Name: a duplex digital pcr assay for simultaneous quantification of the enterococcus spp. and the human fecal-associated hf183 marker in waters
Uploaded: 2016-03-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Duplex Digital PCR Assay for Simultaneous Quantification of the Enterococcus spp. and the Human Fecal-associated HF183 Marker in Waters at JoVE.com

The authors have no acknowledgements.

1. Analysbränsleblandning <ol><li> Gör 100 mikromol / L förrådskoncentrationer för alla primers i molekylärbiologisk kvalitet vatten och sonder i TE pH 8 buffert [Entero F1A, Entero R1, GPL813TQ 12; HF183-1, BthetR1, BthetP1 3]. Obs: Sönder för de två målen fluorescerande med olika fluoroforer 7 som anges i lista över material / utrustning. </li><li> Förbered Master Mix genom att blanda, per reaktion planerat 12 pl digital PCR-blandning (2x lager, se lista över mate...

<ol>
	<li>Boehm, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+forty-one+microbial+source+tracking+methods:+A+twenty-seven+lab+evaluation+study.">Performance of forty-one microbial source tracking methods: A twenty-seven lab evaluation study.</a> Water Res. 47 (18), 6812-6828 (2013).</li><li>Layton, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+human+fecal+anaerobe-associated+PCR-based+assays+in+a+multi-laboratory+method+evaluation+study.">Performance of human fecal anaerobe-associated PCR-based assays in a multi-laboratory method evaluation study.</a> Water Res. 47 (18), 6897-6908 (2013).</li><li>Cao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+platform,+reference+material,+and+quantification+model+on+enumeration+of+Enterococcus+by+quantitative+PCR+methods.">Effect of platform, reference material, and quantification model on enumeration of Enterococcus by quantitative PCR methods.</a> Water Res. 47 (1), 233-241 (2013).</li><li>Sivaganesan, M., Siefring, S., Varma, M., Haugland, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MPN+estimation+of+qPCR+target+sequence+recoveries+from+whole+cell+calibrator+samples.">MPN estimation of qPCR target sequence recoveries from whole cell calibrator samples.</a> J. Microbiol. Methods. 87 (3), 343-349 (2011).</li><li>Huggett, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Digital+MIQE+Guidelines:+Minimum+Information+for+Publication+of+Quantitative+Digital+PCR+Experiments.">The Digital MIQE Guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Digital PCR Experiments.</a> Clin. Chem. 59 (6), 892-902 (2013).</li><li>Cao, Y., Raith, M. R., Griffith, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Droplet+digital+PCR+for+simultaneous+quantification+of+general+and+human-associated+fecal+indicators+for+water+quality+assessment.">Droplet digital PCR for simultaneous quantification of general and human-associated fecal indicators for water quality assessment.</a> Water Res. 70, 337-349 (2015).</li><li>Sanders, R., Huggett, J. F., Bushell, C. A., Cowen, S., Scott, D. J., Foy, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+Digital+PCR+for+Absolute+DNA+Quantification.">Evaluation of Digital PCR for Absolute DNA Quantification.</a> Anal. Chem. 83 (17), 6474-6484 (2011).</li><li>Whale, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+microfluidic+digital+PCR+and+conventional+quantitative+PCR+for+measuring+copy+number+variation.">Comparison of microfluidic digital PCR and conventional quantitative PCR for measuring copy number variation.</a> Nucleic Acid Res. 40 (11), 82-89 (2012).</li><li>Hindson, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absolute+quantification+by+droplet+digital+PCR+versus+analog+real-time+PCR.">Absolute quantification by droplet digital PCR versus analog real-time PCR.</a> Nature Methods. 10 (10), 1003-1005 (2013).</li><li>Morisset, D., &#352;tebih, D., Milavec, M., Gruden, K., &#381;el, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+food+and+feed+aamples+with+droplet+digital+PCR.">Quantitative analysis of food and feed aamples with droplet digital PCR.</a> PLoS One. 8 (5), e62583 (2013).</li><li>Cao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+molecular+community+analysis+methods+for+discerning+fecal+sources+and+human+waste.">Evaluation of molecular community analysis methods for discerning fecal sources and human waste.</a> Water Res. 47 (18), 6862-6872 (2013).</li></ol>

