Name: preparation of acute brain slices using an optimized n-methyl-d-glucamine protective recovery method
Uploaded: 2018-02-26T12:30:00
Duration: 10 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method at JoVE.com

Dette arbejde blev finansieret af Allen Institute for hjernen videnskab. Forfatterne vil gerne takke Allen Institute stiftere, Paul G. Allen og Jody Allen, for deres vision, opmuntring og støtte. Vi takker også Allen Institute teknisk support personale til at udføre dyrs pleje, opdræt og genotypebestemmelse.

Procedurer, der involverer Transgene mus er blevet godkendt af institutionelle Animal Care og brug udvalg (IACUC) på Allen Institute for hjernen videnskab. Både mandlige og kvindelige C57BL/6 mus (vægtområde 10-30 g) blev brugt i disse eksperimenter. Nogle af de repræsentative resultater beskriver data indsamlet fra levende menneskelige hjerne skiver. Neocortical væv prøver blev indhentet under neurosurgeries for tumor removal. Det var nødvendigt at fjerne den overliggende neocortical væv for at få adgang til den syge væv. Informeret patientsamtykke blev opnået i alle tilfælde for anvendelse af neurokirurgiske væv i forskningsøjemed under en protokol, der er godkendt af den institutionelle revision bestyrelse svensk Medical Center.
1. forberedelse af medier og reagenser (tabel 1)
Bemærk: Løsninger bør gøres op i renset vand, der er fri for spor metaller og andre urenheder. Det anbefales, at løsninger gøres frisk på dagen af forsøget, selv om ubrugte løsninger kan opbevares ved 4 ° C i op til 1 uge, hvis det ønskes. 1 liter af hver formuleringen ovenfor er tilstrækkelig for 1 – 2 udskæring procedurer. Alle aCSF løsninger skal være mættet med carbogen (95% O2/5% CO2) før brug for at sikre stabil pH buffer og tilstrækkelig iltning. PH-værdien af alle løsninger bør tilpasses 7.3 7.4 og osmolalitet målt og justeret til 300-310 mOsmol/kg.
<ol><li>Forberede NMDG-HEPES aCSF (i mM): 92 NMDG, 2.5 KCl, 1,25 NaH2PO4, 30 NaHCO3, 20 HEPES, 25 glukose, 2 thiourinstof, 5 Na-Ascorbat, 3 Na-pyruvat, 0,5 CaCl2·2H2O og 10 MgSO4·7H2O. Titrate pH til 7,3 –7.4 med 17 mL +/-0,5 mL 5 M saltsyre. Bemærk: Denne titrering skridt bør ideelt udføres før tilsætning af divalent kationer til at undgå nedbør; dog kan nedbøren vendes ved tilpasning af pH-værdien til den fysiologiske interval.</li>
	<li>Forberede HEPES holding aCSF (i mM): 92 NaCl, 2.5 KCl, 1,25 NaH2PO4, 30 NaHCO3, 20 HEPES, 25 glukose, 2 thiourinstof, 5 Na-Ascorbat, 3 Na-pyruvat, 2 CaCl2·2H2O og 2 MgSO4·7H2O. Titrate pH til 7,3-7.4 med flere dråber koncentreret 10 N NaOH.</li>
	<li>Forberede optagelse aCSF (i mM): 124 NaCl, 2.5 KCl, 1,25 NaH2PO4, 24 NaHCO3, 12,5 glukose, 5 HEPES, 2 CaCl2·2H2O og 2 MgSO4·7H2O. Titrate pH til 7,3-7.4 med et par dråber koncentreret 10 N NaOH.</li>
	<li>Forberede Na+ spike-løsning (2 M): 580 mg af NaCl opløses i 5 mL frisk tilberedte NMDG-HEPES aCSF. Dette er nok løsning for en hjerne skive prep.</li>
	<li>Forberede 2% Agarosen anvendes til integrering af væv. Opløs 2 g af Agarosen type 1B (Se Tabel af materialer) i 100 mL 1 x PBS og mikroovn indtil bare kogende. Swirl for at blande, så hæld blandingen i en steril 10 cm petriskåle og lad den størkne. Gemme Agarosen plade i en forseglet plasticpose ved 4 ° C indtil brug.</li>
	<li>Forberede injicerbare bedøvelsesmiddel arbejder stamopløsning. Bland 2,5 g af 2,2,2-Tribromoethanol med 5 mL 2-methyl-2-butanol og derefter gradvist opløses i 200 mL PBS, pH 7,0-7,3. Filtrer stamopløsningen med et 0,22 µm filter før brug og opbevares ved 4 ° C beskyttet mod lys. Bemærk: Kontakt respektive animalske brug Udvalget retningslinjer og regler for fastlæggelse af proceduren for narkose arbejder stamopløsning udløb og bortskaffelse.</li>
</ol>2. opsætning af udskæring Station
<ol><li>Oprettet den udskæring station med væv slicer maskine og kirurgiske instrumenter (Se Tabel af materialer). At kalibrere slicer maskine, vedhæfte en zirconium keramiske injektor klinge til blade arm ved hjælp af hurtig-klæbende lim, derefter indsætte præparatholderen og justere forkanten af blade til modellen indehaveren rand efterlader et lille hul for at sikre, at vingen ikke skraber metal. Bemærk: Hvis klinge kant ikke er fysisk beskadiget det kan genbruges til mange uger eller endda måneder uden udskiftning. Forskellige væv slicer modeller er kommercielt tilgængelige, hvoraf mange kan levere fremragende ydelse når optimalt kalibreret. Det ideelle instrument bør have minimal z-aksen afbøjning, enten direkte målte og tunet eller empirisk observeret.</li>
	<li>Oprette et 250 mL bægerglas fyldt med 200 mL af NMDG-HEPES aCSF og før chill på isen med konstant carbogenation (anbragt via en gas diffuser sten nedsænket i medierne) til > 10 min. Bemærk: Denne løsning vil blive brugt til transcardial perfusion og fylde udskæring maskine reservoiret under skæring.</li>
	<li>Oprettet den oprindelige hjernen skive opsving kammer fyldt med 150 mL af NMDG-HEPES aCSF (opretholde konstant carbogenation) og placere afdeling i en opvarmet vandbad vedligeholdes på 32 – 34 ° C. Bemærk: En skive afdeling efter design af Edwards og Konnerth (1992)52 anbefales til dette trin. Disse kamre kan foretages med let tilgængelige laboratorium elementer (250 mL bægerglas, nylon mesh netting, 50 mL konisk tube, 35 mm plast runde parabol). Pleje skal træffes for at sikre, at udsnittet netting forbliver fri luft bobler, især dem, der løbende produceres af carbogen gas boble sten, da disse kan forårsage skiver til at flyde op og blive beskadiget. Netting bør være nedsænket ca 1 cm under overfladen, flydende.</li>
	<li>Oprette en hjerne skive holding kammer; et design med flere uafhængige brønde i en større reservoir anbefales (Se Tabel af materialer). Fyld beholderen med 450 mL af HEPES aCSF og varme til stuetemperatur under konstant carbogenation indtil brug. Bemærk: Hjernen skiver vil blive overført fra den oprindelige opsving kammer til salen til langtidsopbevaring før elektrofysiologiske optagelse. Skal sørges for at sikre, at skive netting forbliver fri for luftbobler på alle tidspunkter.</li>
