Name: preparation of acute brain slices using an optimized n-methyl-d-glucamine protective recovery method
Uploaded: 2018-02-26T12:30:00
Duration: 10 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method at JoVE.com

עבודה זו מומן על ידי מכון אלן למדעי המוח. המחברים רוצים להודות מכון אלן המייסדים, פול ג' אלן, אלן ג'ודי, של החזון שלהם, עידוד ותמיכה. אנו מודים גם צוות התמיכה הטכנית אלן מכון לביצוע טיפול בבעלי חיים, גידול ו genotyping.

המחברים אין לחשוף.

נה + ספייק-in משפר את היווצרות חותם ג'יגה אוהם, מלחציים תיקון הקלטה הצלחה הגירסה הראשונית של שיטת שחזור מגן NMDG תוכנן במיוחד עבור בוגרים ובעלי הזדקנות2,5. שכמה מהמקדימים ביקשו גם ליישם מתודולוגיה זו כדי לחתוך קטין החייתי במוח (כלומר, עכברים < בת 30 ימים). עם זאת, זה נרשמה כי בניגוד מצטיינים ואושרו מבחינה ויזואלית עצביים שימור באמצעות שיטת שחזור מגן NMDG בטווח הגיל הזה, היווצרות חותם ג'יגה אוהם יכול לעתים קרובות לעכב, שמוביל מלחציים תיקון כושל להקליט ניסיונות. אחת ההשערות היא כי קטיונים NMDG יותר בקלות לכוד בתוך פרוסות המוח ילדותי ביחס פרוסות המוח למבוגרים יכולים לעכב היווצרות ים; אולם, חותמות ג'יגה אוהם יכול ליצור בקלות בזמן פרוסות המוח לנוער הם שקועים לחלוטין NMDG כלנית חדד (נתונים לא מוצג), ובכך כמסמן את NMDG חנה המבר כשלעצמו הוא לא הפגיעה ג'יגה אוהם חותם היווצרות.
המעבר נמוך-גבוהה פתרון Na+ בסיום השלב הראשוני במוח פרוסה שחזור מהיר גורם נזק לממברנות עצביים, perturbs את תהליך היווצרות של החותם. זה אינטואיטיבי נתון כי המעבר נמוך-גבוהה Na+, הטמפרטורה הקרה-אל-חמה, העלאה דרמטית של Ca2 + מ ג2 + יחס להוביל באופן קולקטיבי תחייתו מסיבית של פעילות סינפטית ספונטנית. שלב זה ריבאונד מעכבות במוח עם פרוסות הליך סביר להניח מראה פגיעה פגיעה reperfusion לאחר עלבון איסכמי. לכן, בכדי להמתיק נזק הממברנה עצביים בשלב ההחלמה הראשונית ש-na+ הדרגתית ספייק-אין נוהל נכלל בהן העלאת ריכוז Na+ בחדר דגירה שחזור מגן NMDG הוא לאט לאט reproducibly מוגבה עם תזמון מדויק. ההליך לשחזור מגן המקורי, דיסוציאציה הטמפורלי של Na+ העלאה של טמפרטורה, Ca2 +/Mg2 + יחס גובה הוא מועיל. אבל בנוסף, ההליך ספייק ב- Na+ מוביל לעלייה מצטבר קטן ריכוז Na+ חוץ-תאית על נקודות זמן מוקדם ועל עליות גדולות לקראת נקודות זמן מאוחר, כך יכלו על רקמת המוח הזדמנות כדי להתאים טוב יותר את רמות Na+ העולה. ההליך זה שאלטרנטיבה לפתרון הדרגתי exchange נשלט על ידי משאבת זלוף או כוח המשיכה של קווי טפטוף אשר ולהוביל לעלייה מתמדת Na+ רמות ודורשים תשומת לב תזרים והן יצוא כדי למנוע הצפת החדר פרוסה. ראוי לציין, זה נה+ הליך ספייק-in osmolality הפתרון בבית הבליעה פרוסה בהדרגה עולה על פני תקופה של מספר דקות לפני הפרוסות מוחזרות לפתרון osmolality נורמלי, אך לא השפיעה לרעה על בריאות פרוסה או תיקון קלאמפ הקלטה הצלחה. פתרון חיתוך osmolality גבוהה כבר בעבר בשימוש על ההכנות פרוסה המוח האמצעי על מנת לשמר טוב יותר נוירונים דופאמין עבור תיקון קלאמפ הקלטות57,58, לפיכך הוכחת כי זה זמני hyperosmolality עשוי להיות מועיל בהקשרים מסוימים.
על-ידי הטמעת הליך בלתי אופטימליים המשלב את שיטת שחזור מגן NMDG ו- Na הדרגתי+ הוארך בספייק שלב השירות של מתודולוגיה זו פרוסה המוח לכסות לנוער במשך הדורות בוגרים בעלי חיים למבוגרים. פרוטוקול מעודכן זה מתאים עכשיו מגוון הגילאים בעלי חיים באמצעות יחיד אופטימלי NMDG חנה המבר גיבוש נוהל. במידת הצורך, ניתן להחיל על ההליך ספייק ב- Na+ עם עיכוב למחמיר יותר ו/או קורס איטי יותר זמן כדי לשפר את הכדאיות של המוח פרוסות מחיות בוגרים, אנו מגישים מדריך בסיסי של מומלצים ספייק-אין לוחות זמנים לפי לחיה גיל (ראה טבלה 2). בזמן שאנו מספקים מסגרת בסיסית מתאים עבור מגוון רחב של יישומים, ניתן לסייר שלבים מתקדמים נוספים לשיפור נוסף הכדאיות ואריכות ימיהם של המוח פרוסות מחיות למבוגרים ובטיפולים. לדוגמה, אסטרטגיות שחזור גלוטתיון יעילים במיוחד בהקשר זה, ניתן ליישם כמתואר2,6.
שיפור תפוקה מאתגרת ניסויים הניתוח של קישוריות סינפטית על ידי הקלטה מלחציים תיקון הוא יישום תובעני שדורש מעולה לשימור המבנה העצבית ותפקוד על מנת להשיג אמינות גבוהה של הצלחה. ככל שמספר נוירונים שיירשמו בו זמנית עולה באופן ליניארי, רמת הקושי הטכני עולה העל-לינארית. ישנם מצבי כשל רבים, אחד הגורמים בתדירות הגבוהה ביותר של כשלים הוא חוסר היכולת טופס חותמות ג'יגה אוהם נאותה על אחד או יותר של תאים יישוב. הדבר באופן דרמטי יכול להאט את התקדמות, במיוחד כאשר שלושה או יותר נוירונים חייב להיות מוקלט בו זמנית. תואם את הממצא יותר מהר ג'יגה אוהם חותם היווצרות הזמן עם שיטת אופטימיזציה של שחזור מגן NMDG, היה שיפור שיעור ההצלחה ואת התפוקה של נוירון רב תיקון קלאמפ הקלטה ניסויים עם שני מבוגרים מהונדס העכבר מוח ופרוסות למבוגרים מוח הנוירוכירורגית. יעילות משופרת היא קרוב לוודאי המיוחס היווצרות חותם ג'יגה אוהם יותר מהיר ואמין והן לשימור עצביים משופר הפרוסות עם פרוטוקול זה. למרות פרוטוקול זה מתמקד ביתרונות במפורש עבור תיקון קלאמפ הקלטה יישומים, הישגים דומים הם הצפוי ליישומים אחרים ניסיוני ומאתגר שבו המוח פרוסה הכדאיות הוא בעל חשיבות עליונה.

