Name: en face detection of nitric oxide and superoxide in endothelial layer of intact arteries
Uploaded: 2016-02-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries at JoVE.com

This work was supported by the Swiss National Science Foundation (310030_141070/1), Swiss Heart Foundation, and National Center of Competence in Research (NCCR-Kidney.CH) Switzerland. Yu Yi is supported by the Chinese Scholarship Council.

Djur arbete godkändes av den etiska kommittén för veterinärfrågor i Fribourg, Schweiz. Protokollet följer riktlinjerna för djuromsorg och experiment på vår institution. 1. Framställning av en Set-up för inkubation av isolerade artärer <ol><li> Konstruera ett organbad system som kan värmas till 37 ° C och luftades med 95% O2 och 5% CO2 från ett kol gastank. </li><li> Förbereda så mycket Krebs-Ringer bikarbonat-buffert efter behov med koncentrationen av...

<ol>
	<li>Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arginase:+the+emerging+therapeutic+target+for+vascular+oxidative+stress+and+inflammation.">Arginase: the emerging therapeutic target for vascular oxidative stress and inflammation.</a> Front Immunol. 4, 149 (2013).</li><li>Forstermann, U., Sessa, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+synthases:+regulation+and+function.">Nitric oxide synthases: regulation and function.</a> Eur Heart J. 33 (7), 829-837 (2012).</li><li>Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+understanding+endothelial+dysfunction+in+atherosclerosis.">Recent advances in understanding endothelial dysfunction in atherosclerosis.</a> Clin Med Res. 4 (1), 53-65 (2006).</li><li>Kietadisorn, R., Juni, R. P., Moens, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tackling+endothelial+dysfunction+by+modulating+NOS+uncoupling:+new+insights+into+its+pathogenesis+and+therapeutic+possibilities.">Tackling endothelial dysfunction by modulating NOS uncoupling: new insights into its pathogenesis and therapeutic possibilities.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 302 (5), 481-495 (2012).</li><li>Green, L. C., Wagner, D. A., Glogowski, J., Skipper, P. L., Wishnok, J. S., Tannenbaum, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+nitrate,+nitrite,+and+[15N]nitrate+in+biological+fluids.">Analysis of nitrate, nitrite, and [15N]nitrate in biological fluids.</a> Anal. Biochem. 126 (1), 131-138 (1982).</li><li>Knowles, R. G., Palacios, M., Palmer, R. M., Moncada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+nitric+oxide+from+L-arginine+in+the+central+nervous+system:+a+transduction+mechanism+for+stimulation+of+the+soluble+guanylate+cyclase.">Formation of nitric oxide from L-arginine in the central nervous system: a transduction mechanism for stimulation of the soluble guanylate cyclase.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 86 (13), 5159-5162 (1989).</li><li>Ishii, K., Sheng, H., Warner, T. D., Forstermann, U., Murad, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+sensitive+bioassay+method+for+detection+of+EDRF+with+RFL-6+rat+lung+fibroblasts.">A simple and sensitive bioassay method for detection of EDRF with RFL-6 rat lung fibroblasts.</a> Am. J. Physiol. 261 (2), 598-603 (1991).</li><li>Guo, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitory+effect+of+C-type+natriuretic+peptide+on+spontaneous+contraction+in+gastric+antral+circular+smooth+muscle+of+rat.">Inhibitory effect of C-type natriuretic peptide on spontaneous contraction in gastric antral circular smooth muscle of rat.</a> Acta Pharmacol Sin. 24 (10), 1021-1026 (2003).</li><li>Palmer, R. M., Ashton, D. S., Moncada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+cells+synthesize+nitric+oxide+from+L-arginine.">Vascular endothelial cells synthesize nitric oxide from L-arginine.</a> Nature. 333 (6174), 664-666 (1988).</li><li>Hecker, M., Sessa, W. C., Harris, H. J., Anggard, E. E., Vane, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+metabolism+of+L-arginine+and+its+significance+for+the+biosynthesis+of+endothelium-derived+relaxing+factor:+cultured+endothelial+cells+recycle+L-citrulline+to+L-arginine.">The metabolism of L-arginine and its significance for the biosynthesis of endothelium-derived relaxing factor: cultured endothelial cells recycle L-citrulline to L-arginine.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 87 (21), 8612-8616 (1990).</li><li>Kikuchi, K., Nagano, T., Hayakawa, H., Hirata, Y., Hirobe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+nitric+oxide+production+from+a+perfused+organ+by+a+luminol-H2O2+system.">Detection of nitric oxide production from a perfused organ by a luminol-H2O2 system.