Name: myeloid cell isolation from mouse skin and draining lymph node following intradermal immunization with live attenuated plasmodium sporozoites
Uploaded: 2016-05-18T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites at JoVE.com

लेखकों माउस त्वचा में बीजाणुज गतिशीलता के vivo इमेजिंग में शिक्षण के लिए चित्रों और पॉलीन Formaglio लेने में मदद के लिए पेट्रीसिया Baldacci, वैनेसा Lagal और सबीन Thiberge महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए, इरीना Dobrescu और सबीन Thiberge धन्यवाद। हम यह भी मच्छर के पालन के लिए उत्पादन और एनोफ़ेलीज़ (Cepia-Institut पाश्चर) के संक्रमण के लिए मारेक Szatanik और केंद्र को धन्यवाद देना चाहूंगा। इस अध्ययन एक्सा रिसर्च फंड और Laboratoire d&#39;उत्कृष्टता &quot;संक्रामक रोगों उभरते की एकीकृत जीवविज्ञान&quot; से धन द्वारा समर्थित किया गया (अनुदान नहीं। ANR-10-LabX-62-IBEID)।

<html> सभी प्रक्रियाओं पाश्चर संस्थान की समिति द्वारा और पशु प्रयोग पर स्थानीय आचार समिति (नैतिक समिति आईडीएफ पेरिस 1, पेरिस, फ्रांस, समझौते संख्या: 2012-0015) द्वारा अनुमोदित किया गया और लागू दिशा निर्देशों और नियमों के ...