המוח חריפה פרוסה ההכנה היא מערכת חיוניים דגם ניסיוני במדעי המוח. בערך חצי מאה, פלטפורמה זו אפשרה דינמי מחקרים תפקודית של המוח החי על פני מגוון רחב של אזורים במוח האנטומי של מיני בעלי חיים. אם היישום המיועד הוא ביוכימיה, הדמיה תפקודית, מורפולוגיה או אלקטרופיזיולוגיה, זה חשיבות עליונה כדי להבטיח תקינות האופטימלי ואת הכדאיות של הרקמה הפרוס. זה מסיבה זו כי ההכנה פרוסה מדרגית המוח מכרסמים לנוער (קרי, צעיר יותר כמחנכת ליום 30 עכברים) כבר המועדף ביותר עד כה. הקושי בהשגת המוח מספיק בריא פרוסות של מבוגר בוגר, הזדקנות חיות הוכיחה להיות אתגר עצום עבור רוב מטילה מגבלות חמורות ללמוד אדריכלות תפקודית של המוח בוגרת. זה נכון במיוחד עבור תיקון קלאמפ הקלטה, טכניקה דורשת שימור פונקציונלי מורפולוגיים מעולה, היא הכרחית עבור אפיון מפורט ומאפייני מהותי סינפטית של נוירונים יחיד שזוהה. מספר עשורים, הרוב המכריע של תיקון קלאמפ electrophysiologists צריכים לסמוך על שיטת 'מגן חיתוך' באמצעות שהוחלפו סוכרוז נמוך Na+ חנה המבר1 להכנת פרוסות המוח בריא של ילדותי, רחוק במידות שונות במידה אפרוחי למבוגרים. שיטה זו מבוססת על ההנחה כי זרם Na+ פסיבי, הזנת מים הבאים ותא נפיחות במהלך השלב חיתוך פרוסה היא העלבון השולט שמוביל הישרדות המסכן של נוירונים, במיוחד עבור אלה נוירונים הממוקמת שכבות שטחיות שסביר לקיים טראומה ישירה מהתנועה להב. עם זאת, שיטת חיתוך מגן עדיין משאיר רחוק ממשביע להכנה פרוסה מוח מחיות למבוגרים בוגר ללא קשר ניסוח מסוים חנה המבר מיושמת.
פתרון פשוט אך יעיל לבעיה זו היה תיאר2,3,4,5,6 , כינה את השיטה פרוסה של המוח 'שחזור מגן'. הגירסה המקורית של שיטה זו משתמש של NMDG שהוחלפו כלנית חדד, כפי NMDG היה מזוהה ביותר תכליתי ויעיל בקרב שונים אחרים המועמד נתרן יון תחליפים (כולל סוכרוז, גליצרול, כולין, טריס). ניסוח מדיה היה משופרת נוספת על ידי תוספת של HEPES להתנגד המוח פרוסה בצקת ולספק pH חזק יותר באגירת7, וכן התוספת של תוספים כדי לנטרל את השפעות מזיקות של סטרס חמצוני (טבלה 1). מדעית נקבע כי דגירה ההחלמה הראשונית נה נמוך+, נמוך Ca2 +, ולקבל גבוהה מ ג2 + NMDG חנה המבר מיד לאחר בציעת רקמת המוח למבוגרים היה נחוץ וגם מספיק עבור שיפור עצביים שימור על טווח רחב של אזורים במוח, סוגי תאים בעלי חיים גילאי3,5,6.
ראוי לציין, גלגולים קודמות של מה עכשיו שכונתה שיטת שחזור מגן ניתן למצוא את הספרות1,8,9,10,11,12, 13, למרות הפוטנציאל המלא מבוגרים למבוגרים, הזדקנות החייתי במוח פרוסה, תיקון קלאמפ ההקלטה לא הייתה מוכרת או הפגינו בעבודות קודמות אלה. בנוסף, הניואנסים וריאציות פרוצדורלי ממשיכים להגיח לתמיכה יישומים ספציפיים ניסיוני4,14,15,16. הגוף הקולקטיבי של העבודה של קבוצות מחקר רבות אלה מקנה ביטחון מלא ב החוסן של פעולת שחזור מגן לשימור רקמות משופרת. שיטת שחזור מגן NMDG יש עכשיו כבר נרחב אימץ ויושמו תוך ניצול למבוגרים החייתי במוח פרוסה ההכנות מחקרים רבים של מחקר שפורסם. מחקרים אלה חריפה פרוסה span17,neocortical3,18, בהיפוקמפוס15,19,20,21, striatal22 , 23 , 24, המוח האמצעי25,26,27,28,29ו hindbrain30,31,32, 33 , 34 אזורים, ועוד מגוון של סוגי נוירוטרנסמיטר, המודל העצבי כולל4,glutamatergic30, GABAergic18,20,31,35 ,36, דופאמין24,29,37,38,37,שימוש14,38, 39, noradrenergic40, תכולה27,28 עצבית. השיטה מתאימה מאוד גם על השליטה optogenetic פעילות. עצבית פרוסות נגזר מ-3,חיות הטרנסגניים39 או בעקבות ויוו ויראלי זריקות17,27, 28,40,41,42,43, כמו גם פונקציונלית Ca2 + הדמיה של פעילות. עצבית2,44 45, ,46. ניתוחים של טווח קצר פלסטיות4,47,48 וגם צורות מגוונות של לטווח ארוך פלסטיות16,35,48 כבר דיווח. מחקר שנערך לאחרונה החלת שיטת שחזור מגן NMDG כדי להקל על נרחבת ושיטתית חיטוט של קישוריות סינפטית בקליפת הראיה פרוסות המוח בוגרת בעכבר למבוגרים באמצעות octopatch את ההקלטה תצורה49 – רב עוצמה הפגנה של השירות ואת החוסן של שיטה זו. שיטת שחזור מגן אפילו הוחל בהצלחה בהקשרים ניסיוני בעבר בלתי צפויות, כגון, שיפור שימור להערכת pericytes פרוסות המוח קורטיקלית למבוגרים50, מלחציים תיקון הקלטה מ מושתלים interneuron אוכלוסיות בעוד בן 1-1.5 שנה מחלת אלצהיימר העכבר דגמי20, של המוח למבוגרים פרוסה קולטן סחר assay51.
הפרוטוקול הבא מתאר הליכים מפורטים ליישום שיטת שחזור מגן NMDG אופטימיזציה של המוח פרוסה הכנה לשיפור הכדאיות של פרוסות המוח חריפה. העקרונות לשימור עצביים משופרת הנזכרים, כמו גם הדגמה של היתרונות ברורים של מתודולוגיה זו עבור תיקון נוירון רב מורכבים קלאמפ הקלטה ניסויים פרוסות המוח הצעיר העכבר הטרנסגניים למבוגרים והן למבוגר בוגר פרוסות המוח האנושי הנוירוכירורגית. פרוטוקול הבאים אומתה עבור עכברים מן בן 21 ימים בת אחד או יותר, כמו גם לגבי האדם דגימות נוירוכירורגיים נגזר חולים מבוגרים.

