Name: preparation of acute brain slices using an optimized n-methyl-d-glucamine protective recovery method
Uploaded: 2018-02-26T12:30:00
Duration: 10 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method at JoVE.com

تم تمويل هذا العمل من قبل المعهد الين "علوم المخ". الكتاب أود أن أشكر مؤسسي معهد ألن، بول غ. الين والين جودي، للرؤية والتشجيع، والدعم. ونشكر أيضا على موظفي الدعم التقني الين المعهد للقيام برعاية الحيوان وتربية والتنميط.

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

نا + سبايك في يحسن تشكيل ختم جيجاوهم والمشبك التصحيح تسجيل النجاح النسخة الأولية من أسلوب استرداد واقية نمدج صمم خصيصا للحيوانات الكبار والشيخوخة2،5. كما سعت بعض الأوائل لتطبيق هذه المنهجية على تشريح الدماغ الحيواني الأحداث (أي، الفئران < 30 يوما). ومع ذلك، لوحظ أن خلافا المعلقة أكد بصريا العصبية الحفاظ على مع أسلوب الاسترداد واقية نمدج في هذه الفئة العمرية، تشكيل ختم جيجاوهم يمكن كثيرا ما المماطلة، مما يؤدي إلى تصحيح فشل المشبك تسجيل محاولات. فرضية واحدة هي أن الكاتيونات نمدج محاصرون أكثر سهولة في شرائح المخ الأحداث بالنسبة لشرائح المخ الكبار ويمكن أن تعرقل تشكيل الختم؛ ومع ذلك، يمكن سهولة شكل الأختام جيجاوهم بينما شرائح المخ الأحداث مغمورة تماما في نمدج قام (البيانات لا تظهر)، مما يشير إلى أن نمدج قام في حد ذاته لا يعرقل تشكيل ختم جيجاوهم.
الانتقال السريع من منخفض إلى مرتفع نا+ الحل عند انتهاء الخطوة استرداد شريحة الدماغ الأولية يسبب ضررا لأغشية الخلايا العصبية وازعاجاً في عملية تشكيل الختم. هذا بديهية نظراً لأن الانتقال من منخفض إلى مرتفع نا+ودرجات الحرارة الباردة إلى الحارة وارتفاع دراماتيكية من Ca2 + Mg2 + نسبة مجتمعة تؤدي إلى تجدد نشاط متشابك عفوية ضخمة. هذه مرحلة انتعاش المثبطة في الدماغ التقطيع الداخلي من المرجح أن تعكس الإصابة ضخه بعد إهانة الدماغية. وهكذا، لمواصلة التخفيف من الضرر غشاء الخلايا العصبية في مرحلة الانتعاش الأولى نا+ تدريجي سبايك في إجراء قد أدمج فيه الارتقاء بتركيز Na+ في غرفة الحضانة انتعاش الحمائية نمدج ببطء وتكاثر مرتفعة مع التوقيت الدقيق. كما هو الحال في الإجراء الأصلي لانتعاش الحمائية، مفيد للانفصال الزماني ارتفاع نا+ من درجة الحرارة و Ca2 +/Mg2 + نسبة الارتفاع. ولكن بالإضافة إلى ذلك، نا+ سبايك في الإجراء يؤدي إلى الزيادات الإضافية الصغيرة في تركيز Na+ خارج الخلية عبر النقاط الزمنية المبكرة والزيادات الكبيرة نحو النقاط الزمنية المتأخرة، وبالتالي إتاحة أنسجة المخ الفرصة لاستيعاب أفضل لارتفاع مستويات نا+ . هذا الإجراء هو بديل لتبادل الحلول التدريجية التي تسيطر عليها مضخة نضح أو خطورة خطوط التنقيط الذي يؤدي إلى زيادة مستمرة في مستويات نا+ وتتطلب الاهتمام بتدفق وتدفق