Name: in situ characterization of hydrated proteins in water by salvi and tof-sims
Uploaded: 2016-02-15T15:00:00
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We are grateful to the Pacific Northwest National Laboratory (PNNL) Chemical Imaging Initiative-Laboratory Directed Research and Development (CII-LDRD) and Materials Synthesis and Simulation across Scales (MS3) Initiative LDRD fund for support. Instrumental access was provided through a W. R. Wiley Environmental Molecular Sciences Laboratory (EMSL) Science Themed Proposal. EMSL is a national scientific user facility sponsored by the Office of Biological and Environmental Research (BER) at PNNL. The authors thank Mr. Xiao Sui, Mr. Yuanzhao Ding, and Ms. Juan Yao for proof reading the manuscript and providing useful feedback. PNNL is operated by Battelle for the DOE under Contract DE-AC05-76RL01830.

1. nettoyage et la stérilisation de l&#39;Microchannel SALVI <ol><li> Stérilisation du Microchannel dans SALVI <ol><li> Piochez 2 ml de solution aqueuse à 70% d&#39;éthanol dans une seringue, connecter la seringue à l&#39;extrémité d&#39;entrée de SALVI, et injecter lentement 1 ml de liquide dans 10 min. Retirer la seringue en fin d&#39;injection. Ensuite, connectez l&#39;entrée et la sortie de SALVI utilisant une polyétheréthercétone (PEEK) union. Vous pouvez également utiliser une pompe à seringue pour...

