Name: tissue characterization after a new disaggregation method for skin micro-grafts generation
Uploaded: 2016-03-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation at JoVE.com

De auteurs willen bedanken Dr. Federica Zanzottera om bij te dragen aan de studie uitvoeren van flowcytometrie-analyse.

Ethiek statement: sinds de klinische toepassing van het protocol het gebruik van cutane autoloog weefsel van de patiënt vereist, de karakterisering in vitro werd uitgevoerd voor klinisch gebruik op homologe huidweefsel in Emilia Romagna Regionale Skin Bank volgens de richtlijnen van de nationale regels inzake de oogst, verwerking en distribueren van weefsels voor transplantatie (CNT 2013). 1. Bio-complex Building for Clinical Application Opmerking: Dit pr...

<ol>
	<li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+wounds:+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy.">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair Regen. 17, 763-771 (2009).</li><li>Ellis, E., Sinn, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+homologous+bone+grafts+in+maxillofacial+surgery.">Use of homologous bone grafts in maxillofacial surgery.</a> J Oral Maxillofac Surg. 51, 1181-1193 (1993).</li><li>Nguyen, A., Pasyk, K. A., Bouvier, T. N., Hassett, C. A., Argenta, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+survival+of+autologous+adipose+tissue+taken+and+transplanted+by+different+techniques.">Comparative study of survival of autologous adipose tissue taken and transplanted by different techniques.</a> Plast Reconstr Sur. 85, 378-389 (1990).</li><li>Abuzeni, P. Z., Alexander, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+Autologous+Fat+Transplantation+With+Platelet+Rich+Plasma.">Enhancement of Autologous Fat Transplantation With Platelet Rich Plasma.</a> AJCS. 18 (2), 59-70 (2001).</li><li>Trovato, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+New+Medical+Device+Rigeneracons+Allows+to+Obtain+Viable+Micro-Grafts+from+Mechanical+Disaggregation+of+Human+Tissues.">A New Medical Device Rigeneracons Allows to Obtain Viable Micro-Grafts from Mechanical Disaggregation of Human Tissues.</a> J Cell Physiol. , (2015).</li><li>Zanzottera, F., Lavezzari, E., Trovato, L., Icardi, A., Graziano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+Derived+Stem+Cells+and+Growth+Factors+Applied+on+Hair+Transplantation+Follow-Up+of+Clinical+Outcome.">Adipose Derived Stem Cells and Growth Factors Applied on Hair Transplantation Follow-Up of Clinical Outcome.</a> JCDSA. 4 (4), 268-274 (2014).</li><li>Giaccone, M., Brunetti, M., Camandona, M., Trovato, L., Graziano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+New+Medical+Device,+Based+on+Rigenera+Protocol+in+the+Management+of+Complex+Wounds.">A New Medical Device, Based on Rigenera Protocol in the Management of Complex Wounds.</a> J Stem Cells Res, Rev &amp; Rep. 1 (3), 3 (2014).</li><li>Aimetti, M., Ferrarotti, F., Cricenti, L., Mariani, G. M., Romano, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+dental+pulp+stem+cells+in+periodontal+regeneration:+a+case+report.">Autologous dental pulp stem cells in periodontal regeneration: a case report.</a> Int J Periodontics Restorative Dent. 34 (3), s27-s33 (2014).</li><li>Graziano, A., Carinci, F., Scolaro, S., D'Aquino, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periodontal+tissue+generation+using+autologous+dental+ligament+micro-grafts:+case+report+with+6+months+follow-up.">Periodontal tissue generation using autologous dental ligament micro-grafts: case report with 6 months follow-up.</a> AOMS. 1 (2), 20 (2013).</li><li>Brunelli, G., Motroni, A., Graziano, A., D'Aquino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sinus+lift+tissue+engineering+using+autologous+pulp+micro-grafts:+A+case+report+of+bone+density+evaluation.">Sinus lift tissue engineering using autologous pulp micro-grafts: A case report of bone density evaluation.</a> J Indian Soc Periodontol. 17 (5), 644-647 (2013).</li><li>Ellner, P. D., Stoessel, C. J., Drakeford, E., Vasi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+culture+medium+for+medical+bacteriology.">A new culture medium for medical bacteriology.</a> Am J Clin Pathol. 45, 502-504 (1966).</li></ol>

