Name: feeder-free derivation of melanocytes from human pluripotent stem cells
Uploaded: 2016-03-03T15:00:00
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इस काम जोआना एम Nicolay फाउंडेशन से मेलेनोमा शोधकर्ताओं के लिए एक फैलोशिप द्वारा और रूथ एल Kirschstein राष्ट्रीय अनुसंधान सेवा पुरस्कार F31 के तहत राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान द्वारा समर्थित किया गया। इस काम के लिए आगे NYSTEM और त्रि-संस्थागत स्टेम सेल पहल (स्टार फाउंडेशन) से अनुदान के माध्यम से समर्थन किया था।

नोट: मेलानोसाईट यहाँ उल्लिखित प्रोटोकॉल पहले मीका एट अल द्वारा प्रदर्शन किया गया। 1. मध्यम संस्कृति की तैयारी, लेपित व्यंजन और hPSCs का रखरखाव <ol><li> मध्यम तैयारी नोट: स्टोर करने के लिए 2 सप्ताह ?...

<ol>
	<li>Ebert, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+from+a+spinal+muscular+atrophy+patient.">Induced pluripotent stem cells from a spinal muscular atrophy patient.</a> Nature. 457, 277-280 (2009).</li><li>Lee, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+pathogenesis+and+treatment+of+familial+dysautonomia+using+patient-specific+iPSCs.">Modelling pathogenesis and treatment of familial dysautonomia using patient-specific iPSCs.</a> Nature. 461, 402-406 (2009).</li><li>Lee, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+screening+using+familial+dysautonomia+induced+pluripotent+stem+cells+identifies+compounds+that+rescue+IKBKAP+expression.">Large-scale screening using familial dysautonomia induced pluripotent stem cells identifies compounds that rescue IKBKAP expression.</a> Nat biotechnol. 30, 1244-1248 (2012).</li><li>Lee, G., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell+technology+for+the+study+of+human+disease.">Induced pluripotent stem cell technology for the study of human disease.</a> Nat methods. 7, 25-27 (2010).</li><li>Zimmer, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+developmental+toxicants+and+signaling+pathways+in+a+functional+test+based+on+the+migration+of+human+neural+crest+cells.">Evaluation of developmental toxicants and signaling pathways in a functional test based on the migration of human neural crest cells.</a> Environ health persp. 120, 1116-1122 (2012).</li><li>Mica, Y., Lee, G., Chambers, S. M., Tomishima, M. J., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+neural+crest+induction,+melanocyte+specification,+and+disease-related+pigmentation+defects+in+hESCs+and+patient-specific+iPSCs.">Modeling neural crest induction, melanocyte specification, and disease-related pigmentation defects in hESCs and patient-specific iPSCs.</a> Cell rep. 3, 1140-1152 (2013).</li><li>Mariani, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FOXG1-Dependent+Dysregulation+of+GABA/Glutamate+Neuron+Differentiation+in+Autism+Spectrum+Disorders.">FOXG1-Dependent Dysregulation of GABA/Glutamate Neuron Differentiation in Autism Spectrum Disorders.</a> Cell. 162, 375-390 (2015).</li><li>Doulatov, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+Diamond+Blackfan+Anemia+in+Vivo+Using+Human+Induced+Pluripotent+Stem+Cells.">Modeling Diamond Blackfan Anemia in Vivo Using Human Induced Pluripotent Stem Cells.</a> Blood. 124, (2014).</li><li>Cherry, A. B. C., Daley, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprogrammed+Cells+for+Disease+Modeling+and+Regenerative+Medicine.">Reprogrammed Cells for Disease Modeling and Regenerative Medicine.</a> Annu Rev Med. 64, 277-290 (2013).</li><li>Inoue, H., Nagata, N., Kurokawa, H., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=iPS+cells:+a+game+changer+for+future+medicine.">iPS cells: a game changer for future medicine.</a> Embo J. 33, 409-417 (2014).</li><li>Kim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+arrhythmogenic+right+ventricular+dysplasia+with+patient-specific+iPSCs.">Studying arrhythmogenic right ventricular dysplasia with patient-specific iPSCs.</a> Nature. 494, 105-110 (2013).</li><li>Fang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+conditions+for+the+generation+of+melanocytes+from+human+embryonic+stem+cells.">Defining the conditions for the generation of melanocytes from human embryonic stem cells.</a> Stem cells. 24, 1668-1677 (2006).</li><li>Huang, X., Saint-Jeannet, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+the+neural+crest+and+the+opportunities+of+life+on+the+edge.">Induction of the neural crest and the opportunities of life on the edge.</a> Dev biol. 275, 1-11 (2004).</li><li>White, R. M., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocytes+in+development,+regeneration,+and+cancer.">Melanocytes in development, regeneration, and cancer.</a> Cell stem cell. 3, 242-252 (2008).