Name: en face detection of nitric oxide and superoxide in endothelial layer of intact arteries
Uploaded: 2016-02-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries at JoVE.com

This work was supported by the Swiss National Science Foundation (310030_141070/1), Swiss Heart Foundation, and National Center of Competence in Research (NCCR-Kidney.CH) Switzerland. Yu Yi is supported by the Chinese Scholarship Council.

Работа животных была одобрена Комитетом по этике ветеринарной службы Фрибурга, Швейцарии. Протокол следует рекомендациям по уходу за животными и экспериментов в нашем институте. 1. Подготовка установки для Инкубация изолированных артериях <ol><li> Построить систему ванн...

<ol>
	<li>Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arginase:+the+emerging+therapeutic+target+for+vascular+oxidative+stress+and+inflammation.">Arginase: the emerging therapeutic target for vascular oxidative stress and inflammation.</a> Front Immunol. 4, 149 (2013).</li><li>Forstermann, U., Sessa, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+synthases:+regulation+and+function.">Nitric oxide synthases: regulation and function.</a> Eur Heart J. 33 (7), 829-837 (2012).</li><li>Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+understanding+endothelial+dysfunction+in+atherosclerosis.">Recent advances in understanding endothelial dysfunction in atherosclerosis.</a> Clin Med Res. 4 (1), 53-65 (2006).</li><li>Kietadisorn, R., Juni, R. P., Moens, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tackling+endothelial+dysfunction+by+modulating+NOS+uncoupling:+new+insights+into+its+pathogenesis+and+therapeutic+possibilities.">Tackling endothelial dysfunction by modulating NOS uncoupling: new insights into its pathogenesis and therapeutic possibilities.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 302 (5), 481-495 (2012).</li><li>Green, L. C., Wagner, D. A., Glogowski, J., Skipper, P. L., Wishnok, J. S., Tannenbaum, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+nitrate,+nitrite,+and+[15N]nitrate+in+biological+fluids.">Analysis of nitrate, nitrite, and [15N]nitrate in biological fluids.</a> Anal. Biochem. 126 (1), 131-138 (1982).</li><li>Knowles, R. G., Palacios, M., Palmer, R. M., Moncada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+nitric+oxide+from+L-arginine+in+the+central+nervous+system:+a+transduction+mechanism+for+stimulation+of+the+soluble+guanylate+cyclase.">Formation of nitric oxide from L-arginine in the central nervous system: a transduction mechanism for stimulation of the soluble guanylate cyclase.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 86 (13), 5159-5162 (1989).</li><li>Ishii, K., Sheng, H., Warner, T. D., Forstermann, U., Murad, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+sensitive+bioassay+method+for+detection+of+EDRF+with+RFL-6+rat+lung+fibroblasts.">A simple and sensitive bioassay method for detection of EDRF with RFL-6 rat lung fibroblasts.</a> Am. J. Physiol. 261 (2), 598-603 (1991).</li><li>Guo, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitory+effect+of+C-type+natriuretic+peptide+on+spontaneous+contraction+in+gastric+antral+circular+smooth+muscle+of+rat.">Inhibitory effect of C-type natriuretic peptide on spontaneous contraction in gastric antral circular smooth muscle of rat.</a> Acta Pharmacol Sin. 24 (10), 1021-1026 (2003).</li><li>Palmer, R. M., Ashton, D. S., Moncada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+cells+synthesize+nitric+oxide+from+L-arginine.">Vascular endothelial cells synthesize nitric oxide from L-arginine.</a> Nature. 333 (6174), 664-666 (1988).</li><li>Hecker, M., Sessa, W. C., Harris, H. J., Anggard, E. E., Vane, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+metabolism+of+L-arginine+and+its+significance+for+the+biosynthesis+of+endothelium-derived+relaxing+factor:+cultured+endothelial+cells+recycle+L-citrulline+to+L-arginine.">The metabolism of L-arginine and its significance for the biosynthesis of endothelium-derived relaxing factor: cultured endothelial cells recycle L-citrulline to L-arginine.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 87 (21), 8612-8616 (1990).</li><li>Kikuchi, K., Nagano, T., Hayakawa, H., Hirata, Y., Hirobe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+nitric+oxide+production+from+a+perfused+organ+by+a+luminol-H2O2+system.">Detection of nitric oxide production from a perfused organ by a luminol-H2O2 system.