Name: tissue characterization after a new disaggregation method for skin micro-grafts generation
Uploaded: 2016-03-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation at JoVE.com

Forfatterne ønsker at takke Dr. Federica Zanzottera for at bidrage til undersøgelsen udfører flowcytometri analyse.

Etik erklæring: siden den kliniske anvendelse af protokollen kræver brug af kutant autolog væv af patienten, blev dens karakterisering in vitro udføres inden klinisk brug på homolog kutant væv på Emilia Romagna Regional Skin Bank efter retningslinjerne af nationale regler om høst, forarbejdning og distribuere væv til transplantation (CNT 2013). 1. Bio-kompleks Building for klinisk anvendelse BEMÆRK: Denne protokol er klinisk baseret på anvendels...

<ol>
	<li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+wounds:+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy.">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair Regen. 17, 763-771 (2009).</li><li>Ellis, E., Sinn, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+homologous+bone+grafts+in+maxillofacial+surgery.">Use of homologous bone grafts in maxillofacial surgery.</a> J Oral Maxillofac Surg. 51, 1181-1193 (1993).</li><li>Nguyen, A., Pasyk, K. A., Bouvier, T. N., Hassett, C. A., Argenta, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+survival+of+autologous+adipose+tissue+taken+and+transplanted+by+different+techniques.">Comparative study of survival of autologous adipose tissue taken and transplanted by different techniques.</a> Plast Reconstr Sur. 85, 378-389 (1990).</li><li>Abuzeni, P. Z., Alexander, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+Autologous+Fat+Transplantation+With+Platelet+Rich+Plasma.">Enhancement of Autologous Fat Transplantation With Platelet Rich Plasma.</a> AJCS. 18 (2), 59-70 (2001).</li><li>Trovato, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+New+Medical+Device+Rigeneracons+Allows+to+Obtain+Viable+Micro-Grafts+from+Mechanical+Disaggregation+of+Human+Tissues.">A New Medical Device Rigeneracons Allows to Obtain Viable Micro-Grafts from Mechanical Disaggregation of Human Tissues.</a> J Cell Physiol. , (2015).</li><li>Zanzottera, F., Lavezzari, E., Trovato, L., Icardi, A., Graziano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+Derived+Stem+Cells+and+Growth+Factors+Applied+on+Hair+Transplantation+Follow-Up+of+Clinical+Outcome.">Adipose Derived Stem Cells and Growth Factors Applied on Hair Transplantation Follow-Up of Clinical Outcome.</a> JCDSA. 4 (4), 268-274 (2014).</li><li>Giaccone, M., Brunetti, M., Camandona, M., Trovato, L., Graziano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+New+Medical+Device,+Based+on+Rigenera+Protocol+in+the+Management+of+Complex+Wounds.">A New Medical Device, Based on Rigenera Protocol in the Management of Complex Wounds.</a> J Stem Cells Res, Rev &amp; Rep. 1 (3), 3 (2014).</li><li>Aimetti, M., Ferrarotti, F., Cricenti, L., Mariani, G. M., Romano, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+dental+pulp+stem+cells+in+periodontal+regeneration:+a+case+report.">Autologous dental pulp stem cells in periodontal regeneration: a case report.</a> Int J Periodontics Restorative Dent. 34 (3), s27-s33 (2014).</li><li>Graziano, A., Carinci, F., Scolaro, S., D'Aquino, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periodontal+tissue+generation+using+autologous+dental+ligament+micro-grafts:+case+report+with+6+months+follow-up.">Periodontal tissue generation using autologous dental ligament micro-grafts: case report with 6 months follow-up.</a> AOMS. 1 (2), 20 (2013).</li><li>Brunelli, G., Motroni, A., Graziano, A., D'Aquino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sinus+lift+tissue+engineering+using+autologous+pulp+micro-grafts:+A+case+report+of+bone+density+evaluation.">Sinus lift tissue engineering using autologous pulp micro-grafts: A case report of bone density evaluation.</a> J Indian Soc Periodontol. 17 (5), 644-647 (2013).</li><li>Ellner, P. D., Stoessel, C. J., Drakeford, E., Vasi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+culture+medium+for+medical+bacteriology.">A new culture medium for medical bacteriology.</a> Am J Clin Pathol. 45, 502-504 (1966).</li></ol>