<table style="width:948px;" width="948">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:319px;height:21px;">Compresstome VF-200</td>
			<td style="width:185px;">Precisionary Instruments</td>
			<td style="width:131px;">VF-200</td>
			<td style="width:315px;">Vibrating tissue slicer (recommended)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-methyl-D-glucamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M2004</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5405</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Phosphate monobasic dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>71505</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H4034</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Ascorbate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A4034</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thiourea</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8656</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5280</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C7902</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Magnesium Sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M1880</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2,2,2-Tribromoethanol&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T48402</td>
			<td>Anesthetic component 1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-methyl-2-butanol&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>240486</td>
			<td>Anesthetic component 2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Curved blunt forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11065-07</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fine dissecting scissors (supercut)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-09</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large heavy duty scissors 7&#39;&#39;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14000-18</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Metal spatula</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z511455-1PAK</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blades</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89031-954</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Brain Slice Keeper-4</td>
			<td>Automate Scientific</td>
			<td>S-BSK4</td>
			<td>brain slice holding chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">nylon netting&#160;</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0198</td>
			<td>For building small slice recovery chambers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pyrex glass beakers (250 mL)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89090-434</td>
			<td>For building small slice recovery chambers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">35 mm plastic dish, round</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100488-376</td>
			<td>For building small slice recovery chambers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gas diffuser stones (10 &#181;m)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>59277</td>
			<td>For constant carbogenation (fine bubbles)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agarose Type I-B</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A0576</td>
			<td>For embedding brain specimens</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro loader tips</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22491229</td>
			<td>For filling patch clamp electrodes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sylgard</td>
			<td>VWR</td>
			<td>102092-312</td>
			<td>For making a custom dissecting platform</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hydrochloric acid&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H1758-100ML</td>
			<td>For pH adjustment of media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Hydroxide&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>221465-25G</td>
			<td>For pH adjustment of media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Hydroxide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>221473</td>
			<td>For pH adjustment of media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plastic transfer pipets 3 mL graduated</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89497-676</td>
			<td>For slice transfer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zirconium ceramic injector blades</td>
			<td>Cadence Specialty Blades</td>
			<td>EF-INZ10</td>
			<td>http://cadenceinc.com/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KG-33 borosilicate glass capillary w/filament</td>
			<td>King Glass Company</td>
			<td>custom quote</td>
			<td>ID: 0.87mm, OD 1.50mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Biocytin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B4261</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphocreatine disodium</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P7936</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Gluconate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G4500-100G</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EGTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E3889</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mg-ATP</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9187</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Na2-GTP</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>51120</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sucrose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S0389</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heated water bath (2.5L)</td>
			<td>VWR</td>
			<td style="width:131px;">13491-060</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Filter paper rounds</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28456-022</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanoacrylate glue</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B000BQRBO6</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass petri dish</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89000-326</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10X Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5493</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">30 mL syringes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD302832</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 mL syringes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD-309628</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">25 5/8 gauge needles</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-292</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thermomixer (w/1.5 mL tube block)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89232-908</td>
			<td>To keep agarose molten&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of acute brain slices using an optimized n-methyl-d-glucamine protective recovery method