</a> Anal. Chem. 65 (13), 1794-1799 (1993).</li><li>Zweier, J. L., Wang, P., Kuppusamy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+measurement+of+nitric+oxide+generation+in+the+ischemic+heart+using+electron+paramagnetic+resonance+spectroscopy.">Direct measurement of nitric oxide generation in the ischemic heart using electron paramagnetic resonance spectroscopy.</a> J. Biol. Chem. 270 (1), 304-307 (1995).</li><li>Malinski, T., Mesaros, S., Tomboulian, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+measurement+using+electrochemical+methods.">Nitric oxide measurement using electrochemical methods.</a> Methods Enzymol. 268, 58-69 (1996).</li><li>Yu, Y., Rajapakse, A. G., Montani, J. P., Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p38+mitogen-activated+protein+kinase+is+involved+in+arginase-II-mediated+eNOS-Uncoupling+in+Obesity.">p38 mitogen-activated protein kinase is involved in arginase-II-mediated eNOS-Uncoupling in Obesity.</a> Cardiovasc Diabetol. 13 (1), 113 (2014).</li><li>Nakatsubo, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+evidence+of+nitric+oxide+production+from+bovine+aortic+endothelial+cells+using+new+fluorescence+indicators:+diaminofluoresceins.">Direct evidence of nitric oxide production from bovine aortic endothelial cells using new fluorescence indicators: diaminofluoresceins.</a> FEBS Lett. 427 (2), 263-266 (1998).</li><li>Hink, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+underlying+endothelial+dysfunction+in+diabetes+mellitus.">Mechanisms underlying endothelial dysfunction in diabetes mellitus.</a> Circ Res. 88 (2), 14-22 (2001).</li><li>Okuda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+glutaredoxin+in+human+coronary+arteries:+its+potential+role+in+antioxidant+protection+against+atherosclerosis.">Expression of glutaredoxin in human coronary arteries: its potential role in antioxidant protection against atherosclerosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 21 (9), 1483-1487 (2001).</li><li>Cortese-Krott, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+red+blood+cells+at+work:+identification+and+visualization+of+erythrocytic+eNOS+activity+in+health+and+disease.">Human red blood cells at work: identification and visualization of erythrocytic eNOS activity in health and disease.</a> Blood. 120 (20), 4229-4237 (2012).</li><li>Nunez, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discrepancies+between+nitroglycerin+and+NO-releasing+drugs+on+mitochondrial+oxygen+consumption,+vasoactivity,+and+the+release+of+NO.">Discrepancies between nitroglycerin and NO-releasing drugs on mitochondrial oxygen consumption, vasoactivity, and the release of NO.</a> Circ Res. 97 (10), 1063-1069 (2005).</li><li>Guzik, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+increased+vascular+superoxide+production+in+human+diabetes+mellitus:+role+of+NAD(P)H+oxidase+and+endothelial+nitric+oxide+synthase.">Mechanisms of increased vascular superoxide production in human diabetes mellitus: role of NAD(P)H oxidase and endothelial nitric oxide synthase.</a> Circulation. 105 (14), 1656-1662 (2002).</li><li>Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mTOR+signalling:+the+molecular+interface+connecting+metabolic+stress,+aging+and+cardiovascular+diseases.">mTOR signalling: the molecular interface connecting metabolic stress, aging and cardiovascular diseases.</a> Obes Rev. 13 (Suppl 2), 58-68 (2012).</li><li>Yepuri, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+crosstalk+between+arginase-II+and+S6K1+in+vascular+endothelial+inflammation+and+aging.">Positive crosstalk between arginase-II and S6K1 in vascular endothelial inflammation and aging.</a> Aging Cell. 11 (6), 1005-1016 (2012).</li><li>Matsuno, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nox1+is+involved+in+angiotensin+II-mediated+hypertension:+a+study+in+Nox1-deficient+mice.">Nox1 is involved in angiotensin II-mediated hypertension: a study in Nox1-deficient mice.</a> Circulation. 112 (17), 2677-2685 (2005).</li></ol>

Обнаружение NO или O 2 .- с помощью флуоресцентных красителей часто используется во многих исследованиях в культивируемых эндотелиальных клетках , а также в ткани криосрезах 23. Здесь мы расширили этот метод неповрежденными живых кровеносных сосудов, то есть, еп</em...

