Name: an improved method for rapid intubation of the trachea in mice
Uploaded: 2016-02-22T14:00:00
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저자는 트리 크롬 염색 및 분석에 대한 도움말은 워싱턴 대학의 조직학의 브라이언 존슨과 이미징 코어 감사합니다. 이 작품은 NIH 보조금 HL098067 및 HL089455에 의해 지원되었다.

미국과 삼목 시나이 의료 센터의 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)는 이러한 연구에 필요한 동물 작업을 승인했다. 1. 준비 <ol><li> 무딘 엔드 집게와 억압자를 통해 오토 클레이브를 모두 소독. </li><li> 생물 안전 캐비닛을 사용하여 동결 건조 분말 PBS에서 BLM의 작업 주식을 준비합니다. 혼합조차 보장 35 kHz에서 10 분 동안 초음파 처리 용액. 참고 : μL (30) 사이에 45의 총 부피는 ?...

<ol>
	<li>Hyde, D. M., Hamid, Q., Irvin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy,+pathology,+and+physiology+of+the+tracheobronchial+tree:+emphasis+on+the+distal+airways.">Anatomy, pathology, and physiology of the tracheobronchial tree: emphasis on the distal airways.</a> J Allergy Clin Immunol. 124, S72-S77 (2009).</li><li>Rosenthal, N., Brown, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+ascending:+perspectives+for+human-disease+models.">The mouse ascending: perspectives for human-disease models.</a> Nat Cell Biol. 9, 993-999 (2007).</li><li>Peters, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+as+a+model+for+human+biology:+a+resource+guide+for+complex+trait+analysis.">The mouse as a model for human biology: a resource guide for complex trait analysis.</a> Nat Rev Genet. 8, 58-69 (2007).</li><li>Baron, R. M., Choi, A. J., Owen, C. A., Choi, A. 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N., Torres-Gonzalez, E., Goodson, P., Rojas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+tracheal+instillation+of+solutes+into+mouse+lung.">Direct tracheal instillation of solutes into mouse lung.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Osier, M., Oberdorster, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intratracheal+inhalation+vs+intratracheal+instillation:+differences+in+particle+effects.">Intratracheal inhalation vs intratracheal instillation: differences in particle effects.</a> Fundam Appl Toxicol. 40, 220-227 (1997).</li><li>Driscoll, K. 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N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+simple+method+for+endotracheal+intubation+of+mice.">A novel and simple method for endotracheal intubation of mice.</a> Lab Anim. 41, 128-135 (2007).</li><li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung.">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> J Vis Exp. , e50601 (2013).</li><li>Starcher, B., WIlliams, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+intratracheal+instillation+of+endotoxin+into+the+lungs+of+mice.">A method for intratracheal instillation of endotoxin into the lungs of mice.</a> Lab Anim. 23, 234-240 (1989).</li><li>Daubeuf, F., Frossard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+bronchoalveolar+lavage+in+the+mouse.">Performing bronchoalveolar lavage in the mouse.</a> Curr Protoc Mouse Biol. 2, 167-175 (2012).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+lung+fibrosis+requires+an+invasive+fibroblast+phenotype+regulated+by+hyaluronan+and+CD44.">Severe lung fibrosis requires an invasive fibroblast phenotype regulated by hyaluronan and CD44.</a> J Exp Med. 208, 1459-1471 (2011).</li><li>Grazioli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CYR61+(CCN1)+overexpression+induces+lung+injury+in+mice.">CYR61 (CCN1) overexpression induces lung injury in mice.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 308, L759-L765 (2015).</li><li>Redente, E. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+necrosis+factor-alpha+accelerates+the+resolution+of+established+pulmonary+fibrosis+in+mice+by+targeting+profibrotic+lung+macrophages.">Tumor necrosis factor-alpha accelerates the resolution of established pulmonary fibrosis in mice by targeting profibrotic lung macrophages.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 50, 825-837 (2014).</li><li>Lawrenz, M. B., Fodah, R. A., Gutierrez, M. G., Warawa, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intubation-mediated+intratracheal+(IMIT)+instillation:+a+noninvasive,+lung-specific+delivery+system.">Intubation-mediated intratracheal (IMIT) instillation: a noninvasive, lung-specific delivery system.</a> J Vis Exp. , e52261 (2014).</li></ol>