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	<li>Nussenzweig, R. S., Vanderberg, J., Most, H., Orton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+immunity+produced+by+the+injection+of+x-irradiated+sporozoites+of+plasmodium+berghei.">Protective immunity produced by the injection of x-irradiated sporozoites of plasmodium berghei.</a> Nature. 216 (5111), 160-162 (1967).</li><li>Hoffman, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+of+humans+against+malaria+by+immunization+with+radiation-attenuated+Plasmodium+falciparum+sporozoites.">Protection of humans against malaria by immunization with radiation-attenuated Plasmodium falciparum sporozoites.</a> J Infect Dis. 185 (8), 1155-1164 (2002).</li><li>Mueller, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+liver+stage+developmental+arrest+by+depletion+of+a+protein+at+the+parasite-host+interface.">Plasmodium liver stage developmental arrest by depletion of a protein at the parasite-host interface.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (8), 3022-3027 (2005).</li><li>Mueller, A. K., Deckert, M., Heiss, K., Goetz, K., Matuschewski, K., Schl&#252;ter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+attenuated+Plasmodium+berghei+liver+stages+persist+and+elicit+sterile+protection+primarily+via+CD8+T+cells.">Genetically attenuated Plasmodium berghei liver stages persist and elicit sterile protection primarily via CD8 T cells.</a> Am J Pathol. 171 (1), 107-115 (2007).</li><li>Tarun, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protracted+sterile+protection+with+Plasmodium+yoelii+pre-erythrocytic+genetically+attenuated+parasite+malaria+vaccines+is+independent+of+significant+liver-stage+persistence+and+is+mediated+by+CD8++T+cells.">Protracted sterile protection with Plasmodium yoelii pre-erythrocytic genetically attenuated parasite malaria vaccines is independent of significant liver-stage persistence and is mediated by CD8+ T cells.</a> J Infect Dis. 196 (4), 608-616 (2007).</li><li>van Dijk, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+attenuated,+P36p-deficient+malarial+sporozoites+induce+protective+immunity+and+apoptosis+of+infected+liver+cells.">Genetically attenuated, P36p-deficient malarial sporozoites induce protective immunity and apoptosis of infected liver cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (34), 12194-12199 (2005).</li><li>Butler, N. S., Schmidt, N. W., Vaughan, A. M., Aly, A. S., Kappe, S. H., Harty, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superior+antimalarial+immunity+after+vaccination+with+late+liver+stage-arresting+genetically+attenuated+parasites.">Superior antimalarial immunity after vaccination with late liver stage-arresting genetically attenuated parasites.</a> Cell Host Microbe. 9 (6), 451-462 (2011).</li><li>Belnoue, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+T+cell+immunity+against+malaria+liver+stage+after+vaccination+with+live+sporozoites+under+chloroquine+treatment.">Protective T cell immunity against malaria liver stage after vaccination with live sporozoites under chloroquine treatment.</a> J Immunol. 172 (4), 2487-2495 (2004).</li><li>Behet, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sporozoite+immunization+of+human+volunteers+under+chemoprophylaxis+induces+functional+antibodies+against+pre-erythrocytic+stages+of+Plasmodium+falciparum.">Sporozoite immunization of human volunteers under chemoprophylaxis induces functional antibodies against pre-erythrocytic stages of Plasmodium falciparum.</a> Malar J. 13, 136 (2014).</li><li>Amino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+imaging+of+Plasmodium+transmission+from+mosquito+to+mammal.">Quantitative imaging of Plasmodium transmission from mosquito to mammal.</a> Nat Med. 12 (2), 220-224 (2006).</li><li>Yamauchi, L. M., Coppi, A., Snounou, G., Sinnis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+sporozoites+trickle+out+of+the+injection+site.">Plasmodium sporozoites trickle out of the injection site.</a> Cell Microbiol. 9 (5), 1215-1222 (2007).</li><li>Gueirard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+malaria+parasite+in+the+skin+of+the+mammalian+host.">Development of the malaria parasite in the skin of the mammalian host.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (43), 18640-18645 (2010).</li><li>Voza, T., Miller, J. L., Kappe, S. H., Sinnis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrahepatic+exo-+erythrocytic+forms+of+rodent+malaria+parasites+at+the+site+of+inoculation:+clearance+after+immunization,+susceptibility+to+primaquine,+and+contribution+to+blood-stage+infection.">Extrahepatic exo- erythrocytic forms of rodent malaria parasites at the site of inoculation: clearance after immunization, susceptibility to primaquine, and contribution to blood-stage infection.</a> Infect Immun. 80 (6), 2158-2164 (2012).</li><li>Chakravarty, S., Cockburn, I. A., Kuk, S., Overstreet, M. G., Sacci, J. B., Zavala, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+lymphocytes+protective+against+malaria+liver+stages+are+primed+in+skin-draining+lymph+nodes.">CD8+ T lymphocytes protective against malaria liver stages are primed in skin-draining lymph nodes.