Name: tissue characterization after a new disaggregation method for skin micro-grafts generation
Uploaded: 2016-03-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation at JoVE.com

Författarna vill tacka Dr Federica Zanzottera för att bidra till studien utför flödescytometrianalys.

Etik uttalande: eftersom den kliniska tillämpningen av protokollet kräver användning av kutan autolog vävnad hos patienten, dess karakterisering in vitro utfördes innan klinisk användning på homolog kutan vävnad vid Emilia Romagna regionala Skin Bank följer riktlinjerna av nationella bestämmelser om avverkning, bearbetning och distribuera vävnader för transplantation (CNT 2013). 1. Bio-komplex byggnad för klinisk tillämpning OBS: Detta protok...

<ol>
	<li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+wounds:+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy.">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair Regen. 17, 763-771 (2009).</li><li>Ellis, E., Sinn, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+homologous+bone+grafts+in+maxillofacial+surgery.">Use of homologous bone grafts in maxillofacial surgery.</a> J Oral Maxillofac Surg. 51, 1181-1193 (1993).</li><li>Nguyen, A., Pasyk, K. A., Bouvier, T. N., Hassett, C. A., Argenta, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+survival+of+autologous+adipose+tissue+taken+and+transplanted+by+different+techniques.">Comparative study of survival of autologous adipose tissue taken and transplanted by different techniques.</a> Plast Reconstr Sur. 85, 378-389 (1990).</li><li>Abuzeni, P. Z., Alexander, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+Autologous+Fat+Transplantation+With+Platelet+Rich+Plasma.">Enhancement of Autologous Fat Transplantation With Platelet Rich Plasma.</a> AJCS. 18 (2), 59-70 (2001).</li><li>Trovato, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+New+Medical+Device+Rigeneracons+Allows+to+Obtain+Viable+Micro-Grafts+from+Mechanical+Disaggregation+of+Human+Tissues.">A New Medical Device Rigeneracons Allows to Obtain Viable Micro-Grafts from Mechanical Disaggregation of Human Tissues.</a> J Cell Physiol. , (2015).</li><li>Zanzottera, F., Lavezzari, E., Trovato, L., Icardi, A., Graziano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+Derived+Stem+Cells+and+Growth+Factors+Applied+on+Hair+Transplantation+Follow-Up+of+Clinical+Outcome.">Adipose Derived Stem Cells and Growth Factors Applied on Hair Transplantation Follow-Up of Clinical Outcome.</a> JCDSA. 4 (4), 268-274 (2014).</li><li>Giaccone, M., Brunetti, M., Camandona, M., Trovato, L., Graziano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+New+Medical+Device,+Based+on+Rigenera+Protocol+in+the+Management+of+Complex+Wounds.">A New Medical Device, Based on Rigenera Protocol in the Management of Complex Wounds.</a> J Stem Cells Res, Rev &amp; Rep. 1 (3), 3 (2014).</li><li>Aimetti, M., Ferrarotti, F., Cricenti, L., Mariani, G. M., Romano, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+dental+pulp+stem+cells+in+periodontal+regeneration:+a+case+report.">Autologous dental pulp stem cells in periodontal regeneration: a case report.</a> Int J Periodontics Restorative Dent. 34 (3), s27-s33 (2014).</li><li>Graziano, A., Carinci, F., Scolaro, S., D'Aquino, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periodontal+tissue+generation+using+autologous+dental+ligament+micro-grafts:+case+report+with+6+months+follow-up.">Periodontal tissue generation using autologous dental ligament micro-grafts: case report with 6 months follow-up.</a> AOMS. 1 (2), 20 (2013).</li><li>Brunelli, G., Motroni, A., Graziano, A., D'Aquino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sinus+lift+tissue+engineering+using+autologous+pulp+micro-grafts:+A+case+report+of+bone+density+evaluation.">Sinus lift tissue engineering using autologous pulp micro-grafts: A case report of bone density evaluation.</a> J Indian Soc Periodontol. 17 (5), 644-647 (2013).</li><li>Ellner, P. D., Stoessel, C. J., Drakeford, E., Vasi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+culture+medium+for+medical+bacteriology.">A new culture medium for medical bacteriology.</a> Am J Clin Pathol. 45, 502-504 (1966).</li></ol>

