Name: a duplex digital pcr assay for simultaneous quantification of the enterococcus spp. and the human fecal-associated hf183 marker in waters
Uploaded: 2016-03-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Duplex Digital PCR Assay for Simultaneous Quantification of the Enterococcus spp. and the Human Fecal-associated HF183 Marker in Waters at JoVE.com

The authors have no acknowledgements.

1. Assay Blanding Forberedelse <ol><li> Gør 100 pmol / L stamkoncentrationer for alle primere i vand af molekylærbiologisk kvalitet og prober i TE pH 8 puffer [Entero F1A, Entero R1, GPL813TQ 12; HF183-1, BthetR1, BthetP1 3]. Bemærk: Prober til de to mål fluorescens mærket med forskellige fluoroforer 7 som angivet i Liste over materialer / udstyr. </li><li> Forbered mester mix ved at blande, pr reaktion planlagt 12 pi digital PCR mix (2x lager, se liste over materialer / ud...

<ol>
	<li>Boehm, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+forty-one+microbial+source+tracking+methods:+A+twenty-seven+lab+evaluation+study.">Performance of forty-one microbial source tracking methods: A twenty-seven lab evaluation study.</a> Water Res. 47 (18), 6812-6828 (2013).</li><li>Layton, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+human+fecal+anaerobe-associated+PCR-based+assays+in+a+multi-laboratory+method+evaluation+study.">Performance of human fecal anaerobe-associated PCR-based assays in a multi-laboratory method evaluation study.</a> Water Res. 47 (18), 6897-6908 (2013).</li><li>Cao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+platform,+reference+material,+and+quantification+model+on+enumeration+of+Enterococcus+by+quantitative+PCR+methods.">Effect of platform, reference material, and quantification model on enumeration of Enterococcus by quantitative PCR methods.</a> Water Res. 47 (1), 233-241 (2013).</li><li>Sivaganesan, M., Siefring, S., Varma, M., Haugland, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MPN+estimation+of+qPCR+target+sequence+recoveries+from+whole+cell+calibrator+samples.">MPN estimation of qPCR target sequence recoveries from whole cell calibrator samples.</a> J. Microbiol. Methods. 87 (3), 343-349 (2011).</li><li>Huggett, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Digital+MIQE+Guidelines:+Minimum+Information+for+Publication+of+Quantitative+Digital+PCR+Experiments.">The Digital MIQE Guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Digital PCR Experiments.</a> Clin. Chem. 59 (6), 892-902 (2013).</li><li>Cao, Y., Raith, M. R., Griffith, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Droplet+digital+PCR+for+simultaneous+quantification+of+general+and+human-associated+fecal+indicators+for+water+quality+assessment.">Droplet digital PCR for simultaneous quantification of general and human-associated fecal indicators for water quality assessment.</a> Water Res. 70, 337-349 (2015).</li><li>Sanders, R., Huggett, J. F., Bushell, C. A., Cowen, S., Scott, D. J., Foy, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+Digital+PCR+for+Absolute+DNA+Quantification.">Evaluation of Digital PCR for Absolute DNA Quantification.</a> Anal. Chem. 83 (17), 6474-6484 (2011).</li><li>Whale, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+microfluidic+digital+PCR+and+conventional+quantitative+PCR+for+measuring+copy+number+variation.">Comparison of microfluidic digital PCR and conventional quantitative PCR for measuring copy number variation.</a> Nucleic Acid Res. 40 (11), 82-89 (2012).</li><li>Hindson, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absolute+quantification+by+droplet+digital+PCR+versus+analog+real-time+PCR.">Absolute quantification by droplet digital PCR versus analog real-time PCR.</a> Nature Methods. 10 (10), 1003-1005 (2013).</li><li>Morisset, D., &#352;tebih, D., Milavec, M., Gruden, K., &#381;el, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+food+and+feed+aamples+with+droplet+digital+PCR.">Quantitative analysis of food and feed aamples with droplet digital PCR.</a> PLoS One. 8 (5), e62583 (2013).</li><li>Cao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+molecular+community+analysis+methods+for+discerning+fecal+sources+and+human+waste.">Evaluation of molecular community analysis methods for discerning fecal sources and human waste.</a> Water Res. 47 (18), 6862-6872 (2013).</li></ol>