Deze preliminaire studie toonde aan dat micro-transplantaten verkregen door dit protocol kan worden gecombineerd met collageen sponzen, zoals reeds gemeld in andere klinische toepassingen, om de werkzaamheid van micro-grafts implantaten 9, 10 optimaliseren. Vooral dit onderzoek meldde de capaciteit van bio -complexen, gevormd door micro-implantaten en collageensponzen, de wondgenezing van een been letsel adjuvans na 30 dagen klinische toepassing. Verder in vitro resultaten tonen de effectiviteit van ...

In de afgelopen jaren zijn verscheidene methoden ontwikkeld in de biotechnologie autologe cellulaire suspensies tijdens chirurgie verkrijgen om éénfasige behandelingen voor acute en chronische huidletsels. Bovendien is de behandeling van acute maar vooral chronische wonden gevolg van trauma, diabetes, infecties, en andere oorzaken, blijft een uitdaging. Er is steeds meer bewijs dat chronische wonden een ernstige wereldwijde gezondheidsprobleem geworden, waardoor een enorme financiële last voor de gezondheidszorg systemen wereldwijd 1. Om de mate van succes bij de behandeling van huidletsels verhogen, gebrek aan uitgebreide manipulatie (inclusief cellulaire versterking) en het handhaven van steriele omstandigheden essentieel, om een ​​celsuspensie die direct kunnen worden aangebracht op het beschadigde gebied van het creëren patiënten, waardoor een langere verwerking in cleanrooms vermijden, zoals Cell Factories. StArting van kleine huidbiopten, slijpen, centrifugeren en andere scheidingsmethoden (bijvoorbeeld enzymatisch of mechanisch), worden vaak gebruikt om een celsuspensie, die kunnen worden gekweekt in een groeimedium verkrijgen. Al deze werkwijzen vereisen in het algemeen een lange tijd van uitvoering, benadrukt de celstructuren, en leidt tot een vermindering van cellevensvatbaarheid. Een ander belangrijk aspect is een autologe cellulaire suspensie gereed voor gebruik door artsen te verkrijgen, bijvoorbeeld om beschadigingen bij. Bovendien is het bekend dat autoloog weefsel enten overleven de procedures overdracht uiteindelijk overleven in de receptorplaats die de beginselen van inductie en geleiding 2, 3. Moet de ideale implantaat weefsel beschikbaar zijn en lage antigeniteit en donorplaats morbiditeit 4. Op basis van deze bewijzen, was de eerste doelstelling van dit onderzoek om lichaamseigen bio-complexen geschikt voor creërenklinische toepassing in het weefselherstel. Hiervoor beschrijven we een nieuwe werkwijze voor autologe micro-grafts vanaf cutane weefsels die zijn opgesplitst dit protocol verkregen. Een case-presentatie wordt hierin ook beschreven als een klinische toepassing van autologe micro-transplantaten verkregen door dit protocol in combinatie met collageen sponzen. Deze aanpak is reeds gemeld efficiënte mechanische disaggregatie van menselijk weefsel 5 te zijn en het is klinisch gebruikt voor het enten en regeneratie van huidweefsels 6,7 en regeneratieve therapieën bindweefsel in orale kaakchirurgie 8-10 . Daarnaast is het tweede doel van deze studie was de biologische karakterisering van de cutane weefsels na de opsplitsing van dit protocol. Hiertoe verschillende homologe monsters van huidweefsel afgeleid van de bagageruimte van verschillende meerdere organenen / of multi-weefsel donoren werden verwerkt na de nationale regels inzake de oogst, verwerking en distributie van weefsels voor transplantatie (CNT 2013) in Emilia Romagna Regional Skin Bank. CASE PRESENTATIE: Een 35-jarige vrouwelijke patiënt met een complex trauma als gevolg van auto-ongeluk werd toegelaten tot de Intensive Care Unit van Ancona Hospital. De patiënt toonde een besmetting van het been door een open wond en een gecompliceerde breuk gestabiliseerd met externe fixatie. Twee radicale debridement werden uitgevoerd en wanneer de wond werd schoon te maken na de negatieve druk therapie (VAC therapie) en het periost verscheen gezond, we passen het protocol na twee maanden van herstel. Na disaggregatie met dit systeem werden de micro-transplantaten verkregen wordt gebruikt voor bio-complexen met een collageenspons die vervolgens om geïmplanteerd hun doeltreffendheid op de laesie reparatie onderzoeken maken.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="978">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Rigenera Machine</td>
			<td style="width:257px;">Human Brain Wave</td>
			<td style="width:217px;">79210R</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Rigeneracons</td>
			<td style="width:257px;">Human Brain Wave</td>
			<td style="width:217px;">79450S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">MTT</td>
			<td style="width:257px;">Roche Diagnostic GmbH</td>
			<td style="width:217px;">11465007001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:245px;">RPMI medium</td>
			<td style="width:257px;">PBI International</td>
			<td style="width:217px;">733-2292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:245px;">DMEM medium</td>
			<td style="width:257px;">PBI International</td>
			<td style="width:217px;">F 0415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Antibiotics</td>
			<td style="width:257px;">Biological Industries PBI</td>
			<td style="width:217px;">03-038-1 &#160;&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:245px;">Antibodies for FACS Analysis</td>
			<td style="width:257px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:217px;">code 12-1469 for CD146-P; code 17-0349&#160; for CD34-APC&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Columbia agar</td>
			<td style="width:257px;">BioMerieux Company</td>
			<td style="width:217px;">43041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Condress&#174;</td>
			<td style="width:257px;">Abiogen Pharma</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td>collagen sponge used for bio-complexes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">DMSO&#160;</td>
			<td style="width:257px;">Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl solution</td>
			<td>Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylene&#160;</td>
			<td style="width:257px;">Carlo Erba</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tissue characterization after a new disaggregation method for skin micro-grafts generation

