Name: en face detection of nitric oxide and superoxide in endothelial layer of intact arteries
Uploaded: 2016-02-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries at JoVE.com

This work was supported by the Swiss National Science Foundation (310030_141070/1), Swiss Heart Foundation, and National Center of Competence in Research (NCCR-Kidney.CH) Switzerland. Yu Yi is supported by the Chinese Scholarship Council.

Animal arbeidet ble godkjent av etisk komité Veterinary Office of Fribourg, Sveits. Protokollen følger retningslinjer for dyr omsorg og eksperimentering ved vår institusjon. 1. Utarbeidelse av en Set-up for Inkubasjon av Isolated Arterier <ol><li> Konstruere et organbad system som kan varmes opp til 37 ° C og gjennomluftet med 95% O2 og 5% CO2 fra en gasstank karbon. </li><li> Fremstille så mye Krebs-Ringer bikarbonat-buffer etter behov med konsentrasjonen av fø...

<ol>
	<li>Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arginase:+the+emerging+therapeutic+target+for+vascular+oxidative+stress+and+inflammation.">Arginase: the emerging therapeutic target for vascular oxidative stress and inflammation.</a> Front Immunol. 4, 149 (2013).</li><li>Forstermann, U., Sessa, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+synthases:+regulation+and+function.">Nitric oxide synthases: regulation and function.</a> Eur Heart J. 33 (7), 829-837 (2012).</li><li>Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+understanding+endothelial+dysfunction+in+atherosclerosis.">Recent advances in understanding endothelial dysfunction in atherosclerosis.</a> Clin Med Res. 4 (1), 53-65 (2006).</li><li>Kietadisorn, R., Juni, R. P., Moens, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tackling+endothelial+dysfunction+by+modulating+NOS+uncoupling:+new+insights+into+its+pathogenesis+and+therapeutic+possibilities.">Tackling endothelial dysfunction by modulating NOS uncoupling: new insights into its pathogenesis and therapeutic possibilities.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 302 (5), 481-495 (2012).</li><li>Green, L. C., Wagner, D. A., Glogowski, J., Skipper, P. L., Wishnok, J. S., Tannenbaum, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+nitrate,+nitrite,+and+[15N]nitrate+in+biological+fluids.">Analysis of nitrate, nitrite, and [15N]nitrate in biological fluids.</a> Anal. Biochem. 126 (1), 131-138 (1982).</li><li>Knowles, R. G., Palacios, M., Palmer, R. M., Moncada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+nitric+oxide+from+L-arginine+in+the+central+nervous+system:+a+transduction+mechanism+for+stimulation+of+the+soluble+guanylate+cyclase.">Formation of nitric oxide from L-arginine in the central nervous system: a transduction mechanism for stimulation of the soluble guanylate cyclase.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 86 (13), 5159-5162 (1989).</li><li>Ishii, K., Sheng, H., Warner, T. D., Forstermann, U., Murad, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+sensitive+bioassay+method+for+detection+of+EDRF+with+RFL-6+rat+lung+fibroblasts.">A simple and sensitive bioassay method for detection of EDRF with RFL-6 rat lung fibroblasts.</a> Am. J. Physiol. 261 (2), 598-603 (1991).</li><li>Guo, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitory+effect+of+C-type+natriuretic+peptide+on+spontaneous+contraction+in+gastric+antral+circular+smooth+muscle+of+rat.">Inhibitory effect of C-type natriuretic peptide on spontaneous contraction in gastric antral circular smooth muscle of rat.</a> Acta Pharmacol Sin. 24 (10), 1021-1026 (2003).</li><li>Palmer, R. M., Ashton, D. S., Moncada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+cells+synthesize+nitric+oxide+from+L-arginine.">Vascular endothelial cells synthesize nitric oxide from L-arginine.</a> Nature. 333 (6174), 664-666 (1988).</li><li>Hecker, M., Sessa, W. C., Harris, H. J., Anggard, E. E., Vane, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+metabolism+of+L-arginine+and+its+significance+for+the+biosynthesis+of+endothelium-derived+relaxing+factor:+cultured+endothelial+cells+recycle+L-citrulline+to+L-arginine.">The metabolism of L-arginine and its significance for the biosynthesis of endothelium-derived relaxing factor: cultured endothelial cells recycle L-citrulline to L-arginine.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 87 (21), 8612-8616 (1990).</li><li>Kikuchi, K., Nagano, T., Hayakawa, H., Hirata, Y., Hirobe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+nitric+oxide+production+from+a+perfused+organ+by+a+luminol-H2O2+system.">Detection of nitric oxide production from a perfused organ by a luminol-H2O2 system.