</a> Anal. Chem. 65 (13), 1794-1799 (1993).</li><li>Zweier, J. L., Wang, P., Kuppusamy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+measurement+of+nitric+oxide+generation+in+the+ischemic+heart+using+electron+paramagnetic+resonance+spectroscopy.">Direct measurement of nitric oxide generation in the ischemic heart using electron paramagnetic resonance spectroscopy.</a> J. Biol. Chem. 270 (1), 304-307 (1995).</li><li>Malinski, T., Mesaros, S., Tomboulian, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+measurement+using+electrochemical+methods.">Nitric oxide measurement using electrochemical methods.</a> Methods Enzymol. 268, 58-69 (1996).</li><li>Yu, Y., Rajapakse, A. G., Montani, J. P., Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p38+mitogen-activated+protein+kinase+is+involved+in+arginase-II-mediated+eNOS-Uncoupling+in+Obesity.">p38 mitogen-activated protein kinase is involved in arginase-II-mediated eNOS-Uncoupling in Obesity.</a> Cardiovasc Diabetol. 13 (1), 113 (2014).</li><li>Nakatsubo, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+evidence+of+nitric+oxide+production+from+bovine+aortic+endothelial+cells+using+new+fluorescence+indicators:+diaminofluoresceins.">Direct evidence of nitric oxide production from bovine aortic endothelial cells using new fluorescence indicators: diaminofluoresceins.</a> FEBS Lett. 427 (2), 263-266 (1998).</li><li>Hink, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+underlying+endothelial+dysfunction+in+diabetes+mellitus.">Mechanisms underlying endothelial dysfunction in diabetes mellitus.</a> Circ Res. 88 (2), 14-22 (2001).</li><li>Okuda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+glutaredoxin+in+human+coronary+arteries:+its+potential+role+in+antioxidant+protection+against+atherosclerosis.">Expression of glutaredoxin in human coronary arteries: its potential role in antioxidant protection against atherosclerosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 21 (9), 1483-1487 (2001).</li><li>Cortese-Krott, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+red+blood+cells+at+work:+identification+and+visualization+of+erythrocytic+eNOS+activity+in+health+and+disease.">Human red blood cells at work: identification and visualization of erythrocytic eNOS activity in health and disease.</a> Blood. 120 (20), 4229-4237 (2012).</li><li>Nunez, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discrepancies+between+nitroglycerin+and+NO-releasing+drugs+on+mitochondrial+oxygen+consumption,+vasoactivity,+and+the+release+of+NO.">Discrepancies between nitroglycerin and NO-releasing drugs on mitochondrial oxygen consumption, vasoactivity, and the release of NO.</a> Circ Res. 97 (10), 1063-1069 (2005).</li><li>Guzik, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+increased+vascular+superoxide+production+in+human+diabetes+mellitus:+role+of+NAD(P)H+oxidase+and+endothelial+nitric+oxide+synthase.">Mechanisms of increased vascular superoxide production in human diabetes mellitus: role of NAD(P)H oxidase and endothelial nitric oxide synthase.</a> Circulation. 105 (14), 1656-1662 (2002).</li><li>Yang, Z., Ming, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mTOR+signalling:+the+molecular+interface+connecting+metabolic+stress,+aging+and+cardiovascular+diseases.">mTOR signalling: the molecular interface connecting metabolic stress, aging and cardiovascular diseases.</a> Obes Rev. 13 (Suppl 2), 58-68 (2012).</li><li>Yepuri, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+crosstalk+between+arginase-II+and+S6K1+in+vascular+endothelial+inflammation+and+aging.">Positive crosstalk between arginase-II and S6K1 in vascular endothelial inflammation and aging.</a> Aging Cell. 11 (6), 1005-1016 (2012).</li><li>Matsuno, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nox1+is+involved+in+angiotensin+II-mediated+hypertension:+a+study+in+Nox1-deficient+mice.">Nox1 is involved in angiotensin II-mediated hypertension: a study in Nox1-deficient mice.</a> Circulation. 112 (17), 2677-2685 (2005).</li></ol>

Detektering av NO eller O 2 .- med fluorescerande färgämnen användes ofta i många studier i odlade endotelceller och även i vävnads kryosnitt 23. Här vi utökat denna metod för att intakt levande blodkärl, det vill säga, en ansiktsdetektering av NO och O 2 .- nivåer i endotelskiktet med DAF-2DA och DHE, respektive, som är effektiv, relativt enkel och intuitiv. I jämförelse med metoden i vaskulära kryosnitt, visar denna metod lägre b...