</a> Nat Med. 13 (9), (2007).</li><li>Obeid, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin-draining+lymph+node+priming+is+sufficient+to+induce+sterile+immunity+against+pre-erythrocytic+malaria.">Skin-draining lymph node priming is sufficient to induce sterile immunity against pre-erythrocytic malaria.</a> EMBO Mol Med. 5 (2), 250-263 (2013).</li><li>Amino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+cell+traversal+is+important+for+progression+of+the+malaria+parasite+through+the+dermis+to+the+liver.">Host cell traversal is important for progression of the malaria parasite through the dermis to the liver.</a> Cell Host Microbe. 3 (2), 88-96 (2008).</li><li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph-node+resident+CD8&#945;++dendritic+cells+capture+antigens+from+migratory+malaria+sporozoites+and+induce+CD8++T+cell+responses.">Lymph-node resident CD8&#945;+ dendritic cells capture antigens from migratory malaria sporozoites and induce CD8+ T cell responses.</a> PLoS Pathog. 11 (2), e1004637 (2015).</li><li>da Silva, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+skin+immunological+disturbance+after+Plasmodium-infected+mosquito+bites.">Early skin immunological disturbance after Plasmodium-infected mosquito bites.</a> Cell Immunol. 277 (1-2), 22-32 (2012).</li><li>Mac-Daniel, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+immune+response+to+injection+of+Plasmodium+sporozoites+into+the+skin.">Local immune response to injection of Plasmodium sporozoites into the skin.</a> J Immunol. 193 (3), 1246-1257 (2014).</li><li>Ribeiro-Gomes, F. L., Peters, N. C., Debrabant, A., Sacks, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+capture+of+infected+neutrophils+by+dendritic+cells+in+the+skin+inhibits+the+early+anti-leishmania+response.">Efficient capture of infected neutrophils by dendritic cells in the skin inhibits the early anti-leishmania response.</a> PLoS Pathog. 8 (2), e1002536 (2012).</li><li>Thiberge, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo.+imaging+of+malaria+parasites+in+the+murine+liver.">In vivo. imaging of malaria parasites in the murine liver.</a> Nat Protoc. 2 (7), 1811-1818 (2007).</li><li>Ishino, T., Orito, Y., Chinzei, Y., Yuda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+calcium-dependent+protein+kinase+regulates+Plasmodium+ookinete+access+to+the+midgut+epithelial+cell.">A calcium-dependent protein kinase regulates Plasmodium ookinete access to the midgut epithelial cell.</a> Mol Microbiol. 59 (4), 1175-1184 (2006).</li><li>Amino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+malaria+sporozoites+in+the+dermis+of+the+mammalian+host.">Imaging malaria sporozoites in the dermis of the mammalian host.</a> Nat Protoc. 2 (7), 1705-1712 (2007).</li><li>Ploemen, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+liver+load+following+parenteral+sporozoite+administration+in+rodents.">Plasmodium liver load following parenteral sporozoite administration in rodents.</a> Vaccine. 31 (34), 3410-3416 (2013).</li><li>Epstein, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+attenuated+malaria+vaccine+designed+to+protect+through+hepatic+CD8+T+cell+immunity.">Live attenuated malaria vaccine designed to protect through hepatic CD8 T cell immunity.</a> Science. 334 (6055), 475-480 (2011).</li><li>Roestenberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+protection+against+malaria+after+experimental+sporozoite+inoculation:+an+open-label+follow-up+study.">Long-term protection against malaria after experimental sporozoite inoculation: an open-label follow-up study.</a> Lancet. 377 (9779), 1770-1776 (2011).</li><li>Seder, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+against+malaria+by+intravenous+immunization+with+a+nonreplicating+sporozoite+vaccine.">Protection against malaria by intravenous immunization with a nonreplicating sporozoite vaccine.</a> Science. 341 (6152), 1359-1365 (2013).</li><li>Douradinha, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+attenuated+P36p-deficient+Plasmodium+berghei+sporozoites+confer+long-lasting+and+partial+cross-species+protection.">Genetically attenuated P36p-deficient Plasmodium berghei sporozoites confer long-lasting and partial cross-species protection.</a> Int J Parasitol. 37 (13), 1511-1519 (2007).</li><li>Geem, D., Medina-Contreras, O., Kim, W., Huang, C. S., Denning, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Dendritic+Cells+and+Macrophages+from+the+Mouse+Intestine.">Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine.</a> J Vis Exp. (63), e4040 (2012).</li><li>Autengruber, A., Gereke, M., Hansen, G., Hennig, C., Bruder, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+enzymatic+tissue+disintegration+on+the+level+of+surface+molecule+expression+and+immune+cell+function.">Impact of enzymatic tissue disintegration on the level of surface molecule expression and immune cell function.</a> Eur J Microbiol Immunol (Bp. 2 (2), 112-120 (2012).</li></ol>

