Name: preparation of acute brain slices using an optimized n-methyl-d-glucamine protective recovery method
Uploaded: 2018-02-26T12:30:00
Duration: 10 min 53 s
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Este trabajo fue financiado por el Instituto Allen para la ciencia del cerebro. Los autores desean agradecer a los fundadores del Instituto Allen, Paul G. Allen y Jody Allen, por su visión, ánimo y apoyo. Agradecemos también el personal de apoyo técnico del Instituto de Allen para realizar genotipado, la cría y cuidado de los animales.

Los autores no tienen nada que revelar.

Na + Spike - mejora Gigaohm sello formación y éxito la grabación de la abrazadera del remiendo La versión inicial del método de recuperación protección NMDG fue diseñada específicamente para animales adultos y envejecimiento2,5. Algunos pioneros también han intentado aplicar esta metodología a corte juvenil cerebro animal (es decir, ratones < 30 días de edad). Sin embargo, se ha observado que a diferencia de la excepcional confirmado visualmente neuronal preservación con el método de recuperación protección NMDG en este rango de edad, gigaohm sello formación puede frecuentemente puesto hacia fuera, hacia la abrazadera del remiendo fallidos intentos de grabación. Una hipótesis es que NMDG cationes más fácilmente son atrapados en rebanadas de cerebro juvenil en relación con rebanadas del cerebro adulto y pueden impedir la formación de sello; sin embargo, gigaohm juntas pueden formar fácilmente mientras que rebanadas de cerebro juvenil están completamente sumergidos en NMDG aCSF (datos no mostrados), así indicando NMDG aCSF por sí no impide el gigaohm sello formación.
La transición rápida de solución de Na+ de bajo a alto al finalizar el paso de recuperación de rebanada de cerebro inicial causa daño a las membranas neuronales y perturba el proceso de formación de sello. Esto es intuitivo ya que la transición de bajo a alto Na+, temperatura de fría a caliente y elevación dramática de la Ca2 + Mg2 + relación entre llevar colectivamente a un resurgimiento masivo de la actividad sináptica espontánea. Esta fase de rebote inhibitorio en el cerebro rebanado procedimiento es probable que después de un insulto isquémico por reperfusión del espejo. Así, a otros mitigar daño de la membrana neuronal en la fase de recuperación inicial que se ha incorporado un gradual Na+ spike en procedimiento en el que la elevación de la concentración de Na+ en la cámara de incubación NMDG protección recuperación es lenta y reproducible con la sincronización exacta. Como en el procedimiento de recuperación protectora original, la disociación temporal de Na+ elevación de la temperatura y Ca2 +/Mg2 + cociente de la elevación es beneficiosa. Pero además, el Na+ spike en procedimiento conduce a aumento incremental en la concentración extracelular de Na+ sobre los primeros momentos y grandes aumentos hacia los puntos finales del tiempo, así que el tejido cerebral una oportunidad para acomodar mejor a los crecientes niveles de Na+ . Este procedimiento es que una alternativa al intercambio de solución gradual controlado por una bomba de perfusión o gravedad líneas de goteo que conducen a incrementos constantes en los niveles de Na+ y requieren atención para entrada y salida para evitar el desbordamiento de la cámara del sector. En particular, en este Na+ procedimiento de spike la osmolalidad de la solución en la cámara de corte poco a poco se levanta durante un período de varios minutos antes de las láminas vuelven a solución osmolalidad normal, pero esto no afectó negativamente la salud del sector o abrazadera del remiendo éxito la grabación. Una solución de corte de alta osmolaridad se ha utilizado anteriormente para las preparaciones de cerebro medio rebanada para mejor preservar las neuronas de dopamina para patch clamp grabaciones57,58, demostrando así que este temporal hyperosmolality puede ser beneficioso en algunos contextos.
Mediante la aplicación de un procedimiento optimizado que combina el método de recuperación protección NMDG y gradual Na+ spike en paso la utilidad de esta metodología de rebanada del cerebro se ha ampliado para cubrir menores a través de las edades animales adultos maduras. Este protocolo actualizado ahora es conveniente para una amplia gama de edades animales mediante un único óptimo NMDG aCSF formulación y procedimiento. Si es necesario, el procedimiento de punto Na+ puede ser aplicado con un retardo progresivamente más largo o más lento curso del tiempo para mejorar la viabilidad de las rebanadas de cerebro de animales más viejos, y hemos proporcionado a una guía básica de recomendado spike en horarios según para animales de edad (ver tabla 2). Mientras que hemos proporcionado un marco básico adecuado para una amplia gama de aplicaciones, pasos avanzados adicionales pueden ser exploradas para mejorar aún más la viabilidad y longevidad de las rebanadas de cerebro de animales adultos y envejecimiento. Por ejemplo, estrategias de restauración de glutatión son particularmente eficaces en este sentido y pueden aplicarse como se describe en otra parte2,6.
Mejora de rendimiento para impugnar experimentos El análisis de la conectividad sináptica por la grabación de abrazadera del remiendo es una aplicación exigente que requiere excelente preservación de la estructura neuronal y función para lograr una alta confiabilidad del éxito. Como el número de neuronas al mismo tiempo grabar sube linealmente, el nivel de dificultad técnica aumenta supra-linealmente. Hay numerosos modos de falla, y una de las causas más frecuentes de fracasos es la incapacidad para sellos de forma adecuada gigaohm en uno o más de las células apuntadas. Esto dramáticamente puede ralentizar el progreso, sobre todo cuando tres o más neuronas se registrarán simultáneamente. Consistente con el hallazgo de más rápido gigaohm sello tiempo de formación con el método de recuperación protección NMDG optimizado, hubo una notable mejora en la tasa de éxito y rendimiento de grabación de múltiples neuronas parche abrazadera experimentos con tanto adulto transgénicos rebanadas de cerebro de ratón y rebanadas de cerebro neuroquirúrgica humano adulto. La mejora de la eficiencia es seguramente atribuible a la formación de sello gigaohm más rápido y confiable y la mejor preservación neuronal de las rebanadas con este protocolo. Aunque este protocolo se centra en los beneficios expresamente para aplicaciones de grabación de la abrazadera del remiendo, se anticipan aumentos similares para otras aplicaciones experimentales difíciles donde la viabilidad de rebanada del cerebro es fundamental.

