Name: multi-exon skipping using cocktail antisense oligonucleotides in the canine x-linked muscular dystrophy
Uploaded: 2016-05-24T13:00:00
Duration: 10 min 30 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multi-exon Skipping Using Cocktail Antisense Oligonucleotides in the Canine X-linked Muscular Dystrophy at JoVE.com

This work was supported by The University of Alberta Faculty of Medicine and Dentistry, The Friends of Garrett Cumming Research Chair Fund, HM Toupin Neurological Science Research Chair Fund, Muscular Dystrophy Canada, Canada Foundation for Innovation (CFI), Alberta Advanced Education and Technology (AET), Canadian Institutes of Health Research (CIHR), Jesse's Journey - The Foundation for Gene and Cell Therapy, and the Women and Children's Health Research Institute (WCHRI).

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एक्सॉन लंघन डीएमडी के उपचार के लिए एक आशाजनक चिकित्सीय तकनीक है। दोनों इन विट्रो और इन विवो प्रयोगों में पता चला है कि बहु-एक्सॉन लंघन संभव है। इधर, CXMD कुत्ते मॉडल के उपयोग पर चर्चा की है। 8. 2&#39;OMePS AON रसायन विज्ञान CXMD myoblast अभिकर्मक और morpholino AON रीढ़ रसायन शास्त्र में विवो प्रयोगों के लिए चुना गया था के लिए इस्तेमाल किया गया था - सबसे पहले, AONs dystrophin एक्सॉनों 6 निशाना बनाने के लिए बचाव-ese और ESEfinder कार्यक्रमों का उपयोग कर बनाया गया था। vPMOs असंशोधित PMOS से अधिक कुशल हैं, लेकिन उनके उच्च विषाक्तता के कारण वे प्रणालीगत इंजेक्शन के लिए उपयुक्त नहीं हैं। शाही सेना निष्कर्षण, आरटी पीसीआर, और सीडीएनए अनुक्रमण CXMD myoblasts पर प्रदर्शन किया गया। पीएमओ कॉकटेल के साथ इंजेक्शन कुत्तों नैदानिक ​​नैदानिक ​​लक्षणों में कोई सुधार का आकलन करने के लिए वर्गीकृत किया गया। बाद कुत्तों नम्रता euthanized थे, मांसपेशियों के नमूने ले लिया है और क्रायो सेक्शनिंग के लिए तैयार थे। dystrophin प्रोटीन का आधा जीवन एक से प्रेरित2 महीने - ons लगभग 1 माना जा रहा है। युवा वयस्क कुत्तों, इस अध्ययन में इस्तेमाल किया, हालांकि इन प्रयोगों नवजात कुत्तों और बड़े कुत्तों (&gt; 5 वर्ष) के साथ किया जा सकता है किया गया। तैयार पेशी वर्गों ऊतकविकृतिविज्ञानी मूल्यांकन और पश्चिमी सोख्ता और immunohistochemistry 48 के माध्यम से dystrophin प्रोटीन बचाव का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया गया। यह सुनिश्चित करना है कि पीएमओ समाधान की मात्रा में इंजेक्शन से पहले सही है महत्वपूर्ण है; ऐसा करने में नाकाम रहने के परिणाम पर महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ेगा। इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन के दौरान पर्याप्त दबाव मांसपेशी फाइबर में प्रवेश करने के लिए आवश्यक है। कुत्ते के स्वास्थ्य और सर्जरी साइट के निरीक्षण की निगरानी समस्या निवारण के लिए महत्वपूर्ण हैं। पशुओं के स्वास्थ्य की निगरानी करने के लिए, साप्ताहिक रक्त परीक्षण और वजन किया जाना चाहिए। जानवर और मांसपेशियों के नमूनों की तैयारी की euthanization के बाद, dystrophin प्रोटीन का पता लगाने में संवेदनशीलता सुनिश्चित करने के लिए एक महत्वपूर्ण कदम दोनों Tris- एसीटेट जेल और अर्द्ध शुष्क सोख्ता विधि का उपयोग करने के लिए हैपश्चिमी सोख्ता प्रक्रिया के दौरान। जैसा प्रतिनिधि परिणामों में दिखाया गया है, myoblasts Ex6A, Ex6B, Ex8A, और कॉकटेल (Ex6A, Ex6B, Ex8A युक्त, और Ex8B) में फ्रेम डीएमडी उत्पादों का उत्पादन के साथ इलाज किया। चूंकि Ex8B कोई एक्सॉन-छोड़ उत्पादों का उत्पादन किया है, यह विवो प्रयोगों में बाद में इस्तेमाल नहीं किया गया था। 9 लंघन हुई और Dys-2 धुंधला के साथ immunocytochemistry इलाज के नमूने में dystrophin अभिव्यक्ति बहाल दिखाया - सीडीएनए अनुक्रमण कि एक्सॉनों 6 दिखाया। AON इलाज कुत्तों dystrophin पॉजिटिव तंतुओं में एक महत्वपूर्ण वृद्धि देखी गई। यह इंगित करता है कि एक्सॉनों 6 - 8 छोड़ जा रहे थे और एक छोटा प्रोटीन का उत्पादन किया गया था। dystrophin पॉजिटिव फाइबर की मात्रा में वृद्धि हुई जब AONs का कॉकटेल इस्तेमाल किया गया था और AON खुराक के लिए आनुपातिक था। Immunoblots प्रणालीगत morpholino इलाज कुत्तों में dystrophin अभिव्यक्ति वृद्धि हुई दिखाया। कंकाल की मांसपेशी dystrophin फाइबर के चर स्तर पर था; हालांकि, morpholino इलाज हृदय के ऊतकों थोड़ा दिखायाdystrophin अभिव्यक्ति में सुधार। चूंकि dystrophin एक उच्च आणविक भार (427 केडीए) है, dystrophin की कम मात्रा का पता लगाने के लिए मुश्किल हो सकता है। सर्वोत्तम परिणामों के लिए, Tris-एसीटेट जेल और अर्द्ध शुष्क हस्तांतरण विधि का इस्तेमाल किया गया था। महामहिम morpholino इलाज कुत्तों में