	<li>Forberede smeltet Agarosen væv indlejring. Brug den åbne ende af en 50 mL konisk hætteglas ligesom en cookie cutter til at skære ud af en blok af 2% Agarosen fra tidligere rede skålen. Løst cap konisk hætteglasset, så mikroovn til 10 – 30 s indtil Agarosen er bare smeltet. Ikke overophede.</li>
	<li>Hæld den smeltede Agarosen i 1,5 mL rør. Vedligeholde Agarosen i smeltet tilstand ved hjælp af en thermomixer sat til 42 ° C under kraftig omrystning. Omhyggeligt sørge for, at den smeltede Agarosen ikke størkne for tidligt.</li>
	<li>Placer tilbehøret nedkøling blok for udsnitsværktøj på is pre-afkøle på dette tidspunkt.</li>
</ol>3. Transcardial Perfusion
Bemærk: Transcardial perfusion procedure er et vigtigt skridt, når du arbejder med voksne dyr og er vigtigt at opnå en hurtig nedkøling af hjernen og langsommere stofskifte via hjernen infusion af lav Na+, lav Ca2 +/ høj Mg2 + aCSF løsning. Transcardial perfusion tjener også til at klare røde blodlegemer fra hjernen Vaskulaturen, hvilket reducerer autofluorescence, der kan interferere med visualisering og målretning af fluorescently mærket cellepopulationer i transgene linjer. Det er ikke tilrådeligt at udelade transcardial perfusion.
<ol><li>Dybt bedøver mus ved intraperitoneal injektion af bedøvelsesmiddel arbejder stamopløsning (250 mg / kg: 0,2 mL af 1,25% bedøvelsesmiddel arbejde stamopløsning pr. 10 g kropsvægt, se Tabel af materialer). Efter ~ 2-3 min, kontrollere tilstrækkelig dybde af anæstesi ved at vurdere tå knivspids refleks. Hvis det er påkrævet, indsprøjtes en ekstra mængde bedøvelsesmiddel arbejder lager og revurdere tå knivspids refleks efter en anden 2-3 min.</li>
	<li>Indlæse en 30 mL sprøjte med 25 mL af carbogenated NMDG-HEPES aCSF fra pre kølet 250 mL bægerglas (2-4 ° C er optimal, i modsætning til sjappet eller frosne løsning). Vedhæfte en 25 5/8 gauge kanyle.</li>
	<li>Med musen på ryggen, pin ned forepaws og bagpoterne for stabilitet. En 15 cm glas petriskål fyldt med hærdet silikone fungerer godt som base.</li>
	<li>Ved hjælp af en skalpel, foretage en tværgående snit til at åbne brysthulen på niveau med mellemgulvet. Brug fine saks til at skære gennem brystkassen på enten side tager sig at undgå klipning hjerte og lunger.</li>
	<li>PIN tilbage center del af brystkassen til at eksponere hjertet. Indsætte nålen 30 mL sprøjte ind i venstre hjertekammer og skære den højre atrium med fine saks til at tillade blodet at afslutte hjertet.</li>
	<li>Trykkes sprøjte stemplet ved hjælp af manuel konstant pres og perfuse dyr med den kølede NMDG-HEPES aCSF med en sats på ~ 10 mL/min. Bemærk: Hvis perfusion er vellykket leveren vil ændre farve fra mørkerød til bleg gul, og i nogle tilfælde klare væsker kan observeres spændende næsebor i slutningen af proceduren.</li>
</ol>4. hjerne dissektion og udskæring
<ol><li>Hug hovedet af dyret. Brug en skalpel til at åbne huden på hovedet og udsætte kalot.</li>
	<li>Brug fine super-cut saks til at skære væk huden over kalot og gøre små indsnit lateralt på enten side på den caudale/ventral bunden af kraniet. Foretage yderligere lavvandede nedskæringer startende fra den caudale/dorsale aspekt af kraniet i den rostralt retning op svinekroppens midterlinje pas på ikke for at skade den underliggende hjernen. Gøre en endelig 'T' skære vinkelret med midterlinjen på niveau med den olfaktoriske pære. Bemærk: Pleje skal tages til at sikre, at ingen skade sker til hjernen region(er) af interesse. Især på intet tidspunkt bør der være nogen trykstyrke kraft, selve hjernen.</li>
	<li>Bruge runde-spids pincet til at forstå kraniet startende fra den rostralt-mediale aspekt og skræl tilbage mod den caudale-lateral retning. Gentag til begge sider til at knække åbne og fjerne de dorsale halvdele af kalot at eksponere hjernen. Forsigtigt øse ud intakt hjernen i bægerglasset af pre kølet NMDG-HEPES aCSF. Tillad hjernen til ensartet cool ~ 1 minut.</li>
	<li>Brug den store spatel til at løfte hjernen ud af bægerglasset og på petriskålen dækket med filtrerpapir. Trim og blokere hjernen i henhold til den foretrukne vinkel af udskæring og ønskede hjernen region af interesse. Arbejde hurtigt for at undgå længerevarende iltmangel under håndteringen. Bemærk: Mange udskæring vinkler er muligt. Den nøjagtige blokerende metode og udskæring vinkel vil afhænge af den nøjagtige hjernen regionen, celletype og kredsløb undersøges.</li>
	<li>Anbringe den hjerne blok til præparatholderen ved hjælp af selvklæbende lim. Trække det inderste stykke præparatholderen nok til at trække hjernen blok fuldt inde. Hæld den smeltede Agarosen direkte ind i holderen, indtil hjernen blok er fuldt dækket i Agarosen. Klemme pre afkølede tilbehøret nedkøling blok omkring præparatholderen for ~ 10 s indtil Agarosen er størknet.</li>
	<li>Indsæt præparatholderen i beholderen på pålægsmaskine maskinen og kontroller korrekt justering. Fyld beholderen med resterende pre kølede, iltet NMDG-HEPES aCSF fra 250 mL baegerglas og flytte en boble sten i reservoiret for varigheden af udskæring for at sikre tilstrækkelig iltning.</li>
	<li>Justere mikrometer for at begynde at fremme Agarosen indstøbte hjernen modellen. Start udsnitsfilteret og empirisk justere advance hastighed og svingning frekvens til det ønskede niveau. Bemærk: Begge indstillinger skal være i det lave område. For de bedste resultater, en enkelt pass af klinge arm skal tage ca 20 s og svingning, der skal producere en meget glat og blid summende støj med ingen åbenlys summende.</li>
	<li>Fortsat fremme og udskæring væv i 300 µm-trin (eller andre foretrukne tykkelse) indtil regionen hjernen af interesse er fuldt sectioned; den samlede tid den udskæring procedure bør være mindre end 15 min.</li>
</ol>5. optimeret NMDG beskyttende inddrivelsesproceduren
<ol><li>Indledende NMDG recovery trin (kritiske trin): efter afslutningen af proceduren for skæring, indsamle op alle udsnittene ved hjælp af en cut-off plast Pasteur pipe t og overføre dem til en pre varmede (34 ° C) indledende opsving kammer fyldt med 150 mL NMDG-HEPES aCSF. Overføre alle skiver i korte træk og starter en timer, så snart alle skiver er flyttet ind i recovery kammeret.</li>