에어로졸 인해 제한 시약 가용성, 안전성, 또는 비용이 비현실적 경우에, 직접 기관 행정부는 폐에 외인성 에이전트의 전달을위한 우수한 방법이다 16 Transtracheal의 점안이 광범위하게이 작업을 수행하는 데 사용되었습니다.; 그러나, 모든 외과 적 개입, 그것은 또한 그것 절차 자체에 의한 합병증의 가능성을 수행하고, 반드시 제가 주입된다. (13) 이러한 이유로, 삽관...

일부 해부학 적 생리 학적 차이에도 불구하고, 1 뮤린 모델 사육 관점에서 인간 생물학 및 질환 발병. 2 모델링 헤아릴 수, 마우스, 취급하기 쉬운 낮은 사육 시간 가속 수명을 가지며, 상대적으로 저렴 계속 집입니다. 다양한 유전자 변형 전략 (예., 조건부 녹아웃 리포터 마우스 계통 추적 방법 등)뿐만 아니라, 가능한 시약의 다양한 (예., 항체, 재조합 단백질 억제제의 개발과 함께, 등), 마우스는 인간의 질병 및 항상성 과정을 밝히기 위해서 필수적인 모델 척추 생물되었다. (3) 마우스는 인간의 4 ALI는 외상, 부상 또는 패혈증으로 인해 발생할 수 있습니다. 급성 폐 손상 (ALI) 및 폐 섬유증을 포함한 폐 조건을 공부에 특히 유용되었습니다 상피을 특징으로하고내피 누출 (예., 부종), 염증 및 초기 섬유화. 많은 환자에서 ALI 종종 인한 호흡 부전으로 사망 섬유증 결과의 중증 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)으로 진행한다. 5,6- 폐 섬유증은 세포 외 기질의 과잉 증착 특징 진보적 인 심각한 병리학 , 특히. 나는 장애인 폐 기능을 선도, 콜라겐 블레오 마이신 (BLM)의 7,8 관리를 입력 한 실험 동물에 ALI 및 섬유화를 유도하기 위해 가장 널리 사용되는 최고의 특성화 된 모델입니다. (9) 설치류에 폐 섬유증을 BLM 유발하지만 않습니다 완전히 인간의 섬유 성 표현형은,이 모델 (10) 마우스 연구는 발병과 질병의 진행에 영향을 미치는 여러 중요한 요인의 발견을 주도 요점을 되풀이하지. (11) BLM 유도 섬유화 뒤에 정확한 메커니즘 (들)를 알 수 있지만, 개시 부상전도기도 및 폐포, 특히 제 1 형 pneumocytes 라이닝 상피 세포의 접촉에 의존하는 DNA 가닥 나누기에서 발생하는 것으로 생각된다. (12) BLM과 폐 상피 세포 사이의 직접 접촉에 대한 필요성은 강력한 전달 경로의 중요성을 강조 그리고 이러한 우려는 재조합 단백질, 항체, siRNA를, 바이러스, 박테리아, 미립자 등을 포함한 말초기도를 대상으로 치료의 넓은 범위에 밀접한 있습니다. 인두 흡인 (OPA)는 이러한 목적 13 널리 사용되었지만, OPA의 주요 단점은 전달 제의 일부가되어 투여 용량으로 부정확 선도 위장관으로 삼킬 수 있다는 것이다. 널리 사용되는 또 다른 방법은 직접 호흡기에 제의 기관지 점적 및 노출 강한 마취 기관 절개술을 포함 transtracheal 점안이다. (14) 그러나, 그러한 수도절차 인해 invasivity에 바람직하지 않을 수 있지만, 또한, 시간 소모적 인 훈련 공정한 비트가 필요하며으로 제제의 직접 투여를 포함한다. 15,16 여러 프로토콜들이 개발되었다 호흡기 잠재적 손상을 일으키는 수술 개입 없이도기도가 16,17,18,19,20 그러나 이러한 방법은 확장 된 것을 포함 복구 시간 강력한 마취제로 인한 고가 장비의 사용 (예., 이경 / 후두경 시판 절차 보드, 광섬유 투여 량에 관한 와이어 등), 구강 조작 과량 불확실성. 이 논문은 연구자가 신속, 저렴하고 안정적​​으로 주변 조직에 잔류 손상의 제한으로 위험 쥐의 폐에 시약을 주입 할 수 있습니다 삽관을 통한 행정의 비교적 쉬운 방법을 설명합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1528">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:481px;">Bleomycin For Injection, 30 units/vial</td>
			<td style="width:304px;">APP Pharmaceuticals, LLC</td>
			<td style="width:139px;">103720</td>
			<td style="width:604px;">For best results, BLM should be suspended in PBS, aliquoted, and stored as single use lyophilzed aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Blunt End Forceps</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:139px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tongue Depressor (i.e. bent Valleylab Blade Electrode, 2.4&#34;)&#160;</td>
			<td style="width:304px;">Covidien</td>
			<td>E1551G</td>
			<td>Before use, create a 45 degree bend 1.5 cm&#160; from the blade tip. A suitable depressor can also be created from any metal implement of similar dimensions.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Exel Safelet Catheter 22G X 1&#34;</td>
			<td style="width:304px;">Exel International</td>
			<td>26746</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 mL Slip-tip Disposable Tuberculin Syringe (200/sp, 1600/ca)</td>
			<td style="width:304px;">BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.2ml Pipettor and Filter Tips</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:139px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:481px;">Fiber-Lite Illuminator. Model 181-1: Model 180 mated with Standard Dual Gooseneck illuminator</td>