لتجنب تجاوز الدائرة شريحة. جدير بالذكر أن هذه نا+ الداخلي سبايك osmolality الحل في قاعة شريحة تدريجيا يرتفع في خلال فترة عدة دقائق قبل الشرائح يتم إرجاعه إلى حل osmolality العادي، ولكن هذا لا تؤثر سلبا على صحة شريحة أو تسجيل التصحيح المشبك النجاح. حلاً قطع osmolality عالية قد استخدمت سابقا لاستعدادات شريحة midbrain حفاظا على نحو أفضل الدوبامين من الخلايا العصبية للتصحيح المشبك تسجيلات57،58، مما يدل على أن هذا مؤقت هايبروسمولاليتي قد تكون مفيدة في بعض السياقات.
قد مددت سبايك في الخطوة الأداة المساعدة هذه المنهجية شريحة الدماغ قبل تنفيذ إجراء أمثل الجمع بين أسلوب استرداد واقية نمدج وتدريجي نا+ لتغطية الأحداث خلال العصور الحيوان الكبار ناضجة. هذا البروتوكول حدثت الآن مناسبة لمجموعة واسعة من الإعمار الحيوان باستخدام واحد وضع قام نمدج الأمثل والإجراء. إذا لزم الأمر، نا+ سبايك في الإجراءات يمكن تطبيقها مع تأخير تدريجيا أطول و/أو أبطأ بالطبع الوقت لتعزيز استمرارية شرائح المخ من كبار السن الحيوانات، وقد قدمنا دليل أساسي لجداول سبايك الموصى بها وفقا للحيوان في السن (انظر الجدول 2). وفي حين أننا قد وفر إطارا أساسيا مناسبة لمجموعة واسعة من التطبيقات، يمكن استكشاف خطوات متقدمة إضافية لزيادة تعزيز السلامة وطول العمر من شرائح المخ من الحيوانات الكبار والشيخوخة. على سبيل المثال، الجلوتاثيون استعادة استراتيجيات فعالة بوجه خاص في هذا الصدد ويمكن تنفيذها كما هو موضح في مكان آخر2،6.
تحسين الإنتاجية للطعن في التجارب تحليل اتصال متشابك بتسجيل التصحيح المشبك هو تطبيق تطلبا تتطلب ممتازة الحفاظ على هيكل الخلايا العصبية ووظيفة من أجل تحقيق وثوقية عالية النجاح. عدد الخلايا العصبية التي سيتم تسجيلها في نفس الوقت ترتفع خطيا، يرتفع مستوى الصعوبة التقنية أعلاه-خطيا. هناك العديد من وسائط الفشل، وواحد من الأسباب الأكثر شيوعاً لحالات الفشل هو عدم القدرة بشكل كاف جيجاوهم الأختام على واحد أو أكثر من الخلايا المستهدفة. هذا هائلة يمكن أن تبطئ التقدم، لا سيما عند ثلاثة أو يجب أن تسجل المزيد من الخلايا العصبية في وقت واحد. متسقة مع العثور على أسرع وقت تشكيل ختم جيجاوهم مع أسلوب الاسترداد واقية نمدج الأمثل، كان هناك تحسن ملحوظ في نسبة النجاح والإنتاجية من تجارب تسجيل التصحيح متعددة الخلايا العصبية المشبك مع الكبار على حد سواء المحورة وراثيا شرائح المخ الماوس والشرائح المخ الجراحة العصبية البشرية الكبار. تحسين كفاءة ويعزى يكاد يكون من المؤكد لتشكيل الختم جيجاوهم أسرع وأكثر موثوقية والحفاظ على الخلايا العصبية المحسنة للشرائح مع هذا البروتوكول. على الرغم من أن يركز هذا البروتوكول على فوائد صراحة للتصحيح المشبك تسجيل التطبيقات، يتوقع تحقيق مكاسب مماثلة للتطبيقات التجريبية الصعبة الأخرى حيث صلاحية شريحة الدماغ أمر بالغ الأهمية.