	<li>Se tabel 2 for at bestemme den optimale Na+ spike-i tidsplan mus alder. Bemærk: Denne procedure er en praktisk metode til at opnå en kontrolleret hastighed af genindførelse af Na+ i hjernen skive afdeling og er optimeret til en bestemt hjerne skive afdeling geometri og reservoir produktmængde og -type (Se Tabel af materialer).</li>
	<li>Udføre trinvis Na+ spike-in procedure ved at tilføje de angivne mængder af Na+ spike-løsning på de angivne tidspunkter. Tilføje Na+ spike-løsning direkte ind i Bobleflasken skorstenen indledende opsving kammer til at lette hurtig blanding.</li>
	<li>Overføre alle skiver til HEPES aCSF langsigtede bedrift afdeling vedligeholdes ved stuetemperatur. Tillad skiver til at gendanne til en yderligere 1 time i HEPES holder salen før indlede patch klemme optagelse eksperimenter.</li>
</ol>6. Patch klemme optagelse
Bemærk: De følgende grundlæggende procedurer blot give nogle praktiske overvejelser og er ikke beregnet til at repræsentere detaljerede protokoller for patch klemme optagelser, som disse kan findes andetsteds53,54. En patch klemme Elektrofysiologi riggen er påkrævet for denne ansøgning. Dette vil normalt bestå af en opretstående mikroskop udstyret med infrarøde differential interferens kontrast (IR-DIC) optik og en fluorescens belysning system, en patch klemme forstærker og data digitizer, motoriseret micromanipulator og mikroskop platform, vibrationer isolation tabel, Faradays bur og løsning varme og perfusion system. Prøve kammer og platform skal være konstrueret til neddykket skive optagelse. For multi neuron patch klemme optagelser er en rig udstyret med flere forstærkere, hoved faser og høj kvalitet micromanipulators påkrævet. Derudover opnår de bedste resultater, en rig udstyret med en 900 nm IR band pass filter og matchende optiske komponenter kan varmt anbefales at sikre passende visualisering af celler beliggende > 50 µm dybt i hjernen skiver. Korrekt justering for Kӧhler belysning er også vigtigt for klar visualisering.
<ol><li>Forberede intracellulære pipette løsning (i mM): 130 K-gluconat, 4 KCl, 10 HEPES, 0.3 EGTA, 10 fosforkreatin-Nielsen2, 4 MgATP, 0.3 Na2-GTP, og 13.4 biocytin. Justere pH til 7,35 med 1 M KOH og osmolalitet til 285-290 mOsmol/kg ved hjælp af saccharose, efter behov.</li>
	<li>Forberede patch klemme elektroder fra tykvæggede borsilikatglas kapillærerne; den ideelle patch klemme elektrode har en relativt kort og stumpet taper med en ~ 3 – 6 MOhm fyldt tip modstand i badet.</li>
	<li>Sikre, at sølv elektrode ledninger er korrekt chlorided for at sikre stabile optagelser. Gøre dette (typisk) af sænkes ned i sidste 3-4 mm af sølv wire i flydende blegemiddel i ca 30 min, eller indtil wiren bliver sort.</li>
	<li>Etablere løsning perfusion ved hjælp af en peristaltisk pumpe angivet til 3 – 4 mL/min. Circulate carbogenated optagelse aCSF gennem optagelse kammeret pasning til at matche tilstrømning og udstrømning for at undgå overløb.</li>
	<li>Overføre en enkelt hjerne skive i submersion optagelse kammer og sikkert på plads ved hjælp af en U-formet skive anker med nylon kors strygere. Identificere mål hjernen regionen ved hjælp af en 4 X luft mål før du skifter til en højere magt mål (f.eks.høj numerisk blænde 40 X eller 60 X vand fordybelse mål).</li>
	<li>Visuelt identificere en sund målcellen. Udseendet af neuronal membranen på soma, der som visualiseret ved IR-DIC mikroskopi, bruges til at bedømme egnetheden af en kandidat celle til patch klemme optagelse. Bemærk: Sund neuroner typisk udviser følgende funktioner: skrumpet hverken hævede somata, blød kontrast af membran kanter og jævn membran udseende. Derudover flertal af sunde celler er placeret > 30 µm dybt i Skive, som overfladiske neuroner er tilbøjelige til at være beskadiget med afskåret dendritiske processer. Neuroner, der udviser en plisseret udseende, klart synlige kerner eller 'stegte æg' udseende eller meget mørke eller høj kontrast membran kanter undgås.</li>
	<li>Back-fill patch afpipetteres med ~ 5 µL af intracellulære løsning og indlæse det på elektrode indehaveren. Flytte pipetten til optagelse badet over hjernen skive og anvende lys overtryk at rydde eventuelle blokeringer i spidsen. Nul pipette forskydning og overvåge tip modstand ved hjælp af en membran test funktion.</li>
	<li>Flytte pipette spidsen i kontakt med target neuron cellen kroppen; en lille dimple bør danne på membranen overflade på grund af den lette overtryk.</li>
	<li>Så snart en membran dimple er observeret, hurtigt fjerne de overtryk og anvende blide suge for at lette seal dannelse. Når pipette modstand stiger til > 100 MOhm, tænde en bedrift kommando til et niveau, der svarer til den forventede hvilende membran potentiale for målrettede celletype (-70 mV er et godt udgangspunkt).</li>
	<li>Når spidsen modstand når ≥ 1 gigaohm, forsøge at bryde ind i cellen ved at sprænges membran nedenunder patch pipette ved hjælp af korte anfald af skarpe suge; funktionen «zap» kan udnyttes til at lette indbrud efter behov. Bemærk: En bedrift potentiale af -70 mV er foreslået for spænding klemme eksperimenter på kortikale neuroner. Sund neuroner vil have en lækage nuværende ikke mere negativ end-100 pA for varigheden af forsøget, men dette er delvis afhængig af celletype. Et neuron ønsker udelukket fra analyse, hvis den hvilende membran potentiale var mere depolarized end -50 mV, eller hvis adgang modstanden ændres med mere end 20%.</li>
	<li>
Når et stabilt hele-celle patch klemme optagelse er opnået, målrette yderligere neuroner til optagelse ved at gentage trin 6.6 – 6.10. Sørge for at undgå mekaniske forstyrrelser, der ville resultere i at miste den første indspilning.
	<ol>
<li>Vælg yderligere neuroner i 100 µm fra den første neuron til at sikre en rimelig sandsynlighed for at finde synaptically kombineret neuroner. Bemærk: Det kan være nyttigt i nogle tilfælde til at identificere flere kandidat neuroner op foran og til at pre-Load og pre-placere alle pipetter i nærheden til de forskellige målrettede celler før etablering af den første patch klemme indspilning.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Forfatterne har ikke noget at oplyse.

