Name: en face detection of nitric oxide and superoxide in endothelial layer of intact arteries
Uploaded: 2016-02-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries at JoVE.com

This work was supported by the Swiss National Science Foundation (310030_141070/1), Swiss Heart Foundation, and National Center of Competence in Research (NCCR-Kidney.CH) Switzerland. Yu Yi is supported by the Chinese Scholarship Council.

animal de trabalho foi aprovado pelo Comitê de Ética do Veterinário de Fribourg, Suíça. O protocolo segue as orientações sobre cuidados com os animais e experimentação em nossa instituição. 1. Preparação de um Set-up para a incubação de Isolated Artérias <ol><li> Construção de um sistema de banho de órgãos que pode ser aquecida a 37 ° C e arejada com 95% de O2 e 5% de CO 2 a partir de um tanque de gás de carbono. </li><li> Preparar de forma muito...

<ol>
	<li>Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arginase:+the+emerging+therapeutic+target+for+vascular+oxidative+stress+and+inflammation.">Arginase: the emerging therapeutic target for vascular oxidative stress and inflammation.</a> Front Immunol. 4, 149 (2013).</li><li>Forstermann, U., Sessa, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+synthases:+regulation+and+function.">Nitric oxide synthases: regulation and function.</a> Eur Heart J. 33 (7), 829-837 (2012).</li><li>Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+understanding+endothelial+dysfunction+in+atherosclerosis.">Recent advances in understanding endothelial dysfunction in atherosclerosis.</a> Clin Med Res. 4 (1), 53-65 (2006).</li><li>Kietadisorn, R., Juni, R. P., Moens, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tackling+endothelial+dysfunction+by+modulating+NOS+uncoupling:+new+insights+into+its+pathogenesis+and+therapeutic+possibilities.">Tackling endothelial dysfunction by modulating NOS uncoupling: new insights into its pathogenesis and therapeutic possibilities.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 302 (5), 481-495 (2012).</li><li>Green, L. C., Wagner, D. A., Glogowski, J., Skipper, P. L., Wishnok, J. S., Tannenbaum, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+nitrate,+nitrite,+and+[15N]nitrate+in+biological+fluids.">Analysis of nitrate, nitrite, and [15N]nitrate in biological fluids.</a> Anal. Biochem. 126 (1), 131-138 (1982).</li><li>Knowles, R. G., Palacios, M., Palmer, R. M., Moncada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+nitric+oxide+from+L-arginine+in+the+central+nervous+system:+a+transduction+mechanism+for+stimulation+of+the+soluble+guanylate+cyclase.">Formation of nitric oxide from L-arginine in the central nervous system: a transduction mechanism for stimulation of the soluble guanylate cyclase.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 86 (13), 5159-5162 (1989).</li><li>Ishii, K., Sheng, H., Warner, T. D., Forstermann, U., Murad, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+sensitive+bioassay+method+for+detection+of+EDRF+with+RFL-6+rat+lung+fibroblasts.">A simple and sensitive bioassay method for detection of EDRF with RFL-6 rat lung fibroblasts.</a> Am. J. Physiol. 261 (2), 598-603 (1991).</li><li>Guo, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitory+effect+of+C-type+natriuretic+peptide+on+spontaneous+contraction+in+gastric+antral+circular+smooth+muscle+of+rat.">Inhibitory effect of C-type natriuretic peptide on spontaneous contraction in gastric antral circular smooth muscle of rat.</a> Acta Pharmacol Sin. 24 (10), 1021-1026 (2003).</li><li>Palmer, R. M., Ashton, D. S., Moncada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+cells+synthesize+nitric+oxide+from+L-arginine.">Vascular endothelial cells synthesize nitric oxide from L-arginine.</a> Nature. 333 (6174), 664-666 (1988).</li><li>Hecker, M., Sessa, W. C., Harris, H. J., Anggard, E. E., Vane, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+metabolism+of+L-arginine+and+its+significance+for+the+biosynthesis+of+endothelium-derived+relaxing+factor:+cultured+endothelial+cells+recycle+L-citrulline+to+L-arginine.">The metabolism of L-arginine and its significance for the biosynthesis of endothelium-derived relaxing factor: cultured endothelial cells recycle L-citrulline to L-arginine.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 87 (21), 8612-8616 (1990).</li><li>Kikuchi, K., Nagano, T., Hayakawa, H., Hirata, Y., Hirobe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+nitric+oxide+production+from+a+perfused+organ+by+a+luminol-H2O2+system.">Detection of nitric oxide production from a perfused organ by a luminol-H2O2 system.