إعداد شريحة الدماغ الحادة نظام أساسي نموذج تجريبي في علم الأعصاب. لما يقرب من نصف قرن، مكن هذا المنهاج الدراسات الفنية ديناميكية الدماغ الحية عبر طائفة واسعة من مناطق الدماغ التشريحية والأنواع الحيوانية. إذا كان التطبيق المقصود هو الكيمياء الحيوية، والتصوير الوظيفي، مورفولوجيا، أو الكهربية، من أهمية قصوى لضمان سلامة الأمثل والجدوى لشرائح الأنسجة. لهذا السبب أن إعداد شريحة الدماغ القوارض الأحداث فائقة المرونة (أي، أصغر سنا من يوم الولادة 30 للفئران) كانت الأكثر تفضيلاً للتاريخ. صعوبة الحصول على الدماغ بما فيه الكفاية صحية شرائح من بالغ ناضجة والشيخوخة الحيوانات قد ثبت أن يشكل تحديا كبيرا بالنسبة لمعظم وفرضت قيودا شديدة على دراسة الهندسة المعمارية الوظيفية للدماغ ناضجة. وهذا صحيح بصفة خاصة للتصحيح المشبك تسجيل، أسلوب الذي يتطلب الحفاظ على الخصائص المورفولوجية والوظيفية ممتازة ولا غنى عنه لوصف الخصائص الجوهرية ومتشابك مفصلة الخلايا العصبية الوحيدة التي تم تحديدها. للعقود العديدة الماضية، اعتمدت الغالبية العظمى من التصحيح المشبك اليكتروفيسيولوجيستس على أسلوب 'قطع واقية' استخدام استبدال السكروز منخفضة نا+ قام1 لإعداد شرائح المخ السليمة من الأحداث، وإلى حد أقل الآن مدى، الحيوانات البالغين الشباب. يقوم هذا الأسلوب على أساس أن تدفق Na+ السلبي ودخول المياه اللاحقة وخلية تورم خلال الخطوة قطع شريحة هو إهانة المهيمن الذي يؤدي إلى بقاء الفقراء من الخلايا العصبية، لا سيما لتلك الخلايا العصبية الموجودة في الطبقات السطحية التي الأكثر احتمالاً للحفاظ على الصدمة المباشرة من الحركة بليد. ومع ذلك، الأسلوب قطع واقية ما زال يترك الكثير على المستوى المطلوب لإعداد شريحة الدماغ من الحيوانات الكبار ناضجة بغض النظر عن وضع خاص قام ينفذ.
وقد تم حل هذه المشكلة بسيطة ولكن فعالة ووصف2،،من34،،من56 ووصف طريقة شريحة الدماغ 'استعادة الحماية'. النسخة الأصلية من هذا الأسلوب يستخدم قام استبدال-نمدج، كما اعتبرت نمدج الأكثر تنوعاً والفعال بين مختلف المرشحين الصوديوم أيون البدائل الأخرى (بما فيها تريس ومادة الكولين، السكروز والجلسرين). وضع وسائل الإعلام قد عزز إضافة حبيس لمقاومة ذمة شريحة الدماغ وتوفير درجة الحموضة أقوى التخزين المؤقت7، فضلا عن إضافة المكملات الغذائية للتصدي للآثار الضارة للأكسدة (الجدول 1). تقرر تجريبيا أن حضانة انتعاش أولى خطوة في انخفاض نا+، انخفاض Ca2 +، وارتفاع Mg2 + نمدج قام فورا بعد تشريح أنسجة المخ الكبار كانت ضرورية وكافية لتحسين الخلايا العصبية الحفاظ على أكثر من مجموعة واسعة من مناطق الدماغ وأنواع الخلايا الحيوانية الإعمار3،،من56.
خاصة، ويمكن الاطلاع على التجسيد سابق لماذا الآن أطلق عليها اسم الأسلوب الاسترداد الواقية في الأدب1،،من89،10،11،12، 13، على الرغم من الإمكانات الكاملة لتنضج الكبار والشيخوخة الدماغ الحيواني تسجيل المشبك شريحة والتصحيح لم يكن يعترف أو أظهر في هذه الأعمال السابقة. وبالإضافة إلى ذلك، تواصل الاختلافات الإجرائية الدقيقة تظهر دعما لتطبيقات تجريبية محددة4،14،،من1516. الهيئة الجماعية لأعمال هذه المجموعات البحثية العديدة يضفي ثقة عالية في متانة الأسلوب الاسترداد واقية للحفاظ على النسيج محسنة. أسلوب الاسترداد واقية نمدج لديه الآن على نطاق واسع اعتمدت ونفذت في العديد من الدراسات البحثية المنشورة استخدام الدماغ الحيواني الكبار شريحة الأعمال التحضيرية. تمتد هذه الدراسات شريحة الحادة نيوكورتيكال3،،من1718،19،هيبوكامبال15،،من2021، سترياتال22 , 23 , 24و midbrain25،،من2627،،من2829و31،هيندبرين،من3032، 33 , مناطق 34 ، ومجموعة متنوعة من أنواع العصبي ونيورومودولاتور بما في ذلك جلوتاماتيرجيك4،30جابايرجيك18،،من2031،35 ،36، تتميز24،29،،من3738، اتروبين14،،من3738، 39، نورادرينيرجيك40و28 هرمون السيروتونين27،كبيرة. الأسلوب أيضا مناسبة لمراقبة نشاط الخلايا العصبية في شرائح المستمدة من الحيوانات المحورة وراثيا3،39 أو أثر في فيفو حقن الفيروسية17،27، أوبتوجينيتيك 28،40،41،،من4243، كالنحو الوظيفي وكذلك Ca2 + تصوير نشاط الخلايا العصبية2،44 ،،من4546. وكانت تحليلات قصيرة الأجل اللدونة4،،من4748 وتنوع أشكال طويلة الأجل اللدونة16،،من3548 وأفادت. دراسة أجريت مؤخرا تطبيق الأسلوب الاسترداد واقية نمدج لتيسير السبر واسعة النطاق ومنهجية الاتصال متشابك في القشرة البصرية في الماوس الكبار ناضجة الدماغ الشرائح باستخدام أوكتوباتش تسجيل التكوين49 -قوية مظاهرة من فائدة ومتانة من هذا الأسلوب. أسلوب الاسترداد الواقية حتى طبق بنجاح في السياقات التجريبية غير المتوقعة سابقا، مثل، تحسين الحفاظ على المفرج وبيريسيتيس في الدماغ القشرية الكبار شرائح50، المشبك التصحيح تسجيل من زرع السكان إينتيرنيورون في 1 – 1.5 سنة مرض الزهايمر الماوس نماذج20، والدماغ الكبار شريحة مستقبلات الاتجار مقايسة51.
البروتوكول التالي يصف إجراءات خطوة بخطوة لتنفيذ أسلوب استرداد واقية نمدج أمثل لإعداد شريحة الدماغ لتحسين جدوى شرائح الدماغ الحادة. وتناقش المبادئ لتحسين المحافظة على الخلايا العصبية، فضلا عن إثبات الفوائد الواضحة لهذه المنهجية المشبك معقدة متعددة الخلايا العصبية التصحيح تسجيل التجارب في كل من شرائح المخ الماوس المعدلة وراثيا البالغين الصغار والكبار ناضجة شرائح المخ البشري جراحة الأعصاب. قد صودق في البروتوكول التالي للفئران من 21 يوما إلى أكثر من سنة، كذلك أما بالنسبة للعينات البشرية جراحة الأعصاب المستمدة من المرضى البالغين.