Na + Spike-i forbedrer Gigaohm Seal dannelse og Patch klemme optagelse succes Den oprindelige version af metoden NMDG beskyttende opsving var specialdesignet til voksne og aldrende dyr2,5. Nogle tidlige adopters har også forsøgt at anvende denne metode på unge dyrs hjerne udskæring (dvs., mus < 30 dage gammel). Det er blevet bemærket, at i modsætning til den udestående visuelt bekræftet neuronal bevarelse med metoden NMDG beskyttende opsving i denne aldersgruppe, gigaohm seal dannelse kan ofte stall, fører til mislykkede patch klemme optagelse forsøg. En hypotese er, at NMDG kationer er mere let fanget i juvenile hjernen skiver i forhold til voksne hjerne skiver og kan hindre seal dannelse; men gigaohm sæler kan let danne mens juvenile hjernen skiver er fuldt neddykket i NMDG aCSF (data ikke vist), således der viser at NMDG aCSF i sig selv er ikke hindrer gigaohm seal dannelse.
Den hurtige overgang fra lav til høj Na+ løsning ved afslutningen af det oprindelige hjerne skive recovery trin beskadiger neuronal membraner og perturbs seal dannelsen processen. Dette er intuitive, da overgangen fra lav til høj Na+, kold til varm temperatur og dramatisk udvidelse af Ca2 + Mg2 + forhold til kollektivt føre til en massiv genopblussen af spontan synaptic aktivitet. Denne hæmmende rebound fase i hjernen udskæring procedure er tilbøjelige til at spejle reperfusion skade efter en iskæmisk fornærmelse. Således, at yderligere afbøde neuronal membran skader i indledende opvågningsfasen en gradvis Na+ spike-in procedure er blevet indarbejdet i som udvidelse af Na+ koncentration i NMDG beskyttende genopretning-inkubation kammer er langsomt og reproducerbar forhøjet med præcis timing. Som i den oprindelige beskyttende inddrivelsesproceduren er tidsmæssige dissociation af Na+ højde fra temperatur og Ca2 +/Mg2 + forholdet højde gavnligt. Men derudover Na+ spike-in procedure fører til små mindre stigninger i ekstracellulær Na+ koncentration over tidlige tidspunkt punkter og store stigninger over de sene tid point, derved giver hjernevæv en mulighed for at bedre plads til de stigende vandstand i Na+ . Denne procedure er et alternativ til gradvis løsning exchange kontrolleres af en perfusion pumpe eller tyngdekraften drop linjer, som føre til løbende stigninger i Na+ niveauer og kræver opmærksomhed både tilgangen og udstrømning til undgå overløb for skive afdeling. Navnlig i dette Na+ stiger spike-in procedure osmolalitet af løsningen i Skive afdeling gradvist over en periode på flere minutter før skiver er vendt tilbage til normal osmolalitet løsning, men det ikke forringe skive sundhed eller patch klemme optagelse succes. En høj osmolalitet skæring løsning har tidligere været brugt i midthjernen skive præparater for at bedre bevare dopamin neuroner for patch klemme optagelser57,58, dermed demonstrere at dette midlertidige hyperosmolality kan være gavnlig i nogle sammenhænge.
Ved at gennemføre en optimeret procedure kombinerer NMDG beskyttende genoprettelsesmetode og gradvis Na+ er spike-i trin nytten af denne hjerne skive metode blevet udvidet til at omfatte unge gennem modne voksne dyrs aldre. Denne opdaterede protokol er nu egnet til en bred vifte af animalske aldre ved hjælp af en enkelt optimal NMDG aCSF formulering og procedure. Hvis det er nødvendigt, Na+ spike-in procedure kan anvendes med en gradvis længere forsinkelse og/eller langsommere tid naturligvis at øge rentabiliteten af hjernen skiver fra ældre dyr, og vi har givet en grundlæggende guide anbefalede spike-i tidsplanerne ifølge at dyr alder (Se tabel 2). Mens vi har givet en grundlæggende ramme, der er egnet til en bred vifte af applikationer, kan yderligere avancerede trin udforskes for yderligere forbedrer levedygtighed og levetiden af hjernen skiver fra voksne og aldrende dyr. For eksempel glutathion restaurering strategier er særligt effektiv i denne henseende og kan gennemføres som beskrevet andetsteds2,6.
Forbedre overførselshastighed for udfordrende eksperimenter Analyse af synaptisk forbindelse af patch klemme optagelse er en krævende program, der kræver fremragende bevarelse af både neuronal struktur og funktion for at opnå en høj pålidelighed af succes. Da antallet af neuroner kan registreres samtidigt går op lineært, teknisk sværhedsgrad går op supra-lineært. Der er talrige fejlmodi, og en af de hyppigste årsager til fejl er manglende evne til at form passende gigaohm sæler på en eller flere af de målrettede celler. Dette kan dramatisk langsomme fremskridt, især når tre eller flere neuroner skal registreres samtidig. Overensstemmelse med konstateringen af hurtigere gigaohm forsegle dannelse tid med optimeret NMDG beskyttende recovery metoden, der var en markant forbedring i succesrate og gennemløb af multi neuron patch klemme optagelse eksperimenter med både voksen transgene musen hjernen skiver og voksen neurokirurgiske menneskehjerne skiver. Den forbedrede effektivitet er næsten helt sikkert tilskrives både hurtigere og mere pålidelig gigaohm seal dannelsen og forbedret neuronal bevarelsen af skiver med denne protokol. Selv om denne protokol fokuserer på fordelene udtrykkeligt for patch klemme optagelse programmer, forventes lignende gevinster for andre udfordrende eksperimentelle programmer hvor hjernen skive levedygtighed er altafgørende.