Det finns några viktiga steg i protokollet. För det första kan blandning av analysblandningar vara svårt eftersom Master Mix är mer trögflytande än konventionella qPCR huvudmixarna. Enkel virvling kan leda till otillräcklig blandning, som i sin tur leder till icke likformig fördelning av DNA-mallar i analysblandningar och därefter i dropparna. Blandnings-by-pipetteringsteknik som beskrivs i protokollet måste följas för att säkerställa korrekt dPCR kvantifiering. För det andra är det viktigt att säkerst...

Kvantitativa PCR (qPCR) metoder har använts i stor utsträckning för fritids övervakning av vattenkvaliteten och mikrobiell källa tracking program eftersom de är snabbare, mer flexibel och specifik jämfört med traditionella odlingsbaserade metoder. Följaktligen qPCR rekommenderas för att uppnå snabba vatten övervakningsresultat för allmänna fekal indikatorer såsom Enterococcus spp. I de reviderade USEPA kriterier fritids vattenkvalitet 1. Många qPCR analyser har också utvecklats och godkänts för att identifiera källorna till fekal förorening i miljö vatten 2. Bland dessa, de HF183 markör analyser är bland de mest använda för att identifiera human associerade fekal förorening 3. Däremot kan qPCR resultat ofta vara partisk eftersom de är beroende av standardkurvor för kvantifiering. qPCR kvantifierar okända koncentrationer av mål i prover genom att interpolera deras kvantifiering cykel (Cq) från en standard kurva som beskriver ett linjärt förhållande mellan Cq och logaritmisk kvantitet av en uppsättning av i serie-spädda standarder. Bristen på tillförlitliga och konsekvent standard referensmaterial kan därför i hög grad förspänna qPCR resultat. Studier visade att qPCR resultat skilde sig med ungefär en halv log med hjälp av standarder från olika leverantörer 4 och två gånger med olika partier av standarder från samma leverantör 5. Digital PCR (dPCR) teknologi kvantifierar ett okänt prov genom att räkna frekvensen av positiva i ett stort antal små PCR som genereras genom att dela upp en bulk qPCR till tusentals eller miljontals enhetlig nanoliter eller picoliter reaktioner 6. Den betecknas som dropp digital PCR (dvs den här artikeln) eller kammare digital PCR, respektive, om partitioner vatten-i-oljedroppar (dvs den här artikeln) eller små kamrar på ett chip. En högre provkoncentration kommer att resultera i närvaro av mål-DNA(Därav positiv PCR) i en högre proportion av skiljeväggar, ett förhållande approximeras av Poisson-fördelning. Som sådana är de binära resultat (positivt eller negativt PCR) registreras och frekvensen av positiva droppar används för att beräkna okända provkoncentrationer direkt via Poisson approximation, vilket eliminerar behovet av en standardkurva som i qPCR. Denna binära karaktär digital PCR kvantifiering ger ytterligare fördelar jämfört med qPCR 7. Eftersom fördröjd förstärkning kan fortfarande ge en positiv PCR, är dPCR kvantifiering mer robust mot hämning som minskar förstärkningen effektivitet. På samma sätt är dPCR kvantifiering påverkas inte av variationer i Cq-värden som är qPCR, vilket leder till högre precision av dPCR jämfört med qPCR 8-10. Dessutom säkerställer fördelningsprocessen en mycket liten mängd av mål-DNA närvarande i varje droppe, effektivt minimera substrat konkurrens (under amplification olika DNA-mål) som är vanliga hinder för att uppnå dubbelsidig (dvs en analys mäter samtidigt två DNA-mål) i qPCR. Som sådan, om körning i duplex eller simplex (dvs. ett mål mäts i en enda analys) dPCR producerar nästan omöjlig att skilja kvantifiering av båda målen 7,11. Målet för den digitala PCR-analys (EntHF183 dPCR) som beskrivs i denna artikel är att erhålla samtidig direkt kvantifiering av den allmänna fekal indikatorn Enterococcus spp. Och HF183 markören människo fekal samband med förbättrad precision, reproducerbarhet och robusthet mot hämning jämfört med dess qPCR motsvarigheter. Denna analys har använts med framgång för att kvantifiera fekal kontaminering i miljö sötvatten, havsvatten och olika avföringsmaterial 7, men kan även tillämpas på andra typer av vatten och avloppsvatten. Denna analys är mycket lovande för att analysera sediment eller jord på grund av att detär hög tolerans mot hämning, men ytterligare tester krävs på grund av komplexiteten av inhibitor blandar i dessa typer av prover.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1361">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Low Bind Microtubes</td>
			<td style="width:84px;">Costar</td>
			<td style="width:439px;">3207</td>
			<td style="width:575px;">For storage of reagents, samples/production of master mixes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Nuclease Free Water</td>
			<td style="width:84px;">FisherSci</td>
			<td style="width:439px;">BP2484-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">TE pH 8 buffer</td>
			<td style="width:84px;">FisherSci</td>
			<td style="width:439px;">BP2473-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Hardshell 96 Well Plate</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>HSP-9601</td>