<table style="width:948px;" width="948">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:319px;height:21px;">Compresstome VF-200</td>
			<td style="width:185px;">Precisionary Instruments</td>
			<td style="width:131px;">VF-200</td>
			<td style="width:315px;">Vibrating tissue slicer (recommended)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-methyl-D-glucamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M2004</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5405</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Phosphate monobasic dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>71505</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H4034</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Ascorbate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A4034</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thiourea</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8656</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5280</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C7902</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Magnesium Sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M1880</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2,2,2-Tribromoethanol&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T48402</td>
			<td>Anesthetic component 1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-methyl-2-butanol&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>240486</td>
			<td>Anesthetic component 2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Curved blunt forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11065-07</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fine dissecting scissors (supercut)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-09</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large heavy duty scissors 7&#39;&#39;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14000-18</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Metal spatula</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z511455-1PAK</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blades</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89031-954</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Brain Slice Keeper-4</td>
			<td>Automate Scientific</td>
			<td>S-BSK4</td>
			<td>brain slice holding chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">nylon netting&#160;</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0198</td>
			<td>For building small slice recovery chambers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pyrex glass beakers (250 mL)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89090-434</td>
			<td>For building small slice recovery chambers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">35 mm plastic dish, round</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100488-376</td>
			<td>For building small slice recovery chambers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gas diffuser stones (10 &#181;m)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>59277</td>
			<td>For constant carbogenation (fine bubbles)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agarose Type I-B</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A0576</td>
			<td>For embedding brain specimens</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro loader tips</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22491229</td>
			<td>For filling patch clamp electrodes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sylgard</td>
			<td>VWR</td>
			<td>102092-312</td>
			<td>For making a custom dissecting platform</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hydrochloric acid&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H1758-100ML</td>
			<td>For pH adjustment of media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Hydroxide&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>221465-25G</td>
			<td>For pH adjustment of media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Hydroxide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>221473</td>
			<td>For pH adjustment of media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plastic transfer pipets 3 mL graduated</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89497-676</td>
			<td>For slice transfer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zirconium ceramic injector blades</td>
			<td>Cadence Specialty Blades</td>
			<td>EF-INZ10</td>
			<td>http://cadenceinc.com/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KG-33 borosilicate glass capillary w/filament</td>
			<td>King Glass Company</td>
			<td>custom quote</td>
			<td>ID: 0.87mm, OD 1.50mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Biocytin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B4261</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphocreatine disodium</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P7936</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Gluconate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G4500-100G</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EGTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E3889</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mg-ATP</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9187</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Na2-GTP</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>51120</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sucrose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S0389</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heated water bath (2.5L)</td>
			<td>VWR</td>
			<td style="width:131px;">13491-060</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Filter paper rounds</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28456-022</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanoacrylate glue</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B000BQRBO6</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass petri dish</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89000-326</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10X Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5493</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">30 mL syringes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD302832</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 mL syringes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD-309628</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">25 5/8 gauge needles</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-292</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thermomixer (w/1.5 mL tube block)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89232-908</td>
			<td>To keep agarose molten&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of acute brain slices using an optimized n-methyl-d-glucamine protective recovery method