Akut hjernen skive forberedelse er et væsentlig eksperimentel modelsystem i neurovidenskab. For omtrent halvdelen af et århundrede, har denne platform aktiveret dynamisk funktionelle studier af living-hjernen på tværs af en bred vifte af anatomiske hjerneregioner og dyrearter. Om den tilsigtede anvendelse er biokemi, funktionel afbildning, morfologi eller Elektrofysiologi, er det af yderste vigtighed at sikre optimal integritet og levedygtigheden af de skivede væv. Det er derfor at robust juvenile gnaver hjernen skive forberedelse (dvs., yngre end postnatal dag 30 for mus) har været det mest foretrukne til dato. Vanskeligheden ved at opnå tilstrækkelig sund hjerne skiver fra modne voksne og aldrende dyr har vist sig for at være en formidabel udfordring for de fleste og har indført strenge begrænsninger for at studere den funktionelle arkitektur af modne hjernen. Dette er især sandt for patch klemme optagelse, en teknik, der kræver fremragende morfologiske og funktionelt bevarelse og er uundværlig for kendetegner detaljerede iboende og synaptic egenskaber af identificerede enkelt neuroner. For de sidste mange årtier, har størstedelen af patch klemme electrophysiologists påberåbt sig en 'beskyttende skæring' metode ved hjælp af saccharose i stedet lave Na+ aCSF1 for at forberede sund hjerne skiver fra juvenile, og en langt mindre omfang, unge voksne dyr. Denne metode er baseret på den forudsætning, at passive Na+ tilstrømning og efterfølgende vand ind og celle hævelse under trinnet skive skæring er den fremherskende fornærmelse, der fører til dårlig overlevelse af neuroner, især for disse neuroner beliggende i den overfladiske lag, der er mest tilbøjelige til at opretholde direkte traumer fra bevægelsen blade. Men beskyttende klippe metode stadig lader meget tilbage at ønske for hjernen skive forberedelse fra modne voksne dyr uanset den særlige aCSF formulering gennemført.
En enkel, men effektiv løsning på dette problem har været beskrevet2,3,4,5,6 og kaldes "beskyttende nyttiggørelse" hjernen skive metode. Den oprindelige version af denne metode bruger et NMDG-substituerede aCSF, som NMDG blev udpeget som den mest alsidige og effektive blandt forskellige andre kandidat natrium ion erstatninger (herunder saccharose, glycerol, cholin og Tris). Medier formuleringen blev yderligere forbedret ved tilsætning af HEPES til at modstå skive hjerneødem og give stærkere pH buffer7, såvel som tilføjelsen af kosttilskud for at modvirke de skadelige virkninger af oxidativt stress (tabel 1). Det var empirisk fastslået, at en indledende genopretning-inkubation trin i lav Na+, lave Ca2 +, og høj Mg2 + NMDG aCSF straks efter voksen hjerne væv udskæring var både nødvendige og tilstrækkelige for forbedret neuronal bevarelse over en bred vifte af områder af hjernen, celletyper og animalske aldre3,5,6.
Navnlig kan tidligere inkarnationer af hvad er nu døbt den beskyttende genoprettelsesmetode findes i litteratur1,8,9,10,11,12, 13, selv om det fulde potentiale for modne voksne og aldrende dyr hjernen skive og patch klemme optagelse blev ikke genkendt eller demonstreret i disse tidligere værker. Derudover fortsat nuanceret proceduremæssige variationer at dukke op til støtte for særlige eksperimentelle programmer4,14,15,16. Den kollektive krop arbejde af disse mange forskergrupper formidler høj tillid i robusthed beskyttende recovery metoden til forbedret væv bevarelse. NMDG beskyttende genoprettelsesmetode har nu blevet bredt vedtaget og gennemført i talrige offentliggjort forskningsundersøgelser udnytte voksne dyrs hjerne skive præparater. Undersøgelserne akut skive span neocortical3,17,18, hippocampus15,19,20,21, striatal22 , 23 , 24, midthjernen25,26,27,28,29og baghjernen30,31,32, 33 , 34 regioner, og en bred vifte af neurotransmitter og neuromodulator typer, herunder glutamatergic4,30, GABAergic18,20,31,35 ,36, dopaminerge24,29,37,38, kolinerge14,37,38, 39, noradrenerge40og serotonerge27,28 neurotransmission. Metoden er også velegnet for optogenetic kontrol af neuronal aktivitet i skiver stammer fra transgene dyr3,39 eller efter i vivo viral injektioner17,27, 28,40,41,42,43, som godt som funktionelle Ca2 + billeddannelse af neuronal aktivitet2,44 ,45,46. Analyser af såvel kortsigtede plasticitet4,47,48 og forskellige former for langsigtet plasticitet16,35,48 har været rapporteret. En nylig undersøgelse anvendes metoden NMDG beskyttende recovery for at lette, omfattende og systematiske sondering af synaptisk forbindelse i den visuelle cortex i modne voksne mus hjernen skiver ved hjælp octopatch optage konfiguration49 — en kraftfuld demonstration af nytte og robusthed af denne metode. Den beskyttende genoprettelsesmetode er endda blevet anvendt med succes i tidligere uforudsete eksperimentelle sammenhænge, såsom forbedret bevarelse af kar og pericytes i voksne kortikale hjerne skiver50, patch klemme optagelse fra transplanteret interneuron populationer i 1-1,5 år gamle Alzheimers mus modeller20, og en voksen hjerne skive receptor menneskehandel assay51.
Følgende protokol beskriver trinvise procedurer for gennemførelsen af en optimeret NMDG beskyttende genoprettelsesmetode af hjernen skive forberedelse til forbedring af levedygtigheden af akut hjernen skiver. Principper for forbedret neuronal bevarelse er diskuteret, samt demonstration af de klare fordele ved denne metode for komplekse multi neuron patch klemme optagelse eksperimenter i både unge voksne Transgene mus hjernen skiver og moden voksen neurokirurgiske menneskehjerne skiver. Følgende protokol er blevet valideret for mus fra 21 dage gamle til mere end et år gamle, samt med hensyn til menneskelige neurokirurgiske prøver stammer fra voksne patienter.