Denna förstudie visade att mikro transplantat som erhålls genom detta protokoll kan kombineras med kollagen tvättsvamp, som redan rapporterats i andra kliniska tillämpningar, för att optimera effekten av mikro transplantat implantat 9, 10. I synnerhet, rapporterade studien kapacitet bio -complexes, utgörs av mikro transplantat och kollagensvampar, till adjuvant sårläkningen av ett ben skada efter 30 dagar från klinisk tillämpning. Dessutom in vitro resultat ger bevis om effektiviteten av de...

Under de senaste åren har flera nya metoder utvecklats inom bioteknik för att få autologa cellulära suspensioner under operationen för att tillhandahålla ett steg behandlingar för akuta och kroniska hudskador. Dessutom behandling av akuta men främst kroniska sår till följd av trauma, diabetes, infektioner, och andra orsaker, förblir utmanande. Det finns bevis för att kroniska sår har blivit ett allvarligt globalt hälsoproblem, som orsakar en enorm ekonomisk börda för hälso- och sjukvårdssystemen i hela världen en. För att öka graden av framgång vid behandling av hudskador, avsaknad av omfattande manipulation (inbegripet cell förbättring) och upprätthållande av sterila förhållanden är viktigt för att skapa en cellulär suspension som omedelbart kan tillämpas på det skadade området av patienter på så sätt undvika en längre behandling i renrum som cellfabriker. stArting från små hudbiopsier, slipning, centrifugering och andra separationsmetoder (t.ex. enzymatisk eller mekanisk), används ofta för att erhålla en cellulär suspension, som kan odlas i ett tillväxtmedium. Alla dessa metoder kräver i allmänhet en lång tid för utförande, betonar de cellstrukturer, och leder till en minskning av cellviabilitet. En annan viktig aspekt är att erhålla en autolog cellulär suspension redo att användas av läkare, till exempel för att reparera skadade områden. Dessutom är det väl etablerat att autologa vävnadstransplantat överleva överföringsförfaranden för att så småningom överleva i mottagarens sida av principerna om induktion och ledning 2, 3. Bör Den ideala transplantatvävnad vara lätt tillgängliga och har låg antigenicitet och tagstället sjuklighet 4. På grundval av dessa bevis, det första målet med denna studie var att skapa autologa bio-komplex som är lämpliga förklinisk tillämpning i vävnadsreparation. För detta ändamål beskriver vi en ny metod för att få autologa mikro transplantat från och kutana vävnader som uppdelade efter detta protokoll. Ett fall presentation också häri beskrivas som en klinisk tillämpning av autologa mikro transplantat som erhålls genom detta protokoll i kombination med kollagensvampar. Detta tillvägagångssätt har redan rapporterats vara effektiv i den mekaniska uppdelning av mänskliga vävnader 5 och det har använts kliniskt för transplantat och regenerering av dermala vävnader 6,7 samt regenerativa terapier av bindväv i oral-käkkirurgi 8-10 . Dessutom andra syftet med denna studie var den biologiska karakteriseringen av de kutana vävnader efter sin uppdelning av detta protokoll. För detta syfte, olika homologa prover av kutan vävnad härledd från stammen område med olika många organoch / eller flera vävnadsdonatorer bearbetades efter nationella regler om avverkning, bearbetning och distribution av vävnader för transplantation (CNT 2013) på Emilia Romagna regionala Skin Bank. CASE PRESENTATION: En 35-årig kvinnlig patient som visar en komplex trauma på grund av bilolycka medgavs till intensivvårdsavdelning Ancona sjukhus. Patienten visade en infektion i benet på grund av ett öppet sår och en sammansatt fraktur stabiliserad med extern fixering. Två radikal debridering utfördes och när såret blev ren efter undertryck terapi (VAC terapi) och benhinnan verkade frisk, tillämpade vi protokollet efter två månader från återhämtning. Efter uppdelning med detta system var mikro transplantat erhållna används för att skapa bio-komplex med en kollagensvamp som därefter implanterades i syfte att undersöka deras effekt på den skada reparation.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="978">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Rigenera Machine</td>
			<td style="width:257px;">Human Brain Wave</td>
			<td style="width:217px;">79210R</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Rigeneracons</td>
			<td style="width:257px;">Human Brain Wave</td>
			<td style="width:217px;">79450S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">MTT</td>
			<td style="width:257px;">Roche Diagnostic GmbH</td>
			<td style="width:217px;">11465007001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:245px;">RPMI medium</td>
			<td style="width:257px;">PBI International</td>
			<td style="width:217px;">733-2292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:245px;">DMEM medium</td>
			<td style="width:257px;">PBI International</td>
			<td style="width:217px;">F 0415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Antibiotics</td>
			<td style="width:257px;">Biological Industries PBI</td>
			<td style="width:217px;">03-038-1 &#160;&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:245px;">Antibodies for FACS Analysis</td>
			<td style="width:257px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:217px;">code 12-1469 for CD146-P; code 17-0349&#160; for CD34-APC&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Columbia agar</td>
			<td style="width:257px;">BioMerieux Company</td>
			<td style="width:217px;">43041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Condress&#174;</td>
			<td style="width:257px;">Abiogen Pharma</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td>collagen sponge used for bio-complexes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">DMSO&#160;</td>
			<td style="width:257px;">Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl solution</td>
			<td>Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylene&#160;</td>
			<td style="width:257px;">Carlo Erba</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tissue characterization after a new disaggregation method for skin micro-grafts generation