Denne indledende undersøgelse viste, at mikro-implantater fremstillet ved denne protokol kan kombineres med collagen-svampe, som allerede rapporteret i andre kliniske anvendelser, for at optimere effektiviteten af mikro-transplantater implantater 9, 10. Især denne undersøgelse rapporteret kapaciteten af bio -complexes, udgøres af mikro-grafts og collagen-svampe, på adjuverende sårhelingen af ​​et ben læsion efter 30 dage fra klinisk anvendelse. Desuden in vitro resultater dokumentere om ef...

I de sidste år har flere nye metoder blevet udviklet inden for bioteknologi til at opnå autologe cellulære suspensioner under operationen for at give et-trins behandlinger for akutte og kroniske hudlæsioner. Desuden behandling af akut men hovedsagelig kroniske sår efter traumer, diabetes, infektioner, og andre årsager, stadig en udfordring. Der er stigende tegn på, at kroniske sår er blevet en alvorlig global sundhedsproblem, der forårsager en enorm økonomisk byrde for sundhedssystemerne i hele verden 1. At forøge hastigheden af ​​succes i behandlingen af ​​hudlæsioner, fraværet af omfattende manipulation (herunder cellulær enhancement) og opretholdelse af sterile betingelser er afgørende, for at skabe en cellulær suspension, der umiddelbart kan anvendes på det beskadigede område af patienter og derved undgå en længere behandling i renrum såsom cellefabrikker. Starting fra små hudbiopsier, slibning, centrifugering og andre adskillelsesmetoder (f.eks enzymatisk eller mekanisk), anvendes ofte til opnåelse af en cellulær suspension, der kan dyrkes i et vækstmedium. Alle disse metoder kræver generelt lang tid for udførelse, understreger de cellestrukturer, og fører til en reduktion af cellelevedygtighed. Et andet væsentligt aspekt er at opnå et autologt cellulær suspension klar til at blive brugt af klinikere, for eksempel til at reparere beskadigede områder. Desuden er det velkendt, at autologe vævstransplantater overlever procedurerne for overførsel til sidst overleve i modtagerens sted ved principperne for induktion og ledning 2, 3. Den ideelle graft væv skal være let tilgængelige og har lav antigenicitet og donor websted sygelighed 4. På grundlag af disse beviser, den første Formålet med denne undersøgelse var at skabe autologe bio-komplekser er egnede tilklinisk anvendelse i vævsreparation. Til dette formål, vi beskriver en ny metode til at opnå autologe mikro-podninger startende fra kutane væv, der blev opdelt efter denne protokol. En sag præsentation er også heri beskrives som en klinisk anvendelse af autologe mikro-podninger opnået ved denne protokol i kombination med collagen-svampe. Denne fremgangsmåde er allerede blevet rapporteret at være effektiv i den mekaniske opdeling af humane væv 5, og det er blevet anvendt klinisk til transplantater og regenerering af dermale væv 6,7 samt for regenerative terapier af bindevæv i oral-maxillofacial kirurgi 8-10 . Derudover andet formål med denne undersøgelse var den biologiske karakterisering af de kutane væv efter deres disaggregering af denne protokol. Til dette formål forskellige homologe prøver af kutant væv afledt fra stammen område af forskellige multiorgansystemerog / eller multi-vævsdonorer blev behandlet efter de nationale regler om høst, forarbejdning og distribution af væv til transplantation (CNT 2013) på Emilia Romagna Regional Skin Bank. CASE PRÆSENTATION: En 35-årig kvindelig patient, som viser en kompleks traume grundet bilulykke blev indlagt på intensivafdelingen på Ancona Hospital. Patienten viste en infektion på benet grundet et åbent sår og en sammensat brud stabiliseret med ekstern fiksering. To radikale debridering blev udført, og når såret blev rene efter undertryk terapi (VAC-terapi), og periosteum optrådte sunde, vi anvendte protokollen efter to måneder opsving. Efter disaggregering med dette system, blev mikro-implantater fremstillet brugt til at skabe bio-komplekser med en kollagensvamp som efterfølgende blev implanteret med henblik på at undersøge deres virkning på læsionen reparation.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="978">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Rigenera Machine</td>
			<td style="width:257px;">Human Brain Wave</td>
			<td style="width:217px;">79210R</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Rigeneracons</td>
			<td style="width:257px;">Human Brain Wave</td>
			<td style="width:217px;">79450S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">MTT</td>
			<td style="width:257px;">Roche Diagnostic GmbH</td>
			<td style="width:217px;">11465007001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:245px;">RPMI medium</td>
			<td style="width:257px;">PBI International</td>
			<td style="width:217px;">733-2292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:245px;">DMEM medium</td>
			<td style="width:257px;">PBI International</td>
			<td style="width:217px;">F 0415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Antibiotics</td>
			<td style="width:257px;">Biological Industries PBI</td>
			<td style="width:217px;">03-038-1 &#160;&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:245px;">Antibodies for FACS Analysis</td>
			<td style="width:257px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:217px;">code 12-1469 for CD146-P; code 17-0349&#160; for CD34-APC&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Columbia agar</td>
			<td style="width:257px;">BioMerieux Company</td>
			<td style="width:217px;">43041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Condress&#174;</td>
			<td style="width:257px;">Abiogen Pharma</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td>collagen sponge used for bio-complexes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">DMSO&#160;</td>
			<td style="width:257px;">Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl solution</td>
			<td>Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylene&#160;</td>
			<td style="width:257px;">Carlo Erba</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tissue characterization after a new disaggregation method for skin micro-grafts generation