La preparación de rebanada cerebral aguda es un sistema esencial de modelo experimental en Neurociencia. Aproximadamente la mitad de un siglo, esta plataforma permite estudios dinámicos funcionales del cerebro vivo en una amplia variedad de especies animales y regiones anatómicas del cerebro. Si el uso es bioquímica, proyección de imagen funcional, morfología y electrofisiología, es de suma importancia para garantizar una óptima integridad y viabilidad de los tejidos en rodajas. Es por ello que la preparación de la rebanada del cerebro roedores juveniles altamente resistente (es decir, menores de día postnatal 30 para ratones) ha sido el preferido hasta la fecha. La dificultad en la obtención de cerebro suficientemente sano rebanadas de adulto maduro y crianza de animales ha demostrado para ser un desafío formidable para la mayoría y ha impuesto severas limitaciones para el estudio de la arquitectura funcional del cerebro maduro. Esto es particularmente cierto para la abrazadera del remiendo de grabación, una técnica que requiere preservación morfológica y funcional excelente y es indispensable para la caracterización detalladas propiedades intrínsecas y sinápticas de las neuronas individuales identificadas. Durante las últimas décadas, la gran mayoría de electrofisiólogos de abrazadera del remiendo se ha basado en un método de 'protección corte' utilizando sacarosa-sustituido bajo Na+ aCSF1 para la preparación de rodajas de cerebro sano de juvenil y en mucho menor medida, los animales adultos jóvenes. Este método se basa en la premisa que afluencia de Na+ pasiva y entrada de agua posterior y celular inflamación durante el paso de corte de la rebanada es el insulto predominante que lleva a la pobre supervivencia de las neuronas, particularmente para las neuronas ubicadas en la capas superficiales que son más propensos a mantener el trauma directo del movimiento de la hoja. Sin embargo, el método de corte protector todavía deja mucho que desear para la preparación de rebanada de cerebro de animales adultos maduros independientemente de la formulación particular aCSF implementado.
Una solución simple pero efectiva a este problema ha sido descrito2,3,4,5,6 y denomina el método de corte de cerebro 'protección recuperación'. La versión original de este método utiliza un aCSF NMDG-sustituido, NMDG fue identificado como el más versátil y efectivo entre varios otros candidatos sodio iones sustitutos (como sacarosa, glicerol, colina y Tris). La formulación de los medios de comunicación fue reforzada por la adición de HEPES para resistir el edema de la rebanada del cerebro y proporcionan más fuerte pH buffer7, así como la adición de suplementos para contrarrestar los efectos perjudiciales del estrés oxidativo (tabla 1). Se determinó empíricamente que una incubación de recuperación inicial en baja Na+, baja Ca2 +, y alto Mg2 + NMDG aCSF inmediatamente después de corte de tejido de cerebro adulto era necesario y suficiente para mejora neuronal conservación sobre una amplia gama de regiones cerebrales, tipos de células y animales edad3,5,6.
En particular, las encarnaciones anteriores de lo que ahora es llamado el método de recuperación protección pueden encontrarse en la literatura1,8,9,10,11,12, 13, aunque todo el potencial para maduros adultos y envejecimiento animal cerebro rebanada y parche abrazadera grabación no fue reconocida o demostrada en estos trabajos anteriores. Además, matizadas variaciones procesales siguen apareciendo en apoyo de aplicaciones experimentales4,14,15,16. El cuerpo colectivo de trabajo de estos numerosos grupos de investigación imparte alta confianza en la robustez del método de protección recuperación para la preservación de tejido mejorado. El método de recuperación protección NMDG ahora ha sido ampliamente adoptado y aplicado en numerosos estudios de investigación publicados utilizando preparaciones de rebanada de cerebro de animales adultos. Estos estudios de corte aguda palmo neocortical3,17,18, hipocampo15,19,20,21, estriado22 , 23 , 24, midbrain25,26,27,28,29y cerebelo30,31,32, 33 , regiones de 34 y una variedad de tipos de neurotransmisor y neuromodulador incluyendo glutamatérgica4,30, GABAérgico18,20,31,35 ,36, dopaminérgico24,29,37,38, colinérgicos14,37,38, 39, noradrenérgicas40y serotonergic27,28 neurotransmisión. El método está también bien adaptado para el control de optogenetic de la actividad neuronal en sectores derivados de animales transgénicos3,39 o siguiendo en vivo inyecciones virales17,27, 28,40,41,42,43, como bien como Ca2 + proyección de imagen funcional de la actividad neuronal2,44 ,45,46. Análisis de corto plazo plasticidad4,47,48 y diversas formas de plasticidad a largo plazo16,de35,48 han sido registrados. Un reciente estudio aplicó el método de recuperación protección NMDG para facilitar amplia y sistemática de sondeo de la conectividad sináptica en la corteza visual en rebanadas de cerebro de ratón adulto maduro usando el octopatch grabación configuración49 — un poderoso demostración de la utilidad y la robustez de este método. El método de recuperación protección incluso se ha aplicado con éxito en contextos experimentales previamente imprevistos, tales como, mejor preservación de la vasculatura y del pericitos en el cerebro cortical adulto rodajas50, abrazadera del remiendo de la grabación trasplantado las poblaciones interneurona en 1 a 1,5 años de Alzheimer ratón modelos20y un cerebro adulto rebanada del receptor tráfico ensayo51.
El siguiente protocolo describe los procedimientos paso a paso para implementar un método de protección recuperación NMDG optimizado de preparación de rebanada del cerebro para mejorar la viabilidad de las rebanadas de cerebro agudo. Se discuten los principios para la mejor preservación neuronal, así como la demostración de los beneficios claros de esta metodología para abrazadera de parche neurona múltiples complejos experimentos de grabación en rebanadas de cerebro de ratón transgénico adulto joven y adulto maduro rebanadas de cerebro humano neuroquirúrgica. El siguiente protocolo validado para ratones de 21 días de edad a más de un años de edad, así como por muestras neuroquirúrgicas humanas derivadas de pacientes adultos.