<table style="width:948px;" width="948">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:319px;height:21px;">Compresstome VF-200</td>
			<td style="width:185px;">Precisionary Instruments</td>
			<td style="width:131px;">VF-200</td>
			<td style="width:315px;">Vibrating tissue slicer (recommended)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-methyl-D-glucamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M2004</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5405</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Phosphate monobasic dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>71505</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H4034</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Ascorbate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A4034</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thiourea</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8656</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5280</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C7902</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Magnesium Sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M1880</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2,2,2-Tribromoethanol&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T48402</td>
			<td>Anesthetic component 1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-methyl-2-butanol&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>240486</td>
			<td>Anesthetic component 2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Curved blunt forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11065-07</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fine dissecting scissors (supercut)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-09</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large heavy duty scissors 7&#39;&#39;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14000-18</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Metal spatula</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z511455-1PAK</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blades</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89031-954</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Brain Slice Keeper-4</td>
			<td>Automate Scientific</td>
			<td>S-BSK4</td>
			<td>brain slice holding chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">nylon netting&#160;</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0198</td>
			<td>For building small slice recovery chambers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pyrex glass beakers (250 mL)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89090-434</td>
			<td>For building small slice recovery chambers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">35 mm plastic dish, round</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100488-376</td>
			<td>For building small slice recovery chambers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gas diffuser stones (10 &#181;m)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>59277</td>
			<td>For constant carbogenation (fine bubbles)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agarose Type I-B</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A0576</td>
			<td>For embedding brain specimens</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro loader tips</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22491229</td>
			<td>For filling patch clamp electrodes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sylgard</td>
			<td>VWR</td>
			<td>102092-312</td>
			<td>For making a custom dissecting platform</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hydrochloric acid&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H1758-100ML</td>
			<td>For pH adjustment of media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Hydroxide&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>221465-25G</td>
			<td>For pH adjustment of media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Hydroxide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>221473</td>
			<td>For pH adjustment of media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plastic transfer pipets 3 mL graduated</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89497-676</td>
			<td>For slice transfer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zirconium ceramic injector blades</td>
			<td>Cadence Specialty Blades</td>
			<td>EF-INZ10</td>
			<td>http://cadenceinc.com/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KG-33 borosilicate glass capillary w/filament</td>
			<td>King Glass Company</td>
			<td>custom quote</td>
			<td>ID: 0.87mm, OD 1.50mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Biocytin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B4261</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphocreatine disodium</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P7936</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Gluconate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G4500-100G</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EGTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E3889</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mg-ATP</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9187</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Na2-GTP</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>51120</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sucrose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S0389</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heated water bath (2.5L)</td>
			<td>VWR</td>
			<td style="width:131px;">13491-060</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Filter paper rounds</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28456-022</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanoacrylate glue</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B000BQRBO6</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass petri dish</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89000-326</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10X Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5493</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">30 mL syringes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD302832</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 mL syringes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD-309628</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">25 5/8 gauge needles</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-292</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thermomixer (w/1.5 mL tube block)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89232-908</td>
			<td>To keep agarose molten&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of acute brain slices using an optimized n-methyl-d-glucamine protective recovery method