सुधार हुआ है ऊतकविकृतिविज्ञानी दिखाया धुंधला हो जाना। केंद्र nucleated फाइबर (CNFs) अस्वस्थ मांसपेशियों का संकेत कर रहे हैं और मांसपेशियों के अध: पतन और उत्थान के चक्र का प्रतिनिधित्व करते हैं। Morpholino इलाज CXMD कुत्तों गैर इलाज CXMD कुत्तों की तुलना में CNFs के प्रतिशत में कमी देखी गई। नैदानिक ​​ग्रेडिंग बढ़ घूमना और चल क्षमता, morpholino इलाज जानवरों के रूप में लक्षण, में सुधार का पता चला। मांसपेशियों की कठोरता पेशी शोष, इस प्रकार, यह ग्रेडिंग स्कीम 59 में शामिल किया गया था प्रतिबिंबित करने के लिए माना जाता है। जांघ (हिंद अंग) मांसपेशियों की कठोरता मूल्यांकन किया गया था; हालांकि, हम कपाल Sartorius मांसपेशियों को बाहर रखा गया है, क्योंकि वे CXMD में शोष अतिवृद्धि के बजाय प्रदर्शन करने के लिए करते हैं। इलाज किया कुत्तों दिखानेकम ग्रेडिंग स्कोर एड और 15 मीटर चल परीक्षण पर तेजी से बार किया था। 15 मीटर परीक्षण पर सुधार बार सुधार मांसपेशी समारोह 40 के संकेत हैं। उच्च कुल स्कोर ग्रेडिंग गरीबों के स्वास्थ्य और वृद्धि की मांसपेशी शोष संकेत मिलता है। जबकि इन परिणामों वादा कर रहे हैं, बहु एक्सॉन लंघन अभी भी कई चुनौतियों है कि इससे पहले कि तकनीक नैदानिक ​​प्रयोज्यता को दूर करने की आवश्यकता होगी प्रस्तुत करता है। हृदय के ऊतकों अभी भी हृदय और कंकाल ऊतक के बीच सेलुलर तस्करी में अंतर के कारण AONs, संभावना के कम तेज प्रदर्शित करता है। कोई विषाक्त प्रभाव वर्तमान खुराक परहेजों के तहत पशुओं में मनाया गया है; हालाँकि, और अधिक काम करने से पहले AON कॉकटेल के उपयोग के क्लिनिकल परीक्षण करने के लिए स्थानांतरित कर सकते हैं लंबे समय तक विषाक्तता का आकलन करने के लिए किया जाना चाहिए। ऐसा नहीं है क्योंकि नियामक एजेंसियों के लिए एक अनूठा दवा के रूप में प्रत्येक AON अनुक्रम को परिभाषित AON कॉकटेल दवाओं के लिए मंजूरी हासिल करने के लिए मुश्किल है। इसका मतलब यह है कि एक कॉकटेल में प्रत्येक दृश्य को व्यक्तिगत रूप से safet के लिए परीक्षण किया जा करने की आवश्यकता होगीवाई, और अधिक समय और अधिक पैसे की जरूरत पड़ेगी। एक नैदानिक ​​सेटिंग में बहु-एक्सॉन लंघन के उपयोग के लिए एक और बाधा मध्यवर्ती प्रोटीन अज्ञात कार्यों के साथ उत्पादित उत्पादों की एक बड़ी राशि है। ये प्रोटीन संभावित, अप्रत्याशित दुष्प्रभाव पैदा कर सकते हैं अलग-अलग उत्परिवर्तन 22 के आधार पर। इसके अतिरिक्त, उत्परिवर्तन वर्तमान dystrophic कुत्ते मॉडल के भीतर उपलब्ध पैटर्न सीमित हैं। वहाँ कुछ प्राकृतिक रूप से पाए म्यूटेशन हैं, और सभी म्यूटेशन बहु एक्सॉन लंघन के अध्ययन के लिए उपयोगी होते हैं। Dystrophic सुअर मॉडल भविष्य डीएमडी एक्सॉन लंघन अध्ययनों से 33, 34 के लिए एक अच्छा विकल्प हो वादा किया है। डीएमडी कुत्ते मॉडल अन्य मॉडलों डीएमडी पर कुछ फायदे हैं। एक बड़ा पशु मॉडल, नैदानिक ​​ग्रेडिंग होने के नाते और एमआरआई और अधिक विस्तृत विश्लेषण के लिए अनुमति देने के लिए संभव हो रहे हैं। कुत्तों के बाद से बड़े जानवर हैं वे भी विष विज्ञान के अध्ययन के लिए अधिक अनुकूल हैं और अधिक बारीकी से माउस मॉडल की तुलना में मानव रोग प्रतिनिधित्व करते हैं। कुत्ता मीटरodels भी डीएमडी जीन दृश्यों कि अधिक मनुष्यों 23, 34, 45 के लिए समान हैं। हालांकि तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण, बहु एक्सॉन लंघन दृष्टिकोण अंततः डीएमडी रोगियों की 24&gt; 90% फायदा हो सकता है। यह यह एकल एक्सॉन लंघन करने के लिए एक बेहतर विकल्प बनाता है, के रूप में एकल एक्सॉन लंघन केवल रोगियों के एक छोटे सबसेट के लिए लागू है। इसके अलावा, मल्टी-एक्सॉन लंघन विलोपन पैटर्न है कि छोटा dystrophin प्रोटीन की कार्यक्षमता का अनुकूलन का चयन करने के लिए सक्षम हो जाएगा। उदाहरण के लिए, डीएमडी का विलोपन एक्सॉनों 45 - 55 असाधारण हल्के लक्षण या स्पर्शोन्मुख व्यक्तियों 14,19,60-63 के साथ जुड़ा हुआ है। एक्सॉनों 45 के बहु-एक्सॉन लंघन - 55 पहले से ही एक एक्सॉन 52 विलोपन (mdx52) vPMOs 22,26 के प्रणालीगत इंजेक्शन के प्रयोग के साथ डीएमडी के एक माउस मॉडल में प्रदर्शन किया गया है। कॉकटेल vPMOs का उपयोग भी पेशी dystrophy के अन्य रूपों, ऐसे में प्रदर्शन किया गया हैफुकुयामा जन्मजात पेशी dystrophy (FCMD) के रूप में। FCMD एक्सॉन फँसाने, जिसमें न्यायपालिका mRNA splicing retrotransposon प्रविष्टि के कारण होता है के कारण होता है। vPMOs दोनों एक FCMD माउस मॉडल में और मानव कोशिका लाइनों 64 में splicing के पैटर्न को बचाने के लिए दिखाया गया है। अगली पीढ़ी के AON उच्च प्रभावकारिता और कम विषाक्तता का प्रदर्शन करते chemistries नैदानिक ​​आवेदन में बहु-एक्सॉन लंघन दृष्टिकोण के प्रभावी अनुवाद की सुविधा होगी। इसके अतिरिक्त, बहु-एक्सॉन लंघन संभवतः ऐसे dysferlinopathies 24, 65 के रूप में अन्य आनुवांशिक विकार, को लागू किया जा सकता है।