Сосудистые эндотелиальные клетки сосудов сохранить функциональную и структурную целостность путем высвобождения вазоактивных факторов 1. Среди этих факторов, эндотелием оксида азота (NO) , полученного из L-аргинина с помощью эндотелиальной NO-синтазы (Енос) является наиболее важным и лучше всего характеризуется фактором в сердечно - сосудистой физиологии 2. НЕТ вызывает расслабление гладких мышц и ингибирует клеточную пролиферацию, ингибирует агрегацию тромбоцитов и воспалительную клеточную адгезию и проникновение в субэндотелиальном пространство, следовательно , защита против развития сосудистого заболевания 3. При многих физиологических и патологических состояний, в том числе старение, гипертензия, диабет, гиперлипидемия и т.д., дисфункция эндотелия характеризуется сниженная биодоступностью и увеличение O 2 .- производство присутствует и способствует патогенеза атеросклероза 2. Исследования, проведенные в последние годы, показывают, что разобщение Эноса являетсяВажным механизмом эндотелиальной дисфункции, в котором фермент Енос генерирует O 2 .- вместо NO, при различных вышеуказанных условиях 1,4. Таким образом, анализ эндотелиальной функции, в частности, эндотелиальной NO производства и O 2 .- поколение имеет ключевое значение для экспериментальных исследований сердечно - сосудистых заболеваний и осложнений. Существуют многочисленные методологические подходы, которые были разработаны для анализа и не измерить никакого производства в биологических образцах. Из - за чрезвычайно лабильный характер NO , который легко окисляется до NO 2 - и NO 3 - с периодом полураспада от 3 ​​до 6 сек, то измерить трудно NO напрямую. Поэтому определение NO 2 - / NO 3 - в жидких образцах использовали в качестве показателя NO высвобождаемого из клеток или тканей 5. Хотя процедура относительно легко, метод, однако, Э.А.Sily воздействию высокой фоне стабильного NO 2 - / NO - 3 , содержащегося в растворе. Поскольку NO стимулирует растворимую гуанилатциклазу для получения циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ) 6, клеточный уровень цГМФ также установлено , чтобы оценить не высвобождают 7. Опять же , это косвенной оценки и не может быть специфическим, так как некоторые эндотелием факторы , такие , как С-типа натрийуретического пептида (CNP) также может повысить уровни цГМФ путем активации частиц гуанилатциклазы 8. ОТСУТСТВИЕ получают из L-аргинина с генерацией L-цитруллина в качестве побочного продукта , 9, измерение L-цитруллин производства, следовательно , также используется как косвенный метод, чтобы оценить продукцию NO. Основными недостатками этого метода является то, что он является радиоактивным и он не измеряет биоактивные уровни NO, так как НЕТ Наличие релиза может быть быстро инактивируется O 2 .-; Кроме того, L-цитруллин может быть переработана в L-Аргинин 10. Другие химические методы , такие как обнаружение хемилюминесценции 11, электронного спинового резонанса 12 или электрохимического порфиринового NO датчика 13 используются несколькими исследователями. Эти методы, как правило, не так просто в эксплуатации, процедуры обнаружения и требуют специального оборудования. Следует также отметить, что во многих исследованиях применяются эксперименты ванночку с изолированными кровеносных сосудов с или без эндотелием для оценки эндотелиальной функции и косвенного измерения эндотелием NO опосредованную сосудистых релаксаций. Тем не менее, этот метод, хотя он в основном близок к физиологической ситуации, но строго говоря, не не измеряет NO функции, она скорее оценивает эндотелий-опосредованные ответы вазомоторные в целом, отражающие характер влияния функции Enos, производство другой эндотелием отдыха факторы и эндотелием факторы Тунинг, производство O 2 .-, а также ответы клеток гладкой мускулатурык этим факторам. Конкретный анализ функции ENOS или NO производства, как правило , требуется 3. Многие исследовательские группы , включая наши в последние годы использовали метод флуоресцентной красителя для обнаружения внутриклеточных производства NO 14-19. В этом методе индикаторный элемент проницаемой флуоресценции diaminofluorescein-2 диацетат (DAF-2DA) использовали для измерения NO и свободную функцию NOS в живых клетках и тканях в пробирке или экс естественных условиях. Принцип, что в живых клетках, ДАФ-2DA является деацетилируется внутриклеточным эстеразы к нефлуоресцентном 4,5-diaminofluorescein (DAF-2), который затем превращают в флуоресцентный DAF-2 триазола (DAF-2t) путем взаимодействия с NO , Флуоресценцию от DAF-2T можно наблюдать под флюоресцентным микроскопом или флуоресцентного конфокального микроскопа 14. В связи с этим интенсивность флуоресценции внутриклеточного отражает внутриклеточную продукцию NO в клетках или эндотелий показа в неповрежденной Вессе кровил. В сочетании со специфическим флуоресцентным красителем , такие как dihydroethidium (ДНЕ), можно одновременно оценить внутриклеточного NO и O 2 .- поколение в клетках или в кровеносных сосудах 14. Точно так же, ДНЕ также клетка-проницаема соединение , которое окисляется О 2 .- внутри клеток, и окислительное продукт затем встраивается с нуклеиновыми кислотами , чтобы излучать ярко - красный цвет обнаруживаемого количественно с помощью флуоресцентного микроскопа или флуоресцентного конфокального микроскопа. ДНЕ очень специфический краситель для обнаружения O 2 .- из биологических образцов, как она обнаруживает , по существу супероксидных радикалов, сохраняется хорошо клетками, и , возможно , даже переносят умеренную фиксацию 20. Одним из преимуществ этого метода флуоресценции красителя является то , что он обнаруживает и визуализирует NO и / или О 2 .- фас непосредственно на интактной эндотелиальной слой живой кровеносного сосуда. В этой статье,мы опишем этот метод флуоресценции красителя для обнаружения NO и O 2 .- которую мы приспособили для собственной функции распознавания лиц от NO и O 2 .- в интактных аортах модели мышей с ожирением , вызванной высоким содержанием жира диета (HFD) кормления. Показано , что этот метод может успешно и надежно измерять NO и O 2 .- уровней и оценки функции Енос (DYS) в эндотелиальной слое свежеизолированных неповрежденных аорте мышей при ожирении.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dihydroethidium (DHE)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D 1168</td>
			<td>dissolve with DMSO to 5 mmol/L as 1000X stock, stored at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diaminofluorescein-2 Diacetate (DAF-2 DA)</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>251505</td>
			<td>dissolve with DMSO to 5 mmol/L as 1000X stock,stored at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D 1306</td>
			<td>dissolve with water to 300 &#181;mol/L as 1000X stock,stored at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>Vector labor. (reactolab)</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Name (N o-nitro-l-argininemethylester.HCl)</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>A5751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>P3636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-Myograph System&#160;</td>
			<td>Danish Myo Technology A/S</td>
			<td>Model 610M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope&#160;</td>
			<td>Leica&#160;</td>
			<td>DM6000&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image processing software</td>
			<td>National Institute of Health(NIH)</td>
			<td>Image J&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors&#160;</td>
			<td>S&#38;T AG</td>
			<td>SDC-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical scissors&#160;</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>15000-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>S&#38;T AG</td>
			<td>JF-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26G&#215;1/2&#698; syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip round diam15mm</td>
			<td>vwr</td>
			<td>631-1579</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 1 mL</td>
			<td>vwr</td>
			<td>RFL-1200c&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 200 uL</td>
			<td>vwr&#160;</td>
			<td>613.0659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes 1.5 mL</td>
			<td>Eppendorf&#160;</td>
			<td>30120086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetylcholine chloride</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>A-6625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