</a> Anal. Chem. 65 (13), 1794-1799 (1993).</li><li>Zweier, J. L., Wang, P., Kuppusamy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+measurement+of+nitric+oxide+generation+in+the+ischemic+heart+using+electron+paramagnetic+resonance+spectroscopy.">Direct measurement of nitric oxide generation in the ischemic heart using electron paramagnetic resonance spectroscopy.</a> J. Biol. Chem. 270 (1), 304-307 (1995).</li><li>Malinski, T., Mesaros, S., Tomboulian, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+measurement+using+electrochemical+methods.">Nitric oxide measurement using electrochemical methods.</a> Methods Enzymol. 268, 58-69 (1996).</li><li>Yu, Y., Rajapakse, A. G., Montani, J. P., Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p38+mitogen-activated+protein+kinase+is+involved+in+arginase-II-mediated+eNOS-Uncoupling+in+Obesity.">p38 mitogen-activated protein kinase is involved in arginase-II-mediated eNOS-Uncoupling in Obesity.</a> Cardiovasc Diabetol. 13 (1), 113 (2014).</li><li>Nakatsubo, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+evidence+of+nitric+oxide+production+from+bovine+aortic+endothelial+cells+using+new+fluorescence+indicators:+diaminofluoresceins.">Direct evidence of nitric oxide production from bovine aortic endothelial cells using new fluorescence indicators: diaminofluoresceins.</a> FEBS Lett. 427 (2), 263-266 (1998).</li><li>Hink, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+underlying+endothelial+dysfunction+in+diabetes+mellitus.">Mechanisms underlying endothelial dysfunction in diabetes mellitus.</a> Circ Res. 88 (2), 14-22 (2001).</li><li>Okuda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+glutaredoxin+in+human+coronary+arteries:+its+potential+role+in+antioxidant+protection+against+atherosclerosis.">Expression of glutaredoxin in human coronary arteries: its potential role in antioxidant protection against atherosclerosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 21 (9), 1483-1487 (2001).</li><li>Cortese-Krott, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+red+blood+cells+at+work:+identification+and+visualization+of+erythrocytic+eNOS+activity+in+health+and+disease.">Human red blood cells at work: identification and visualization of erythrocytic eNOS activity in health and disease.</a> Blood. 120 (20), 4229-4237 (2012).</li><li>Nunez, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discrepancies+between+nitroglycerin+and+NO-releasing+drugs+on+mitochondrial+oxygen+consumption,+vasoactivity,+and+the+release+of+NO.">Discrepancies between nitroglycerin and NO-releasing drugs on mitochondrial oxygen consumption, vasoactivity, and the release of NO.</a> Circ Res. 97 (10), 1063-1069 (2005).</li><li>Guzik, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+increased+vascular+superoxide+production+in+human+diabetes+mellitus:+role+of+NAD(P)H+oxidase+and+endothelial+nitric+oxide+synthase.">Mechanisms of increased vascular superoxide production in human diabetes mellitus: role of NAD(P)H oxidase and endothelial nitric oxide synthase.</a> Circulation. 105 (14), 1656-1662 (2002).</li><li>Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mTOR+signalling:+the+molecular+interface+connecting+metabolic+stress,+aging+and+cardiovascular+diseases.">mTOR signalling: the molecular interface connecting metabolic stress, aging and cardiovascular diseases.</a> Obes Rev. 13 (Suppl 2), 58-68 (2012).</li><li>Yepuri, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+crosstalk+between+arginase-II+and+S6K1+in+vascular+endothelial+inflammation+and+aging.">Positive crosstalk between arginase-II and S6K1 in vascular endothelial inflammation and aging.</a> Aging Cell. 11 (6), 1005-1016 (2012).</li><li>Matsuno, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nox1+is+involved+in+angiotensin+II-mediated+hypertension:+a+study+in+Nox1-deficient+mice.">Nox1 is involved in angiotensin II-mediated hypertension: a study in Nox1-deficient mice.</a> Circulation. 112 (17), 2677-2685 (2005).</li></ol>

Detecção de NO ou O 2 .- com corantes fluorescentes era frequentemente usado em muitos estudos em células endoteliais cultivadas e também em criosecções tecido 23. Aqui nós estendemos este método para os vasos sanguíneos de vida intacta, ou seja, en detecção de face de NO e O 2 .- níveis na camada endotelial com DAF-2DA e DHE, respectivamente, o que é eficaz, relativamente simples e intuitiva. Em comparação com o método no ...