</li><li>Morrison, S. J., White, P. M., Zock, C., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+identification,+isolation+by+flow+cytometry,+and+in+vivo+self-renewal+of+multipotent+mammalian+neural+crest+stem+cells.">Prospective identification, isolation by flow cytometry, and in vivo self-renewal of multipotent mammalian neural crest stem cells.</a> Cell. 96, 737-749 (1999).</li><li>Elworthy, S., Pinto, J. P., Pettifer, A., Cancela, M. L., Kelsh, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phox2b+function+in+the+enteric+nervous+system+is+conserved+in+zebrafish+and+is+sox10-dependent.">Phox2b function in the enteric nervous system is conserved in zebrafish and is sox10-dependent.</a> Mech develop. 122, 659-669 (2005).</li><li>Harris, M. L., Baxter, L. L., Loftus, S. K., Pavan, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox+proteins+in+melanocyte+development+and+melanoma.">Sox proteins in melanocyte development and melanoma.</a> Pigm cell melanoma r. 23, 496-513 (2010).</li><li>Herbarth, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutation+of+the+Sry-related+Sox10+gene+in+Dominant+megacolon,+a+mouse+model+for+human+Hirschsprung+disease.">Mutation of the Sry-related Sox10 gene in Dominant megacolon, a mouse model for human Hirschsprung disease.</a> PNAS. 95, 5161-5165 (1998).</li><li>Southard-Smith, E. M., Kos, L., Pavan, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox10+mutation+disrupts+neural+crest+development+in+Dom+Hirschsprung+mouse+model.">Sox10 mutation disrupts neural crest development in Dom Hirschsprung mouse model.</a> Nat genetics. 18, 60-64 (1998).</li><li>Dupin, E., Glavieux, C., Vaigot, P., Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelin+3+induces+the+reversion+of+melanocytes+to+glia+through+a+neural+crest-derived+glial-melanocytic+progenitor.">Endothelin 3 induces the reversion of melanocytes to glia through a neural crest-derived glial-melanocytic progenitor.</a> PNAS. 97, 7882-7887 (2000).</li><li>Lister, J. A., Robertson, C. P., Lepage, T., Johnson, S. L., Raible, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=nacre+encodes+a+zebrafish+microphthalmia-related+protein+that+regulates+neural-crest-derived+pigment+cell+fate.">nacre encodes a zebrafish microphthalmia-related protein that regulates neural-crest-derived pigment cell fate.</a> Development. 126, 3757-3767 (1999).</li><li>Hou, L., Panthier, J. J., Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+and+transcriptional+regulation+in+the+neural+crest-derived+melanocyte+lineage:+interactions+between+KIT+and+MITF.">Signaling and transcriptional regulation in the neural crest-derived melanocyte lineage: interactions between KIT and MITF.</a> Development. 127, 5379-5389 (2000).</li><li>Levy, C., Khaled, M., Fisher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MITF:+master+regulator+of+melanocyte+development+and+melanoma+oncogene.">MITF: master regulator of melanocyte development and melanoma oncogene.</a> Trends mol med. 12, 406-414 (2006).</li><li>Phung, B., Sun, J., Schepsky, A., Steingrimsson, E., Ronnstrand, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-KIT+signaling+depends+on+microphthalmia-associated+transcription+factor+for+effects+on+cell+proliferation.">C-KIT signaling depends on microphthalmia-associated transcription factor for effects on cell proliferation.</a> PloS one. 6, e24064 (2011).</li><li>Grichnik, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KIT+expression+reveals+a+population+of+precursor+melanocytes+in+human+skin.">KIT expression reveals a population of precursor melanocytes in human skin.</a> J invest dermatol. 106, 967-971 (1996).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dermal+stem+cells+differentiate+into+functional+epidermal+melanocytes.">Human dermal stem cells differentiate into functional epidermal melanocytes.</a> J cell sci. 123, 853-860 (2010).</li><li>Nishimura, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant+role+of+the+niche+in+melanocyte+stem-cell+fate+determination.">Dominant role of the niche in melanocyte stem-cell fate determination.</a> Nature. 416, 854-860 (2002).</li><li>Zur Nieden, N. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Embryonic stem cell therapy for osteo-degenerative diseases : methods and protocols. , (2011).</li><li>Lee, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=high-content+screening+for+novel+pigmentation+regulators+using+a+keratinocyte/melanocyte+co-culture+system.">high-content screening for novel pigmentation regulators using a keratinocyte/melanocyte co-culture system.</a> Exp dermatol. 23, 125-129 (2014).</li></ol>