			<td style="width:304px;">Dolan Jenner Industries, Inc.</td>
			<td style="width:139px;">181-1</td>
			<td>Lower output LED illuminators are not recommended as they fail to suficiently illuminate the trachea.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Intubation Board</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:139px;">N/A</td>
			<td>See Diagram 1.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Colored Label Tape: 0.5&#160;in. Wide</td>
			<td style="width:304px;">Fisherbrand</td>
			<td>15-901-15A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oxygen&#160;</td>
			<td style="width:304px;">N/A</td>
			<td style="width:139px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate-Buffered Saline, 1X</td>
			<td style="width:304px;">Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td>Product should be sterile</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Non-Sterile Silk Black Braided Suture Spool, 91.4 m, Size 4-0</td>
			<td style="width:304px;">Harvard Apparatus</td>
			<td>517698</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Table Top Anesthesia Machine Isoflurane</td>
			<td style="width:304px;">Highland Medical Equipment</td>
			<td>N/A</td>
			<td>http://www.highlandmedical.net/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Slide Top Induction Mouse Isoflurane Chamber</td>
			<td>MIP / Anesthesia Technologies</td>
			<td>AS-01-0530-SM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FORANE (isoflurane, USP) Liquid For Inhalation 100 mL&#160;</td>
			<td style="width:304px;">Baxter</td>
			<td>1001936040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;Nanozoomer Digital Pathology system</td>
			<td style="width:304px;">Hamamatsu</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IgM ELISA Quantification Kit&#160;</td>
			<td style="width:304px;">Bethyl Laboratories</td>
			<td style="width:139px;">E90-101</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an improved method for rapid intubation of the trachea in mice

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity is a commonly used model to study both acute lung injury and fibrosis, and multiple methods have been developed for administering bleomycin (and other toxic agents) into the lungs. However, many of these approaches, such as transtracheal instillation, have inherent drawbacks, including the need for strong anesthetics and survival surgery. This paper reports a quick, reproducible method of intratracheal intubation that involves mild inhaled anesthesia, visualization of the trachea, and the use of a surrogate spirometer to confirm exposure. As a proof of concept, 8-12 week old C57BL/6 mice were administered either 2.0 U/kg of bleomycin or an equivalent volume of PBS, and both damage and fibrotic endpoints were measured post-exposure. This procedure allows researchers to treat a large cohort of mice in a relatively short period with little expense and minimal post-procedure care.