</a> Anal. Chem. 65 (13), 1794-1799 (1993).</li><li>Zweier, J. L., Wang, P., Kuppusamy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+measurement+of+nitric+oxide+generation+in+the+ischemic+heart+using+electron+paramagnetic+resonance+spectroscopy.">Direct measurement of nitric oxide generation in the ischemic heart using electron paramagnetic resonance spectroscopy.</a> J. Biol. Chem. 270 (1), 304-307 (1995).</li><li>Malinski, T., Mesaros, S., Tomboulian, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+measurement+using+electrochemical+methods.">Nitric oxide measurement using electrochemical methods.</a> Methods Enzymol. 268, 58-69 (1996).</li><li>Yu, Y., Rajapakse, A. G., Montani, J. P., Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p38+mitogen-activated+protein+kinase+is+involved+in+arginase-II-mediated+eNOS-Uncoupling+in+Obesity.">p38 mitogen-activated protein kinase is involved in arginase-II-mediated eNOS-Uncoupling in Obesity.</a> Cardiovasc Diabetol. 13 (1), 113 (2014).</li><li>Nakatsubo, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+evidence+of+nitric+oxide+production+from+bovine+aortic+endothelial+cells+using+new+fluorescence+indicators:+diaminofluoresceins.">Direct evidence of nitric oxide production from bovine aortic endothelial cells using new fluorescence indicators: diaminofluoresceins.</a> FEBS Lett. 427 (2), 263-266 (1998).</li><li>Hink, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+underlying+endothelial+dysfunction+in+diabetes+mellitus.">Mechanisms underlying endothelial dysfunction in diabetes mellitus.</a> Circ Res. 88 (2), 14-22 (2001).</li><li>Okuda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+glutaredoxin+in+human+coronary+arteries:+its+potential+role+in+antioxidant+protection+against+atherosclerosis.">Expression of glutaredoxin in human coronary arteries: its potential role in antioxidant protection against atherosclerosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 21 (9), 1483-1487 (2001).</li><li>Cortese-Krott, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+red+blood+cells+at+work:+identification+and+visualization+of+erythrocytic+eNOS+activity+in+health+and+disease.">Human red blood cells at work: identification and visualization of erythrocytic eNOS activity in health and disease.</a> Blood. 120 (20), 4229-4237 (2012).</li><li>Nunez, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discrepancies+between+nitroglycerin+and+NO-releasing+drugs+on+mitochondrial+oxygen+consumption,+vasoactivity,+and+the+release+of+NO.">Discrepancies between nitroglycerin and NO-releasing drugs on mitochondrial oxygen consumption, vasoactivity, and the release of NO.</a> Circ Res. 97 (10), 1063-1069 (2005).</li><li>Guzik, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+increased+vascular+superoxide+production+in+human+diabetes+mellitus:+role+of+NAD(P)H+oxidase+and+endothelial+nitric+oxide+synthase.">Mechanisms of increased vascular superoxide production in human diabetes mellitus: role of NAD(P)H oxidase and endothelial nitric oxide synthase.</a> Circulation. 105 (14), 1656-1662 (2002).</li><li>Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mTOR+signalling:+the+molecular+interface+connecting+metabolic+stress,+aging+and+cardiovascular+diseases.">mTOR signalling: the molecular interface connecting metabolic stress, aging and cardiovascular diseases.</a> Obes Rev. 13 (Suppl 2), 58-68 (2012).</li><li>Yepuri, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+crosstalk+between+arginase-II+and+S6K1+in+vascular+endothelial+inflammation+and+aging.">Positive crosstalk between arginase-II and S6K1 in vascular endothelial inflammation and aging.</a> Aging Cell. 11 (6), 1005-1016 (2012).</li><li>Matsuno, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nox1+is+involved+in+angiotensin+II-mediated+hypertension:+a+study+in+Nox1-deficient+mice.">Nox1 is involved in angiotensin II-mediated hypertension: a study in Nox1-deficient mice.</a> Circulation. 112 (17), 2677-2685 (2005).</li></ol>

Påvisning av NO eller O 2 .- med fluorescerende fargestoffer ble hyppig brukt i mange studier i dyrkede endotelceller og også i vev frysesnitt 23. Her utvidet vi denne metoden for å intakt levende blodkar, dvs. en face deteksjon av NO og O 2 .- nivåer i det endoteliale lag med DAF-2DA og DHE, henholdsvis, som er effektiv, relativt enkel og intuitiv. Sammenlignet med fremgangsmåten i vaskulære frysesnitt, viser denne metoden lavere bakgrunn, o...