hPSCs से melanocytes के सफल भेदभाव के लिए निम्नलिखित सुझाव को ध्यान में रखा जाना चाहिए। और सबसे पहले, यह सब समय पर बाँझ संस्कृति की शर्तों के तहत काम करने के लिए आवश्यक है। इसके अतिरिक्त, यह pluripotent, पूरी तरह से अविभाजि...

मानव स्टेम कोशिकाओं (hPSCs) रोग मॉडलिंग, दवा स्क्रीनिंग, और सेल प्रतिस्थापन उपचार 1-6 के लिए एक स्केलेबल फैशन में सामान्य भेदभाव नकल करने के लिए एक मंच प्रदान करते हैं। खास रुचि, hPSCs को अलग-थलग करने के लिए मुश्किल या दुर्लभ / क्षणिक प्रकार की कोशिकाओं जहां मरीज के नमूनों के अध्ययन के लिए दुर्लभ हैं अवसर खोलने होंगे। इसके अलावा, प्रेरित pluripotent स्टेम सेल (IPSCs) एक रोगी विशिष्ट ढंग से विकास और रोग मॉडलिंग का अध्ययन करने के लिए अद्वितीय तंत्र 1,2,7-11 को जानने के लिए सक्षम शोधकर्ताओं। HPSCs से melanocytes के भेदभाव के लिए पहले प्रकाशित प्रोटोकॉल differentiations के 6 सप्ताह का समय की आवश्यकता है और एल Wnt3a कोशिकाओं 12 से वातानुकूलित माध्यम से संवर्धन कोशिकाओं शामिल है। प्रोटोकॉल पहले मीका एट अल द्वारा प्रस्तुत किया। और यहाँ वर्णित तीन सप्ताह में pigmented कोशिकाओं का उत्पादन और अस्पष्टता और वातानुकूलित माध्यम से जुड़े विसंगतियों को हटा। melanocytes की गिरफ्तारीई तंत्रिका शिखा, रीढ़ के लिए अद्वितीय कोशिकाओं का एक प्रवासी आबादी से निकाली गई। तंत्रिका शिखा gastrulation के दौरान परिभाषित और तंत्रिका प्लेट के किनारे पर कोशिकाओं की आबादी का प्रतिनिधित्व करता है, तंत्रिका और गैर तंत्रिका बाहरी झिल्ली के बीच की सीमा है। Neurulation के दौरान, तंत्रिका ऊतक तंत्रिका सिलवटों, जो पृष्ठीय midline न्यूरल ट्यूब 13,14, जिसके परिणामस्वरूप पर एकाग्र फार्म के लिए एक तंत्रिका थाली से विकसित। तंत्रिका शिखा कोशिकाओं, न्यूरल ट्यूब की छत की थाली से उभरने पृष्ठदंड विपरीत, और दूर पलायन विभेदित कोशिकाओं की एक विविध आबादी को जन्म देने से पहले mesenchymal संक्रमण के लिए एक उपकला से गुजरना। शिखा कोशिकाओं के भाग्य भाग में भ्रूण के शरीर के अक्ष के साथ छत प्लेट की शारीरिक स्थान के आधार पर परिभाषित कर रहे हैं। तंत्रिका शिखा सेल डेरिवेटिव दोनों mesoderm की विशेषता प्रजातियों (चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं, अस्थिकोरक, adipocytes, chondrocytes) और बाह्य त्वक स्तर कोशिकाओं में शामिल हैं (melanocytes, श्वान गएल, न्यूरॉन्स) 14। तंत्रिका शिखा स्टेम कोशिकाओं प्रतिलेखन कारक SOX10 upregulate और प्रतिदीप्ति सक्रिय सेल p75 और HNK1 करने के लिए एंटीबॉडी के साथ छँटाई द्वारा अलग किया जा सकता है। तंत्रिका शिखा कोशिकाओं melanocytes एक melanoblast मंच के माध्यम से गुजरती हैं और upregulate किट और MITF (microphthalmia जुड़े प्रतिलेखन कारक) 6,21 MITF मेलानोसाईट विकास के एक मास्टर नियामक है और एक प्रतिलेखन कारक मेलानोसाईट विकास के बहुत नियंत्रित करने के लिए जिम्मेदार है बनने के लिए 22 नसीब 24। मानव melanoblasts एपिडर्मिस जहां वे या तो बालों के उभार में या (रंजकता इकाइयों के गठन) एपिडर्मिस में केरेटिनकोशिकाओं से घिरा हुआ परिपक्व, रंजित melanocytes के लिए व्यापारियों के रूप में काम करने के लिए आने से बेसल परत की ओर पलायन। भेदभाव और pigmented melanocytes में melanoblasts की परिपक्वता मेलेनिन उत्पादन मार्ग (TYRP1, Tyr, OCA2 के बाल बल्ब के उपनिवेशवाद और अभिव्यक्ति और साथ सहवर्ती होती हैPMEL) 25,26। रोगियों से मानव melanocytes और melanoblasts अलग, महंगा मुश्किल और मात्रा में सीमित है। इस प्रोटोकॉल शोधकर्ताओं ने एक अच्छी तरह से परिभाषित, तेजी, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य स्केलेबल, और सस्ती सेल छँटाई के बिना विधि में hPSCs (प्रेरित या भ्रूण) melanocytes या मेलानोसाईट व्यापारियों में अंतर करने में सक्षम बनाता है। प्रोटोकॉल पहले से इस्तेमाल किया गया था जब रंजकता बीमारियों के साथ रोगियों से IPSCs फर्क रोग विशिष्ट दोष की पहचान करने के लिए।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Innovative Cell Technologies</td>
			<td>AT104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>apo human transferrin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic Acid (L-AA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4034</td>
			<td>100 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 (B27 Supplement)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Mercaptoethanol</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>21985-023</td>
			<td>10 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BMP4</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>314-bp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR99021</td>
			<td>Tocris-R&#38;D Systems</td>
			<td>4423</td>
			<td>6 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera toxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8052</td>
			<td>50 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cAMP (cyclicAMP)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D0627</td>
			<td>100 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2915-100MG</td>