Der er udviklet en række nye metoder inden for bioteknologi til at opnå autologe cellulære suspensioner under operationen, for at give et trin behandlinger for akutte og kroniske hudlæsioner. Endvidere behandlingen af ​​kronisk men også akutte sår efter traumer, diabetes, infektioner og andre årsager, stadig en udfordring. I denne undersøgelse beskriver vi en ny metode til at skabe autologe mikro-implantater fra kutant væv af en enkelt patient og deres kliniske anvendelse. Desuden blev in vitro biologisk karakterisering af kutant væv stammer fra hud, de-epidermized dermis (DED) og dermis af multi-organ og / eller multi-vævsdonorer også udført. Alle væv blev opdelt efter denne nye protokol, hvilket giver os mulighed for at opnå levedygtige mikro-podninger. Især rapporterede vi, at denne innovative protokol er i stand til at skabe bio-komplekser sammensat af autologe mikro-transplantater og collagen-svampe klar til at blive anvendt på hudlæsioner. Den kli-cal anvendelse af autologe bio-komplekser på et ben læsion blev også rapporteret, viser en forbedring af både re-epitalization proces og blødhed af læsionen. Derudover viste vores in vitro model, at cellelevedygtighed efter mekanisk opdeling med dette system opretholdes over tid for op til syv (7) dage kultur. Vi har også observeret, ved hjælp af flowcytometri analyse, at puljen af ​​celler opnået fra disaggregering er sammensat af flere celletyper, herunder mesenchymstamceller, der udøver en nøglerolle i de processer af vævsregeneration og reparation, for deres høje regenerative potentiale. Endelig demonstrerede vi in vitro, at denne procedure opretholder sterilitet af mikro-implantater ved dyrkning i agar retter. Sammenfattende konkluderer vi, at denne nye regenerative tilgang kan være et lovende redskab for klinikere at opnå i et trin levedygtig, sterilt og klar til brug mikro-implantater, der kan anvendes alene eller i kombination med mest almindelige biologiske scaffoLDS.