삽관 마우스는 체중 감소와 고통에 대해 매일 모니터링, 2.5 % 2,2,2- tribromoethanol의 복강 내 주사를 통해 4, 10 또는 제 17 일 후에 희생되었다. 기관지 폐포 세척액 (BAL)는 PBS 세 세척에 수집 된 21 곳 바와 같이 , 오른쪽 폐는 10 % 포르말린에 고정 된 파라핀, 워싱턴 조직학 및 이미징 코어 (22)의 대학에 의해 메이슨의 트리 크롬 염색 하였다. <p cla...

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An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

마우스의기도 신속 삽관 용 개선 된 방법

이 문서에서는 삽관을 통해 마우스 기관에 직접 블레오 마이신 관리를위한 신속하고 간단한 방법을 제공합니다. 이러한 방법의 주요 장점은 마스터 높은 재현성 쉽고, 특수 장비 나 긴 회복 시간을 요구하지 않는다는 점이다.

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Guidelines for Elective Pediatric Fiberoptic Intubation

선택 소아 Fiberoptic 삽관법에 대한 지침

Fiberoptic intubation in pediatric patients is often required especially in difficult airways of syndromic patients i.e. Pierre Robin Syndrome. Small ...

연구

의학

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

혈관 질병의 연구에 대한 마우스의 Orthotopic 대동맥 이식

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

Endotracheal Intubation in Mice via Direct Laryngoscopy Using an Otoscope

Endotracheal Intubation in Mice via Direct Laryngoscopy Using an Otoscope

마우스의 기관 내 삽관<em&gt;를 통해</em이경 사용&gt; 직접 후두경

Mice, both wildtype and transgenic, are the principal mammalian model in biomedical research currently. Intubation and mechanical ventilation are ...

A Simple Method of Mouse Lung Intubation

마우스 폐 삽관 법의 간단한 방법

A  simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would  have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or  ...

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

생체 외에서 혈액-뇌 장벽 돼지 뇌 내 피 세포를 기반으로 하는 모델의 설립에 대 한 방법 개선

The aim of this protocol presents an optimized procedure for the purification and cultivation of pBECs and to establish in vitro blood-brain barrier (BBB) ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

쥐에서 혈액 샘플 컬렉션의 대체 방법으로 빵 꾸 하 정 맥

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

A Revised Method for Inducing Secondary Lymphedema in the Hindlimb of Mice

마우스의 힌들보에서 보조 림프부종을 유도하기위한 개정 된 방법

Animal models are of paramount importance in the research of lymphedema in order to understand the pathophysiology of the disease but also to explore ...

Repeated Orotracheal Intubation in Mice

마우스에서 반복된 Orotracheal 삽관

The literature describes several methods for mouse intubation that either require visualization of the glottis through the oral cavity or incision in the ...

Semi-Minimal Invasive Method to Induce Myocardial Infarction in Rats and the Assessment of Cardiac Function by an Isolated Working Heart System

쥐의 심근 경색과 격리 된 작업 심장 시스템에 의한 심장 기능 평가를 유도하는 반 최소 침습 적 방법

Myocardial infarction (MI) remains the main contributor to morbidity and mortality worldwide. Therefore, research on this topic is mandatory. An easily ...

Blind Endotracheal Intubation in Neonatal Rabbits

신생아 토끼의 맹인 내트라큐어 삽관

The newborn rabbit is a useful animal model for various pathologies and procedures. Airway management of the rabbit is complex due to its anatomical ...