Verschillende nieuwe werkwijzen ontwikkeld op het gebied van biotechnologie autologe cellulaire suspensies tijdens de operatie te verkrijgen, teneinde een stap behandelingen voor acute en chronische huidletsels. Bovendien is de behandeling van chronische maar ook acute wonden gevolg van trauma, diabetes, infecties en andere oorzaken, blijft een uitdaging. In deze studie beschrijven we een nieuwe methode om autologe micro-transplantaten van huidweefsel van een enkele patiënt en hun klinische toepassing. Bovendien werd in vitro biologische karakterisering van cutane weefsel afkomstig van de huid-de epidermized dermis (Ded) en de dermis van meerdere organen en / of multi-weefsel donoren ook uitgevoerd. Alle weefsels werden uitgesplitst naar dit nieuwe protocol, waardoor we levensvatbare micro-implantaten te verkrijgen. In het bijzonder hebben we gemeld dat deze innovatieve protocol kan bio-complexen bestaande uit autologe micro-transplantaten en collageensponzen klaar om te worden aangebracht op de huid laesies. de clinischappelijke toepassing autologe bio-complexen op een been laesie werd gemeld, dat een verbetering van zowel opnieuw epitalization proces en zachtheid van de laesie. Bovendien, onze in vitro model bleek dat de levensvatbaarheid van de cel na mechanische uitsplitsing met dit systeem voor maximaal zeven (7) dagen van de cultuur in stand wordt gehouden in de tijd. We hebben ook opgemerkt door middel van flowcytometrie-analyse, dat de verzameling van cellen verkregen uit uitsplitsing bestaat uit verschillende celtypen, waaronder mesenchymale stamcellen, dat een sleutelrol speelt bij de processen van weefselregeneratie en herstel uitoefenen, voor hun hoge regeneratieve mogelijkheden. Tenslotte hebben we aangetoond dat in vitro procedure handhaaft de steriliteit van micro-implantaten wanneer gekweekt in Agar gerechten. Samengevat concluderen wij dat deze nieuwe regeneratieve benadering veelbelovend hulpmiddel kan zijn voor clinici te verkrijgen in één stap levensvatbare, steriel en klaar voor micro-grafts die alleen of in combinatie kunnen worden toegepast met de meest voorkomende biologische scaffo gebruikenlds.

