Name: sex differences in mouse hippocampal astrocytes after in-vitro ischemia
Uploaded: 2016-10-25T12:30:00
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Clinical and Translational Science Award program of NCATS UL1 TR0000427 and KL2 TR000428 (Cengiz P), UL1TR000427 to the UW ICTR from NIH/NCATS and funds from Waisman Center (Cengiz P), K08 NS088563-01A1 from NINDS (Cengiz P) and NIH P30 HD03352 (Waisman Center), NIH/NINDS 1K08NS078113 (Ferrazzano P). We would like to thank Albee Messing, PhD, for providing us the GFAP knockout mice.

नोट: इस अध्ययन की देखभाल के लिए गाइड की सिफारिश और स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान की प्रयोगशाला पशु के उपयोग के अनुसार में आयोजित किया गया। पशु प्रोटोकॉल विस्कॉन्सिन-मैडिसन, संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग स?...

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	<li>Powell, E. M., Geller, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+astrocyte-mediated+cues+in+neuronal+guidance+and+process+extension.">Dissection of astrocyte-mediated cues in neuronal guidance and process extension.</a> Glia. 26, 73-83 (1999).</li><li>Koehler, R. C., Roman, R. J., Harder, D. 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H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+DNA+extraction+and+PCR-sexing+of+mouse+embryos.">Rapid DNA extraction and PCR-sexing of mouse embryos.</a> Molecular reproduction and development. 60, 225-226 (2001).</li><li>Wolterink-Donselaar, I. G., Meerding, J. M., Fernandes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+gender+determination+in+newborn+dark+pigmented+mice.">A method for gender determination in newborn dark pigmented mice.</a> Lab Anim (NY). 38, 35-38 (2009).</li><li>Uliasz, T. F., Hamby, M. E., Jackman, N. A., Hewett, J. A., Hewett, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+primary+astrocyte+cultures+devoid+of+contaminating+microglia.">Generation of primary astrocyte cultures devoid of contaminating microglia.</a> Methods Mol Biol. 814, 61-79 (2012).</li><li>Raponi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=S100B+expression+defines+a+state+in+which+GFAP-expressing+cells+lose+their+neural+stem+cell+potential+and+acquire+a+more+mature+developmental+stage.">S100B expression defines a state in which GFAP-expressing cells lose their neural stem cell potential and acquire a more mature developmental stage.</a> Glia. 55, 165-177 (2007).</li><li>Souza, D. G., Bellaver, B., Souza, D. 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सेक्स शारीरिक और रोग की शर्तों के तहत astrocytes के गुणों में मतभेद और समारोह का अध्ययन करने के लिए, सेल संस्कृति में sexed प्राथमिक astrocytes की तैयारी का उपयोग करने के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण है। वर्तमान अध्ययन में ह...