De vaskulære endotelceller holde vaskulær funksjonell og strukturell integritet ved å slippe vasoaktive faktorer 1. Blant disse faktorene, endotel-avledede nitrogenoksid (NO) produksjon fra L-arginin via endotelial NO-syntase (eNOS) er den viktigste og best karakteriserte faktor i sirkulasjonsfysiologi 2. NO forårsaker avslapning av glatt muskulatur og inhiberer celleproliferasjon, hemmer blodplateaggregasjon og inflammatorisk celle adhesjon og infiltrasjon i subendotel plass, derfor beskyttelse mot vaskulær sykdom utvikling tre. Under mange fysiologiske og patologiske tilstander, inkludert aldring, høyt blodtrykk, diabetes, hyperlipidemi, etc., endotelial dysfunksjon kjennetegnet ved redusert NO biotilgjengelighet og øket O 2 .- produksjon er til stede og fremmer patogenesen av aterosklerose 2. Studier fra de siste årene viser at frakopling av eNOS er enviktig mekanisme for endotelial dysfunksjon, karakterisert ved at eNOS enzym genererer O 2 .- istedenfor NO, under de forskjellige nevnte forhold 1,4. Derfor analyse av endotelial funksjon, særlig endotelial NO-produksjon og O 2 .- generasjon er dreibar for eksperimentell forskning på kardiovaskulære sykdommer og komplikasjoner. Det er mange arbeidsmåter som er utviklet for å analysere og måle NO-produksjon i biologiske prøver. På grunn av den ekstremt labile naturen av NO som lett oksyderes til NO2 - og NO 3 - med en halveringstid på 3 til 6 sek, er det vanskelig å måle NO direkte. Derfor bestemmelse av NO 2 - / NEI 3 - i fluidprøvene ble brukt som en indeks av NO frigitt fra celler eller vev 5. Selv om fremgangsmåten er forholdsvis enkel, idet fremgangsmåten er imidlertid eaSily påvirket av høy bakgrunn av det stabile NO2 - / NEI 3 - som inneholdes i oppløsningen. Fordi NO stimulerer løselig guanylatsyklase for å produsere syklisk guanosinmonofosfat (cGMP) 6, har den cellulært cGMP-nivået også blitt bestemt til å estimere NO frigivelse 7. Igjen, dette er en indirekte estimering og kan ikke være spesifikk, siden noen endotel-avledede faktorer slik som C-type natriuretisk peptid (CNP) kan også øke cGMP-nivåer gjennom aktivering av partikkelformig guanylatsyklase 8. NO er fremstilt fra L-arginin med generering av L-citrullin som et biprodukt 9, måling av L-citrullin produksjon er derfor også brukt som en indirekte metode for å estimere NO produksjon. De største ulempene med denne metoden er at det er radioaktivt og det ikke måle bioaktive INGEN nivåer, siden utgitt NO kunne raskt inaktivert av O 2 .-; Videre kan L-citrullin resirkuleres til L-arginin 10. Andre kjemiske metoder slik som kjemiluminescens deteksjon 11, elektronspinn-resonans 12, eller elektrokjemisk porphyrinic NO-sensor 13 blir brukt av flere forskere. Disse metodene er vanligvis ikke lett i drift, oppdager prosedyrer og krever spesialutstyr. Det er også å nevne at mange studier gjelder organbade eksperimenter med isolerte blodårer med eller uten endotelet å vurdere endotelfunksjon og indirekte måle endotel-avledet INGEN mediert vaskulære relaxations. Men denne fremgangsmåte, selv om det er mest i nærheten av fysiologisk situasjon, men strengt å si ikke måle noen funksjon, det heller vurderer endotel-mediert vasomotoriske responser generelt som reflekterer netto effekt av eNOS funksjon, produksjon av andre endotel-avledede avslappende faktorer og endotel-avledet kontrahering faktorer, produksjon av O 2 .-, og også responser av glatte muskelcellertil disse faktorene. En analyse av eNOS funksjon eller NO produksjonen er vanligvis nødvendig tre. Mange forskningsgrupper inkludert vår har de siste årene brukt fluorescens fargestoff metoden for å oppdage intracellulær produksjon av NO 14-19. I denne fremgangsmåten cellepermeable fluorescens-indikator diaminofluorescein-2-diacetat (DAF-2DA) ble anvendt for å måle fri NO og NOS funksjon i levende celler og vev in vitro eller ex vivo. Prinsippet er at i levende celler, DAF-2DA deacetyleres av intracellulære esterase til ikke-fluorescerende 4,5-diaminofluorescein (DAF-2) som deretter ble omdannet til fluorescerende DAF-2 triazol (DAF-2T) ved å reagere med NO . Fluorescensen fra DAF-2T kan iakttas under et fluorescens mikroskop eller et fluorescens konfokalt mikroskop 14. Den intracellulære fluorescens-intensitet gjenspeiler derfor den intracellulære NO-produksjon i cellene eller endotelet i en i intakt blod vessel. Kombinert med en spesifikk fluorescens fargestoff som dihydroethidium (DHE), kan man samtidig vurdere intracellulær NO og O 2 .- generasjon i cellene eller i blodårer 14. Tilsvarende er DHE også en celle-permeabel forbindelse som oksyderes ved O 2 .- inne i cellene, og den oksidative produkt deretter skytes inn med nukleinsyrer for å sende ut en lys rød farge påvises kvantitativt ved fluorescerende mikroskop eller fluorescens konfokalt mikroskop. DHE er en meget spesifikk fargestoff for påvisning av O 2 .- fra biologiske prøver, som den oppdager det vesentlige superoksidradikaler, fastholdes også av celler, og kan også tolerere mild fiksering 20. En av fordelene med denne fluorescens fargestoff metoden er at den detekterer og visualiserer NO og / eller O 2 .- en face direkte på intakt endotel-lag av et levende blodkar. I denne utredningen,vi beskrive denne fluorescens fargestoff metoden for å oppdage NO og O 2 .- som vi har tilrettelagt for en ansiktsgjenkjenning av NO og O 2 .- i intakte Aorta av en fedme musemodell indusert av høy-fett-diett (HFD) fôring. Vi viser at denne metoden kan med hell og sikker måling av NO og O 2 .- nivåer og evaluere eNOS (dys) -funksjonen i endothelial laget av ferskt isolerte intakte muse Aorta i fedme.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dihydroethidium (DHE)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D 1168</td>
			<td>dissolve with DMSO to 5 mmol/L as 1000X stock, stored at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diaminofluorescein-2 Diacetate (DAF-2 DA)</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>251505</td>
			<td>dissolve with DMSO to 5 mmol/L as 1000X stock,stored at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D 1306</td>
			<td>dissolve with water to 300 &#181;mol/L as 1000X stock,stored at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>Vector labor. (reactolab)</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Name (N o-nitro-l-argininemethylester.HCl)</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>A5751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>P3636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-Myograph System&#160;</td>
			<td>Danish Myo Technology A/S</td>
			<td>Model 610M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope&#160;</td>
			<td>Leica&#160;</td>
			<td>DM6000&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image processing software</td>
			<td>National Institute of Health(NIH)</td>
			<td>Image J&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors&#160;</td>
			<td>S&#38;T AG</td>
			<td>SDC-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical scissors&#160;</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>15000-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>S&#38;T AG</td>
			<td>JF-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26G&#215;1/2&#698; syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip round diam15mm</td>
			<td>vwr</td>
			<td>631-1579</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 1 mL</td>
			<td>vwr</td>
			<td>RFL-1200c&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 200 uL</td>
			<td>vwr&#160;</td>
			<td>613.0659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes 1.5 mL</td>
			<td>Eppendorf&#160;</td>
			<td>30120086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetylcholine chloride</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>A-6625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