Duchenne पेशी dystrophy (डीएमडी) एक एक्स-लिंक्ड हटने पेशी प्रगतिशील मांसपेशियों में कमजोरी की विशेषता रोग, पहले डॉ Guillaume-बेंजामिन-Amand Duchenne (डी Boulogne) 1 द्वारा वर्णित है। डीएमडी एक आम आनुवंशिक बारे में 1 3,500 में लड़कों को प्रभावित कर दुनिया भर में, लगभग 20,000 प्रभावित प्रत्येक साल 2,3 पैदा हुए बच्चों के साथ बीमारी है। मोटर विकास देरी हो रही है और चाल गड़बड़ी बचपन 4 में देखा जाता है, जल्दी किशोर के बारे में व्हीलचेयर पर निर्भरता द्वारा पीछा किया। मौत को आम तौर पर सांस या हृदय की विफलता 5-8 के कारण 20 और 30 की उम्र के बीच होता है। वर्तमान में डीएमडी के लिए कोई इलाज नहीं है। Glucocorticoids के साथ उपचार कुछ हद तक मांसपेशी अध: पतन की प्रगति को धीमा कर सकते हैं लेकिन मोटापे और मधुमेह हो सकता 2,7,8 सहित महत्वपूर्ण दुष्प्रभाव, के साथ जुड़ा हुआ है। डीएमडी dystrophin (डीएमडी) जीन में उत्परिवर्तन का परिणाम है, कार्यात्मक dystrophin protei का एक नुकसान के लिए अग्रणीएन। डीएमडी 2 लाख से अधिक आधार जोड़े और 79 एक्सॉनों 9,10 के साथ एक बहुत बड़ी जीन है। विलोपन, बकवास है, और दोहराव म्यूटेशन के बाहर के फ्रेम म्यूटेशन के लिए अग्रणी डीएमडी phenotype का सबसे आम कारण हैं। 9 और एक्सॉनों 45 - - एक्सॉनों 3 के क्षेत्रों 55 &quot;उत्परिवर्तन के आकर्षण के केंद्र &#39;कहा जाता है के रूप में सबसे अधिक रोगियों जीन के इन भागों के भीतर विलोपन म्यूटेशन है, डीएमडी रोगियों 3,9,11-16 में गैर कार्यात्मक dystrophin के लिए अग्रणी। dystrophin-ग्लाइकोप्रोटीन जटिल (क्लब), जो मांसपेशियों की झिल्ली स्थिरीकरण में एक प्रमुख भूमिका है के भीतर dystrophin कार्य करता है। जबकि केंद्रीय रॉड डोमेन एक कम महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है 3,9,17 एन और सी-Termini, समारोह के लिए सबसे महत्वपूर्ण डोमेन हैं। एक हल्के बेकर पेशी dystrophy (बीएमडी), जो ज्यादातर डीएमडी जीन के भीतर में फ्रेम म्यूटेशन से परिणामों के साथ जुड़े phenotype के पालन, एक्सॉन डीएमडी के इलाज के लिए लंघन के आवेदन को प्रेरित किया। बीएमडी रोगियों को एक छोटा कर दिया है, लेकिन कार्यात्मकएल, dystrophin प्रोटीन है कि दोनों Termini 3,6,18 बनाए रखता है। एक्सॉन लंघन, सिद्धांत में, पढ़ने फ्रेम बहाल कर सकते हैं, छोटा है लेकिन कार्यात्मक dystrophin बीएमडी 3,19 में देखा उन लोगों के लिए इसी तरह के प्रोटीन में जिसके परिणामस्वरूप। antisense oligonucleotides (AONs) के कई प्रकार 2&#39;O-methylated phosphorothioates (2&#39;OMePS) और phosphorodiamidate morpholino oligomers (PMOS) सहित क्लिनिकल परीक्षण में परीक्षण किया गया है। लंघन एक्सॉनों 51 और 53 इन AONs का उपयोग कर जांच की गई है और जब तक परिणाम आशाजनक हैं, एकल एक्सॉन लंघन प्रयोज्यता सीमित है, के रूप में यह उत्परिवर्तन विशेष 3, 19, 20,21, 22-26 है। सवाल यह भी एकल एक्सॉन लंघन 22,23 से उत्पादित जिसके परिणामस्वरूप छोटा dystrophin प्रोटीन की स्थिरता के बारे में रहते हैं। साथ ही, कुछ रोगियों की आवश्यकता होती है एक भी एक्सॉन की तुलना में अधिक आदेश पढ़ने फ्रेम 3 बहाल करने के लिए छोड़ दिया जाना चाहिए। जबकि तकनीकी रूप से अधिक कठिन है, बहु-एक्सॉन लंघन एक तरीका है किइन समस्याओं के समाधान के 3,19 सकता है। मल्टी एक्सॉन लंघन पहले dystrophic कुत्ते और इन विट्रो में मानव कोशिका लाइनों में प्रदर्शन किया गया है। इसके अतिरिक्त, mdx52 माउस और कुत्ते एक्स से जुड़े पेशी dystrophy (CXMD) कुत्ता मॉडल में विवो के लिए इस्तेमाल किया गया है अध्ययन 22, 24-27। कुत्ते एक्स से जुड़े पेशी dystrophy जापान (CXMD जे) बीगल यहां इस्तेमाल किया गया था, के रूप में CXMD जम्मू के पढ़ने फ्रेम एक्सॉनों 6 और 8, या अतिरिक्त एक्सॉनों (जैसे, एक्सॉनों 3 - 9) के बहु-एक्सॉन लंघन द्वारा बहाल किया जा सकता है (चित्रा 1)। बीगल आधारित CXMD गोल्डन कुत्ता पेशी dystrophy (GRMD) मॉडल के रूप में एक ही पैटर्न उत्परिवर्तन के शेयरों, लेकिन बीगल इस प्रकार डीएमडी 28,29 के लिए एक उपयोगी मॉडल उपलब्ध कराने के लिए अपने शरीर को आकार की वजह से छोटे और सस्ता बनाए रखने के लिए कर रहे हैं। CXMD कुत्तों और अधिक बारीकी से, छोटे पशु मॉडलों की तुलना में मानव डीएमडी phenotype नकल कृंतक की तरह है, और विषाक्तता आकलन 3,22,30,31 के लिए और अधिक विश्वसनीय हैं </sअप&gt; (चित्रा 2)। CXMD कुत्तों प्रगतिशील मांसपेशी क्षय, चाल गड़बड़ी, और हृदय और सांस की समस्याओं डीएमडी में देखा उन लोगों के लिए समान प्रदर्शित करते हैं। एकल एक्सॉन लंघन के साथ तुलना में, बहु-एक्सॉन लंघन रोगियों के लिए एक बहुत बड़ा अनुपात के लिए लागू है। तीन सबसे आम प्रकार उत्परिवर्तन (विलोपन, बकवास है, और दोहराव) के बीच, 80 - रोगियों के 98% बहु एक्सॉन लंघन 14,32,33 के माध्यम से, जबकि सभी डीएमडी रोगियों के 45% फायदा हो सकता है विशेष रूप से लंघन एक्सॉनों 45 से इलाज किया जा सकता - 55 3,19,22,34। संशोधित morpholinos के विकास के साथ, एक्सॉन लंघन को सुविधाजनक बनाने पर AON कॉकटेल की दक्षता में सुधार हुआ है। Arginine अमीर सेल मर्मज्ञ पेप्टाइड संयुग्मित PMOS (PPMOs), और इन विवो-morpholinos (vPMOs) AON chemistries उल्लेखनीय है कि सेल मर्मज्ञ क्षमता और स्थिरता में सुधार हुआ है 3,35-38 हैं। चिंताएं लंबे समय तक AON विषाक्तता के बारे में रहते हैं; हालांकि, महत्वपूर्ण प्रगतितैयार किया गया है। रासायनिक संशोधनों morpholinos के लिए किए गए बहुत बंद लक्ष्य प्रभाव कम होती है और पूर्व नैदानिक ​​अध्ययन कोई महत्वपूर्ण विषाक्त प्रभाव 3,22,39,40 की सूचना है। बहु-एक्सॉन लंघन के लिए एक शेष चुनौती प्रत्येक एकल