As células endoteliais vasculares manter a integridade funcional e estrutural vascular pela liberação de fatores vasoativos 1. Entre estes factores, o óxido nítrico derivado do endotélio (NO) produzido a partir de L-arginina através de NO endotelial (eNOS-sintase) é o factor mais importante e mais bem caracterizado na fisiologia cardiovascular 2. NO provoca relaxamento do músculo liso e inibe a proliferação celular, inibe a agregação plaquetária e aderência de células inflamatórias e infiltração no espaço subendotelial, por conseguinte, proteger contra o desenvolvimento de doenças vasculares 3. Sob muitas condições fisiológicas e patológicas, incluindo envelhecimento, hipertensão, diabetes, hiperlipidemia, etc, disfunção endotelial caracterizada pela diminuição da biodisponibilidade do NO e aumentou a produção de O2 .- está presente e promove a patogénese da aterosclerose 2. Estudos realizados em anos recentes demonstram que o desacoplamento da eNOS é ummecanismo importante para a disfunção endotelial, em que a enzima eNOS gera O2 .-, em vez de NO, de acordo com as várias condições acima mencionadas 1,4. Portanto, a análise da função endotelial, em particular, a produção de NO endotelial e O 2 .- geração é crucial para a pesquisa experimental sobre as doenças cardiovasculares e as complicações. Há várias abordagens metodológicas que têm sido desenvolvidos para analisar e medir a produção de NO em amostras biológicas. Devido à natureza extremamente lábil de NO que é facilmente oxidado a NO 2 - e NO 3 - com uma semi-vida de 3 a 6 segundos, é difícil de medir directamente NO. Portanto, a determinação de NO 2 - / NO3 - nas amostras de fluido foi utilizada como um índice de NO libertado a partir de células ou tecidos 5. Embora o procedimento é relativamente fácil, o método é, no entanto, eAsily afectados pela alta fundo do NO estável 2 - / NO3 - contido na solução. Porque NO estimula a guanilato ciclase solúvel para produzir monofosfato de guanosina cíclico (cGMP) 6, o nível de cGMP celular também foi determinada para estimar a libertação de NO 7. Mais uma vez, esta é uma estimativa indirecta e não pode ser específico, uma vez que alguns factores derivados do endotélio tais como a-peptídeo natriurético tipo C (CNP) também pode aumentar os níveis de cGMP por meio de activação de ciclase de guanilato em partículas 8. O NO é produzido a partir de L-arginina com a geração de L-citrulina como um sub-produto 9, a medição da produção de L-citrulina é, por conseguinte, também utilizada como um método indirecto para estimar a produção de NO. As principais desvantagens deste método são que ele é radioativo e não medir os níveis de NO bioativos, pois NÃO Autorização poderia ser rapidamente inactivado pelo O 2 .-; Além disso, a L-citrulina pode ser reciclado para L-arginina 10. Outros métodos químicos, tais como detecção de quimiluminescência 11, elétron de spin ressonância 12, ou porfirínico eletroquímico NO sensor de 13 são utilizados por vários investigadores. Estes métodos geralmente não são fáceis em funcionamento, procedimentos de detecção e requer equipamento especial. É também de referir que muitos estudos aplicar experiências banho de órgãos com os vasos sanguíneos isolados com ou sem o endotélio para avaliar a função endotelial e indiretamente Medida mediada relaxamentos vasculares derivados do endotélio. No entanto, este método, embora seja principalmente perto de situação fisiológica, mas estritamente a dizer, não mede NO função, em vez avalia respostas vasomotores mediada pelo endotélio em geral que refletem efeitos líquidos da função eNOS, a produção de outra relaxante derivado do endotélio factores e factores contratantes derivado do endotélio, a produção de O2 .-, e também as respostas das células musculares lisasa estes factores. A análise específica da função eNOS ou nenhuma produção é geralmente necessária 3. Muitos grupos de investigação, incluindo o nosso, nos últimos anos usaram o método do corante de fluorescência para detectar a produção intracelular de NO 14-19. Neste método, a célula indicadora fluorescente permeável diaminofluorescein 2-diacetato (DAF-2DA) foi usada para medir a função NÃO livre e NOS em células e tecidos in vitro ou ex vivo vivo. O princípio é que nas células vivas, DAF-2DA é desacetilada por esterase intracelular para não-fluorescente de 4,5-diaminofluorescein (DAF-2), que foi depois convertida a fluorescente DAF 2-triazole (DAF-2T) fazendo reagir com NO . A fluorescência a partir de DAF-2T podem ser observados sob um microscópio de fluorescência ou um microscópio confocal de fluorescência 14. Por conseguinte, a intensidade de fluorescência intracelular reflecte a produção de NO intracelular nas células do endotélio ou de um vesse no sangue intactoeu. Combinado com um corante fluorescente específico, tal como dihydroethidium (DHE), pode-se avaliar simultaneamente intracelular NO e O2 .- geração nas células ou nos vasos sanguíneos 14. Da mesma forma, a DHE é também um composto de células-permeável que é oxidado por O 2 .- interior das células, e, em seguida, o produto oxidativo intercala com ácidos nucleicos para emitir uma cor vermelho brilhante detectável quantitativamente por microscopia fluorescente ou de fluorescência microscópio confocal. A DHE é um corante muito específico para a detecção de O 2 .- a partir de amostras biológicas, que detecta essencialmente radicais superóxido, é mantida assim por células, e pode mesmo tolerar fixação suave 20. Uma das vantagens deste método de fluorescência do corante é que ele detecta e visualiza NO e / ou de O 2 .- en face directamente sobre a camada endotelial intacta de um vaso sanguíneo de estar. Nesse papel,descrevemos este método de fluorescência de corantes para detectar NO e O 2 .- que temos adaptado para en detecção de face de NO e O 2 .- em aortas intactas de um modelo de rato obesidade induzida por alta gordura com a dieta (HFD) alimentação. Nós demonstramos que este método poderia com sucesso e de forma confiável medir NO e O 2 .- níveis e avaliar a função eNOS (dis) na camada endotelial de aortas de rato intactas recém-isoladas em obesidade.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dihydroethidium (DHE)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D 1168</td>
			<td>dissolve with DMSO to 5 mmol/L as 1000X stock, stored at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diaminofluorescein-2 Diacetate (DAF-2 DA)</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>251505</td>
			<td>dissolve with DMSO to 5 mmol/L as 1000X stock,stored at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D 1306</td>
			<td>dissolve with water to 300 &#181;mol/L as 1000X stock,stored at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>Vector labor. (reactolab)</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Name (N o-nitro-l-argininemethylester.HCl)</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>A5751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>P3636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-Myograph System&#160;</td>
			<td>Danish Myo Technology A/S</td>
			<td>Model 610M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope&#160;</td>
			<td>Leica&#160;</td>
			<td>DM6000&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image processing software</td>
			<td>National Institute of Health(NIH)</td>
			<td>Image J&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors&#160;</td>
			<td>S&#38;T AG</td>
			<td>SDC-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical scissors&#160;</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>15000-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>S&#38;T AG</td>
			<td>JF-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26G&#215;1/2&#698; syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip round diam15mm</td>
			<td>vwr</td>
			<td>631-1579</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 1 mL</td>
			<td>vwr</td>
			<td>RFL-1200c&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 200 uL</td>
			<td>vwr&#160;</td>
			<td>613.0659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes 1.5 mL</td>
			<td>Eppendorf&#160;</td>
			<td>30120086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetylcholine chloride</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>A-6625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

