Name: preparation of acute brain slices using an optimized n-methyl-d-glucamine protective recovery method
Uploaded: 2018-02-26T12:30:00
Duration: 10 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method at JoVE.com

Ce travail a été financé par l’Institut Allen pour la Science du cerveau. Les auteurs tiennent à remercier les fondateurs de Allen Institute, Paul G. Allen et Jody Allen, pour leur vision, encouragement et soutien. Nous remercions également le personnel de soutien technique de Allen Institute pour l’exécution de génotypage, élevage et soins aux animaux.

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Na + Spike pinçage Seal Gigaohm Formation et Patch Clamp, enregistrant des succès La version initiale de la méthode de recouvrement protecteur de NMDG a été spécialement conçue pour les animaux adultes et vieillissement2,5. Certains utilisateurs précoces ont également cherché à appliquer cette méthodologie à cerveau animal juvénile tranchage (c.-à-d., souris < 30 jours). Toutefois, il a été noté que contrairement à l’exceptionnelle confirmée visuellement neuronale préservation avec la méthode de recouvrement protecteur NMDG dans cette tranche d’âge, les gigaohm joint la formation peut se caler fréquemment, menant à échec patch clamp de tentatives d’enregistrement. Une hypothèse est que les cations NMDG sont plus facilement pris au piège dans des tranches de cerveau pour mineurs par rapport à des tranches de cerveau adulte et peuvent gêner la formation de joint ; Cependant, gigaohm joints peuvent se former facilement tandis que les tranches de cerveau juvénile sont entièrement submergés NMDG aCSF (données non présentées), indiquant ainsi que NMDG FSCA en soi pas entrave la formation joint gigaohm.
La transition rapide de la solution de Na+ de faible à élevé à la fin de l’étape de récupération de tranches de cerveau initial provoque des dommages aux membranes neuronales et perturbe le processus de formation du sceau. C’est intuitif, étant donné que la transition de faible à élevé Na+, température froide-au-chaud et une élévation dramatique du Ca2 + Mg2 + ratio collectivement entraîner une réapparition massive de l’activité synaptique spontanée. Cette phase de détente inhibiteur dans le cerveau de tranchage de procédure est susceptible de mettre en miroir la lésion de reperfusion après un accident ischémique. Ainsi, afin d’atténuer les dommages membrane neuronale dans la phase de relèvement initial qu'une progressive Na+ spike procédure a été intégrée dans lequel l’élévation de la concentration de Na+ dans la chambre d’incubation NMDG recouvrement protecteur est lentement et de façon reproductible élevées avec un timing précis. Comme dans la procédure de recouvrement protecteur original, la dissociation temporelle des Na+ élévation de température et Ca2 +/Mg2 + ratio élévation est bénéfique. En outre, la procédure de spike Na+ mène à petites augmentations graduelles des concentrations extracellulaires de Na+ sur les premiers points dans le temps et les fortes augmentations vers les points de temps fin, offrant ainsi le tissu cérébral, mais un occasion de mieux s’adapter à l’élévation du niveau des Na+ . Cette procédure est qu'une alternative à exchange solution progressive contrôlé par une pompe à perfusion ou la gravité des lignes de goutte à goutte qui conduisent à l’augmentation constante des niveaux de Na+ et nécessitent une attention pour les apports et les retraits pour éviter tout débordement de la chambre de la tranche. Notamment, dans ce Na+ procédure PIC l’osmolarité de la solution dans la chambre de tranche augmente progressivement sur une période de plusieurs minutes avant que les tranches sont retournés à la solution dont l’osmolalité est normale, mais cela n’affecte pas négativement la santé tranche ou enregistrement de patch clamp de la réussite. Une solution de découpe haute osmolalité a déjà été utilisée pour les préparations de tranches mésencéphale afin de mieux préserver les neurones de dopamine pour patch clamp enregistrements57,58, démontrant ainsi que ce temporaire hyperosmolalité peut être salutaire dans certains contextes.
En mettant en place une procédure optimisée combinant la méthode de recouvrement protecteur NMDG et progressive Na+ épi-en étape l’utilité de cette méthode de tranche de cerveau a été étendu pour couvrir les jeunes à travers des âges animaux adultes matures. Ce protocole mis à jour est maintenant adapté pour un large éventail d’animaux âgés en utilisant une seule formulation de FSCA NMDG optimale et une procédure. Si nécessaire, la procédure de spike Na+ peut être appliquée avec un retard progressivement plus longue et/ou plus lente évolution temporelle afin d’améliorer la viabilité des tranches de cerveau d’animaux plus âgés, et nous avons fourni un guide de base de recommandée spike-en annexes selon à animal âge (voir tableau 2). Alors que nous avons fourni un cadre de base pour un large éventail d’applications, des étapes avancées supplémentaires peuvent être explorées pour renforcer encore la viabilité et la longévité des tranches de cerveau d’animaux adultes et vieillissement. Par exemple, les stratégies de restauration de glutathion sont particulièrement efficaces à cet égard et peuvent être implémentées comme décrit ailleurs2,6.
Améliorant le débit pour contester les expériences L’analyse de la connectivité synaptique par enregistrement de patch clamp est une application exigeante nécessitant une excellente conservation de la structure neuronale et la fonction afin d’atteindre une haute fiabilité de succès. Comme le nombre de neurones à enregistrer simultanément augmente linéairement, le niveau de difficulté technique Monte supra-linéairement. Il existe de nombreux modes de défaillance, et une des causes plus fréquentes d’échecs est l’incapacité à joints adéquats gigaohm forme sur une ou plusieurs des cellules ciblées. Cela peut ralentir considérablement des progrès, en particulier lorsque trois ou plusieurs neurones doivent être enregistrés simultanément. Joint de gigaohm conformément à la conclusion de plus rapide temps de formation avec la méthode de recouvrement protecteur NMDG optimisée, il y avait une nette amélioration dans le taux de réussite et le débit d’enregistrement de multiples neurones patch clamp expériences avec les deux adulte transgéniques coupes de cerveau de souris et des tranches de cerveau neurochirurgicaux humain adulte. L’amélioration de l’efficacité est presque certainement attribuable à la fois la formation de joint de gigaohm plus rapide et plus fiable et la préservation neuronale améliorée des tranches avec ce protocole. Bien que ce protocole met l’accent sur les avantages explicitement pour patch clamp de demandes d’enregistrement, des gains similaires sont prévus pour d’autres applications expérimentales difficiles où la viabilité de tranches de cerveau est primordiale.