De vaskulära endotelcellerna hålla vaskulär funktionell och strukturell integritet genom att släppa vasoaktiva faktorer 1. Bland dessa faktorer är endotelhärledd kväveoxid (NO) produceras från L-arginin via endotel NO-syntas (eNOS) den viktigaste och bäst karakteriseras faktor i kardiovaskulär fysiologi 2. NO orsakar glatt muskulatur och hämmar celltillväxt, hämmar trombocytaggregationen och inflammatorisk celladhesion och infiltration i subendoteliala utrymme, därför skydda mot utveckling kärlsjukdom 3. Under många fysiologiska och patologiska tillstånd, inklusive åldrande, högt blodtryck, diabetes, hyperlipidemi, etc., endoteldysfunktion kännetecknas av minskade NO biotillgänglighet och ökad O2 .- produktion är närvarande och främjar patogenes av ateroskleros 2. Studier från de senaste åren visar att frikoppling av eNOS är enviktig mekanism för endoteldysfunktion, där eNOS enzymet genererar O 2 .- stället för NO, i enlighet med de olika ovannämnda villkor 1,4. Därför analys av endotelfunktion, särskilt endotel NO-produktion och O 2 .- generation är avgörande för experimentell forskning om hjärt- och kärlsjukdomar och komplikationer. Det finns många metodologiska ansatser som har utvecklats för att analysera och mäta NO-produktion i biologiska prover. På grund av den extremt labila naturen av NO, som lätt oxideras till NO2 - och NO 3 - med en halveringstid på 3 till 6 sek, är det svårt att mäta NO direkt. Därför bestämning av NO 2 - / NO 3 - i vätskeprover användes som ett index på NO frisätts från celler eller vävnader 5. Även om förfarandet är relativt enkelt, vilket förfarande är emellertid easily påverkas av hög bakgrund av den stabila NO 2 - / NO 3 - som finns i lösningen. Eftersom NO stimulerar lösligt guanylatcyklas att producera cykliskt guanosinmonofosfat (cGMP) 6, har den cellulära cGMP-nivå även bestämts för att uppskatta NO-frisättning 7. Återigen, detta en indirekt uppskattning och får inte vara specifik, eftersom vissa endotelhärledd faktorer såsom C-typ natriuretisk peptid (CNP) också skulle kunna öka cGMP-nivåer genom aktivering av partikelformigt guanylatcyklas 8. NO bildas från L-arginin med genereringen av L-citrullin som en biprodukt 9, mätning av L-citrullin produktion används därför också som en indirekt metod för att uppskatta NO-produktion. De största nackdelarna med denna metod är att det är radioaktivt och det mäter inte bioaktiva NO-nivåer, sedan dess släppt NO kan snabbt inaktiveras genom O 2 .-; Dessutom kan L-citrullin återvinnas till L-arginin 10. Andra kemiska metoder såsom kemiluminescens upptäckt 11, elektronspinnresonans 12 eller elektro porfyrinförening NO sensorn 13 används av flera forskare. Dessa metoder är oftast inte lätt i drift, detekteringsförfaranden och kräver specialutrustning. Det är också att nämna att många studier gäller organbad experiment med isolerade blodkärl med eller utan endotel att bedöma endotelfunktion och indirekt mäta endotelhärledd NO medierad kärlrelaxationer. Men denna metod, även om det oftast är nära fysiologisk situation, men absolut säga, inte mäta NO funktion, bedömer det ganska endotel-medierad vasomotoriska svar i allmänhet återspeglar nettoeffekterna av eNOS-funktion, produktion av andra endotelhärledd avkopplande faktorer och endotelhärledd avtalsfaktorer, produktion av O 2 .-, och även svaren av glatta muskelcellertill dessa faktorer. En särskild analys av eNOS-funktion eller NO-produktion är vanligtvis krävs 3. Många forskargrupper inklusive vårt har under de senaste åren använt fluorescens färgämne metod för att detektera intracellulär produktion av NO 14-19. I denna metod cellpermeabla flouresceinsindikator diaminofluorescein-2-acetat (DAF-2DA) användes för att mäta fri NO och NOS funktion i levande celler och vävnader in vitro eller ex vivo. Principen är att i levande celler, DAF-2DA deacetyleras genom intracellulär esteras till icke-fluorescerande 4,5-diaminofluorescein (DAF-2) som sedan omvandlades till fluorescerande DAF-2 triazol (DAF-2T) genom att reagera med NO . Fluorescensen från DAF-2T kan observeras under ett fluorescensmikroskop eller en fluorescens konfokalmikroskop 14. Den intracellulära fluorescensintensiteten återspeglar därför den intracellulära NO-produktion i cellerna eller endotel en i intakt blod Vessel. I kombination med en specifik fluorescens färgämne såsom dihydroethidium (DHE), kan man samtidigt bedöma intracellulära NO och O 2 .- generation i cellerna eller i blodkärlen 14. På samma sätt är DHE också ett cell permeabel förening som oxideras av O2 .- inuti cellerna, och den oxidativa produkten sedan interkalerar med nukleinsyror att avge en klarröd färg detekterbar kvantitativt genom fluorescerande mikroskop eller fluorescens konfokalmikroskop. DHE är en mycket specifik färg för detektering av O2 .- från biologiska prover, eftersom den upptäcker huvudsak superoxidradikaler, bibehålls väl av celler, och kan även tolerera mild fixering 20. En av fördelarna med denna fluorescens färgämne metod är att den detekterar och visualiserar NO och / eller O 2 .- en face direkt på det intakta endotelskiktet hos en levande blodkärl. I det här pappret,vi beskriva denna fluorescens färgämne metod för att upptäcka NO och O 2 .- som vi har anpassat för en ansiktsdetektering av NO och O 2 .- i intakta aorta av en fetma musmodell induceras av fettrik-diet (HFD) utfodring. Vi visar att denna metod framgångsrikt och tillförlitligt kan mäta NO och O 2 .- nivåer och utvärdera eNOS (dys) funktion i endotelskiktet av nyisolerade intakta mus artärer i fetma.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dihydroethidium (DHE)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D 1168</td>
			<td>dissolve with DMSO to 5 mmol/L as 1000X stock, stored at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diaminofluorescein-2 Diacetate (DAF-2 DA)</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>251505</td>
			<td>dissolve with DMSO to 5 mmol/L as 1000X stock,stored at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D 1306</td>
			<td>dissolve with water to 300 &#181;mol/L as 1000X stock,stored at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>Vector labor. (reactolab)</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Name (N o-nitro-l-argininemethylester.HCl)</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>A5751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>P3636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-Myograph System&#160;</td>
			<td>Danish Myo Technology A/S</td>
			<td>Model 610M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope&#160;</td>
			<td>Leica&#160;</td>
			<td>DM6000&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image processing software</td>
			<td>National Institute of Health(NIH)</td>
			<td>Image J&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors&#160;</td>
			<td>S&#38;T AG</td>
			<td>SDC-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical scissors&#160;</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>15000-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>S&#38;T AG</td>
			<td>JF-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26G&#215;1/2&#698; syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip round diam15mm</td>
			<td>vwr</td>
			<td>631-1579</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 1 mL</td>
			<td>vwr</td>
			<td>RFL-1200c&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tips 200 uL</td>
			<td>vwr&#160;</td>
			<td>613.0659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes 1.5 mL</td>
			<td>Eppendorf&#160;</td>
			<td>30120086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetylcholine chloride</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>A-6625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