			<td>For initial master mix and sample inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Aluminum Sealing Film</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>359-0133</td>
			<td>To seal sample plate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Droplet Generator</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td style="width:439px;">186-3002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Droplet Generation Oil</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>186-3005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Cartridge</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>186-4008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">DG8 Cartridge Holder</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>186-3051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Gasket</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>186-3009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">20uL pipet tips</td>
			<td style="width:84px;">Rainin</td>
			<td style="width:439px;">GP-L10F</td>
			<td>For tansferring sample/master mix to cartidge</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">200uL pipet tips</td>
			<td style="width:84px;">Rainin</td>
			<td style="width:439px;">GP-L200F</td>
			<td>For transferring droplets to final Twin.Tec Plate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Twin.Tec 96 Well Plate</td>
			<td style="width:84px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:439px;">951020320</td>
			<td>For final droplets thermal cycling and reading</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Pierceable Heat Seal Foil</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>181-4040</td>
			<td>To seal Twin.Tec plate before thermalcycling</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">PX1 PCR Plate Sealer</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td style="width:439px;">181-4000</td>
			<td>Only the thermal cycler is needed, no optics</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">CFX96 Thermalcycler</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td style="width:439px;">CFX96 and C1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">QX100 Droplet Reader</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td style="width:439px;">186-3001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Droplet Reader Oil</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td>186-3004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Droplet PCR Supermix&#160;</td>
			<td style="width:84px;">BioRad</td>
			<td style="width:439px;">186-3024</td>
			<td>i.e. the digital PCR mix in manuscript</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">QuantaSoft software (v1.3.2)</td>
			<td style="width:84px;">Quantasoft&#160;</td>
			<td style="width:439px;">QX100&#160;</td>
			<td>For viewing, analyzing, and exporting ddPCR data</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Entero Forward Primer (Ent F1A)</td>
			<td style="width:84px;">Operon</td>
			<td>GAGAAATTCCAAACGAACTTG</td>
			<td>Alternative vendor can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Entero Reverse Primer (Ent R1)</td>
			<td style="width:84px;">Operon</td>
			<td>CAGTGCTCTACCTCCATCATT</td>
			<td>Alternative vendor can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Entero Probe (GPL813TQ)</td>
			<td style="width:84px;">Operon</td>
			<td>[6-FAM]-TGG TTC TCT CCG AAA TAG CTT TAG GGC TA-[BHQ1]</td>
			<td>Alternative vendor can be used, but the florophore has to be FAM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">HF183 Forward Primer (HF183-1)</td>
			<td style="width:84px;">Operon</td>
			<td>ATCATGAGTTCACATGTCCG</td>
			<td>Alternative vendor can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">HF183 Reverse Primer (BthetR1)</td>
			<td style="width:84px;">Operon</td>
			<td>CGTAGGAGTTTGGACCGTGT</td>
			<td>Alternative vendor can be used</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:265px;">HF183 Probe (BthetP1)</td>
			<td style="width:84px;">Operon</td>
			<td>[6-HEX]-CTGAGAGGAAGGTCCCCC 
			ACATTGGA-[BHQ1]</td>
			<td style="width:575px;">Alternative vendor can be used, but the florophore has to be HEX (if using VIC, then the appropriate matric compensation must be chosen.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:265px;">Positive control</td>
			<td style="width:84px;"></td>
			<td style="width:439px;"></td>
			<td style="width:575px;">Mixture of E.faecalius genomic DNA and HF183 standard plasmid (ordered from IDT). For detailed methods in culturing E. faecalius and sequences of the ordered HF183 plasmid, please see Cao et al 2015 (doi:10.1016/j.watres.2014.12.008). Commercilaly available Enterococcus DNA standards (ATCC 29212Q-FZ) can also be used in the positive control in place of lab-prepared E. faecalis genomic DNA.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a duplex digital pcr assay for simultaneous quantification of the enterococcus spp. and the human fecal-associated hf183 marker in waters