פרוטוקול זה הוא מדריך מעשי N-מתיל-D-glucamine (NMDG) שיטת שחזור מגן המוח פרוסה ההכנה. מחקרים אחרונים רבים יש לאמת את התועלת של שיטה זו לשיפור שימור עצביים, הכוללת הכדאיות פרוסה של המוח. היישום של טכניקה זו על ידי המוקדמים הנחתה מפורט חקירות תפקוד המוח באמצעות מגוון יישומים ניסיוני, על פני מגוון רחב של בעלי חיים הגילאים, אזורים במוח, ואת סוגי תאים. השלבים הבאים מתוארים שבצעתי שחזור מגן המוח פרוסה הטכניקה באמצעות אופטימיזציה NMDG נוזל מוחי שדרתי מלאכותי (כלנית חדד) מדיה ניסוח וההליך משופרת כדי להשיג בצורה אמינה פרוסות המוח בריא עבור תיקון קלאמפ אלקטרופיזיולוגיה. עם גישה מעודכנת זו, שיפור ניכר הוא ציין את המהירות, אמינות של ג'יגה אוהם לאטום היווצרות במהלך תיקון ממוקד קלאמפ הקלטה ניסויים תוך שמירה על שימור עצביים מעולה, ובכך להקל מאתגר יישומים ניסיוני. התוצאות נציג ניתנים מן המלחציים נוירון רב תיקון רישום ניסויים כדי assay קישוריות סינפטית פרוסות המוח neocortical שהוכנו העכברים הטרנסגניים למבוגרים צעירים, בוגרים מבוגרים דגימות נוירוכירורגיים אנושי. יתר על כן, שיטת שחזור מגן NMDG אופטימיזציה ששיספתי המוח הוא תואם עם חיות הן לנוער והן למבוגרים, ובכך לפתרון מגבלה של המתודולוגיה המקורי. לסיכום, ניתן ליישם על ניסוח מדיה בודד והמוח חותך הליך על פני מינים והגילאים השונים כדי להשיג מעולה לשימור הכדאיות ורקמות.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method at JoVE.com