en face detection of nitric oxide and superoxide in endothelial layer of intact arteries

Эндотелием оксида азота (NO), произведенный из эндотелиальной NO-синтазы (Енос) является одним из наиболее важных вазопротективных молекул в сердечно-сосудистой физиологии. Неблагополучные Енос , такие как разобщение Эноса приводит к снижению NO биодоступности и увеличением супероксиданиона (O 2 .-) производства, а также в свою очередь , способствует сердечно - сосудистых заболеваний. Поэтому, соответствующее измерение NO и O 2 .- уровней в эндотелиальных клетках являются ключевыми для исследования сердечно - сосудистых заболеваний и осложнений. Из-за чрезвычайно лабильный характер NO и О 2 .-, что трудно измерить НЕТ и O 2 .- непосредственно в кровеносный сосуд. Многочисленные методы были разработаны для измерения NO и O 2 .- производство. Это, однако, либо нечувствительным или неспецифический, или технически сложных и требует специального оборудования. Здесь мы опишем адаптациюметода флуоресцентного красителя для фас одновременного обнаружения и визуализации внутриклеточного NO и O 2 .- с использованием клеточной проницаемой diaminofluorescein-2 диацетат (DAF-2DA) и dihydroethidium (ДНЕ), соответственно, в неповрежденных аортах модели ожирения мыши индуцированных путем кормления с высоким содержанием жиров-диеты. Мы могли бы продемонстрировать снизился внутриклеточного NO и повышение O 2 .- уровней в свежеизолированных неповрежденных аорте ожирения мышей по сравнению с контрольной постного мыши. Показано , что этот метод является простым методом для непосредственного обнаружения и визуализации NO и O 2 .- в неповрежденных кровеносных сосудов и может широко применяться для исследования эндотелиальной функции (DYS) при (физио) патологических состояний.