एक पूरी बीजाणुज मलेरिया वैक्सीन का उपयोग मनुष्य के लिए बड़े पैमाने पर टीकाकरण के परिप्रेक्ष्य में, मुख्य चुनौतियों पर काबू पाने का एक सफल टीकाकरण और सुरक्षा सुनिश्चित करने के लिए 24,25 अनुकूलित मार्...

मलेरिया दुनिया में घातक संक्रामक रोगों, प्रति वर्ष आधे से ज्यादा एक लाख लोग मारे गए में से एक है। प्लाज्मोडियम, रोग के कारण एजेंट द्वारा संक्रमण एक पूर्व एरिथ्रोसाइटिक (पीई) चरण से शुरू होता है। इस चरण के दौरान, एक महिला Anopheline मच्छर द्वारा मेजबान त्वचा में इंजेक्शन स्पोरोजोएट्स खून के माध्यम से जिगर तक पहुँचने और परजीवी रूपों है कि लाल रक्त कोशिकाओं को संक्रमित और रोग के लक्षण पैदा में अंदर hepatocytes अलग। प्लाज्मोडियम की पीई चरणों विरोधी मलेरिया टीकाकरण के लिए एक विशेषाधिकार प्राप्त लक्ष्य प्रतिनिधित्व करते हैं। दरअसल, इस तरह के विकिरण तनु स्पोरोजोएट्स (आरएएस) के रूप में इन चरणों के खिलाफ तनु टीके, रहते हैं, आनुवंशिक रूप से गिरफ्तार कर लिया परजीवी (जीएपी) या रसायनरोगनिरोध और स्पोरोजोएट्स (सीपीएस) दोनों कृंतक और मानव मेजबान टीम 1-9 की रक्षा के लिए अपनी क्षमता का प्रदर्शन किया है। कृंतक मॉडल में, सबसे टीकाकरण के अध्ययन नसों में टीकाकरण का उपयोग आयोजित की जाती हैंहै, जो सुरक्षात्मक प्रभावकारिता के संदर्भ में स्वर्ण मानक है। हालांकि, एक त्वचा चरण का विवरण और त्वचा से जुड़े draining लिम्फ नोड (DLN) संरक्षण जानने में के महत्व पीई चरण के बारे में हमारी धारणा बदल और इंजेक्शन की अंतर्त्वचीय मार्ग के महत्व पर जोर दिया है। पी के intravital इमेजिंग berghei स्पोरोजोएट्स मूषक की त्वचा में इंजेक्शन से पता चला है कि inoculum के केवल ~ 25% खून के माध्यम से जिगर तक पहुँचता है। शेष ~ 75% समीपस्थ DLN (~ 15%) और त्वचा (~ 50%) 10,11, जहां एक छोटे से अनुपात त्वचा कोशिकाओं 12,13 के अंदर सप्ताह के लिए बदल सकते हैं और जीवित रहने के बीच वितरित करता है। इसके अलावा, बाद में पढ़ाई वर्णित है कि अंतर्त्वचीय टीकाकरण के बाद प्रभावी सुरक्षा प्रतिरोधक क्षमता की स्थापना मुख्य रूप से त्वचा-DLN, जहां परजीवी विशिष्ट CD8 + टी कोशिकाओं को सक्रिय कर रहे हैं में जगह लेता है, और केवल तिल्ली या जिगर-dLNs 14,15 में मामूली। जबकिज्यादातर अध्ययनों सुरक्षात्मक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की स्थापना में फंसा प्रेरक कोशिकाओं के लक्षण वर्णन पर ध्यान केंद्रित किया है, बहुत कम, जीना तनु त्वचा में इंजेक्शन परजीवी के भाग्य के बारे में जाना जाता है, विशेष रूप से सहज प्रतिरक्षा प्रणाली के साथ उनकी बातचीत। विशेष रूप से, सीडी 8 + टी कोशिकाओं को परजीवी प्रतिजन तेज, प्रसंस्करण और प्रस्तुति में शामिल प्रतिजन कोशिकाओं पेश के लक्षण वर्णन, महत्वपूर्ण महत्व का है यह जानकर कि पीई प्रतिजन अधिग्रहण दोनों त्वचा और DLN डिब्बों में हो सकता है। पिछला intravital इमेजिंग अध्ययन एक संक्रामक मच्छर के काटने से 16 जबकि स्पोरोजोएट्स और वृक्ष के समान कोशिकाओं के बीच जल्दी बातचीत DLN 10,17 में मनाया गया के बाद त्वचा में चमकते फ्लोरोसेंट लिस-GFP सकारात्मक कोशिकाओं का एक प्रारंभिक बाढ़ का वर्णन किया। अभी हाल ही में यह बताया गया है कि मच्छरों द्वारा त्वचा में टीका स्पोरोजोएट्स की त्वचा में दोनों वृक्ष के समान और विनियामक टी कोशिकाओं की गतिशीलता बढ़ जाती हैचूहों, जबकि प्रतिजन कोशिकाओं की कमी नंबर DLN 18 में मनाया गया। हम पहचान करने और अधिक ठीक ल्युकोसैट सबसेट त्वचा में भर्ती है और इसी DLN आरएएस 19 की खुराक immunizing की अंतर्त्वचीय इंजेक्शन के बाद परजीवी के साथ बातचीत के उन लोगों के रूप में अच्छी तरह से यों के उद्देश्य से। इस संदर्भ में, हम दोनों के ऊतकों से माइलॉयड कोशिकाओं (CD45 + CD11b +) पृथक और cytometry बहु = पैरामीट्रिक प्रवाह द्वारा ब्याज की उप-जनसंख्या होती है। प्रतिरक्षा लीशमैनिया प्रमुख त्वचा संक्रमण 20 के प्रारंभिक चरण में वर्णित प्रतिक्रिया के अनुरूप, इंजेक्शन बीजाणुज करने के लिए प्राथमिक मेजबान प्रतिक्रिया Polymorphonuclear न्यूट्रोफिल (CD45 + CD11b + Ly6G + Ly6C पूर्णांक) भड़काऊ monocytes (CD45 + CD11b के बाद की एक लगातार भर्ती होते हैं + Ly6G - Ly6C +) जो differenti के आधार पर पहचाने जाते हैंLy6G और Ly6C सतह मार्कर के अल अभिव्यक्ति। हम यहाँ माउस त्वचा से माइलॉयड कोशिकाओं को अलग करने और DLN आरएएस की खुराक संक्रमित मच्छर लार ग्रंथियों से निकाला immunizing की अंतर्त्वचीय इंजेक्शन के बाद के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन है। प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य अंतर्त्वचीय इंजेक्शन और ऊतक प्रसंस्करण संक्रमित ऊतकों के भीतर सेल की आबादी में घुसपैठ की प्ररूपी परिवर्तन यों के लिए महत्वपूर्ण कदम उठाए हैं। दृष्टिकोण नीचे विस्तृत एक विश्वसनीय परख प्लाज्मोडियम परजीवी के लिए त्वचा और DLN भड़काऊ प्रतिक्रिया का आकलन करने और विभिन्न प्रायोगिक प्रणाली के लिए बढ़ाया जा सकता है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketamine: Imalgene&#174; 1000</td>
			<td>Merial</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine: Rompun&#174; 2%</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoFil syringe + 35 gauge needle</td>
			<td>World Precision Instruments&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omnican&#174; 50 Insulin syringe 0,5 ml/50 I.U.</td>
			<td>B. Braun Medical&#160;</td>
			<td>9151125</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiwellTM 6 well tissue culture plate &#8211; Flat Bottom</td>
			<td>BD Falcon&#160;</td>
			<td>353046</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#181;m cell strainer&#160;</td>
			<td>BD Falcon&#160;</td>
			<td>352350</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 ml syringe</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SS-02S</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BLUE MAXTM 15ml Polypropylene conical tube</td>
			<td>BD Falcon&#160;</td>
			<td>352097</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BLUE MAXTM 50ml Polypropylene conical tube</td>
			<td>BD Falcon&#160;</td>
			<td>352098</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5ml Polystyrene Round-Bottom Tube with 35&#181;m Cell-Strainer Cap</td>
			<td>BD Falcon&#160;</td>
			<td>352235</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS 1X Cacl2- and MgCl2-free</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>14190-094</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM 1X + GlutaMAXTM</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>31966-021</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase from Clostridium histolyticum, Type IV 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>C5138</td>
			<td>400 U/ml&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I from bovine pancreas, type IV&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>D5025</td>
			<td>50 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA disodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>E-5134</td>
			<td>10mM or 2.5 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>S1810-500</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer solution (1M)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15630-056</td>
			<td>25 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue Stain (0,4%)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15250-061</td>
			<td>Dilution 1:10&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD16/CD32 (2.4G2 clone)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553142</td>
			<td>10&#181;g/ml final (1:50)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI FluoroPureTM grade</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>D21490</td>
			<td>1&#181;g/ml final</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD45 (30-F11 clone)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>559864</td>
			<td>&#160;Dilution 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD11b (M1/70 clone)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557657</td>
			<td>&#160;Dilution 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD8&#945; (5H10 clone)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>MCD0830</td>
			<td>&#160;Dilution 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Female C57BL/6JRj mice (7-week-old)&#160;</td>
			<td>Janvier Laboratories</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
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myeloid cell isolation from mouse skin and draining lymph node following intradermal immunization with live attenuated plasmodium sporozoites