en face detection of nitric oxide and superoxide in endothelial layer of intact arteries

Endotel-avledet nitrogenoksid (NO) fremstilt av endotelial NO-syntase (eNOS) er en av de viktigste vasoprotective molekyler i sirkulasjonsfysiologi. Dysfunksjonell eNOS som frakobling av eNOS fører til reduksjon i NO biotilgjengelighet og økning i superoksid anion (O 2 .-) produksjon, og i sin tur fremmer hjerte- og karsykdommer. Derfor passende måling av NO og O 2 .- nivåer i endotelceller er avgjørende for forskning på hjerte- og karsykdommer og komplikasjoner. På grunn av den ekstremt labile naturen til NO og O 2 .-, er det vanskelig å måle NO og O 2 .- direkte i et blodkar. Tallrike metoder har blitt utviklet for å måle NO og O 2 .- produksjon. Det er imidlertid enten ufølsom, eller ikke-spesifikke, eller teknisk krevende og krever spesialutstyr. Her beskriver vi en tilpasningav fluorescens fargestoff metode for en face samtidig deteksjon og visualisering av intracellulær NO og O 2 .- ved hjelp av cellepermeable diaminofluorescein-2-diacetat (DAF-2DA) og dihydroethidium (DHE), respektivt, i intakte Aorta av en fedme musemodell som induseres av høy-fett-diett fôring. Vi kunne demonstrere redusert intracellulært NO og forbedret O 2 .- nivåer i de nylig isolerte intakte Aorta av fedme mus sammenlignet med kontrollgruppen mager musen. Vi viser at denne metoden er en enkel teknikk for direkte påvisning og visualisering av NO og O 2 .- i intakte blodårene og kan bli mye brukt for undersøkelse av endothelial (dys) -funksjonen under (physio) patologiske tilstander.