<ol>
	<li>Tompa, K., Bokor, M., Verebelyi, T., Tompa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Water+rotation+barriers+on+protein+molecular+surfaces.">Water rotation barriers on protein molecular surfaces.</a> Chem. Phys. 448, 15-25 (2015).</li><li>Maruyama, Y., Harano, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+water+drive+protein+folding?.">Does water drive protein folding?.</a> Chem. Phys. Lett. 581, 85-90 (2013).</li><li>Chaplin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opinion+-+Do+we+underestimate+the+importance+of+water+in+cell+biology.">Opinion - Do we underestimate the importance of water in cell biology.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 7 (11), 861-866 (2006).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+hydration+dynamics+around+a+protein+surface.">Mapping hydration dynamics around a protein surface.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 104 (47), 18461-18466 (2007).</li><li>Xia, N., May, C. J., McArthur, S. L., Castner, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-of-flight+secondary+ion+mass+spectrometry+analysis+of+conformational+changes+in+adsorbed+protein+films.">Time-of-flight secondary ion mass spectrometry analysis of conformational changes in adsorbed protein films.</a> Langmuir. 18 (10), 4090-4097 (2002).</li><li>Gray, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+interaction+of+proteins+with+solid+surfaces.">The interaction of proteins with solid surfaces.</a> Curr. Opin. Struct. Biol. 14 (1), 110-115 (2004).</li><li>Wagner, M. S., Horbett, T. A., Castner, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+structure+of+binary+and+ternary+adsorbed+protein+films+using+electron+spectroscopy+for+chemical+analysis,+time-of-flight+secondary+ion+mass+spectrometry,+and+radiolabeling.">Characterization of the structure of binary and ternary adsorbed protein films using electron spectroscopy for chemical analysis, time-of-flight secondary ion mass spectrometry, and radiolabeling.</a> Langmuir. 19 (5), 1708-1715 (2003).</li><li>Yang, L., Yu, X. -. Y., Zhu, Z., Iedema, M. J., Cowin, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+liquid+surfaces+under+vacuum+using+SEM+and+and+ToF-SIMS.">Probing liquid surfaces under vacuum using SEM and and ToF-SIMS.</a> Lab Chip. 11 (15), 2481-2484 (2011).</li><li>Yang, L., Yu, X. -. Y., Zhu, Z. H., Thevuthasan, T., Cowin, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+a+hybrid+microfluidic+platform+compatible+for+in+situ+imaging+by+vacuum-based+techniques.">Making a hybrid microfluidic platform compatible for in situ imaging by vacuum-based techniques.</a> J. Vac. Sci. Technol. A. 29 (6), 061101 (2011).</li><li>Yu, X. -. Y., Yang, L., Zhu, Z. H., Cowin, J. P., Iedema, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+aqueous+surfaces+by+ToF-SIMS.">Probing aqueous surfaces by ToF-SIMS.</a> LC GC N. Am. (Oct), 34-38 (2011).</li><li>Yu, X. -. Y., Yang, L., Cowin, J., Iedema, M., Zhu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systems+and+methods+for+analyzing+liquids+under+vacuum.">Systems and methods for analyzing liquids under vacuum.</a> US patent. , (2013).</li><li>Yu, X. -. Y., Liu, B., Yang, L., Zhu, Z., Marshall, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+electrochemical+device+and+process+for+chemical+imaging+and+electrochemical+analysis+at+the+electrode-liquid+interface+in+situ.">Microfluidic electrochemical device and process for chemical imaging and electrochemical analysis at the electrode-liquid interface in situ.</a> US patent. , (2014).</li><li>Yang, L., Zhu, Z., Yu, X. -. Y., Thevuthasan, S., Cowin, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+a+microfluidic+device+for+in+situ+ToF-SIMS+analysis+of+selected+organic+molecules+at+aqueous+surfaces.">Performance of a microfluidic device for in situ ToF-SIMS analysis of selected organic molecules at aqueous surfaces.</a> Anal. Methods. 5 (10), 2515-2522 (2013).</li><li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+SEM+and+ToF-SIMS+analysis+of+IgG+conjugated+gold+nanoparticles+at+aqueous+surfaces.">In situ SEM and ToF-SIMS analysis of IgG conjugated gold nanoparticles at aqueous surfaces.</a> Surf. Interface Anal. 46 (4), 224-228 (2014).</li><li>Hua, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+molecular+imaging+of+hydrated+biofilm+in+a+microfluidic+reactor+by+ToF-SIMS.">In situ molecular imaging of hydrated biofilm in a microfluidic reactor by ToF-SIMS.</a> Analyst. 139 (7), 1609-1613 (2014).