Detta manuskript beskriver en duplex digital PCR-analys (EntHF183 dPCR) för samtidig kvantifiering av Enterococcus spp. Och human fekal associerade HF183 markör. Den EntHF183 duplex dPCR (kallad EntHF183 dPCR härefter) analysen använder samma primer och sondsekvenser som offentliggjorda enskilda kvantitativ PCR (qPCR) motsvarigheter. På samma sätt är de samma vattenfiltrering och DNA extraktion som utförs före qPCR följt före körning dPCR. Däremot har duplex dPCR analysen flera fördelar jämfört med qPCR analyser. Viktigast av allt, det dPCR analysen eliminerar behovet av att köra en standardkurva och därmed den tillhörande fördomar och variationer, genom direkt kvantifiering av sina mål. Dessutom, medan dubbelsidig (dvs samtidig kvantifiering) Enterococcus och HF183 i qPCR ofta leder till svår underskattning av mindre rikligt mål i ett prov, ger dPCR konsekvent kvantifiering av båda målen, vässahenne kvantifieras var för sig eller samtidigt i samma reaktion. Den dPCR analysen är också tåla PCR inhibitorkoncentrationer som är en till två tiopotenser högre än de tolereras av qPCR. Dessa fördelar gör EntHF183 dPCR analysen särskilt attraktivt eftersom det samtidigt ger exakt och repeterbar information om både allmän och människa-associerad fekal förorening i miljö vatten utan att behöva köra två separata qPCR analyser. Trots sina fördelar jämfört med qPCR, är den övre kvantifieringsgräns av dPCR analysen med för närvarande tillgänglig instrumente ungefär fyra storleksordningar lägre än den som kan uppnås genom qPCR. Följaktligen krävs utspädning för mätning av höga koncentrationer av målorganismerna, exempelvis de som typiskt observeras efter avloppsspill.

En bra EntHF183 duplex dPCR körningen bör resultera i relativt höga antalet accepterade droppar (ca 10,000-17,000) och relativt stora skillnaden (ca 5000) mellan fluorescensvärden för negativa och positiva droppar 7. Ovanligt lågt antal droppar sannolikt indikerar problem i droppgenereringsprocessen, och en cutoff på 10.000 droppar föreslås baserat på empiriska data från droppen dPCR system som används i den här artikeln. En svagare separation <e...

Watch this Scientific Journal Video about A Duplex Digital PCR Assay for Simultaneous Quantification of the Enterococcus spp. and the Human Fecal-associated HF183 Marker in Waters at JoVE.com

A Duplex Digital PCR Assay for Simultaneous Quantification of the Enterococcus spp. and the Human Fecal-associated HF183 Marker in Waters

Detta manuskript beskriver en duplex digital PCR-analys som kan användas för att samtidigt kvantifiera Enterococcus spp. Och HF183 genetiska markörer som indikatorer på generell och human-associerade fekal förorening i rekreationsvatten.