Fedme er en viktig risikofaktor for iskemisk hjertesykdom og er assosiert med redusert endotelial NO biotilgjengelighet, et kjennetegn på aterosklerotisk karsykdom 21. eNOS-frakopling er blitt vist å være en viktig mekanisme for endotelial dysfunksjon i henhold til en rekke fysiologiske og patologiske tilstander, inkludert aldring 22, aterosklerose, fedme og 14. Derfor, her sammenligner vi mager og overvektige mus for å vise representativt resultat av...

Watch this Scientific Journal Video about En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries at JoVE.com

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

En Face Detection av nitrogenoksid og Superoxide i endothelial lag av intakte Arterier

I denne artikkelen beskriver vi en tilpasset relativt enkel metode å bruke fluorescens fargestoff diaminofluorescein-2 diacetat (DAF-2DA) og dihydroethidium (DHE) for en face samtidig påvisning og visualisering av intracellulær nitrogenoksid (NO) og superoksid anion (O 2 .- ) henholdsvis i ferske isolerte intakte Aorta av en fedme musemodell.

Endothelium-derived nitric oxide (NO) produced from endothelial NO-synthase (eNOS) is one of the most important vasoprotective molecules in cardiovascular ...

Research

JoVE Journal

Biology

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

Detection of Post-translational Modifications on Native Intact Nucleosomes by ELISA

The genome of eukaryotes exists as chromatin which contains both DNA and proteins. The fundamental unit of chromatin is the nucleosome, which contains 146 ...

Detection of Nitric Oxide and Superoxide Radical Anion by Electron Paramagnetic Resonance Spectroscopy from Cells using Spin Traps

Påvisning av nitrogenoksid og Superoxide Radical anion med Electron paramagnetisk resonans spektroskopi fra celler ved hjelp av Spin Traps

Reactive nitrogen/oxygen species (ROS/RNS) at low concentrations play an important role in regulating cell function, signaling, and immune response but in ...

Isolation of Microvascular Endothelial Tubes from Mouse Resistance Arteries

Isolering av mikrovaskulær endotel Tubes fra Mouse Resistance arterier

The control of blood flow by the resistance vasculature regulates the supply of oxygen and nutrients concomitant with the removal of metabolic ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging av enkelt Mitokondrielle superoksid Blinker Intakt hjerte eller<em&gt; I Vivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

Analyse av oksidativt stress i sebrafisk embryo

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

To-foton avbildning av intracellulær Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Håndtering og nitrogenoksid produksjon i endotel og glatte muskelceller av en isolert Rat Aorta

Calcium is a very important regulator of many physiological processes in vascular tissues. Most endothelial and smooth muscle functions highly depend on ...

Development and Characterization of In Vitro Microvessel Network and Quantitative Measurements of Endothelial [Ca2+]i and Nitric Oxide Production

Development and Characterization of In Vitro Microvessel Network and Quantitative Measurements of Endothelial [Ca2+]i and Nitric Oxide Production

Utvikling og karakterisering av<em&gt; In Vitro</em&gt; Microvessel Nettverk og kvantitative målinger av endotel [Ca<sup&gt; 2+</sup&gt;]<sub&gt; i</sub&gt; Og nitrogenoksid produksjon

Endothelial cells (ECs) lining the blood vessel walls in vivo are constantly exposed to flow, but cultured ECs are often grown under static conditions and ...

Measuring Nitrite and Nitrate, Metabolites in the Nitric Oxide Pathway, in Biological Materials using the Chemiluminescence Method

Måling nitritt og nitrat, metabolitter i nitrogenoksid Pathway, i biologisk materiale ved hjelp av Chemiluminescence Method

Nitric oxide (NO) is one of the main regulator molecules in vascular homeostasis and also a neurotransmitter. Enzymatically produced NO is oxidized into ...

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En ansiktsbehandling av museblodfartøy

Sections of paraffin embedded tissues are routinely used for studying tissue histology and histopathology. However, it is difficult to determine what the ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

Bruk av genetisk kodet Fluorescent Nitrogenoksid (NO •) sonder, de geNOps, for Real-time Imaging av NO • Signaler i enkeltceller

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...