</li><li>Hua, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-dimensional+and+three-dimensional+dynamic+imaging+of+live+biofilms+in+a+microchannel+by+time-of-flight+secondary+ion+mass+spectrometry.">Two-dimensional and three-dimensional dynamic imaging of live biofilms in a microchannel by time-of-flight secondary ion mass spectrometry.</a> Biomicrofluidics. 9 (3), 031101 (2015).</li><li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+chemical+probing+of+the+electrode-electrolyte+interface+by+ToF-SIMS.">In situ chemical probing of the electrode-electrolyte interface by ToF-SIMS.</a> Lab Chip. 14 (5), 855-859 (2014).</li><li>Pankov, R., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibronectin+at+a+glance.">Fibronectin at a glance.</a> J. Cell Sci. 115 (20), 3861-3863 (2002).</li><li>Pierschbacher, M. D., Hayman, E. G., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Location+of+the+cell-attachment+site+in+fibronectin+with+monoclonal+antibodies+and+proteolytic+fragments+of+the+molecule.">Location of the cell-attachment site in fibronectin with monoclonal antibodies and proteolytic fragments of the molecule.</a> Cell. 26 (2), 259-267 (1981).</li><li>Engvall, E., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+of+soluble+form+of+fibroblast+surface+protein,+fibronectin,+to+collagen.">Binding of soluble form of fibroblast surface protein, fibronectin, to collagen.</a> Int. J. Cancer. 20 (1), 1-5 (1977).</li><li>Green, F. M., Gilmore, I. S., Seah, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TOF-SIMS:+Accurate+mass+scale+calibration.">TOF-SIMS: Accurate mass scale calibration.</a> J. Am. Soc. Mass Spectrom. 17 (4), 514-523 (2006).</li><li>Yu, X. -. Y., Liu, B., Yang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+liquids+using+microfluidic+cells.">Imaging liquids using microfluidic cells.</a> Microfluid. Nanofluid. 15 (6), 725-744 (2013).</li><li>Shi, H., Lercher, J. A., Yu, X. -. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sailing+into+uncharted+waters:+recent+advances+in+the+in+situ+monitoring+of+catalytic+processes+in+aqueous+environments.">Sailing into uncharted waters: recent advances in the in situ monitoring of catalytic processes in aqueous environments.</a> Catal. Sci. Technol. 5 (6), 3035-3060 (2015).</li><li>Deleu, M., Crowet, J. M., Nasir, M. N., Lins, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementary+biophysical+tools+to+investigate+lipid+specificity+in+the+interaction+between+bioactive+molecules+and+the+plasma+membrane:+A+review.">Complementary biophysical tools to investigate lipid specificity in the interaction between bioactive molecules and the plasma membrane: A review.</a> Biochim. Biophys. Acta-Biomembr. 1838 (12), 3171-3190 (2014).</li><li>Kraft, M. L., Klitzing, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+lipids+with+secondary+ion+mass+spectrometry.">Imaging lipids with secondary ion mass spectrometry.</a> Biochim. Biophys. Acta Mol. Cell Biol. Lipids. 1841 (8), 1108-1119 (2014).</li><li>Gilmore, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SIMS+of+organics-Advances+in+2D+and+3D+imaging+and+future+outlook.">SIMS of organics-Advances in 2D and 3D imaging and future outlook.</a> J. Vac. Sci. Technol. A. 31 (5), 050819 (2013).</li><li>Muramoto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ToF-SIMS+Analysis+of+Adsorbed+Proteins:+Principal+Component+Analysis+of+the+Primary+Ion+Species+Effect+on+the+Protein+Fragmentation+Patterns.">ToF-SIMS Analysis of Adsorbed Proteins: Principal Component Analysis of the Primary Ion Species Effect on the Protein Fragmentation Patterns.</a> J. Phys. Chem. C. 115 (49), 24247-24255 (2011).</li><li>Br&#252;ning, C., Hellweg, S., Dambach, S., Lipinsky, D., Arlinghaus, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+the+interpretation+of+ToF-SIMS+measurements+on+adsorbed+proteins+using+PCA.">Improving the interpretation of ToF-SIMS measurements on adsorbed proteins using PCA.</a> Surf. Interface Anal. 38 (4), 191-193 (2006).</li><li>Gustavsson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+modifications+of+silicon+nitride+for+cellular+biosensor+applications.">Surface modifications of silicon nitride for cellular biosensor applications.</a> J. Mater. Sci.-Mater. Med. 19 (4), 1839-1850 (2008).</li><li>Deng, J., Ren, T. C., Zhu, J. Y., Mao, Z. W., Gao, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adsorption+of+plasma+proteins+and+fibronectin+on+poly(hydroxylethyl+methacrylate)+brushes+of+different+thickness+and+their+relationship+with+adhesion+and+migration+of+vascular+smooth+muscle+cells.">Adsorption of plasma proteins and fibronectin on poly(hydroxylethyl methacrylate) brushes of different thickness and their relationship with adhesion and migration of vascular smooth muscle cells.</a> Regen Biomater. , 17-25 (2014).</li></ol>