AON के लिए वर्तमान की आवश्यकता है, एक ही दवा के रूप में अकेले विषाक्तता के लिए परीक्षण किया जा सकता है, बजाय एक साथ एक कॉकटेल 3,19,22,41,42 के रूप में है। दोनों एकल और बहु-एक्सॉन को शामिल करने का लक्ष्य दिल लंघन डीएमडी अध्ययन में, वहाँ dystrophic हृदय के ऊतकों में थोड़ा सुधार हुआ है। दिल में morpholinos की प्रभावकारिता क्योंकि गरीब सेल मर्मज्ञ क्षमता के कम होने लगा है। पेप्टाइड संयुग्मित PPMOs AONs हृदय कोशिकाओं घुसना करने की क्षमता में सुधार हुआ है, दिल 3,19,38 में बचाया कार्यात्मक dystrophin प्रोटीन की मात्रा बढ़ रही है। इधर, हमारे AON कॉकटेल दृष्टिकोण विस्तार से चर्चा की है, ESEfinder सॉफ्टवेयर का उपयोग कर 43 AON दृश्यों का डिजाइन भी शामिल है। Protocबहु-एक्सॉन लंघन के साथ कुत्ते के प्रयोगों के लिए OLS भी वर्णित हैं। CXMD जम्मू बीगल एक्सॉनों 6 और 8 लंघन प्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया गया। मल्टी एक्सॉन CXMD कुत्ते मॉडल में लंघन आशाजनक परिणाम से पता चलता है, लेकिन चुनौतियां भी हैं इससे पहले कि वे चिकित्सकीय लागू कर रहे हैं कि जरूरत को दूर किया जा सके।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="2">2&#39;OMePS Transfection of Dog Myoblasts&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3ml 6 welled plates</td>
			<td>IWAKI</td>
			<td>5816-006&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal bovine serum (FBS)&#160;</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30071.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Penicillin&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>P4333&#160;</td>
			<td>&#160;200 U/mL&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectin&#160;</td>
			<td>Invitrogen&#160;</td>
			<td>18292-011</td>
			<td>Total volume of 100 mL in opti-MEM media at a ratio of 2:1 for lipofectin.&#160; 
			10 mL lipofectin for 5 mg RNA.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2&#8217;OMePS</td>
			<td>Eurogentec&#160;</td>
			<td></td>
			<td>&#160;Ex6A (GUU GAUUGUCGGACCCAGCUCAGG), Ex6B (ACCUAUGA CUGUGGAUGAGAGCGUU), and Ex8A (CUUCCUGG AUGGCUUCAAUGCUCAC).&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse Serum&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16050-114</td>
			<td>2%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>streptomycin&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4333&#160;</td>
			<td>200 ug/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9418&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2">Morpholino transfection of dog myoblasts&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">All material from MePS Transfection of Dog Myoblasts&#160; for culturing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antisense morpholinos&#160;</td>
			<td>Gene-tools</td>
			<td></td>
			<td>
			Ex6A(GTTGATTGTCGGACCCAGC 
			TCAGG), 
			Ex6B(ACCTATGACTGTGGATGAG 
			AGCGTT),&#160; 
			Ex8A(CTTCCTGGATGGCTTCAAT 
			GCTCAC)&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 
			Dilute to a final volume of 100L in opti-MEM media.&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 
			120&#8211;200 mg/kg of morpholinos at 32 mg/mL in saline
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endo-Porter</td>
			<td>Gene-tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596-018</td>
			<td>1mL/plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">RNA Extraction and Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (RT-PCR)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596-018</td>
			<td>1mL/plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3803</td>
			<td>200 uL&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 ml Tubes&#160;</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22363204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifudge&#160;</td>
			<td colspan="2">Beckman-Coulter</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Ethanol&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34852</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV Spectrometer&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forward primer in exon 5&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td>CTGACTCTTGGTTTGATTTGGA&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 
			1.5 mL 10 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reverse primer in exon 10&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td>TGCTTCGGTCTCTGTCAATG&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 
			1.5 L 10 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dNTPS</td>
			<td>Clontech</td>
			<td>3040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One-Step RT-PCR kit&#160;</td>
			<td>Qiagen&#160;</td>
			<td>210210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo-cycler</td>
			<td>Scinco</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2">Complementary DNA (cDNA) Sequencing&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel extraction kit&#160;</td>