Ожирение является важным фактором риска развития ишемической ишемической болезни сердца и связано с уменьшением эндотелиальной биодоступности, отличительной чертой атеросклеротических сосудистых заболеваний 21. Енос-разобщение было показано, что является ва...

Watch this Scientific Journal Video about En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries at JoVE.com

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

En Face Detection оксида азота и супероксид в эндотелиальный слой малонарушенных артериях

В этой статье мы опишем , приспособленный относительно простой метод с использованием флуоресценции красителя diaminofluorescein-2 диацетат (DAF-2DA) и dihydroethidium (DHE) для фас одновременного обнаружения и визуализации внутриклеточного оксида азота (NO) и супероксиданиона (O 2 .- ) соответственно, в свежевыделенные неповрежденные аортах модели ожирения мыши.

Endothelium-derived nitric oxide (NO) produced from endothelial NO-synthase (eNOS) is one of the most important vasoprotective molecules in cardiovascular ...

Research

JoVE Journal

Biology

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

Detection of Post-translational Modifications on Native Intact Nucleosomes by ELISA

Обнаружение посттрансляционной Изменения по земельному Неповрежденный нуклеосом с помощью ИФА

The genome of eukaryotes exists as chromatin which contains both DNA and proteins. The fundamental unit of chromatin is the nucleosome, which contains 146 ...

Detection of Nitric Oxide and Superoxide Radical Anion by Electron Paramagnetic Resonance Spectroscopy from Cells using Spin Traps

Определение оксида азота и супероксид анион-радикал электронов парамагнитного резонанса от клеток с использованием спиновых ловушек

Reactive nitrogen/oxygen species (ROS/RNS) at low concentrations play an important role in regulating cell function, signaling, and immune response but in ...

Isolation of Microvascular Endothelial Tubes from Mouse Resistance Arteries

Выделение микрососудистой эндотелиальных трубок от сопротивления мышь автомагистралях

The control of blood flow by the resistance vasculature regulates the supply of oxygen and nutrients concomitant with the removal of metabolic ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Конфокальной микроскопии одиноких митохондриальных супероксид вспышек в интактных Сердце или<em&gt; В Vivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

Анализ окислительного стресса у эмбрионов данио рерио

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Двухфотонное изображений внутриклеточного Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Погрузочно-разгрузочные работы и оксид азота производства в эндотелиальных и гладкомышечных клеток изолированной аорты крыс

Calcium is a very important regulator of many physiological processes in vascular tissues. Most endothelial and smooth muscle functions highly depend on ...

Development and Characterization of In Vitro Microvessel Network and Quantitative Measurements of Endothelial [Ca2+]i and Nitric Oxide Production

Development and Characterization of In Vitro Microvessel Network and Quantitative Measurements of Endothelial [Ca2+]i and Nitric Oxide Production

Разработка и определение характеристик<em&gt; In Vitro</em&gt; Микрососудов Сеть и количественные измерения эндотелиальной [Са<sup&gt; 2+</sup&gt;]<sub&gt; я</sub&gt; И оксид азота Производство

Endothelial cells (ECs) lining the blood vessel walls in vivo are constantly exposed to flow, but cultured ECs are often grown under static conditions and ...

Measuring Nitrite and Nitrate, Metabolites in the Nitric Oxide Pathway, in Biological Materials using the Chemiluminescence Method

Измерение нитритов и нитратов, метаболиты в оксид азота Pathway, в биологических материалах с использованием метода хемилюминесценции

Nitric oxide (NO) is one of the main regulator molecules in vascular homeostasis and also a neurotransmitter. Enzymatically produced NO is oxidized into ...

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

Подготовка к зачатию кровеносных сосудов мыши

Sections of paraffin embedded tissues are routinely used for studying tissue histology and histopathology. However, it is difficult to determine what the ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

Применение Генетически кодируемые Флуоресцентные окиси азота (NO •) зондов geNOps, в режиме реального времени изображений NO • Сигналы в одиночных камерах

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...