en face detection of nitric oxide and superoxide in endothelial layer of intact arteries

óxido nítrico derivado do endotélio (NO) produzido a partir de NO endotelial (eNOS-sintetase) é um dos mais importantes moléculas vasoprotetores na fisiologia cardiovascular. Disfuncional eNOS tais como desacoplamento da eNOS conduz à diminuição da biodisponibilidade do NO e aumento no anião superóxido (O2 .-) produção, e por sua vez promove a doenças cardiovasculares. Portanto, a medida apropriada de NO e O 2 .- níveis nas células endoteliais são fundamentais para a pesquisa sobre doenças cardiovasculares e complicações. Devido à natureza extremamente lábil de NO e O2 .-, é difícil de medir NO e O2 .- directamente num vaso sanguíneo. Diversos métodos foram desenvolvidos para medir NO e O 2 .- produção. É, no entanto, seja insensível, ou não específica, ou tecnicamente exigente e requer equipamento especial. Aqui nós descrevemos uma adaptaçãoo método de fluorescência de corante para a detecção simultânea PT rosto e visualização de intracelular NO e O2 .- usando a célula permeável diaminofluorescein 2-diacetato (DAF-2DA) e dihydroethidium (DHE), respectivamente, em aortas intactas de um modelo de rato de obesidade induzida pela alimentação rica em gordura com a dieta. Pudemos demonstrar diminuição intracelular NO e O reforçada 2 .- níveis nas aortas intactas recentemente isolados de rato obesidade, em comparação com o mouse magra controle. Nós demonstramos que este método é uma técnica fácil para detecção direta e visualização de NO e O 2 .- nos vasos sanguíneos intactos e podem ser amplamente aplicada para investigação da função endotelial (dis) em (fisio) condições patológicas.