			<td>Qiagen&#160;</td>
			<td>28704</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifudge&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit&#160;</td>
			<td>Applied Biosystems&#160;</td>
			<td>4337454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="3">&#160;Intramuscular injections or open muscle biopsy</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Scissors, Scapal, needle, surgical thread&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vet Ointment&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophors&#160;</td>
			<td>webtextiles</td>
			<td>12190-71-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chlorohexidine</td>
			<td>Peridex</td>
			<td>12134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drapes&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Srubs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Facial Mask&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Gloves&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Head Covering&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiopental sodium&#160;</td>
			<td>Mitsubishi Tanabe Pharma&#160;</td>
			<td></td>
			<td>20 mg/kg&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Abbott laboratories&#160;</td>
			<td>05260-05</td>
			<td>2-3%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antisense morpholinos&#160;</td>
			<td>Gene-tools</td>
			<td></td>
			<td>Ex6A(GTTGATTGTCGGACCCAGC 
			TCAGG), 
			Ex6B(ACCTATGACTGTGGATGAG 
			AGCGTT),&#160; 
			Ex8A(CTTCCTGGATGGCTTCAAT 
			GCTCAC)&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 
			Dilute to a final volume of 100 L in opti-MEM media.&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 
			120&#8211;200 mg/kg of morpholinos at 32 mg/mL in saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27G Needles&#160;</td>
			<td>TERUMO&#160;</td>
			<td>SG3-2325&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL syringe&#160;</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SG2-03L2225&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>buprenorphine hydrochloride</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tougne Depressor&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cephalexin</td>
			<td></td>
			<td>15 to 30 mg/kg&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cefazolin</td>
			<td></td>
			<td>15 to 30 mg/kg&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>buprenorphine&#160;</td>
			<td></td>
			<td>0.01 mg/kg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2">&#160;buprenorphine hydrochloride&#160;</td>
			<td>0.02 mg/kg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Systemic Injections</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe infusion pump&#160;</td>
			<td>Muromachi&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22G Indwelling needles</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SG3-2225&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27G Needles&#160;</td>
			<td>TERUMO&#160;</td>
			<td>SG3-2325&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL syringe&#160;</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SG2-03L2225&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Ohtsuka-Pharmaceutical</td>
			<td>28372</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clinical Grading of Dogs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Video Camera&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stop watch&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic resonance imaging (MRI)&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 Tesla MRI l&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 cm diameter/18 cm length human extremity coi</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="3">Muscle sampling and preparation (necropsy)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiopental sodium&#160;</td>
			<td>Mitsubishi Tanabe Pharma&#160;</td>
			<td></td>
			<td>20 mg/kg&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Abbott laboratories&#160;</td>
			<td>05260-05</td>
			<td>2-3%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tragacanth gum</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10-20 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liqoud Nitrogrn&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cork Discs</td>
			<td>Iwai-kagaku&#160;</td>
			<td>101412-806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry Ice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-l-lysine&#8211;coated slides&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-037-216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat Microsystem&#160;</td>
			<td>Leica&#160;</td>
			<td></td>
			<td>cm1900&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immunohistochemistry&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DYS1&#160;</td>