Astrocytes केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) में सबसे महत्वपूर्ण प्रमुख खिलाड़ियों में से एक हैं। सबूत की बढ़ती शरीर इंगित करता है कि astrocytes की भूमिकाओं न्यूरोनल सहायता प्रदान करने की तुलना में अधिक हैं। वास्तव में, शारीरिक शर्तों के तहत astrocytes की भूमिका जैसे विकासशील एक्सोन 1 के प्रवास के मार्गदर्शक, सीएनएस रक्त के प्रवाह को विनियमित 2, synaptic मध्य द्रव 3 का पीएच homeostasis को बनाए रखने, और रक्त मस्तिष्क बाधा में भाग लेने के रूप में, बहुत जटिल हो सकता है 4 और 5 synaptic प्रसारण। रोग की स्थिति के तहत, astrocytes एक प्रक्रिया प्रतिक्रियाशील astrogliosis जिसमें आकृति विज्ञान, संख्या, स्थान, स्थलाकृति astrocytes की और समारोह (अपमान से दूरी के संबंध में) एक विषम रास्ता 6.7 में बदल सकता है कहा जाता है के साथ चोट का जवाब। देखा Astrogliosis नवजात hypoxic इस्कीमिक मस्तिष्क विकृति शायद रुग्णता और नवजात शिशुओं की मृत्यु दर में योगदान करने के बाद <s&gt; 8 तक। हाल ही में नैदानिक ​​और प्रायोगिक अध्ययन से संकेत मिलता है मस्तिष्क की चोट की गंभीरता सेक्स पर निर्भर होना प्रतीत होता है कि पुरुष और नवजात शिशुओं, और अधिक गंभीर स्नायविक परिणामों में जिसके परिणामस्वरूप की तुलना में हाइपोक्सिया / ischemia (एचआई) से संबंधित मस्तिष्क की चोट के प्रभाव के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं कि तुलनीय मस्तिष्क की चोटों 9-11 साथ महिलाओं। हालांकि चोट के स्थानीयकरण गर्भावधि उम्र और अवधि और अपमान की गंभीरता पर निर्भर करता है, हिप्पोकैम्पस सबसे अधिक प्रभावित अवधि नवजात HI बाद सीएनएस में क्षेत्रों में से एक है, और वृद्धि हिप्पोकैम्पस astrogliosis अप-विनियमन के द्वारा पुष्टि की गई है Glial fibrillary अम्लीय प्रोटीन (GFAP) 3 डी नवजात HI 7,10,12,13 के बाद। Astrocyte समारोह में सेक्स मतभेद मस्तिष्क ischemia 14,15 के बाद दोनों नवजात शिशुओं और वयस्क कृन्तकों में दिखाया गया। इसके अलावा, इन विट्रो ischemia के लिए पुरुष astrocytic संवेदनशीलता में वृद्धि हुई सेल द्वारा दिखाया गया थाएल मौत संस्कृति 16 में महिला cortical astrocytes की तुलना में। सेक्स मतभेदों में गर्भाशय शुरू करते हैं और मृत्यु 17 तक जारी है। पिछले दशक के दौरान, सेल संस्कृति में है और इन विवो अध्ययनों प्रयोगात्मक शर्तों में लिंगों सहित के महत्व को चिकित्सा और एनआईएच के संस्थान के जोर सेक्स शारीरिक और रोग की स्थिति 17,18 में देखा मतभेद में मौलिक ज्ञान की तलाश करने के लिए किया गया है । विश्वसनीय तरीकों का विकास अलग और sexed हिप्पोकैम्पस astrocytes की आबादी बनाए रखने के लिए नवजात HI के रोग परिणामों में लिंग भेद के सेलुलर आधार को समझने के लिए आवश्यक है। वर्तमान अध्ययन के आदेश के बाद ऑक्सीजन / ग्लूकोज अभाव (OGD) और reoxygenation (REOX), उत्प्रेरण GFAP-immunoreactive astrocytes की भूमिका का आकलन करने में नवजात चूहों से समृद्ध सेक्स-विशिष्ट हिप्पोकैम्पस astrocyte संस्कृतियों तैयार करने के लिए तकनीक प्रदान करने के लिए डिजाइन किया गया थासेल संस्कृति वातावरण में HI। इस तकनीक normoxic और इस्कीमिक की शर्तों के तहत नवजात पुरुषों और महिलाओं में हिप्पोकैम्पस astrocytes से संबंधित किसी भी परिकल्पना का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="4">Astrocyte culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose</td>
			<td>cellgro</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26050-070</td>
			<td>Final Concentration: 10%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Cellgro&#160;</td>
			<td>30-002-CI</td>
			<td>Final Concentration: 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">L-Leucine methyl ester hydrochloride</td>
			<td rowspan="2">Aldrich</td>
			<td rowspan="2">L1002-25G</td>
			<td rowspan="2">Final Concentration: 5 mM</td>
		</tr>
		<tr>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Solution for brain tissue digestion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>14170-088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% Trypsin</td>
			<td>cellgro</td>
			<td>25-050-CI</td>
			<td>Final Concentration: 0.25%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Other</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% (vol/vol) ethanol</td>
			<td>Roth</td>
			<td>9065.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-D-Lysine 12mm round coverslips&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354087</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>W3500</td>
			<td>cell culture grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>cellgro</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td>cell culture grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.05% Trypsin-EDTA&#160;</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25300-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#956;m Sterile cell strainer&#160;</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>22363548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.5 cm petri dish</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml Falcon tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Falcon tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps, fine&#160;</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>2-1032; 2-1033</td>
			<td># 3c; # 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps, flat tip</td>
			<td>KLS Martin</td>
			<td>12-120-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>13 cm surgical scissors</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>BC-140-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>A1RSi&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5805000.017</td>
			<td>Centrifuge5804R</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital Shaker</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SHKE 4450-1CE</td>
			<td>MaxQ 4450&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-IBA1</td>
			<td>Wako</td>
			<td>019-19741</td>
			<td>Rabbit monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-MAP2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2320</td>
			<td>Mouse monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-HIF1alpha</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab179483</td>
			<td>rabbit monoclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-S100B</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HPA015768</td>
			<td>Rabbit polyclonal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFAP (cocktail)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>837602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASTAIN Elite ABC Kit (Rabbit IgG)</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>PK-6101</td>
			<td>Contains 4 Reagents&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti Rabbit Alexa-Fluor 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti Mouse Alexa-Fluor 568</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11004</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sex differences in mouse hippocampal astrocytes after in-vitro ischemia