SALVI est une interface qui permet microfluidique surface du liquide dynamique et liquide-solide analyse d&#39;interface par des instruments d&#39;aspiration en fonction, comme TOF-SIMS et microscopie électronique à balayage (MEB). En raison de l&#39;utilisation de petites ouvertures pour exposer liquide directement dans le vide, SALVI est adapté à de nombreuses techniques de spectroscopie et imagerie finement ciblées sans aucune modification; 22 la portabilité et la polyvalence de la microfluidique en ...

L&#39;hydratation est essentielle pour la structure, une conformation, 2 3 et l&#39;activité biologique des protéines. Protéines sans les molécules d&#39;eau qui les entourent ne seraient pas avoir des activités biologiques viables. En particulier, les molécules d&#39;eau interagissent avec la surface et de la structure interne de protéines, et les différents états d&#39;hydratation de protéines font de telles interactions distinctes. 4 L&#39;interaction des protéines avec des surfaces solides est un phénomène fondamental avec des implications dans les nanotechnologies, les biomatériaux et les processus d&#39;ingénierie tissulaire. Des études ont indiqué que les temps des changements conformationnels peuvent se produire en tant que protéine rencontre une surface. ToF-SIMS a été envisagé que la technique qui a le potentiel d&#39;étudier l&#39;interface protéine-solide 7.5. Il est important de comprendre l&#39;hydratation de protéines sur des surfaces solides, qui fournit potentiellement une compréhension fondamentale du mécanisme de leur structure, conformation et biologiqueactivité al. Cependant, les techniques d&#39;analyse de surface importante sont pour la plupart à base de vide et des applications directes pour les études liquides volatils sont difficiles en raison de l&#39;évaporation rapide de liquide volatil dans l&#39;environnement sous vide. Nous avons développé un vide Interface microfluidique compatible, Système d&#39;analyse à l&#39;interface de vide Liquide (SALVI), pour permettre l&#39;observation directe des surfaces liquides et les interactions liquide-solide en utilisant des ions secondaires spectrométrie de temps de vol de masse (TOF-SIMS). 8- 11 les aspects uniques sont les suivants: 1) la fenêtre de détection est une ouverture de 2-3 um de diamètre et permettant l&#39;imagerie directe de la surface du liquide, 2) la tension de surface est utilisé pour maintenir le liquide dans l&#39;ouverture, et 3) Salvi portable entre plusieurs plates-formes d&#39;analyse. 11,12 SALVI se compose d&#39;un nitrure de silicium (SiN) membrane en tant que zone de détection et un microcanal en polydiméthylsiloxane (PDMS). Il est fabricated dans la salle blanche, et les facteurs de fabrication et de conception clé ont été détaillés dans les documents précédents et les brevets. 8-12 Les applications de TOF-SIMS comme un outil d&#39;analyse ont été démontrées en utilisant une variété de solutions aqueuses et les mélanges de liquides complexes, dont certains qui contenait des nanoparticules. 13-17 précisément, SALVI liquide TOF-SIMS permet dynamique de sondage de l&#39;interface liquide-solide des systèmes vivants biologiques (ie, les biofilms), des cellules individuelles, et l&#39;interface électrolyte solide, ouvrant de nouvelles perspectives pour la phase in situ condensé études, y compris les liquides à l&#39;aide de TOF-SIMS. Cependant, la conception actuelle ne permet pas encore les interactions gaz-liquide. Ceci est une direction pour le développement futur. SALVI a été utilisée pour étudier le film de protéine hydratée dans ce travail pour la première fois. La fibronectine est une protéine dimère couramment utilisé, constitué de deux monomères à peu près identiques reliées entre elles par une paire de liaisons disulfure, 18 qui is bien connu pour sa capacité à se lier aux cellules. 19,20 Il a été choisi comme système modèle pour illustrer le fait que le film de protéine hydratée pourrait être sondée dynamiquement en utilisant le liquide SALVI TOF-SIMS approche. La solution de protéine a été introduit dans le microcanal. Après une incubation de 12 heures, un film de protéine hydratée formée sur le côté arrière de la membrane SiN. Déminéralisée (DI) a été utilisé pour rincer le canal après l&#39;introduction de protéines. Des informations ont été recueillies auprès de hydratés molécules de protéines de la fibronectine dans le microcanal SALVI utilisant dynamique TOF-SIMS. l&#39;eau DI a également été étudié en tant que témoin de comparer avec les résultats obtenus à partir de couches minces fibronectine hydraté. On a observé des différences marquées entre le film protéique hydratée et de l&#39;eau DI. Ce travail démontre que l&#39;adsorption des protéines sur la surface dans le milieu liquide peut être étudiée en utilisant l&#39;SALVI de roman et de liquide approche TOF-SIMS. Le protocole vidéo est destiné à fournir des conseils techniques pour les gens qui sont intéressésdans l&#39;utilisation de ce nouvel outil d&#39;analyse pour des applications diverses de SALVI avec TOF-SIMS et de réduire les erreurs inutiles dans la manipulation de liquides ainsi que l&#39;acquisition de données TOF-SIMS et l&#39;analyse.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1170">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:389px;">ToF-SIMS</td>
			<td style="width:260px;">IONTOF</td>
			<td style="width:121px;">TOF.SIMS 5</td>
			<td style="width:400px;">Resolution: &#62; 10,000 m/&#916;m for mass resolution; &#62; 4,000 m/&#916;m for high spatial resolution&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:389px;">System for Analysis at the Liquid Vacuum Interface (SALVI)</td>
			<td style="width:260px;">Pacific Northwest National Laboratory</td>
			<td style="width:121px;">N/A</td>
			<td style="width:400px;">SALVI is a unique, self-contained, portable analytical tool that, for the first time, enables vacuum-based scientific instruments such as time-of-flight secondary ion mass spectrometry (ToF-SIMS) to analyze liquid surfaces in their natural state at the molecular level.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:389px;">PEEK Union</td>
			<td style="width:260px;">Valco</td>
			<td style="width:121px;">ZU1TPK</td>
			<td>for connecting the inlet and outlet of SALVI</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:389px;">5 Axes Sample Stage</td>
			<td style="width:260px;">IONTOF</td>
			<td style="width:121px;">N/A</td>
			<td>Stage is self-made for mounting SALVI in ToF-SIMS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:389px;">Barnstead Nanopure Water Purification System</td>
			<td style="width:260px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:121px;">D11921</td>
			<td>ROpure LP Reverse Osmosis filtration module (D2716)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:389px;">Syringe</td>
			<td style="width:260px;">BD</td>
			<td style="width:121px;">309659</td>
			<td style="width:400px;">1 mL</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:389px;">Pipette</td>
			<td style="width:260px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:121px;">21-377-821</td>
			<td>Range: 100 to 1000 mL</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:389px;">Pipette Tip</td>
			<td style="width:260px;">Neptune</td>
			<td style="width:121px;">2112.96.BS</td>
			<td>1000 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:389px;">Centrifuge Tube</td>
			<td style="width:260px;">Corning</td>
			<td style="width:121px;">430791</td>
			<td>15 mL</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:389px;">Fibronectin</td>
			<td style="width:260px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:121px;">F1141</td>
			<td>1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:389px;">Ethanol</td>
			<td style="width:260px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:121px;">S25310A</td>
			<td>95% Denatured</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:389px;">Gibco PBS</td>
			<td style="width:260px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:121px;">10010-023</td>
			<td>pH 7.4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in situ characterization of hydrated proteins in water by salvi and tof-sims

