 mM Tris HCl, 50 mM MgCl2, 0.1% Tween20, 2 mM Levamisole</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAP pen</td>
			<td>Vector</td>
			<td>H-400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBT</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>0.5M NaCl, 10mM TrisHCL pH7.5, 0.1% Tween 20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>100x solutiuon.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (10x)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP3994</td>
			<td>Dilluted 1:10 with distilled water to make 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLL slides</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0425-72EA</td>
			<td>Poly-L-lysine microscope slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase k solution</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>Dilute Proteinase K at 200 &#181;g/ml in 50 mM Tris, 5 mM EDTA.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ralwax</td>
			<td>BDH</td>
			<td>36154 7N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reducer Solution</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>To make 100ml: 1g Hydroquinone, 5g sodium sulphite &#38; 100ml distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RnaseA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>0.9% NaCl in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I3771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sheep serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S3772</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver nitrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S/1240/46</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver solution</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>To make 100ml: 10ml Acetate buffer, 87ml distilled water, 3ml 1% silver nitrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/2120/53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6753</td>
			<td>NaCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium sulfite</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>239321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SSC</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>93017</td>
			<td>20x saline sodium citrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tape</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12960495</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T5648</td>
			<td>TAM, inject without allowing the solution to cool too much as compound will drop out of solution. Solution can be re-used &#8211; store at -20&#176;C between uses, do not reheat more than twice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBS/T</td>
			<td>Cell Signalling</td>
			<td>#9997</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triethanolamine hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCL</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15567-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>TP9416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaMount</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield Hardset mounting Medium with DAPI</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-1500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectastain ABC Kit</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>PK-4001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-gal</td>
			<td>Promega</td>
			<td>V3941</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-gal fixative</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>2% formaldehyde, 0.1% glutaraldehyde in 1xPBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-gal stain</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>X-gal stain; 200ul X-gal (A) in 50ml solution B (0.214g MgCl2, 0.48g K-ferricyanide, 0.734g K-ferrocyanide in 500ml PBS).&#160; Solution B can be made up oin advance and stored at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>X/0200/21</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocols for analyzing the role of paneth cells in regenerating the murine intestine using conditional cre-lox mouse models

משטח אפיתל במעי היונקים הוא רקמה דינמית שמחדשת כל 3-7 ימים. הבנת תהליך התחדשות זו זיהתה אוכלוסייה של מהירות רכיבה על אופניים תאי גזע מעיים (ISCs) מאופיינים בביטוים של גני Lgr5. אלה נתמכים על ידי אוכלוסייה שקטה תאי גזע, מסומנת על ידי ביטוי BMI-1, מסוגל להחליף אותם במקרה של פציעה. חוקר את יחסי הגומלין בין האוכלוסיות אלה הוא חיוני להבנת תפקידם במחלות וסרטן. ISCs קיימת בתוך מאורות על פני השטח המעיים, נישות אלה תומכים בISC בחידוש epithelia. האינטראקציה בין ISCs הפעיל והשקט סבירה כרוכה תאים מובחנים אחרים בתוך הנישה, כפי שכבר בעבר הוכיח כי &#39;&#39; stemness &#39;&#39; של ISC Lgr5 קשור באופן הדוק לנוכחות של תאי פנט השכנים. שימוש בעכבר cre-לקס מותנהדגמים שבדקו את ההשפעה של מחיקה רוב ISCs הפעיל בנוכחות או עדר של תאי פנט. כאן אנו מתארים את הטכניקות והניתוח התחייבו מאפיין את המעי ולהוכיח שתאי פנט לשחק תפקיד מכריע בתוך הנישה ISC בסיוע ההתאוששות הבאה עלבון משמעותי.

Watch this Scientific Journal Video about Protocols for Analyzing the Role of Paneth Cells in Regenerating the Murine Intestine using Conditional Cre-lox Mouse Models at JoVE.com

Protocols for Analyzing the Role of Paneth Cells in Regenerating the Murine Intestine using Conditional Cre-lox Mouse Models

תאי אפיתל במעי גזע (ISCs) מתערבבים עם תאי פנט. תאים אלה נבדלים צאצאים של ISC, התומך בISCs ולספק הגנה אנטי-בקטריאלי. כאן אנו מדגימים כיצד אנו השתמשנו במודלי עכבר מהונדסים מותנים לקבוע כי תאי פנט לשחק תפקיד מכריע בשמירה על epithelia המעיים.

פרוטוקולים לניתוח תפקידם של תאי פנט התחדשות Murine המעי באמצעות מותנה<em&gt; Cre-לקס</em&gt; מודלי עכבר

The epithelial surface of the mammalian intestine is a dynamic tissue that renews every 3 - 7 days. Understanding this renewal process identified a ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Protocols for Analyzing the Role of Paneth Cells in Regenerating the Murine Intestine using Conditional Cre-lox Mouse Models

The Production of Pluripotent Stem Cells from Mouse Amniotic Fluid Cells Using a Transposon System

את ייצור תאי גזע פלוריפוטנטיים מתאי מי שפירים עכבר באמצעות מערכת transposon

Induced pluripotent stem (iPS) cells are generated from mouse and human somatic cells by forced expression of defined transcription factors using ...

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

במבחנה צמיחה של העכבר זקיקים Preantral תחת Microgravity מדומה

14 day-old mouse ovarian tissue and preantral follicles isolated from same-aged mice were incubated in a simulated microgravity culture system. We ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

הדמיה חיה של עכבר משניים פיוז &#39;ן

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

A RANKL-based Osteoclast Culture Assay of Mouse Bone Marrow to Investigate the Role of mTORC1 in Osteoclast Formation

מבוסס רנקל אוסטאוקלסט תרבות וזמינותו של העכבר מח העצם כדי לחקור את התפקיד של mTORC1 במבנה אוסטאוקלסט

Osteoclasts are unique bone-resorbing cells that differentiate from the monocyte/macrophage lineage of bone marrow. Dysfunction of osteoclasts may result ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

היישום של RNAi חום-הלם-induced בביטוי פקטור שעתוק כדי לתכנת בתאי הנבט את הנוירונים C . elegans

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Assessing Lysosomal Alkalinization in the Intestine of Live Caenorhabditis elegans

Assessing Lysosomal Alkalinization in the Intestine of Live Caenorhabditis elegans

הערכת Alkalinization Lysosomal ב המעי של חיים Caenorhabditis elegans

The nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) is a model system that is widely used to study longevity and developmental pathways. Such studies are ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

ניתוח חישובית של Germline Caenorhabditis elegans ללמוד הפצה של גרעינים, חלבונים ו את שלד התא

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

להמחיש את צומת ואת צלחת Notochordal Gastrulating עוברי העכבר באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סריקה כל הר Immunofluorescence

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Adult Zebrafish Injury Models to Study the Effects of Prednisolone in Regenerating Bone Tissue

דג זברה בוגרת מודלים פציעה ללמוד את השפעות Prednisolone רגנרציה רקמת העצם

Zebrafish are able to regenerate various organs, including appendages (fins) after amputation. This involves the regeneration of bone, which regrows ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

הערכה של נזק חמצוני בעכבר הראשי פני השטח העינית/תאים גזע בתגובה אולטרה סגול (UV-C) נזק

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...