en face detection of nitric oxide and superoxide in endothelial layer of intact arteries

Endotelhärledd kväveoxid (NO) producerad från endotelial NO-syntas (eNOS) är en av de viktigaste vasoprotective molekyler i kardiovaskulär fysiologi. Dysfunktionell eNOS såsom frikoppling av eNOS leder till en minskning i NO biotillgänglighet och ökad superoxidanjon (O2 .-) produktion, och i sin tur främjar hjärt- och kärlsjukdomar. Därför bör mätning av NO och O 2 .- nivåer i endotelceller är avgörande för forskning om hjärt- och kärlsjukdomar och komplikationer. På grund av den extremt labila naturen av NO och O 2 .-, är det svårt att mäta NO och O 2 .- direkt i ett blodkärl. Ett stort antal metoder har utvecklats för att mäta NO och O 2 .- produktion. Det är dock antingen okänslig eller ospecifik, eller tekniskt krävande och kräver speciell utrustning. Här beskriver vi en anpassningav fluorescensfärgämnesmetoden för en face samtidig detektion och visualisering av intracellulär NO och O 2 .- använda cellpermeabla diaminofluorescein-2 diacetat (DAF-2DA) och dihydroethidium (DHE), respektive, i intakta aortas av en fetma musmodell inducerade av fettrik-kost utfodring. Vi kunde visa minskad intracellulär NO och förbättrad O 2 .- nivåer i nyisolerade intakta artärer av fetma mus jämfört med kontroll mager musen. Vi visar att denna metod är en enkel teknik för direkt detektering och visualisering av NO och O 2 .- i de intakta blodkärlen och kan tillämpas i stor utsträckning för undersökning av endotelial (dys) funktion under (fysio) patologiska tillstånd.