			<td>Novocastra&#160;</td>
			<td>NCL-DYS1&#160;</td>
			<td>1:150 dilutions&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DYS2</td>
			<td>Novocastra&#160;</td>
			<td>NCL-DYS2&#160;</td>
			<td>1:150 dilutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 594 goat antimouse IgG1&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21125</td>
			<td>1:2,500 dilutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 594 goat antimouse IgG2&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11005</td>
			<td>1:2,500 dilutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D1306</td>
			<td>Contans mounting agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Serum&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10000C</td>
			<td>15%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moisture chamber&#160;</td>
			<td>Scientific Devise Laboratory&#160;</td>
			<td>197-BL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamber slide&#160;</td>
			<td>Lab-tek&#160;</td>
			<td>154453</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Glasses&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>12-540A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophobic barrier pen&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flpurescent microcope&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>594 nm at 20X magnification.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Western Blotting&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distillied Water&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hand Homogenizer&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2&#215; Laemmli SDS-loading buffer&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>0.1 M Tris&#8211;HCl (pH 6.6), 2% (w/v) SDS, 2% (0.28 M) beta-mercaptoethanol, 20% glycerol, 0.01% bromophenol blue&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS gels&#160;</td>
			<td>Bio-Rad&#160;</td>
			<td>161-1210</td>
			<td>5% resolving</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS gels</td>
			<td>Invitrogen&#160;</td>
			<td>Invitrogen, WG1601BOX</td>
			<td>3-8%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVDF membrane&#160;</td>
			<td>GE</td>
			<td>10600021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer buffer (10&#215;)&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>250 mM of Tris-Base, 1,920 mM of Glycine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer buffer (1&#215;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10% 10&#215; buffer, 20% methanol&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.05% PBS/Tween 20 (PBST)&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2,000 mL&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 
			3&#215; 200 mL for washing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBST/5% milk powder&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein Assay Kit</td>
			<td>BCA</td>
			<td>T9650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20&#160;</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>P5927</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urea</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>U5378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beta Mercaptoethanol&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>ES-007-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L3771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-Acetate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris HCL</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T3253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8773</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loading/sample buffer for Western blotting</td>
			<td>NuPage Invitrogen</td>
			<td>NP007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMSF</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease cocktail inhibitor&#160;</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11836153001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cathode Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>.025 M Tris base + 40 mM 6-aminocaproic acid + 20% Methanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anode Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>0.03 M Tris Base + 20% Methanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Concentred Anode Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>0.3 M Tris base + 20 % Methanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>desmin antibody&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab8592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DYS1&#160;</td>
			<td>Novocastra&#160;</td>
			<td>NCL-DYS1&#160;</td>
			<td>1:150 dilutions&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