In dit vooronderzoek als eerste doel het vermogen van menselijke autologe micro-transplantaten in combinatie met een biologische drager, zoals collageen, bio-complexen gebruiksklaar produceren onderzoeken. Deze bio-complexen werden geïmplanteerd in een patiënt met een been letsel veroorzaakt door een auto-ongeluk (figuur 2A) en een volledige re-epithelialisatie geassocieerd met weefselherstel na 30 dagen (Figuur 2B) ...

Watch this Scientific Journal Video about Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation at JoVE.com

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

Het protocol beschrijft een nieuwe methode om menselijke weefsels te splitsen en micro-autologe transplantaten die in combinatie met collageen sponzen, tot menselijk biologisch complexen klaar voor gebruik in de behandeling van huidletsels te maken. Verder dit systeem bewaart cellevensvatbaarheid van micro-grafts op verschillende tijdstippen na mechanische disaggregatie.

Weefsel karakterisering na een New Uitsplitsing Methode voor de huid Micro-Enten Generation

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Manual Muscle Testing:  A Method of Measuring Extremity Muscle Strength Applied to Critically Ill Patients

Manuele spiertesten: een methode van meten Extremity spierkracht Toegepast op kritisch zieke patiënten

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, ...

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

Nauwkeurige en eenvoudige meting van de pro-inflammatoire cytokine IL-1β met behulp van een volbloed stimulatie Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

A Next-generation Tissue Microarray (ngTMA) Protocol for Biomarker Studies

A Next-generation Tissue Microarray ngTMA Protocol for Biomarker Studies

Een volgende generatie Tissue microarray (ngTMA) Protocol voor Biomarker Studies

Biomarker research relies on tissue microarrays (TMA). TMAs are produced by repeated transfer of small tissue cores from a &#8216;donor&#8217; block into ...

Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

Ischemische Tissue Injury in de dorsale huidplooien kamer van de Muis: A Skin Flap Model naar Acute Persistent Ischemia Onderzoek

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

A Mouse Fetal Skin Model of Scarless Wound Repair

Een muis Foetale Skin Model van Scarless Wound Repair

Early in utero, but not in postnatal life, cutaneous wounds undergo regeneration and heal without formation of a scar. Scarless fetal wound healing occurs ...

An In Vitro Dormancy Model of Estrogen-sensitive Breast Cancer in the Bone Marrow: A Tool for Molecular Mechanism Studies and Hypothesis Generation

An In Vitro Dormancy Model of Estrogen-sensitive Breast Cancer in the Bone Marrow: A Tool for Molecular Mechanism Studies and Hypothesis Generation

Een<em&gt; In Vitro</em&gt; Kiemrust Model van oestrogeen-gevoelige Borstkanker in het beenmerg: A Tool for Molecular Mechanism Studies en Hypothese Generation

The study of breast cancer dormancy in the bone marrow is an exceptionally difficult undertaking due to the complexity of the interactions of dormant ...

Cutaneous Surgical Denervation:  A Method for Testing the Requirement for Nerves in Mouse Models of Skin Disease

Cutane Chirurgische denervatie: een methode voor de Eis Testen op Zenuwen in muismodellen van huidziekte

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Kwantitatieve visualisatie van leukocytinfectiet in een muizenmodel van Fulminant-myocarditis door middel van lichte microscopie

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

A Technique for Subcutaneous Abdominal Adipose Tissue Biopsy via a Non-diathermy Method

Een techniek voor subcutane abdominale adipeus weefsel biopsie via een niet-diathermie methode

Adipose tissue biopsies offer tissue samples that, upon analysis, may provide insightful overviews of mechanisms relating to metabolism and disease. To ...

An Enzyme-free Method for Isolation and Expansion of Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells

Een enzym vrije methode voor isolatie en uitbreiding van mesenchymale stamcellen van menselijke adipeus

Mesenchymal stem cells (MSCs) are a population of multipotent cells that can be isolated from various adult and fetal tissues, including adipose tissue. ...