Denne protokol er en praktisk guide til N-methyl-D-glucamine (NMDG) beskyttende genoprettelsesmetode af hjernen skive forberedelse. Adskillige nyere undersøgelser har valideret nytten af denne metode til at styrke neuronal bevarelse og samlede hjerne skive levedygtighed. Gennemførelsen af denne teknik af tidlige adopters har lettet detaljerede undersøgelser af hjernefunktion ved hjælp af forskellige eksperimentelle programmer og spænder over en bred vifte af animalske aldre, hjerneregioner og celletyper. Trin er skitseret for udførelsen af den beskyttende opsving hjerne skive teknik bruger en optimeret NMDG kunstige cerebrospinalvæske (aCSF) medier formulering og forbedret procedure til pålideligt få sund hjerne skiver for patch klemme Elektrofysiologi. Med denne opdaterede tilgang, en væsentlig forbedring er observeret i hastigheden og pålideligheden af gigaohm segl dannelse under målrettet patch klemme optagelse eksperimenter samtidig opretholde fremragende neuronal bevarelse, dermed at lette udfordrende eksperimentelle programmer. Repræsentative resultater er leveret fra flere neuron patch klemme optagelse eksperimenter til assay synaptisk forbindelse i neocortical hjerne skiver fremstillet af unge voksne Transgene mus og modne voksne menneskers neurokirurgiske prøver. Desuden optimeret NMDG beskyttende recovery metoden til hjernen udskæring er kompatibel med både unge og voksne dyr, således løse en begrænsning af den oprindelige metode. I Resumé, kan en enkelt media formulering og hjernen udskæring procedure gennemføres på tværs af forskellige arter og aldre at opnå fremragende levedygtighed og væv bevarelse.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method at JoVE.com