<table style="width:948px;" width="948">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:319px;height:21px;">Compresstome VF-200</td>
			<td style="width:185px;">Precisionary Instruments</td>
			<td style="width:131px;">VF-200</td>
			<td style="width:315px;">Vibrating tissue slicer (recommended)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-methyl-D-glucamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M2004</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5405</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Phosphate monobasic dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>71505</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H4034</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Ascorbate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A4034</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thiourea</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8656</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5280</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C7902</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Magnesium Sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M1880</td>
			<td>aCSF constituent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2,2,2-Tribromoethanol&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T48402</td>
			<td>Anesthetic component 1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-methyl-2-butanol&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>240486</td>
			<td>Anesthetic component 2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Curved blunt forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11065-07</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fine dissecting scissors (supercut)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-09</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large heavy duty scissors 7&#39;&#39;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14000-18</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Metal spatula</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z511455-1PAK</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blades</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89031-954</td>
			<td>Brain dissection tools</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Brain Slice Keeper-4</td>
			<td>Automate Scientific</td>
			<td>S-BSK4</td>
			<td>brain slice holding chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">nylon netting&#160;</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0198</td>
			<td>For building small slice recovery chambers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pyrex glass beakers (250 mL)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89090-434</td>
			<td>For building small slice recovery chambers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">35 mm plastic dish, round</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100488-376</td>
			<td>For building small slice recovery chambers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gas diffuser stones (10 &#181;m)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>59277</td>
			<td>For constant carbogenation (fine bubbles)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agarose Type I-B</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A0576</td>
			<td>For embedding brain specimens</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro loader tips</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22491229</td>
			<td>For filling patch clamp electrodes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sylgard</td>
			<td>VWR</td>
			<td>102092-312</td>
			<td>For making a custom dissecting platform</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hydrochloric acid&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H1758-100ML</td>
			<td>For pH adjustment of media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Hydroxide&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>221465-25G</td>
			<td>For pH adjustment of media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Hydroxide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>221473</td>
			<td>For pH adjustment of media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plastic transfer pipets 3 mL graduated</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89497-676</td>
			<td>For slice transfer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zirconium ceramic injector blades</td>
			<td>Cadence Specialty Blades</td>
			<td>EF-INZ10</td>
			<td>http://cadenceinc.com/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KG-33 borosilicate glass capillary w/filament</td>
			<td>King Glass Company</td>
			<td>custom quote</td>
			<td>ID: 0.87mm, OD 1.50mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Biocytin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B4261</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphocreatine disodium</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P7936</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium Gluconate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G4500-100G</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EGTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E3889</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mg-ATP</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9187</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Na2-GTP</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>51120</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sucrose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S0389</td>
			<td>Intern pipette solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heated water bath (2.5L)</td>
			<td>VWR</td>
			<td style="width:131px;">13491-060</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Filter paper rounds</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28456-022</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanoacrylate glue</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B000BQRBO6</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass petri dish</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89000-326</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10X Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5493</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">30 mL syringes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD302832</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 mL syringes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD-309628</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">25 5/8 gauge needles</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-292</td>
			<td>Miscellaneous</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thermomixer (w/1.5 mL tube block)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89232-908</td>
			<td>To keep agarose molten&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of acute brain slices using an optimized n-methyl-d-glucamine protective recovery method