हाइपोक्सिया / ischemia (एचआई) से संबंधित मस्तिष्क की चोट के बाद Astrogliosis वृद्धि की रुग्णता और नवजात शिशुओं में मृत्यु दर में एक भूमिका निभाता है। हाल ही में नैदानिक अध्ययन से संकेत मिलता है कि मस्तिष्क की चोट की गंभीरता सेक्स निर्भर होना दिखाई देते हैं, और पुरुष नवजात शिशुओं और अधिक गंभीर स्नायविक परिणामों में जिसके परिणामस्वरूप तुलनीय मस्तिष्क की चोटों के साथ महिलाओं की तुलना में एचआई से संबंधित मस्तिष्क की चोट के प्रभाव के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं कि,। विश्वसनीय तरीकों के विकास के लिए अलग और sexed हिप्पोकैम्पस astrocytes की अत्यधिक समृद्ध आबादी बनाए रखने के लिए नवजात HI के रोग परिणामों में लिंग भेद के सेलुलर आधार को समझने के लिए आवश्यक है। इस अध्ययन में, हम सेक्स विशिष्ट हिप्पोकैम्पस astrocyte संस्कृतियों है कि इन विट्रो ischemia, ऑक्सीजन ग्लूकोज अभाव के एक मॉडल, reoxygenation के द्वारा पीछा के अधीन हैं बनाने के लिए एक विधि का वर्णन है। इसके बाद प्रतिक्रियाशील astrogliosis immunostai द्वारा जांच की गई थीGlial fibrillary अम्लीय प्रोटीन (GFAP) और S100B के लिए निंग। इस विधि, नवजात HI निम्नलिखित पुरुष और महिला हिप्पोकैम्पस astrocytes की भूमिका का अध्ययन करने के लिए अलग से एक उपयोगी उपकरण प्रदान करता है।

शारीरिक या pathophysiological शर्तों के तहत sexed astrocyte कार्यों की भूमिका को समझना बेहद इन विट्रो की शर्तों के तहत इन कोशिकाओं संवर्धन द्वारा elucidated किया गया है। sexed संवर्धन के प्रदर्शन के महत्वपूर्ण पहलू ?...

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Sex Differences in Mouse Hippocampal Astrocytes after In-Vitro Ischemia

Astrocytes केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) में सबसे महत्वपूर्ण प्रमुख खिलाड़ियों में से एक हैं। यहाँ, हम तंत्र के बाद इन विट्रो ischemia पुरुष और महिला नवजात शिशु पिल्ले में astrocyte समारोह अंतर्निहित का अध्ययन करने के क्रम में sexed हिप्पोकैम्पस astrocyte संस्कृति प्रोटोकॉल का एक व्यावहारिक विधि रिपोर्टिंग कर रहे हैं।

माउस hippocampal astrocytes में सेक्स अंतर के बाद<em&gt; इन-विट्रो</em&gt; Ischemia