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Denne protokol viser gennemførelsen af en optimeret N-methyl-D-glucamine (NMDG) beskyttende genoprettelsesmetode af hjernen skive forberedelse. En enkelt media formulering bruges til at pålideligt få sund hjerne skiver fra dyr af enhver alder og for forskellige eksperimentelle programmer.

Forberedelse af akut hjernen skiver bruger en optimeret N-Methyl-D-glucamine beskyttende genoprettelsesmetode

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

Fremstilling af akutte Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Fødselsdepression Elektroporation og Time-lapse Imaging af neuroblast Migration i Mouse Akut hjerneskiver

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Electrophysiological and Morphological Characterization of Neuronal Microcircuits in Acute Brain Slices Using Paired Patch-Clamp Recordings

Elektrofysiologiske og morfologiske karakterisering af neuronal Mikrokredsløb i akut Brain Skiver Brug parrede Patch-clamp optagelser

The combination of patch clamp recordings from two (or more) synaptically coupled neurons (paired recordings) in acute brain slice preparations with ...

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

Undersøgelse af Synaptic Tagging / Capture og Cross-capture hjælp Akut hippocampusskiver fra Gnavere

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Optagelse synaptisk plasticitet i akut hippocampus skiver vedligeholdes i en lille-volumen genanvendelse - Perfusion- og neddykning-type kammer System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Optimized Management of Endovascular Treatment for Acute Ischemic Stroke

Optimeret styring af endovaskulære behandling for akut iskæmisk slagtilfælde

This manuscript describes a streamlined protocol for the management of patients with acute ischemic stroke, which aims at the minimization of time from ...

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

En alternativ metode til at studere primære begivenheder i Neurodegeneration ved hjælp af Ex Vivo rotte hjernen skiver

Despite&#160;numerous studies that attempt to develop reliable animal models&#160;which reflecting the primary processes underlying neurodegeneration, ...

Preparation of Acute Spinal Cord Slices for Whole-cell Patch-clamp Recording in Substantia Gelatinosa Neurons

Forberedelse af akut rygmarven skiver til hele-celle Patch-klemme optagelse i Substantia Gelatinosa neuroner

Recent whole-cell patch-clamp studies from substantia gelatinosa (SG) neurons have provided a large body of information about the spinal mechanisms ...

Two-photon Imaging of Microglial Processes' Attraction Toward ATP or Serotonin in Acute Brain Slices

To-foton billeddannelse af Microglial processer tiltrækning mod ATP eller Serotonin i akut hjernen skiver

Microglial cells are resident innate immune cells of the brain that constantly scan their environment with their long processes and, upon disruption of ...