multi-exon skipping using cocktail antisense oligonucleotides in the canine x-linked muscular dystrophy

Duchenne पेशी dystrophy (डीएमडी) सबसे आम घातक आनुवांशिक रोगों दुनिया भर में, dystrophin (डीएमडी) जीन में उत्परिवर्तन के कारण होता में से एक है। एक्सॉन लंघन कम डीएनए / आरएनए-तरह के अणुओं antisense oligonucleotides (AONs) कहा जाता है कि पढ़ने के फ्रेम को बहाल करने और छोटी लेकिन कार्यात्मक प्रोटीन का उत्पादन कार्यरत हैं। सीमित प्रयोज्यता (रोगियों के लिए एक एकल AON दवा के साथ इलाज किया जा सकता का केवल 13% अप करने के लिए), और छोटा प्रोटीन का अनिश्चित समारोह: हालांकि, एक्सॉन लंघन चिकित्सा दो प्रमुख बाधाओं का सामना। इन मुद्दों को एक कॉकटेल AON दृष्टिकोण के साथ संबोधित कर रहे थे। डीएमडी रोगियों के लगभग 70% एकल एक्सॉन लंघन द्वारा इलाज किया जा सकता है (सभी संयुक्त एक्सॉनों), एक संभावित डीएमडी रोगियों के 90% से अधिक का इलाज कर सकता है, तो कई कॉकटेल antisense दवाओं का उपयोग लंघन एक्सॉन महसूस किया जा सकता है। कुत्ते एक्स से जुड़े पेशी dystrophy (CXMD) कुत्ता मॉडल, जिसका phenotype अधिक मानव डीएमडी रोगियों के समान है, प्रणालीगत effic परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया गया थाacy और एक्सॉनों 6 और 8. CXMD कुत्ते मॉडल की बहु एक्सॉन लंघन की सुरक्षा Intron 6 में एक ब्याह साइट उत्परिवर्तन बंदरगाहों, dystrophin mRNA में एक्सॉन 7 की कमी के लिए अग्रणी। CXMD में पढ़ने फ्रेम बहाल करने के लिए एक्सॉनों 6 और 8 के बहु-एक्सॉन लंघन की आवश्यकता है, इसलिए, CXMD प्रभावकारिता और बहु-एक्सॉन लंघन की सुरक्षा के परीक्षण के लिए एक अच्छा मध्यम आकार के पशु मॉडल है। वर्तमान अध्ययन में, लक्षित कर एक्सॉन 6 और एक्सॉन 8 antisense morpholinos के एक कॉकटेल तैयार किया गया था और यह शरीर चौड़ा कंकाल की मांसपेशियों में dystrophin अभिव्यक्ति बहाल। कॉकटेल ओलिगोस के अभिकर्मक / इंजेक्शन और प्रभावकारिता और CXMD कुत्ते मॉडल में बहु-एक्सॉन लंघन की सुरक्षा के मूल्यांकन के लिए तरीके प्रस्तुत कर रहे हैं।