Der er et par kritiske trin i protokollen. Først, kan blanding af assayblandinger være vanskeligt, fordi master mix er mere viskøs end konventionelle qPCR masterblandinger. Simpel vortexing kan føre til utilstrækkelig blanding, hvilket igen fører til uensartet fordeling af DNA-templates i assayblandinger og efterfølgende i små dråber. Blanding-by-pipetteringsteknik beskrevet i protokollen skal følges for at sikre nøjagtig dPCR kvantificering. For det andet er det vigtigt at sikre dråber genereres ved en ensa...

Kvantitativ PCR (qPCR) metoder er ofte blevet brugt til rekreative overvågning af vandkvalitet og mikrobielle kildesporing applikationer, fordi de er hurtigere, mere fleksibel og specifik i forhold til traditionelle kultur-baserede metoder. Derfor er qPCR anbefales for at opnå hurtige vandovervågningsnet resultater for generelle fækale indikatorer såsom Enterococcus spp. I de reviderede USEPA rekreative vand kvalitetskriterier 1. Mange qPCR assays er også blevet udviklet og valideret til at identificere kilder til fækal forurening i vandmiljøet 2. Blandt disse er de HF183 markør assays er blandt de hyppigst anvendte til at identificere humant-associeret fækal forurening 3. Dog kan qPCR resultater ofte være forudindtaget, fordi de er afhængige af standard kurver for kvantificering. qPCR kvantificerer ukendte koncentrationer af mål i prøver ved at interpolere deres kvantificering cyklus (Cq) fra en standard kurve, der beskriver en lineær sammenhæng mellem Cq og logaritmisk mængde af et sæt af serielt fortyndede standarder. Mangel på pålidelige og konsekvent standard referencemateriale kan derfor i høj grad forspænde qPCR resultater. Undersøgelser viste, at qPCR resultater afveg ca. ½ log vha standarder fra forskellige leverandører 4 og med 2-fold under anvendelse af forskellige batches af standarder fra samme leverandør 5. Digital PCR (dPCR) teknologi kvantificerer en ukendt prøve ved at tælle frekvensen af positive i stort antal af miniature PCR, der er genereret ved at opdele en bulk qPCR i tusinder eller millioner af ensartet nanoliter eller picoliter reaktioner 6. Det er nævnt som dråbe digital PCR (dvs. denne artikel) eller kammer digital PCR henholdsvis hvis partitioner er vand-i-olie dråber (dvs. denne artikel) eller små kamre på en chip. En højere koncentration prøve vil resultere i nærvær af mål-DNA(Dermed positiv PCR) i en højere andel af skillevægge, et forhold tilnærmes ved Poisson-fordeling. Som sådan er de binære resultater (positiv eller negativ PCR) registreres og frekvensen af ​​positive dråber anvendes til at beregne ukendte prøvekoncentrationer direkte via Poisson tilnærmelse, hvilket eliminerer behovet for en standardkurve som i qPCR. Denne binære karakter af digital PCR kvantificering giver yderligere fordele i forhold til qPCR 7. Fordi forsinket amplifikation stadig kan give en positiv PCR, dPCR kvantificering er mere robust over for inhibering, som reducerer virkningsgrad for forstærkningen. Tilsvarende er dPCR kvantificering ikke påvirket af variationer i CQ værdier er qPCR, hvilket fører til højere præcision dPCR sammenlignet med qPCR 8-10. Desuden fordelingsprocessen sikrer en meget lille mængde af mål-DNA til stede i hver dråbe, effektivt minimerer substrat konkurrence (under amplification af forskellige DNA-mål), som er fælles hindringer for at opnå duplex (dvs. en assay samtidig måler to DNA-mål) i qPCR. Som sådan, uanset om løb duplex eller simplex (dvs. et mål måles i et enkelt assay) dPCR producerer næsten ikke skelnes kvantificering af begge mål 7,11. Målet med den digitale PCR assay (EntHF183 dPCR) beskrevet i denne artikel er at opnå samtidig direkte kvantificering af den generelle fækal indikator Enterococcus spp. Og menneske-fækal forbundet HF183 markør med forbedret præcision, reproducerbarhed og robusthed mod hæmning i forhold til sin qPCR modstykker. Denne analyse er med succes blevet anvendt til kvantificering fækal forurening i miljøet ferskvand, havvand, og diverse afføring 7, men kan også anvendes på andre typer af farvande og spildevand. Denne analyse lover godt for at analysere sedimenter eller jord på grund af dets høj tolerance til hæmning, men yderligere test er nødvendig på grund af kompleksiteten af ​​inhibitor blander i disse typer af prøver.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1361">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Low Bind Microtubes</td>
			<td style="width:84px;">Costar</td>
			<td style="width:439px;">3207</td>
			<td style="width:575px;">For storage of reagents, samples/production of master mixes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Nuclease Free Water</td>
			<td style="width:84px;">FisherSci</td>
			<td style="width:439px;">BP2484-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">TE pH 8 buffer</td>
			<td style="width:84px;">FisherSci</td>
			<td style="width:439px;">BP2473-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Hardshell 96 Well Plate</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>HSP-9601</td>