La préparation de tranches de cerveau aiguë est un système de modèle expérimental essentiel en neurosciences. Environ la moitié d’un siècle, cette plateforme a permis à dynamiques études fonctionnelles du cerveau vivant dans une grande variété d’espèces animales et des régions anatomiques cérébrales. Que l’application soit biochimie, imagerie fonctionnelle, morphologie ou l’électrophysiologie, c’est de la plus haute importance pour assurer l’intégrité optimale et la viabilité des tissus en tranches. C’est pour cette raison que la préparation de tranches de cerveau de rongeurs juvéniles résilience (c.-à-d., plus jeune que postnatal 30 jours chez les souris) a été le plus préféré à ce jour. Tranches de la difficulté à obtenir suffisamment saines du cerveau de l’adulte et vieillissement des animaux s’est avéré pour être un formidable défi pour la plupart et a imposé des restrictions sévères pour l’étude de l’architecture fonctionnelle du cerveau mature. C’est particulièrement vrai pour les patch clamp d’enregistrement, une technique qui requiert l’excellente conservation morphologique et fonctionnelle et est indispensable pour caractériser les propriétés détaillées d’intrinsèques et synaptiques des neurones individuels identifiés. Pour les dernières décennies, la grande majorité des électrophysiologistes de patch clamp se sont appuyés sur une méthode de « protection coupe » préparation des tranches de cerveau sain de juvéniles et dans une moindre mesure avec saccharose substitués en position basse Na+ aCSF1 dans quelle mesure, les jeunes animaux adultes. Cette méthode repose sur la prémisse que les influx de Na+ passive et entrée ultérieure de l’eau et cellule gonflement pendant l’étape de coupe tranche est l’insulte prédominante qui mène à faible taux de survie des neurones, particulièrement pour ces neurones se trouve dans le couches superficielles qui sont plus susceptibles de soutenir un traumatisme direct du mouvement de la lame. Toutefois, la méthode de protection coupe laisse encore beaucoup à désirer pour la préparation de tranches de cerveau des animaux adultes matures quelle que soit la formulation de l’aCSF particulier mis en place.
Une solution simple mais efficace à ce problème a été décrit2,3,4,5,6 et appelle la méthode de tranche de cerveau « valorisation protectrice ». La version originale de cette méthode utilise un FSCA NMDG substituées, comme NMDG a été identifié comme le plus polyvalent et le plus efficace parmi divers autres candidats sodium ion substituts (y compris le saccharose, glycérol, choline et Tris). La formulation de médias a été renforcée par l’ajout de HEPES à résister à l’oedème du cerveau tranche et fournir plus fort pH tampon7, ainsi que l’ajout de suppléments pour contrecarrer les effets néfastes du stress oxydatif (tableau 1). Il a été déterminé empiriquement qu’une incubation de recouvrement initial dans le bas Na+, faible Ca2 +, et haute Mg2 + NMDG FSCA immédiatement après que découpage de tissu de cerveau adulte était nécessaire et suffisante pour amélioré neuronale conservation sur un large éventail de régions du cerveau, types cellulaires et animaux âgés3,5,6.
Notamment, des incarnations antérieures de ce qui est maintenant surnommé la méthode de recouvrement protecteur se trouve dans la littérature1,8,9,10,11,12, 13, bien que le plein potentiel de maturité adulte et vieillissement cerveau animal tranche et patch clamp enregistrement n’était pas reconnu ou démontrée dans ces premiers travaux. En outre, nuancée de variations procédurales continuent d’émerger à l’appui des applications expérimentales spécifiques4,14,15,16. Le corps collectif de travail de ces nombreux groupes de recherche transmet le degré élevé de confiance dans la robustesse de la méthode de recouvrement protecteur pour la préservation des tissus améliorée. La méthode de recouvrement protecteur NMDG a maintenant largement adoptée et mis en œuvre dans de nombreuses études de recherche publiés utilisant des préparations de tranches de cerveau animal adulte. Ces études tranche aiguë span néocorticales3,17,18, hippocampe15,19,20,21, striatum22 , 23 , 24, mésencéphale25,26,27,28,29et rhombencéphale30,31,32, 33 , 34 régions et une variété de types de neurotransmetteurs et neuromodulateur dont glutamatergique4,30, GABAergiques18,20,31,35 ,36, dopaminergiques24,29,37,38, cholinergiques14,37,38, 39, noradrénergique40et sérotoninergiques27,28 neurotransmission. La méthode consiste aussi bien aux optogenetic contrôle de l’activité neuronale en tranches dérivés d’animaux transgéniques3,39 ou suite in vivo des injections virales17,27, 28,40,41,42,43, comme bien comme Ca2 + imagerie fonctionnelle de l’activité neuronale2,44 ,45,46. Analyses de court terme plasticité4,47,48 et diverses formes de longue durée plasticité16,35,48 ont été a rapporté. Une récente étude a appliqué la méthode de recouvrement protecteur NMDG pour faciliter la complète et structurée de palpage de connectivité synaptique dans le cortex visuel dans des coupes de cerveau de souris adultes matures à l’aide de l’octopatch d’enregistrement de configuration49 — un puissant démonstration de l’utilité et la robustesse de cette méthode. La méthode de recouvrement protecteur a même été appliquée avec succès dans des contextes expérimentaux précédemment imprévues, telles que, meilleure préservation du système vasculaire et péricytes dans cerveau cortical adulte tranches50, patch clamp d’enregistrement de transplanté les populations interneurone 1 – 1,5 ans la maladie d’Alzheimer souris modèles20et un cerveau adulte tranche récepteur trafic dosage51.
Le protocole suivant décrit les procédures pas à pas pour implémenter une méthode de recouvrement protecteur NMDG optimisée de préparation de tranches de cerveau afin d’améliorer la viabilité des tranches de cerveau aiguë. Les principes de conservation neuronale améliorée sont discutés, ainsi que de la démonstration des avantages clairs de cette méthodologie pour complexe multi-neurone patch clamp d’enregistrement des expériences dans les coupes de cerveau de souris transgéniques adulte jeune et adulte tranches de cerveau humain de neurochirurgie. Le protocole suivant a été validé chez la souris de l’âge de 21 jours à plus d’un ans, aussi bien en ce qui concerne les prélèvements humains neurochirurgicaux provenant de patients adultes.