A obesidade é um importante fator de risco de doença cardíaca isquêmica coronariana e está associada à diminuição endoteliais biodisponibilidade, uma característica da doença vascular aterosclerótica 21. eNOS desacoplamento foi demonstrado ser um importante mecanismo de disfunção endotelial sob várias condições fisiológicas e patológicas, incluindo envelhecimento 22, aterosclerose, obesidade e 14. Portanto, aqui vamos comparar os ratos m...

Watch this Scientific Journal Video about En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries at JoVE.com

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

Face Detection En de óxido nítrico e superóxido na camada endotelial das artérias intactas

Neste artigo descrevemos um método relativamente fácil adaptados usando o corante de fluorescência diaminofluorescein-2 diacetato (DAF-2DA) e dihydroethidium (DHE) para en face detecção simultânea e visualização de óxido nítrico intracelular (NO) e ânion superóxido (O 2 .- ), respectivamente, em aortas isoladas de fresco intactas de um modelo de rato de obesidade.

Endothelium-derived nitric oxide (NO) produced from endothelial NO-synthase (eNOS) is one of the most important vasoprotective molecules in cardiovascular ...

Research

JoVE Journal

Biology

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

Detection of Post-translational Modifications on Native Intact Nucleosomes by ELISA

Detecção de modificações pós-translacionais sobre Native Nucleossomos Intact por ELISA

The genome of eukaryotes exists as chromatin which contains both DNA and proteins. The fundamental unit of chromatin is the nucleosome, which contains 146 ...

Biologia

Detection of Nitric Oxide and Superoxide Radical Anion by Electron Paramagnetic Resonance Spectroscopy from Cells using Spin Traps

Detecção de Óxido Nítrico e ânion radical superóxido por espectroscopia de ressonância paramagnética eletrônica a partir de células usando armadilhas para spins

Reactive nitrogen/oxygen species (ROS/RNS) at low concentrations play an important role in regulating cell function, signaling, and immune response but in ...

Isolation of Microvascular Endothelial Tubes from Mouse Resistance Arteries

Isolamento de tubos endoteliais microvasculares de Artérias Rato Resistência

The control of blood flow by the resistance vasculature regulates the supply of oxygen and nutrients concomitant with the removal of metabolic ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Imagem confocal de Solteiro mitocondriais superóxido Pisca em coração intacto ou<em&gt; In Vivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

Análise do estresse oxidativo em embriões Zebrafish

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Dois fótons de imagem de cálcio intracelular<sup&gt; 2+</sup&gt; Manuseio e produção de óxido nítrico no endotélio e músculo liso células de uma aorta de rato isolada

Calcium is a very important regulator of many physiological processes in vascular tissues. Most endothelial and smooth muscle functions highly depend on ...

Development and Characterization of In Vitro Microvessel Network and Quantitative Measurements of Endothelial [Ca2+]i and Nitric Oxide Production

Development and Characterization of In Vitro Microvessel Network and Quantitative Measurements of Endothelial [Ca2+]i and Nitric Oxide Production

Desenvolvimento e Caracterização de<em&gt; In Vitro</em&gt; Rede de microvasos e medições quantitativas de endotelial [ca<sup&gt; 2+</sup&gt;]<sub&gt; i</sub&gt; E óxido nítrico Produção

Endothelial cells (ECs) lining the blood vessel walls in vivo are constantly exposed to flow, but cultured ECs are often grown under static conditions and ...

Measuring Nitrite and Nitrate, Metabolites in the Nitric Oxide Pathway, in Biological Materials using the Chemiluminescence Method

Medindo nitrito e nitrato, metabolitos na Óxido Nítrico Pathway, em materiais biológicos utilizando o método de quimioluminescência

Nitric oxide (NO) is one of the main regulator molecules in vascular homeostasis and also a neurotransmitter. Enzymatically produced NO is oxidized into ...

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En Face Preparação de Vasos Sanguíneos de Rato

Sections of paraffin embedded tissues are routinely used for studying tissue histology and histopathology. However, it is difficult to determine what the ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

Aplicação de codificados geneticamente fluorescente óxido nítrico (NO •) Sondas, as geNOps, para imagens em tempo real de NO • Os sinais em células individuais

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...