Flera nya metoder har utvecklats inom bioteknik för att få autologa cellulära suspensioner under operation, för att ge ett steg behandlingar för akuta och kroniska hudskador. Dessutom förvaltningen av kroniska men också akuta sår till följd av trauma, diabetes, infektioner och andra orsaker, förblir utmanande. I denna studie beskriver vi en ny metod för att skapa autologa mikro transplantat från kutan vävnad av en patient och deras kliniska tillämpning. Dessutom in vitro biologisk karaktärisering av kutan vävnad som härrör från huden, de-epidermized dermis (Ded) och dermis av flera organ och / eller flera vävnadsdonatorer utfördes också. Alla vävnader uppdelat efter denna nya protokollet, vilket tillåter oss att få livskraftiga mikro transplantat. I synnerhet rapporterade vi att denna innovativa protokoll kan skapa bio-komplex som består av autologa mikro transplantat och kollagensvampar redo att appliceras på hudskador. den Clinical tillämpning av autologa biologiska komplex på ett ben skada rapporterades också, visar en förbättring av både åter epitalization process och mjukhet av skadan. Dessutom, vår in vitro-modell visade att cellviabiliteten efter mekanisk uppdelning med detta system bibehålls över tid för upp till sju (7) dagars odling. Vi observerade också, genom flödescytometrianalys, att poolen av celler erhållna från uppdelning består av flera celltyper, inklusive mesenkymala stamceller, som utövar en nyckelroll i processerna för vävnadsregenerering och reparation, för sin höga regenerativ potential. Slutligen är vi demonstreras in vitro att detta förfarande bibehåller steriliteten hos mikro transplantat när de odlas i agar rätter. Sammanfattningsvis, vi dra slutsatsen att den nya regenerativ metod kan vara ett lovande verktyg för kliniker för att få i ett steg livskraftig, steril och redo att använda mikro-transplantat som kan användas separat eller i kombination med de vanligaste biologiska scaffoLDS.