<table style="width:948px;" width="948">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:319px;height:21px;">Compresstome VF-200</td>
			<td style="width:185px;">Precisionary Instruments</td>
			<td style="width:131px;">VF-200</td>
			<td style="width:315px;">Vibrating tissue slicer (recommended)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-methyl-D-glucamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M2004</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5405</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Phosphate monobasic dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>71505</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H4034</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Ascorbate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A4034</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thiourea</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8656</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5280</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C7902</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Magnesium Sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M1880</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2,2,2-Tribromoethanol&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T48402</td>
			<td>Anesthetic component 1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-methyl-2-butanol&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>240486</td>
			<td>Anesthetic component 2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Curved blunt forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11065-07</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fine dissecting scissors (supercut)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-09</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large heavy duty scissors 7&#39;&#39;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14000-18</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Metal spatula</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z511455-1PAK</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blades</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89031-954</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Brain Slice Keeper-4</td>
			<td>Automate Scientific</td>
			<td>S-BSK4</td>
			<td>brain slice holding chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">nylon netting&#160;</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0198</td>
			<td>For building small slice recovery chambers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pyrex glass beakers (250 mL)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89090-434</td>
			<td>For building small slice recovery chambers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">35 mm plastic dish, round</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100488-376</td>
			<td>For building small slice recovery chambers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gas diffuser stones (10 &#181;m)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>59277</td>
			<td>For constant carbogenation (fine bubbles)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agarose Type I-B</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A0576</td>
			<td>For embedding brain specimens</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro loader tips</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22491229</td>
			<td>For filling patch clamp electrodes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sylgard</td>
			<td>VWR</td>
			<td>102092-312</td>
			<td>For making a custom dissecting platform</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hydrochloric acid&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H1758-100ML</td>
			<td>For pH adjustment of media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Hydroxide&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>221465-25G</td>
			<td>For pH adjustment of media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Hydroxide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>221473</td>
			<td>For pH adjustment of media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plastic transfer pipets 3 mL graduated</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89497-676</td>
			<td>For slice transfer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zirconium ceramic injector blades</td>
			<td>Cadence Specialty Blades</td>
			<td>EF-INZ10</td>
			<td>http://cadenceinc.com/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KG-33 borosilicate glass capillary w/filament</td>
			<td>King Glass Company</td>
			<td>custom quote</td>
			<td>ID: 0.87mm, OD 1.50mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Biocytin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B4261</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphocreatine disodium</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P7936</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Gluconate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G4500-100G</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EGTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E3889</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mg-ATP</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9187</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Na2-GTP</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>51120</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sucrose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S0389</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heated water bath (2.5L)</td>
			<td>VWR</td>
			<td style="width:131px;">13491-060</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Filter paper rounds</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28456-022</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanoacrylate glue</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B000BQRBO6</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass petri dish</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89000-326</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10X Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5493</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">30 mL syringes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD302832</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 mL syringes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD-309628</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">25 5/8 gauge needles</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-292</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thermomixer (w/1.5 mL tube block)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89232-908</td>
			<td>To keep agarose molten&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of acute brain slices using an optimized n-methyl-d-glucamine protective recovery method