Este protocolo es una guía práctica para el N-metil-D-glucamine (NMDG) método de protección recuperación de preparación de corte de cerebro. Numerosos estudios recientes han validado la utilidad de este método para mejorar la preservación neuronal y viabilidad de rebanada de cerebro total. La aplicación de esta técnica por pioneros ha facilitado investigaciones detalladas en función cerebral utilizando diversas aplicaciones experimentales y que abarcan una amplia gama de edades animales, regiones del cerebro y tipos de la célula. Se describen los pasos para llevar a cabo la técnica de corte de cerebro protección recuperación utilizando una formulación de medios de comunicación de líquido cefalorraquídeo artificial (aCSF) NMDG optimizada y un procedimiento mejorado para obtener confiablemente rebanadas de cerebro sano para electrofisiología de la abrazadera del remiendo. Con este enfoque actualizado, se observa una mejora sustancial en la velocidad y fiabilidad del gigaohm sello de formación durante la abrazadera del remiendo dirigido experimentos de grabación manteniendo excelente preservación neuronal, facilitando así un reto aplicaciones experimentales. Resultados representativos son siempre de la abrazadera del remiendo de la neurona de múltiples experimentos para ensayo de grabación conectividad sináptica en rebanadas de cerebro neocortical preparado a partir de ratones transgénicos adulto joven y madurados ejemplares adultos de Neurocirugía humanas. Además, el método de recuperación protección NMDG optimizado de corte de cerebro es compatible con animales juveniles y adultos, por lo tanto resolver una limitación de la metodología original. En Resumen, una sola formulación y procedimiento de corte de cerebro se pueden implementar a través de diversas especies y edades para lograr preservación excelente de la viabilidad y el tejido.