			<td>50 &#956;M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM - Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>11985-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12 - Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium: Nutrient Mixture F-12</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>1133--032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12 powder</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12500-096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDN3 (Endothelin-3, human)</td>
			<td>American Peptide Company</td>
			<td>88-5-10B</td>
			<td>100 &#956;M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356008</td>
			<td>200 &#956;g/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gelatin (PBS without Mg/Ca)</td>
			<td>in house</td>
			<td></td>
			<td>0.1% in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ITS+ Universal Culture Supplement Premix&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KSR (Knockout Serum Replacement)</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>10828-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Knockout DMEM</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>10829-018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LDN193189</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>04-0074</td>
			<td>100 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low glucose DMEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11885-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel matrix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354234</td>
			<td>Dissolve 1:20 in DMEM/F12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCDB201 Medium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM minimum essential amino acids solution</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>11140-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse embryonic fibroblasts (7 million cells/vial)</td>
			<td>GlobalStem</td>
			<td>GSC-8105M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Laminin-I</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>3400-010-01</td>
			<td>1 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal medium</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>21103049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>10,000 U/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L Omithin hydrobromide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3655</td>
			<td>15 mg/ml&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8783</td>
			<td>0.032g in 100ml 100% ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Putrescine dihydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF2 (Recombinant human FGF basic)</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>233-FB-001MG/CF</td>
			<td>10 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB431542</td>
			<td>Tocris-R&#38;D Systems</td>
			<td>1814</td>
			<td>10 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Selenite</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCF (Stem Cell Factor, recombinant Human)&#160;</td>
			<td>Peprotech Inc.</td>
			<td>300-07</td>
			<td>50 &#956;g/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TYRP1 (G-17) Antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>10443</td>
			<td>1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TYRP2 Antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>74073</td>
			<td>1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.05%)</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>25300-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632 dihydrochloride</td>
			<td>Tocris-R&#38;D Systems</td>
			<td>1254</td>
			<td>10 mM</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

feeder-free derivation of melanocytes from human pluripotent stem cells

Human pluripotent stem cells (hPSCs) represent a platform to study human development in vitro under both normal and disease conditions. Researchers can direct the differentiation of hPSCs into the cell type of interest by manipulating the culture conditions to recapitulate signals seen during development. One such cell type is the melanocyte, a pigment-producing cell of neural crest (NC) origin responsible for protecting the skin against UV irradiation. This protocol presents an extension of a currently available in vitro Neural Crest differentiation protocol from hPSCs to further differentiate NC into fully pigmented melanocytes. Melanocyte precursors can be enriched from the Neural Crest protocol via a timed exposure to activators of WNT, BMP, and EDN3 signaling under dual-SMAD-inhibition conditions. The resultant melanocyte precursors are then purified and matured into fully pigmented melanocytes by culture in a selective medium. The resultant melanocytes are fully pigmented and stain appropriately for proteins characteristic of mature melanocytes.