मलेरिया संक्रमण शुरू होती है जब प्लाज्मोडियम की बीजाणुज चरण एक मच्छर के काटने के माध्यम से एक स्तनधारी मेजबान की त्वचा में टीका है। अत्यधिक गतिशील परजीवी न केवल जिगर hepatocytes आक्रमण और एरिथ्रोसाइट संक्रामक रूप में परिणत करने के लिए पहुंचता है। यह भी त्वचा में और समीपस्थ लिम्फ नोड इंजेक्शन साइट है, जहां यह मान्यता प्राप्त है और निवासी और / या भर्ती माइलॉयड कोशिकाओं द्वारा अपमानित किया जा सकता draining के लिए migrates। Intravital इमेजिंग त्वचा में चमकते फ्लोरोसेंट लिस-GFP सकारात्मक ल्यूकोसाइट्स और स्पोरोजोएट्स और CD11c + draining लिम्फ नोड में कोशिकाओं के बीच बातचीत के प्रारंभिक भर्ती की सूचना दी। हम यहाँ, ठीक पहचान करने और माइलॉयड सेल सबसेट है कि माउस त्वचा के लिए भर्ती किया और एक murine मॉडल में स्पोरोजोएट्स की खुराक immunizing की अंतर्त्वचीय इंजेक्शन के बाद लिम्फ नोड draining हैं गणना करने के लिए एक कुशल प्रक्रिया प्रस्तुत करते हैं। प्ररूपी लक्षण वर्णन का उपयोग कर बहु-पैरामीट्रिक से फ्लो प्रदान करता हैएक विश्वसनीय परख प्लाज्मोडियम संक्रमण को भड़काऊ प्रतिक्रिया के दौरान जल्दी गतिशील सेलुलर परिवर्तन का आकलन करने के लिए।