Ce travail démontre la caractérisation in situ de biomolécules de protéines dans la solution aqueuse en utilisant le Système d&#39;analyse à l&#39;interface de vide Liquide (SALVI) et d&#39;ions secondaires spectrométrie de temps de vol de masse (TOF-SIMS). Le film de protéine de fibronectine est immobilisé sur la membrane de nitrure de silicium (SiN) qui forme la zone de détection SALVI. Lors de l&#39;analyse TOF-SIMS, trois modes d&#39;analyse ont été menées, y compris haute spatiale spectrométrie de résolution en masse, en deux dimensions (2D) imagerie, et le profilage en profondeur. Les spectres de masse ont été acquises dans les deux modes positif et négatif. eau désionisée a également été analysée comme échantillon de référence. Nos résultats montrent que le film fibronectine dans l&#39;eau a des pics de cluster de l&#39;eau plus distinctes et plus forte par rapport à l&#39;eau seule. des pics caractéristiques des fragments d&#39;acides aminés sont également observables dans la protéine hydratée spectres ToF-SIMS. Ces résultats montrent que l&#39;adsorption des protéines molécule sur une surface peut être étudiée dynamically utilisant SALVI et ToF-SIMS dans le milieu liquide pour la première fois.

Un couple de résultats représentatifs sont présentés pour démontrer les avantages du protocole proposé. En utilisant l&#39;interface microfluidique SALVI, le faisceau d&#39;ions primaires (Bi + 3) peut bombarder directement sur ​​le film de fibronectine hydraté dans de l&#39;eau DI. Ainsi, la cartographie chimique moléculaire de la surface du liquide peut être acquis avec succès. Fig...

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In Situ Characterization of Hydrated Proteins in Water by SALVI and ToF-SIMS

Ce travail présente un protocole pour la manipulation de liquides et introduction de l&#39;échantillon à un microcanaux pour in situ à temps de vol des ions secondaires masse analyse par spectrométrie de biomolécules de protéines dans une solution aqueuse.

La caractérisation in situ des protéines hydratés dans l&#39;eau par Salvi TOF-SIMS

This work demonstrates in situ characterization of protein biomolecules in the aqueous solution using the System for Analysis at the Liquid Vacuum ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

In Situ Characterization of Hydrated Proteins in Water by SALVI and ToF-SIMS

Submillisecond Conformational Changes in Proteins Resolved by Photothermal Beam Deflection

Milliseconde conformationnels changements dans les protéines résolues par Photothermal déviation du faisceau

Photothermal beam deflection together with photo-acoustic calorimetry and thermal grating belongs to the family of photothermal methods that monitor the ...