Ce protocole est un guide pratique pour la N-méthyl-D-glucamine (NMDG) méthode de recouvrement protecteur de préparation de tranches de cerveau. De nombreuses études récentes ont clairement démontré l’utilité de cette méthode pour améliorer la préservation neuronale et viabilité de tranches de cerveau ensemble. La mise en œuvre de cette technique par les adopteurs précoces a facilité des enquêtes détaillées sur le fonctionnement du cerveau à l’aide de diverses applications expérimentales et couvrant un large éventail d’animaux âges, régions cérébrales et types de cellules. Étapes sont décrites pour mener à bien la technique de tranche de cerveau de recouvrement protecteur utilisant un optimisé NMDG artificiel liquide céphalo-rachidien (FSCA) médias formulation et procédure renforcée pour sûrement obtenir des tranches de cerveau sain pour l’électrophysiologie de patch clamp. Avec cette nouvelle approche, on observe une amélioration substantielle dans la vitesse et fiabilité de gigaohm joint la formation durant ciblée patch clamp d’enregistrement des expériences tout en conservant l’excellente conservation neuronale, facilitant ainsi la difficile applications expérimentales. Résultats représentatifs sont pourvu de multiples neurones patch clamp d’enregistrement des expériences pour doser la connectivité synaptique dans des tranches de cerveau néocorticales préparés à partir de souris transgéniques adultes jeunes et matures spécimens adultes de neurochirurgie humaines. En outre, la méthode de recouvrement protecteur NMDG optimisée de tranchage de cerveau est compatible avec les animaux juvéniles et adultes, ainsi résoudre une limitation de la méthodologie originale. En résumé, une formulation unique média et le cerveau tranchage de procédure peuvent être implémentées à travers les différentes espèces et les âges pour atteindre l’excellente conservation de tissus et de viabilité.

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Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Ce protocole illustre l’implémentation d’un optimisé N-méthyl-D-glucamine (NMDG) méthode de recouvrement protecteur de préparation de tranches de cerveau. Une formulation unique de médias est utilisée pour obtenir fiable des tranches de cerveau sain provenant d’animaux de tout âge et pour diverses applications expérimentales.

Préparation de tranches de cerveau aiguë en utilisant un optimisé N-méthyl-D-glucamine méthode de recouvrement protecteur

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

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