Astrogliosis following hypoxia/ischemia (HI)-related brain injury plays a role in increased morbidity and mortality in neonates. Recent clinical studies ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sex Differences in Mouse Hippocampal Astrocytes after In-Vitro Ischemia

Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) of Fluorescence Tagged Proteins in Dendritic Spines of Cultured Hippocampal Neurons

Fluorescence Recovery After Photobleaching FRAP of Fluorescence Tagged Proteins in Dendritic Spines of Cultured Hippocampal Neurons

Photobleaching के बाद प्रतिदीप्ति रिकवरी (FRAP) संवर्धित hippocampal न्यूरॉन्स के वृक्ष के समान spines में प्रतिदीप्ति प्रोटीन के टैग की गईं

FRAP has been used to quantify the mobility of GFP-tagged proteins. Using a strong excitation laser, the fluorescence of a GFP-tagged protein is bleached ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

तीव्र hippocampal स्लाइस में Synaptically पैदा Astroglial और neuronal प्रतिक्रियाएँ की दोहरी electrophysiological रिकॉर्डिंग

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

अलगाव और माउस Cortical Astrocytes की संस्कृति

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

मॉडलिंग तारिकाकोशिकार्बुद रोगजनन<em&gt; इन विट्रो</em&gt; और<em&gt; इन विवो</em&gt; Cortical Astrocytes या सशर्त, आनुवंशिक रूप से इंजीनियर चूहों से तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं का उपयोग

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease ...

Immunohistochemical Visualization of Hippocampal Neuron Activity After Spatial Learning in a Mouse Model of Neurodevelopmental Disorders

Neurodevelopmental विकार की एक माउस मॉडल में स्थानिक सीखने के बाद Hippocampal न्यूरॉन गतिविधि के immunohistochemical दृश्य

Induction of phosphorylated extracellular-regulated kinase (pERK) is a reliable molecular readout of learning-dependent neuronal activation. Here, we ...

Protocol for Three-dimensional Confocal Morphometric Analysis of Astrocytes

Astrocytes की तीन आयामी Confocal morphometric विश्लेषण के लिए प्रोटोकॉल

As glial cells in the brain, astrocytes have diverse functional roles in the central nervous system. In the presence of harmful stimuli, astrocytes modify ...

Tuning in the Hippocampal Theta Band In Vitro: Methodologies for Recording from the Isolated Rodent Septohippocampal Circuit

Tuning in the Hippocampal Theta Band In Vitro: Methodologies for Recording from the Isolated Rodent Septohippocampal Circuit

हिप्पोकैम्पल थीटा बैंड में ट्यूनिंग<em&gt; विट्रो में</em&gt;: अलगाववादी कृंतक सेप्टोशिपोकैम्पल सर्किट से रिकॉर्डिंग के लिए तरीके

This protocol outlines the procedures for preparing and recording from the isolated whole hippocampus, of WT and transgenic mice, along with recent ...

In Utero Electroporation of Multiaddressable Genome-Integrating Color (MAGIC) Markers to Individualize Cortical Mouse Astrocytes

In Utero Electroporation of Multiaddressable Genome-Integrating Color MAGIC Markers to Individualize Cortical Mouse Astrocytes

कॉर्टिकल माउस एस्ट्रोसाइट्स को व्यक्तिगत बनाने के लिए बहु-इंट्रेस्ड जीनोम-इंटीग्रेटिंग कलर (मैजिक) मार्कर के यूटेरो इलेक्ट्रोपंट्रेशन में

Protoplasmic astrocytes (PrA) located in the mouse cerebral cortex are tightly juxtaposed, forming an apparently continuous three-dimensional matrix at ...

Neuronal Differentiation from Mouse Embryonic Stem Cells In vitro

माउस भ्रूण स्टेम सेल इन विट्रो से न्यूरोनल भेदभाव

The neural differentiation of mouse embryonic stem cells (mESCs) is a potential tool for elucidating the key mechanisms involved in neurogenesis and ...

Horizontal Hippocampal Slices of the Mouse Brain

माउस मस्तिष्क के क्षैतिज हिप्पोकैम्पल स्लाइस

The hippocampus is a highly organized structure in the brain that is a part of the limbic system and is involved in memory formation and consolidation as ...