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Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Este protocolo muestra la implementación de un optimizado N-metil-D-glucamine (NMDG) método de protección recuperación de preparación de corte de cerebro. Una formulación de medios de comunicación solo se utiliza para obtener confiablemente rebanadas de cerebro sano de animales de cualquier edad y para diversas aplicaciones experimentales.

Preparación de rebanadas cerebrales agudas mediante un optimizado N-metil-D-glucamine recuperación protección método

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparación de oligómeros β-amiloide 1-42 Y la inducción del deterioro de plasticidad sináptica en rodajas de hipocampo

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Investigación

Neurociencias

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

Preparación de agudos Slices zona subventricular for Imaging Calcio

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal electroporación y time-lapse de Neuroblast Migración en rodajas de cerebro de ratón aguda

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Electrophysiological and Morphological Characterization of Neuronal Microcircuits in Acute Brain Slices Using Paired Patch-Clamp Recordings

Electrofisiológico y Caracterización Morfológica de microcircuitos neuronales en el infarto agudo rodajas de cerebro Usando Emparejados patch-clamp grabaciones

The combination of patch clamp recordings from two (or more) synaptically coupled neurons (paired recordings) in acute brain slice preparations with ...

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

Investigación de sináptica Tagging / Captura y Cruz de captura utilizando aguda hipocampo rebanadas de Roedores

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Grabación de la plasticidad sináptica en rebanadas Hippocampal agudas mantenidas en un pequeño volumen reciclado - perfusión- y sistema de cámara de tipo inmersión

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Optimized Management of Endovascular Treatment for Acute Ischemic Stroke

Gestión optimizada del tratamiento Endovascular para el accidente cerebrovascular isquémico agudo

This manuscript describes a streamlined protocol for the management of patients with acute ischemic stroke, which aims at the minimization of time from ...

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

Un enfoque alternativo para estudiar acontecimientos primarios en neurodegeneración con rodajas de cerebro de rata Ex Vivo

Despite&#160;numerous studies that attempt to develop reliable animal models&#160;which reflecting the primary processes underlying neurodegeneration, ...

Preparation of Acute Spinal Cord Slices for Whole-cell Patch-clamp Recording in Substantia Gelatinosa Neurons

Preparación de láminas agudas de la médula espinal para celulares Patch-clamp de grabación en las neuronas de la sustancia Gelatinosa

Recent whole-cell patch-clamp studies from substantia gelatinosa (SG) neurons have provided a large body of information about the spinal mechanisms ...

Two-photon Imaging of Microglial Processes' Attraction Toward ATP or Serotonin in Acute Brain Slices

Proyección de imagen de dos fotones de atracción Microglial procesos hacia ATP o serotonina en rebanadas de cerebro agudo

Microglial cells are resident innate immune cells of the brain that constantly scan their environment with their long processes and, upon disruption of ...