			<td>For initial master mix and sample inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Aluminum Sealing Film</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>359-0133</td>
			<td>To seal sample plate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Droplet Generator</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td style="width:439px;">186-3002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Droplet Generation Oil</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>186-3005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Cartridge</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>186-4008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">DG8 Cartridge Holder</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>186-3051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Gasket</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>186-3009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">20uL pipet tips</td>
			<td style="width:84px;">Rainin</td>
			<td style="width:439px;">GP-L10F</td>
			<td>For tansferring sample/master mix to cartidge</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">200uL pipet tips</td>
			<td style="width:84px;">Rainin</td>
			<td style="width:439px;">GP-L200F</td>
			<td>For transferring droplets to final Twin.Tec Plate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Twin.Tec 96 Well Plate</td>
			<td style="width:84px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:439px;">951020320</td>
			<td>For final droplets thermal cycling and reading</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Pierceable Heat Seal Foil</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>181-4040</td>
			<td>To seal Twin.Tec plate before thermalcycling</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">PX1 PCR Plate Sealer</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td style="width:439px;">181-4000</td>
			<td>Only the thermal cycler is needed, no optics</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">CFX96 Thermalcycler</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td style="width:439px;">CFX96 and C1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">QX100 Droplet Reader</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td style="width:439px;">186-3001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Droplet Reader Oil</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>186-3004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Droplet PCR Supermix&#160;</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td style="width:439px;">186-3024</td>
			<td>i.e. the digital PCR mix in manuscript</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">QuantaSoft software (v1.3.2)</td>
			<td style="width:84px;">Quantasoft&#160;</td>
			<td style="width:439px;">QX100&#160;</td>
			<td>For viewing, analyzing, and exporting ddPCR data</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Entero Forward Primer (Ent F1A)</td>
			<td style="width:84px;">Operon</td>
			<td>GAGAAATTCCAAACGAACTTG</td>
			<td>Alternative vendor can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Entero Reverse Primer (Ent R1)</td>
			<td style="width:84px;">Operon</td>
			<td>CAGTGCTCTACCTCCATCATT</td>
			<td>Alternative vendor can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Entero Probe (GPL813TQ)</td>
			<td style="width:84px;">Operon</td>
			<td>[6-FAM]-TGG TTC TCT CCG AAA TAG CTT TAG GGC TA-[BHQ1]</td>
			<td>Alternative vendor can be used, but the florophore has to be FAM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">HF183 Forward Primer (HF183-1)</td>
			<td style="width:84px;">Operon</td>
			<td>ATCATGAGTTCACATGTCCG</td>
			<td>Alternative vendor can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">HF183 Reverse Primer (BthetR1)</td>
			<td style="width:84px;">Operon</td>
			<td>CGTAGGAGTTTGGACCGTGT</td>
			<td>Alternative vendor can be used</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:265px;">HF183 Probe (BthetP1)</td>
			<td style="width:84px;">Operon</td>
			<td>[6-HEX]-CTGAGAGGAAGGTCCCCC 
			ACATTGGA-[BHQ1]</td>
			<td style="width:575px;">Alternative vendor can be used, but the florophore has to be HEX (if using VIC, then the appropriate matric compensation must be chosen.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:265px;">Positive control</td>
			<td style="width:84px;"></td>
			<td style="width:439px;"></td>
			<td style="width:575px;">Mixture of E.faecalius genomic DNA and HF183 standard plasmid (ordered from IDT). For detailed methods in culturing E. faecalius and sequences of the ordered HF183 plasmid, please see Cao et al 2015 (doi:10.1016/j.watres.2014.12.008). Commercilaly available Enterococcus DNA standards (ATCC 29212Q-FZ) can also be used in the positive control in place of lab-prepared E. faecalis genomic DNA.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a duplex digital pcr assay for simultaneous quantification of the enterococcus spp. and the human fecal-associated hf183 marker in waters