هذا البروتوكول دليل عملي لأن N-الميثيل-د-أسلوب استرداد واقية جلوكاميني (نمدج) من إعداد شريحة الدماغ. العديد من الدراسات الأخيرة أقرت بفائدة هذا الأسلوب لتعزيز المحافظة على الخلايا العصبية وبقاء شريحة الدماغ عموما. وسهلت تنفيذ هذا الأسلوب من أوائل الشركات التي تبنته تحقيقات مفصلة في وظيفة المخ باستخدام تطبيقات تجريبية متنوعة والتي تغطي مجموعة واسعة من الإعمار الحيواني ومناطق الدماغ وأنواع الخلايا. ويرد خطوات للقيام بالاسترداد واقية الدماغ شريحة تقنية استخدام الأمثل نمدج السائل الدماغي النخاعي الاصطناعية (قام) وسائط الإعلام صياغة وإجراءات تعزيز موثوقية الحصول على شرائح المخ السليمة لتصحيح المشبك الكهربية. مع هذا النهج المحدث، ويلاحظ تحسن كبير في السرعة وموثوقية جيجاوهم ختم تشكيل أثناء التصحيح المستهدفة المشبك تسجيل تجارب مع الحفاظ على المحافظة على الخلايا العصبية ممتازة، مما ييسر تحديا تطبيقات تجريبية. وترد نتائج الممثل من المشبك التصحيح متعددة الخلايا العصبية تسجيل تجارب للاعتداء أعد اتصال متشابك في الدماغ نيوكورتيكال شرائح من الشباب البالغين الفئران المحورة وراثيا وناضجة العينات الجراحة العصبية البشرية الكبار. وعلاوة على ذلك، الأسلوب الاسترداد واقية نمدج الأمثل من تشريح الدماغ متوافق مع الحيوانات الأحداث والبالغين على حد سواء، وبالتالي حل القيد من المنهجية الأصلية. وباختصار، يمكن تنفيذ وضع واحد للوسائط والدماغ التقطيع الداخلي عبر مختلف الأنواع والإعمار لتحقيق المحافظة على استمرارية والأنسجة ممتازة.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method at JoVE.com