Recherche

Chimie

In Situ SIMS and IR Spectroscopy of Well-defined Surfaces Prepared by Soft Landing of Mass-selected Ions

In Situ SIMS and IR Spectroscopy of Well-defined Surfaces Prepared by Soft Landing of Mass-selected Ions

In Situ SIMS et spectroscopie IR des surfaces bien définies Préparé par Soft Landing de Ions Mass-sélectionnés

Soft landing of mass-selected ions onto surfaces is a powerful approach for the highly-controlled preparation of materials that are inaccessible using ...

Water in Oil Emulsions: A New System for Assembling Water-soluble Chlorophyll-binding Proteins with Hydrophobic Pigments

L&#39;eau dans l&#39;huile Emulsions: un nouveau système d&#39;assemblage des protéines Chlorophylle liaison solubles dans l&#39;eau avec Pigments hydrophobes

Chlorophylls (Chls) and bacteriochlorophylls (BChls) are the primary cofactors that carry out photosynthetic light harvesting and electron transport. ...

Assessment of Boron Doped Diamond Electrode Quality and Application to In Situ Modification of Local pH by Water Electrolysis

Assessment of Boron Doped Diamond Electrode Quality and Application to In Situ Modification of Local pH by Water Electrolysis

Évaluation des dopé au bore Diamant électrode qualité et l&#39;application de<em&gt; In Situ</em&gt; Modification du pH local par électrolyse de l&#39;eau

Boron doped diamond (BDD) electrodes have shown considerable promise as an electrode material where many of their reported properties such as extended ...

Radiolabeling and Quantification of Cellular Levels of Phosphoinositides by High Performance Liquid Chromatography-coupled Flow Scintillation

Radiomarquage et la quantification des niveaux cellulaires de phosphoinositides par chromatographie liquide haute performance couplée flux scintillation

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular ...

In Situ Characterization of Shewanella oneidensis MR1 Biofilms by SALVI and ToF-SIMS

In Situ Characterization of Shewanella oneidensis MR1 Biofilms by SALVI and ToF-SIMS

In Situ Caractérisation des Biofilms MR1 Shewanella oneidensis par SALVI et ToF-SIMS

Bacterial biofilms are surface-associated communities that are vastly studied to understand their self-produced extracellular polymeric substances (EPS) ...

In Situ Characterization of Boehmite Particles in Water Using Liquid SEM

In Situ Characterization of Boehmite Particles in Water Using Liquid SEM

In Situ Caractérisation des particules de Boehmite dans l’eau à l’aide de liquide SEM

In situ imaging and elemental analysis of boehmite (AlOOH) particles in water is realized using the System for Analysis at the Liquid Vacuum Interface ...

DNA-magnetic Particle Binding Analysis by Dynamic and Electrophoretic Light Scattering

ADN-magnétoscopie liaison analyse par diffusion de la lumière dynamique et électrophorèse

Isolation of DNA using magnetic particles is a field of high importance in biotechnology and molecular biology research. This protocol describes the ...

Rapid Nanoprobe Signal Enhancement by In Situ Gold Nanoparticle Synthesis

Rapid Nanoprobe Signal Enhancement by In Situ Gold Nanoparticle Synthesis

Signal Nanoprobe rapide amélioration de la synthèse de nanoparticules or In Situ

The use of nanoprobes such as gold, silver, silica or iron-oxide nanoparticles as detection reagents in bioanalytical assays can enable high sensitivity ...

Photoelectron Imaging of Anions Illustrated by 310 Nm Detachment of F&#8722;

Photoelectron Imaging of Anions Illustrated by 310 Nm Detachment of FÃƒÆ’Ã‚Â¢Ãƒâ€¹Ã¢â‚¬Â '

Imagerie de photoélectrons des Anions illustré par 310 Nm détachement de F−

Anion photoelectron imaging is a very efficient method for the study of energy states of bound negative ions, neutral species and interactions of unbound ...