हमने हाल ही में पी की immunizing खुराक की कि सुई सिरिंज इंजेक्शन का प्रदर्शन berghei स्पोरोजोएट्स में माउस त्वचा त्वचा और DLN 19 में भड़काऊ monocytes के द्वारा पीछा Polymorphonuclear न्यूट्रोफिल की एक लगातार भ?...

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Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

We describe here a protocol for isolating myeloid cells from mouse skin and draining lymph node following intradermal injection of Plasmodium sporozoites. Flow cytometry of collected cells provides a reliable assay to characterize the skin and draining lymph node inflammatory response to the parasite.

माउस त्वचा और draining लिम्फ नोड से माइलॉयड सेल अलगाव लाइव तनु के साथ intradermal टीकाकरण के बाद<em&gt; प्लाज्मोडियम</em&gt; स्पोरोजोएट्स

Malaria infection begins when the sporozoite stage of Plasmodium is inoculated into the skin of a mammalian host through a mosquito bite. The highly ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Myeloid Cell Isolation from Mouse Skin and Draining Lymph Node Following Intradermal Immunization with Live Attenuated Plasmodium Sporozoites

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

वंक्षण लिम्फ नोड के intravital माइक्रोस्कोपी

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

Non-surgical Intratracheal Instillation of Mice with Analysis of Lungs and Lung Draining Lymph Nodes by Flow Cytometry

गैर शल्य चिकित्सा फेफड़े और फेफड़े Draining लिम्फ नोड्स के प्रवाह cytometry द्वारा विश्लेषण के साथ चूहे की Intratracheal टपकाना

Phagocytic cells such as alveolar macrophages and lung dendritic cells (LDCs) continuously sample antigens from the alveolar spaces in the 
lungs. LDCs, ...

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Widefield और confocal सूक्ष्मदर्शी के साथ murine लसीका नोड स्लाइसें में टी कोशिकाओं की पूर्व vivo इमेजिंग

Na&iuml;ve T cells continuously traffic to secondary lymphoid organs, including peripheral lymph nodes, to detect rare expressed antigens. The migration ...

Murine Superficial Lymph Node Surgery

को murine सतही लिम्फ नोड सर्जरी

In the field of immunology, to understand the progression of an immune response against a vaccine, an infection or a tumour, the response is often ...

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

माउस जानुपृष्ठीय लसीका नोड के intravital इमेजिंग

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

मानव थाइमस से माइलॉयड वृक्ष के समान कोशिकाओं और उपकला कोशिकाओं का अलगाव

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Generation of Lymph Node-fat Pad Chimeras for the Study of Lymph Node Stromal Cell Origin

लिम्फ नोड stromal सेल मूल के अध्ययन के लिए लिम्फ नोड वसा पैड काइमेरा का सृजन

The stroma is a key component of the lymph node structure and function. However, little is known about its origin, exact cellular composition and the ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Murine लिम्फ नोड stromal कोशिकाओं का अलगाव

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

प्ररूपी विश्लेषण और के लिए मानव त्वचा से लिम्फोसाइट अलगाव<em&gt; पूर्व विवो</em&gt; सेल संस्कृति

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

एंजाइमी डाइजेस्ट और ढाल जुदाई का उपयोग माउस त्वचा से घुसपैठ कर Leukocytes का अलगाव

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...