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

يوضح هذا البروتوكول تنفيذ الأمثل N-الميثيل-د-أسلوب استرداد واقية جلوكاميني (نمدج) من إعداد شريحة الدماغ. يتم استخدام صيغة وسائط واحد موثوق بها الحصول على شرائح المخ السليمة من الحيوانات من أي سن وتطبيقات تجريبية متنوعة.

إعداد شرائح الدماغ الحادة باستخدام محسن N-الميثيل-د-أسلوب استرداد واقية جلوكاميني

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

إعداد Oligomeric β اميلويد 1-42 والتعريفي للعاهة اللدونة متشابك على شرائح الحصين

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

إعداد شرائح الحاد المنطقة Subventricular للتصوير الكالسيوم

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

في الجسم الحي بعد الولادة التثقيب الكهربائي والوقت الفاصل بين التصوير من أرومة عصبية الهجرة في الدماغ الحادة ماوس شرائح

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Electrophysiological and Morphological Characterization of Neuronal Microcircuits in Acute Brain Slices Using Paired Patch-Clamp Recordings

الكهربية والمورفولوجية توصيف العصبية الحادة رقائق في الدماغ عن طريق شرائح الموثوقة التصحيح، المشبك التسجيلات

The combination of patch clamp recordings from two (or more) synaptically coupled neurons (paired recordings) in acute brain slice preparations with ...

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

التحقيق في متشابك وسم / القبض على والصليب التقاط باستخدام الحاد شرائح الحصين من القوارض

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

تسجيل اللدونة متشابك في شرائح هيبوكامبال الحاد تحتفظ في صغيرة الحجم-إعادة التدوير، ونضح-، وغمر من نوع نظام الدائرة

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Optimized Management of Endovascular Treatment for Acute Ischemic Stroke

الإدارة الأمثل لعلاج اللمفاوية الحادة والسكتات الدماغية

This manuscript describes a streamlined protocol for the management of patients with acute ischemic stroke, which aims at the minimization of time from ...

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

وثمة نهج بديل لدراسة الأحداث الرئيسية في نيوروديجينيريشن باستخدام شرائح المخ الفئران السابقين فيفو

Despite&#160;numerous studies that attempt to develop reliable animal models&#160;which reflecting the primary processes underlying neurodegeneration, ...

Preparation of Acute Spinal Cord Slices for Whole-cell Patch-clamp Recording in Substantia Gelatinosa Neurons

إعداد شرائح الحبل الشوكي الحاد لتسجيل كامل الخلية التصحيح-المشبك في الخلايا العصبية جيلاتينوسا الدماغ

Recent whole-cell patch-clamp studies from substantia gelatinosa (SG) neurons have provided a large body of information about the spinal mechanisms ...

Two-photon Imaging of Microglial Processes' Attraction Toward ATP or Serotonin in Acute Brain Slices

اثنين-فوتون تصوير الجذب Microglial العمليات تجاه ATP أو السيروتونين في الدماغ الحادة شرائح

Microglial cells are resident innate immune cells of the brain that constantly scan their environment with their long processes and, upon disruption of ...