En Duplex Digital PCR-analys för samtidig kvantifiering av<em&gt; Enterococcus spp.</em&gt; Och Human fekal-associerade HF183 Marker i Waters

This manuscript describes a duplex digital PCR assay (EntHF183 dPCR) for simultaneous quantification of Enterococcus spp. and the human fecal-associated ...

Research

JoVE Journal

Environment

A Duplex Digital PCR Assay for Simultaneous Quantification of the Enterococcus spp. and the Human Fecal-associated HF183 Marker in Waters

Determination of Microbial Extracellular Enzyme Activity in Waters, Soils, and Sediments using High Throughput Microplate Assays

Fastställande av mikrobiell extracellulär enzymaktivitet i Vatten, Jord och sediment med hjälp av hög genomströmning mikroplattor Analyser

Much of the nutrient cycling and carbon  processing in natural environments occurs through the activity of extracellular  enzymes released by ...

Colorimetric Paper-based Detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from Large Volumes of Agricultural Water

Colorimetric Paper-based Detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from Large Volumes of Agricultural Water

Kolorimetrisk Pappersbaserade Upptäckt av<em&gt; Escherichia coli</em&gt;,<em&gt; Salmonella</em&gt; Spp.., Och<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Från stora volymer av jordbruks Vatten

This protocol describes rapid colorimetric detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from large volumes (10 L) of ...

Simultaneous DNA-RNA Extraction from Coastal Sediments and Quantification of 16S rRNA Genes and Transcripts by Real-time PCR

Samtidig DNA-RNA-extraktion från kustsediment och kvantifiering av 16S rRNA gener och transkript av Real-time PCR

Real Time Polymerase Chain Reaction also known as quantitative PCR (q-PCR) is a widely used tool in microbial ecology to quantify gene abundances of ...

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

Ren Provtagning och analys av floden och flodmynningar för spårmetall Studies

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

Protokoll för Microplastics Provtagning på havsytan och Provanalys

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of ...

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis

Extraktion av organiska klorpesticider från plastpellets och plasttypsanalys

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment ...

The Hawaii Protocol for Scientific Monitoring of Coffee Berry Borer: a Model for Coffee Agroecosystems Worldwide

Hawaii protokollet för vetenskaplig övervakning av kaffe Berry tillväxtborr: en modell för kaffe Agroecosystems i hela världen

Coffee berry borer (CBB) is the most devastating insect pest for coffee crops worldwide. We developed a scientific monitoring protocol that is aimed at ...

Specific and Accurate Detection of the Citrus Greening Pathogen Candidatus liberibacter spp. Using Conventional PCR on Citrus Leaf Tissue Samples

Specific and Accurate Detection of the Citrus Greening Pathogen Candidatus liberibacter  spp. Using Conventional PCR on Citrus Leaf Tissue Samples

Specifika och korrekt upptäckt av den Citrus grönare patogen Candidatus liberibacter spp. med konventionella PCR på Citrus Leaf vävnadsprover

Citrus greening, also known as huanglongbing, is a destructive citrus disease ravaging citrus farms globally. This disease causes asymmetrical yellow leaf ...

Measuring the Flight Ability of the Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus (Murayama), Using a Low-Cost, Small, and Easily Constructed Flight Mill

Measuring the Flight Ability of the Ambrosia Beetle, Platypus Quercivorus Murayama, Using a Low-Cost, Small, and Easily Constructed Flight Mill

Mäta flygning förmåga Ambrosia skalbaggen, Platypus Quercivorus (Murayama), med en billig, liten och enkelt konstruerade flyg Mill

The ambrosia beetle, Platypus quercivorus (Murayama), is the vector of a fungal pathogen that causes mass mortality of Fagaceae trees (Japanese oak wilt). ...

Harvesting Venom Toxins from Assassin Bugs and Other Heteropteran Insects

Skörda Venom gifter från Assassin buggar och andra Heteropteran insekter

Heteropteran insects such as assassin bugs (Reduviidae) and giant water bugs (Belostomatidae) descended from a common predaceous and venomous ancestor, ...