I denne indledende undersøgelse, den første mål var at undersøge evnen af ​​humane autologe mikro-transplantater kombineret med en biologisk støtte, såsom collagen, til frembringelse af bio-komplekser klar til brug. Disse bio-komplekser blev implanteret i en patient med et ben læsion forårsaget af en bilulykke (figur 2A) og en komplet re-epitelisering forbundet med vævsreparation efter 30 dage (figur 2B) b...

Watch this Scientific Journal Video about Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation at JoVE.com

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

Protokollen beskriver en ny metode til at opdele humane væv og skabe autologe mikro-podninger, der kombineret med collagen-svampe, giver anledning til menneskelige bio-komplekser klar til brug i behandlingen af ​​hudlæsioner. Endvidere dette system bevarer cellelevedygtighed af mikro-transplantater på forskellige tidspunkter efter mekanisk opdeling.

Tissue Karakterisering efter en ny Disaggregering Metode til Skin Micro-udtagne transplantater Generation

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Manual Muscle Testing:  A Method of Measuring Extremity Muscle Strength Applied to Critically Ill Patients

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, ...

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

A Next-generation Tissue Microarray (ngTMA) Protocol for Biomarker Studies

A Next-generation Tissue Microarray ngTMA Protocol for Biomarker Studies

En næste-generations Tissue Microarray (ngTMA) Protokollen til biomarkør Studies

Biomarker research relies on tissue microarrays (TMA). TMAs are produced by repeated transfer of small tissue cores from a &#8216;donor&#8217; block into ...

Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

Iskæmisk væv skade i Dorsal hudfolden Afdeling Mus: En hudlap modellen til Akut Persistent Iskæmi

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

A Mouse Fetal Skin Model of Scarless Wound Repair

En mus Føtal Skin Model af scarless sårheling

Early in utero, but not in postnatal life, cutaneous wounds undergo regeneration and heal without formation of a scar. Scarless fetal wound healing occurs ...

An In Vitro Dormancy Model of Estrogen-sensitive Breast Cancer in the Bone Marrow: A Tool for Molecular Mechanism Studies and Hypothesis Generation

An In Vitro Dormancy Model of Estrogen-sensitive Breast Cancer in the Bone Marrow: A Tool for Molecular Mechanism Studies and Hypothesis Generation

En<em&gt; In vitro</em&gt; Vækstdvale Model af østrogen-følsomme brystkræft i knoglemarven: Et værktøj for molekylære mekanisme Studier og Hypotese Generation

The study of breast cancer dormancy in the bone marrow is an exceptionally difficult undertaking due to the complexity of the interactions of dormant ...

Cutaneous Surgical Denervation:  A Method for Testing the Requirement for Nerves in Mouse Models of Skin Disease

Kutan Kirurgisk Denervation: En metode til afprøvning af Krav om Nerver i musemodeller af Skin Disease

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Kvantitativ visualisering af leukocytinfiltrat i en murin model af Fulminant Myocarditis ved lysarkmikroskopi

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

A Technique for Subcutaneous Abdominal Adipose Tissue Biopsy via a Non-diathermy Method

En teknik til subkutan Abdominal fedtvæv biopsi via en ikke-Diatermi metode

Adipose tissue biopsies offer tissue samples that, upon analysis, may provide insightful overviews of mechanisms relating to metabolism and disease. To ...

An Enzyme-free Method for Isolation and Expansion of Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells

En enzym-fri metode til isolering og udvidelse af humane Adipose-afledte mesenchymale stamceller

Mesenchymal stem cells (MSCs) are a population of multipotent cells that can be isolated from various adult and fetal tissues, including adipose tissue. ...