इस प्रोटोकॉल इन विट्रो फीडर से मुक्त, लागत, कुशल, और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीके से hPSCs से पूरी तरह pigmented, परिपक्व melanocytes पाने के लिए एक तरीका प्रदान करता है। HPSC व्युत्पन्न melanocytes के लिए प?...

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Feeder-free Derivation of Melanocytes from Human Pluripotent Stem Cells

मानव स्टेम कोशिकाओं से melanocytes के फीडर मुफ्त व्युत्पत्ति

यह काम एक तंत्रिका शिखा के माध्यम से मानव स्टेम कोशिकाओं से pigmented, परिपक्व melanocytes उत्पादन और एक फीडर से मुक्त, 25 दिन प्रोटोकॉल का उपयोग करने के लिए एक मध्यवर्ती चरण melanoblast इन विट्रो भेदभाव प्रोटोकॉल का वर्णन है।

Human pluripotent stem cells (hPSCs) represent a platform to study human development in vitro under both normal and disease conditions. Researchers can ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Derivation of Cardiac Progenitor Cells from Embryonic Stem Cells

भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से कार्डिएक पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं की व्युत्पत्ति

Cardiac progenitor cells (CPCs) have the capacity to differentiate into cardiomyocytes, smooth muscle cells (SMC), and endothelial cells and hold great ...

Efficient Derivation of Retinal Pigment Epithelium Cells from Stem Cells

स्टेम सेल से रेटिना वर्णक उपकला कोशिकाओं के कुशल व्युत्पत्ति

No cure has been discovered for age-related macular degeneration  (AMD), the leading cause of vision loss in people over the age of 55. AMD is complex ...

Derivation of Highly Purified Cardiomyocytes from Human Induced Pluripotent Stem Cells Using Small Molecule-modulated Differentiation and Subsequent Glucose Starvation

छोटे अणु संग्राहक भेदभाव और इसके बाद ग्लूकोज भुखमरी का प्रयोग मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल से उच्च शुद्ध cardiomyocytes की व्युत्पत्ति

Human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes (hiPSC-CMs) have become an important cell source to address the lack of primary cardiomyocytes ...

Three-dimensional Quantification of Dendritic Spines from Pyramidal Neurons Derived from Human Induced Pluripotent Stem Cells

मानव प्रेरित स्टेम कोशिकाओं से व्युत्पन्न पिरामिड न्यूरॉन्स से वृक्ष के समान spines के तीन आयामी मात्रा

Dendritic spines are small protrusions that correspond to the post-synaptic compartments of excitatory synapses in the central nervous system. They are ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral T Cells Using Sendai Virus in Feeder-free Conditions

फीडर मुक्त परिस्थितियों में सेंडाइ वायरस का उपयोग मानव परिधीय टी कोशिकाओं से प्रेरित स्टेम कोशिकाओं की पीढ़ी

Recently, iPSCs have attracted attention as a new source of cells for regenerative therapies. Although the initial method for generating iPSCs relied on ...

Defined and Scalable Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Pluripotent Stem Cells

परिभाषित किया है और मानव स्टेम कोशिकाओं से Hepatocyte कोशिकाओं की तरह की स्केलेबल जनरेशन

Human pluripotent stem cells (hPSCs) possess great value for biomedical research. hPSCs can be scaled and differentiated to all cell types found in the ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

पेरीफरल रक्त व्युत्पन्न मानव प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल से चांड्रोसाइट्स को विभेदित करना

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Integration Free Derivation of Human Induced Pluripotent Stem Cells Using Laminin 521 Matrix

लाइमिनिन 521 मैट्रिक्स का उपयोग करने वाले मानव प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल का एकीकरण फ्री डेरीवेशन

Xeno-free and fully defined conditions are key parameters for robust and reproducible generation of homogenous human induced pluripotent stem (hiPS) ...

Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

लिवर सेल में मानव Pluripotent स्टेम सेल के कुशल भेदभाव

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

मानव प्रेरित Pluripotent स्टेम सेल से Somite डेरिवेटिव के विट्रो पीढ़ी में

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...