Fetma är en viktig riskfaktor för ischemisk kranskärlssjukdom och är förknippad med minskad endotel NO biotillgänglighet, ett kännetecken för aterosklerotisk kärlsjukdom 21. eNOS-koppling har visat sig vara en viktig mekanism för endoteldysfunktion i många fysiologiska och patologiska tillstånd innefattande åldrande 22, åderförkalkning och fetma 14. Därför Jämför vi de magra och feta möss för att visa representativt resultat av NO och...

Watch this Scientific Journal Video about En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries at JoVE.com

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

En Face Detection av kväveoxid och superoxid i endotelskiktet intakt artärer

I den här artikeln beskriver vi en anpassad relativt enkel metod med hjälp av fluorescens färgämne diaminofluorescein-2-acetat (DAF-2DA) och dihydroethidium (DHE) för en face samtidig detektion och visualisering av intracellulär kväveoxid (NO) och superoxidanjon (O2 .- ) respektive i nyisolerade intakta aorta av en fetma musmodell.

Endothelium-derived nitric oxide (NO) produced from endothelial NO-synthase (eNOS) is one of the most important vasoprotective molecules in cardiovascular ...

Research

JoVE Journal

Biology

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

Detection of Post-translational Modifications on Native Intact Nucleosomes by ELISA

Upptäckt av post-translationella modifieringar på inhemska intakt nukleosomer med ELISA

The genome of eukaryotes exists as chromatin which contains both DNA and proteins. The fundamental unit of chromatin is the nucleosome, which contains 146 ...

Detection of Nitric Oxide and Superoxide Radical Anion by Electron Paramagnetic Resonance Spectroscopy from Cells using Spin Traps

Detektering av kväveoxid och superoxidradikalanjonen genom elektronparamagnetisk resonans-spektroskopi från celler med användning av spin traps

Reactive nitrogen/oxygen species (ROS/RNS) at low concentrations play an important role in regulating cell function, signaling, and immune response but in ...

Isolation of Microvascular Endothelial Tubes from Mouse Resistance Arteries

Isolering av Microvascular Endothelial Rör från mus Resistance Artärer

The control of blood flow by the resistance vasculature regulates the supply of oxygen and nutrients concomitant with the removal of metabolic ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal avbildning av Single Mitochondrial Superoxid Blinkar i intakt hjärta eller<em&gt; In Vivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

Analys av oxidativ stress i Zebrafish embryon

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Två-foton Imaging av intracellulär Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Hantering och kväveoxidproduktion i Endothelial och glatta muskelceller av en isolerad råttaorta

Calcium is a very important regulator of many physiological processes in vascular tissues. Most endothelial and smooth muscle functions highly depend on ...

Development and Characterization of In Vitro Microvessel Network and Quantitative Measurements of Endothelial [Ca2+]i and Nitric Oxide Production

Development and Characterization of In Vitro Microvessel Network and Quantitative Measurements of Endothelial [Ca2+]i and Nitric Oxide Production

Utveckling och karakterisering av<em&gt; In Vitro</em&gt; Mikrokärls Nätverk och kvantitativa mätningar av Endothelial [Ca<sup&gt; 2+</sup&gt;]<sub&gt; i</sub&gt; Och produktionen av kväveoxid

Endothelial cells (ECs) lining the blood vessel walls in vivo are constantly exposed to flow, but cultured ECs are often grown under static conditions and ...

Measuring Nitrite and Nitrate, Metabolites in the Nitric Oxide Pathway, in Biological Materials using the Chemiluminescence Method

Mätning nitrit och nitrat, metaboliter i kväveoxid Pathway, i biologiskt material med hjälp av kemiluminescens metod

Nitric oxide (NO) is one of the main regulator molecules in vascular homeostasis and also a neurotransmitter. Enzymatically produced NO is oxidized into ...

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En ansiktsberedning av musblodfartyg

Sections of paraffin embedded tissues are routinely used for studying tissue histology and histopathology. However, it is difficult to determine what the ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

Tillämpning av genetiskt kodade fluorescerande kväveoxid (NO •) sonder, de geNOps, i realtid avbildning av NO • Signaler i enskilda celler

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...