Dette håndskrift beskriver en duplex digital PCR-assay (EntHF183 dPCR) til samtidig kvantificering af Enterococcus spp. Og det humane fækale-associerede HF183 markør. Den EntHF183 duplex dPCR (benævnt som EntHF183 dPCR herom) assay bruger de samme primer og probe sekvenser som de offentliggjorte individuelle kvantitativ PCR (qPCR) modstykker. Ligeledes er de samme vand filtrering og DNA ekstraktion som udføres før qPCR fulgt inden du kører dPCR. Imidlertid duplex dPCR assayet har flere fordele i forhold til qPCR assays. Vigtigste, dPCR assayet eliminerer behovet for at køre en standardkurve og dermed den tilhørende bias og variabilitet, ved direkte kvantificering af sine mål. Hertil kommer, mens dupleksudskrivning (dvs. samtidig kvantificering) Enterococcus og HF183 i qPCR ofte fører til alvorlig undervurdering af mindre rigelige mål i en prøve, dPCR giver konsekvent kvantificering af begge mål, hvæssehende kvantificeres individuelt eller samtidigt i den samme reaktion. Den dPCR analysen er også i stand til at tolerere PCR inhibitor koncentrationer, som er en til to størrelsesordener højere end de tolereres af qPCR. Disse fordele gør EntHF183 dPCR analysen særligt attraktivt, fordi det samtidig giver nøjagtig og reproducerbar oplysninger om både generelle og human-associeret fækal forurening i vandmiljøet uden behov for at køre to separate qPCR assays. Trods sine fordele i forhold qPCR, den øverste kvantificering grænse for dPCR analysen med i øjeblikket tilgængelig instrumentering er cirka fire størrelsesordener lavere end der kan opnås ved qPCR. Derfor er der behov for fortynding til måling af høje koncentrationer af målorganismer såsom dem, der typisk observeres efter spildevand udslip.

En god EntHF183 duplex dPCR løb bør resultere i relativt højt antal accepterede dråber (ca. 10,000-17,000) og relativ stor forskel (ca. 5000) mellem fluorescens-værdier for negative og positive dråber 7. Usædvanligt lave antal dråber sandsynligvis indikerer problemer i dråben generation proces, og en cutoff på 10.000 dråber foreslås baseret på empiriske data fra dråben dPCR system, der anvendes i denne artikel. En svagere adskillelse (dvs.</...

Watch this Scientific Journal Video about A Duplex Digital PCR Assay for Simultaneous Quantification of the Enterococcus spp. and the Human Fecal-associated HF183 Marker in Waters at JoVE.com

A Duplex Digital PCR Assay for Simultaneous Quantification of the Enterococcus spp. and the Human Fecal-associated HF183 Marker in Waters

Dette håndskrift beskriver en duplex digital PCR-assay, der kan anvendes til samtidigt at kvantificere Enterococcus spp. Og HF183 genetiske markører som indikatorer for generel og human-associeret fækal kontamination i rekreative vandområder.