I denna förstudie, det första målet var att undersöka förmågan hos humana autologa mikro transplantat i kombination med ett biologiskt stöd, såsom kollagen, för att producera bio-komplex redo att använda. Dessa bio-komplex implanterades i en patient med ett ben skada som orsakas av en bilolycka (figur 2A) och en fullständig återepitelisation i samband med vävnadsreparation efter 30 dagar (figur 2B) observe...

Watch this Scientific Journal Video about Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation at JoVE.com

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

Protokollet beskriver en ny metod för att dela upp mänskliga vävnader och skapa autologa mikro transplantat som, i kombination med kollagen tvättsvamp, ger upphov till bio-komplex mänskliga redo att använda vid behandling av hudskador. Vidare bevarar detta system cellviabilitet mikro transplantat vid olika tidpunkter efter mekanisk uppdelning.

Tissue Characterization efter en ny Disaggregation metod för Skin Micro-Grafts Generation

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Manual Muscle Testing:  A Method of Measuring Extremity Muscle Strength Applied to Critically Ill Patients

Manuell muskel testning: en metod att mäta styrka Ytterligheter Muscle Tillämpat på kritiskt sjuka patienter

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, ...

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

Noggrann och enkel mätning av pro-inflammatoriska cytokin IL-1β med hjälp av en hel analys Blood stimulering

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

A Next-generation Tissue Microarray (ngTMA) Protocol for Biomarker Studies

A Next-generation Tissue Microarray ngTMA Protocol for Biomarker Studies

Nästa generations tissue microarray (ngTMA) Protokoll för Biomarker Studies

Biomarker research relies on tissue microarrays (TMA). TMAs are produced by repeated transfer of small tissue cores from a &#8216;donor&#8217; block into ...

Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

Ischemisk Tissue Skada i Dorsal skinfold avdelning Mus: En Skin Flap modell för att undersöka Akut Ihållande Ischemi

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

A Mouse Fetal Skin Model of Scarless Wound Repair

En mus Fetal Skin Modell av scarless sårläkning

Early in utero, but not in postnatal life, cutaneous wounds undergo regeneration and heal without formation of a scar. Scarless fetal wound healing occurs ...

An In Vitro Dormancy Model of Estrogen-sensitive Breast Cancer in the Bone Marrow: A Tool for Molecular Mechanism Studies and Hypothesis Generation

An In Vitro Dormancy Model of Estrogen-sensitive Breast Cancer in the Bone Marrow: A Tool for Molecular Mechanism Studies and Hypothesis Generation

En<em&gt; In Vitro</em&gt; Dvala Modell av östrogen-känsliga bröstcancer i benmärgen: ett verktyg för molekylär mekanism Studier och Hypotes Generation

The study of breast cancer dormancy in the bone marrow is an exceptionally difficult undertaking due to the complexity of the interactions of dormant ...

Cutaneous Surgical Denervation:  A Method for Testing the Requirement for Nerves in Mouse Models of Skin Disease

Kutan Kirurgisk denervering: En metod för att testa Krav på nerver i musmodeller av hudsjukdom

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Kvantitativ visualisering av leukocytinfiltrat i en murinmodell av Fulminant-myokardit genom ljusarkmikroskopi

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

A Technique for Subcutaneous Abdominal Adipose Tissue Biopsy via a Non-diathermy Method

En teknik för subkutan buken fettvävnad biopsi via en icke-diatermi metod

Adipose tissue biopsies offer tissue samples that, upon analysis, may provide insightful overviews of mechanisms relating to metabolism and disease. To ...

An Enzyme-free Method for Isolation and Expansion of Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells

En enzym fri metod för isolering och expansion av humana adipose-härledda mesenkymala stamceller

Mesenchymal stem cells (MSCs) are a population of multipotent cells that can be isolated from various adult and fetal tissues, including adipose tissue. ...