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Multi-exon Skipping Using Cocktail Antisense Oligonucleotides in the Canine X-linked Muscular Dystrophy

मल्टी एक्सॉन कुत्ते एक्स से जुड़े पेशी Dystrophy में कॉकटेल antisense oligonucleotides का प्रयोग लंघन

एक्सॉन लंघन वर्तमान में Duchenne पेशी dystrophy (डीएमडी) के लिए एक सबसे होनहार चिकित्सीय विकल्प है। डीएमडी रोगियों के लिए प्रयोज्यता का विस्तार करने के लिए और जिसके परिणामस्वरूप छोटा dystrophin प्रोटीन की स्थिरता / समारोह अनुकूलन करने के लिए, एक बहु-एक्सॉन कॉकटेल antisense oligonucleotides का उपयोग कर दृष्टिकोण लंघन विकसित किया गया था और हम एक कुत्ते के मॉडल में प्रणालीगत dystrophin बचाव का प्रदर्शन किया।

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is one of the most common lethal genetic diseases worldwide, caused by mutations in the dystrophin (DMD) gene. Exon ...

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vivo Canine Muscle Function Assay

In Vivo Canine Muscle Function Assay

Vivo कुत्ते बलवान फंक्शन परख

We describe a minimally-invasive and reproducible method to measure canine pelvic limb muscle strength and muscle response to repeated eccentric 
...

Cell-based Assay Protocol for the Prognostic Prediction of Idiopathic Scoliosis Using Cellular Dielectric Spectroscopy

सेलुलर ढांकता स्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग इडियोपैथिक स्कोलियोसिस के शकुन भविष्यवाणी के लिए सेल आधारित परख प्रोटोकॉल

This protocol details the experimental and analytical procedure for a cell-based assay developed in our laboratory as a functional test to predict the ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Muscular Dystrophy Patients: Efficient Integration-free Reprogramming of Urine Derived Cells

पेशी Dystrophy रोगियों से प्रेरित pluripotent स्टेम सेल की पीढ़ी: मूत्र ली गई कोशिकाओं के कुशल एकीकरण मुक्त Reprogramming

Dystrophic cardiomyopathy is a poorly understood consequence of muscular dystrophy. Generating induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) from patients with ...

Modeling Myotonic Dystrophy 1 in C2C12 Myoblast Cells

C2C12 Myoblast कक्ष में मायोटोनिक अपविकास 1 मॉडलिंग

Myotonic dystrophy 1 (DM1) is a common form of muscular dystrophy. Although several animal models have been established for DM1, myoblast cell models are ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

अलगाव और कुत्ते धमनियों और नसों से प्राथमिक endothelial कोशिकाओं की संस्कृति

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...

Evaluation of Exon Inclusion Induced by Splice Switching Antisense Oligonucleotides in SMA Patient Fibroblasts

ब्याह द्वारा प्रेरित एक्सॉन शामिल करने का मूल्यांकन स्विचिंग Antisense Oligonucleotides में SMA रोगी Fibroblasts

Spinal muscular atrophy (SMA), a lethal neurological disease caused by the loss of SMN1, presents a unique case in the field of antisense oligonucleotide ...

Ferric Chloride-induced Canine Carotid Artery Thrombosis: A Large Animal Model of Vascular Injury

घाट क्लोराइड-प्रेरित कुत्ते मन्या धमनी घनास्त्रता: संवहनी चोट का एक बड़ा पशु मॉडल

Occlusive arterial thrombosis leading to cerebral ischemic stroke and myocardial infarction contributes to ~13 million deaths every year globally. Here, ...

Measurements of Motor Function and Other Clinical Outcome Parameters in Ambulant Children with Duchenne Muscular Dystrophy

Duchenne पेशी Dystrophy के साथ Ambulant बच्चों में मोटर समारोह और अन्य नैदानिक परिणाम मापदंडों की माप

While the number of new treatment options tested in patients with Duchenne muscular dystrophy (DMD) is increasing, there is still no defining of the most ...

Characterizing Exon Skipping Efficiency in DMD Patient Samples in Clinical Trials of Antisense Oligonucleotides

एंटीसेंस ओलिगोन्यूक्लियोटाइड्स के नैदानिक परीक्षणों में डीएमडी रोगी नमूनों में एक्सोन लंघन दक्षता की विशेषता

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a degenerative muscle disease that causes progressive loss of muscle mass, leading to premature death. The mutations ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

भ्रष्टाचार गुणवत्ता मूल्यांकन के लिए एक रासायनिक बायोप्सी का उपयोग करना

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...