En Duplex Digital PCR analyse for Samtidig Kvantificering af<em&gt; Enterococcus spp.</em&gt; Og Human Fækal-associerede HF183 Marker i Waters

This manuscript describes a duplex digital PCR assay (EntHF183 dPCR) for simultaneous quantification of Enterococcus spp. and the human fecal-associated ...

Research

JoVE Journal

Environment

A Duplex Digital PCR Assay for Simultaneous Quantification of the Enterococcus spp. and the Human Fecal-associated HF183 Marker in Waters

Determination of Microbial Extracellular Enzyme Activity in Waters, Soils, and Sediments using High Throughput Microplate Assays

Bestemmelse af Mikrobiel Extracellular enzymaktivitet i Vand, Jord og sediment ved hjælp af High Throughput Mikropladekrav Analyser

Much of the nutrient cycling and carbon  processing in natural environments occurs through the activity of extracellular  enzymes released by ...

Colorimetric Paper-based Detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from Large Volumes of Agricultural Water

Colorimetric Paper-based Detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from Large Volumes of Agricultural Water

Kolorimetrisk Papir-baseret detektion af<em&gt; Escherichia coli</em&gt;<em&gt; Salmonella</em&gt; Spp. Og<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Fra store mængder af Agricultural Water

This protocol describes rapid colorimetric detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from large volumes (10 L) of ...

Simultaneous DNA-RNA Extraction from Coastal Sediments and Quantification of 16S rRNA Genes and Transcripts by Real-time PCR

Samtidig DNA-RNA-ekstraktion fra kystsedimenter og kvantificering af 16S rRNA-generne og udskrifter af Real-time PCR

Real Time Polymerase Chain Reaction also known as quantitative PCR (q-PCR) is a widely used tool in microbial ecology to quantify gene abundances of ...

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

Clean Prøveudtagning og analyse af floden og kystvande for Trace Metal Studies

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

Protokol for Microplastics Sampling på havoverfladen og Sample Analysis

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of ...

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis

Ekstraktion af organiske chlorpesticider fra plastpellets og plasttypeanalyse

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment ...

The Hawaii Protocol for Scientific Monitoring of Coffee Berry Borer: a Model for Coffee Agroecosystems Worldwide

Hawaii protokol for videnskabelig overvågning af kaffe bær soegeren: en Model for kaffe Agroecosystems hele verden

Coffee berry borer (CBB) is the most devastating insect pest for coffee crops worldwide. We developed a scientific monitoring protocol that is aimed at ...

Specific and Accurate Detection of the Citrus Greening Pathogen Candidatus liberibacter spp. Using Conventional PCR on Citrus Leaf Tissue Samples

Specific and Accurate Detection of the Citrus Greening Pathogen Candidatus liberibacter  spp. Using Conventional PCR on Citrus Leaf Tissue Samples

Specifikke og præcise påvisning af Citrus grønnere patogen blev liberibacter spp. ved hjælp af konventionelle PCR på Citrus blad vævsprøver

Citrus greening, also known as huanglongbing, is a destructive citrus disease ravaging citrus farms globally. This disease causes asymmetrical yellow leaf ...

Measuring the Flight Ability of the Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus (Murayama), Using a Low-Cost, Small, and Easily Constructed Flight Mill

Measuring the Flight Ability of the Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus Murayama, Using a Low-Cost, Small, and Easily Constructed Flight Mill

Måling af flyvning evne til Ambrosia Bille, Platypus Quercivorus (Murayama), ved hjælp af en billig, lille og let bygget flyvning Mill

The ambrosia beetle, Platypus quercivorus (Murayama), is the vector of a fungal pathogen that causes mass mortality of Fagaceae trees (Japanese oak wilt). ...

Harvesting Venom Toxins from Assassin Bugs and Other Heteropteran Insects

Høst Venom toksiner fra Assassin Bugs og andre Heteropteran insekter

Heteropteran insects such as assassin bugs (Reduviidae) and giant water bugs (Belostomatidae) descended from a common predaceous and venomous ancestor, ...