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

פרוטוקול זה מדגים יישום אופטימיזציה N-מתיל-D-glucamine (NMDG) שיטת שחזור מגן המוח פרוסה ההכנה. ניסוח מדיה בודד משמש להשיג באופן אמין פרוסות המוח בריא של בעלי חיים בכל גיל, וגם עבור יישומים שונים ומגוונים ניסיוני.

הכנת פרוסות המוח חריפה באמצעות אופטימיזציה N-מתיל-D-שיטת שחזור מגן glucamine

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

הכנת Oligomeric β עמילואיד 1-42 ו אינדוקציה של ירידת ערך הפלסטיות הסינפטית על Slices בהיפוקמפוס

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

הכנת Slices האזור Subventricular החריף להדמית סיד

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo electroporation ואחרי הלידה וזמן לשגות הדמיה של neuroblast הגירה בעכבר חריפה פרוסות המוח

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Electrophysiological and Morphological Characterization of Neuronal Microcircuits in Acute Brain Slices Using Paired Patch-Clamp Recordings

אלקטרו ומורפולוגי אפיון של שבבים עצביים במוח חריף Slices שימוש מותאם Patch-קלאמפ הקלטות

The combination of patch clamp recordings from two (or more) synaptically coupled neurons (paired recordings) in acute brain slice preparations with ...

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

חקירה של Synaptic תיוג / לכידה וצלב-לכידה באמצעות חריפות בהיפוקמפוס פרוסות ממכרסמים

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

הקלטה הפלסטיות הסינפטית בפרוסות בהיפוקמפוס חריפה, בהשתתפות של מיחזור - בנפח מצומצם, זלוף- ומערכת ועלייתו-סוג תא

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Optimized Management of Endovascular Treatment for Acute Ischemic Stroke

ניהול מיטבי של טיפול Endovascular שבץ איסכמי אקוטי

This manuscript describes a streamlined protocol for the management of patients with acute ischemic stroke, which aims at the minimization of time from ...

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

גישה חלופית ללמוד העיקרי אירועים הקשורים ניוון מוחיים לשעבר Vivo עכברוש המוח בפרוסות

Despite&#160;numerous studies that attempt to develop reliable animal models&#160;which reflecting the primary processes underlying neurodegeneration, ...

Preparation of Acute Spinal Cord Slices for Whole-cell Patch-clamp Recording in Substantia Gelatinosa Neurons

הכנה של חוט השדרה חריפה פרוסות תאים כל תיקון-קלאמפ הקלטה בנוירונים הסובסטנציה Gelatinosa

Recent whole-cell patch-clamp studies from substantia gelatinosa (SG) neurons have provided a large body of information about the spinal mechanisms ...

Two-photon Imaging of Microglial Processes' Attraction Toward ATP or Serotonin in Acute Brain Slices

שני הפוטונים הדמיה של תהליכים Microglial המשיכה לכיוון ATP או סרוטונין המוח חריפה פרוסות

Microglial cells are resident innate immune cells of the brain that constantly scan their environment with their long processes and, upon disruption of ...