Name: in vivo alkaline comet assay and enzyme-modified alkaline comet assay for measuring dna strand breaks and oxidative dna damage in rat liver
Uploaded: 2016-05-04T14:00:00
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This work was supported by the US Food and Drug Administration. We acknowledge the original publication of the CPA study by Elsevier B.V.: Ding W, Bishop ME, Peace MG, Davis KJ, White GA, Lyn-Cook LE, Manjanatha MG. Sex-specific dose-response analysis of genotoxicity in cyproterone acetate-treated F344 rats. Mutation Research 774: 1-7, 2014 (PMID: 25440904)

Éthique déclaration: procédures impliquant des animaux ont été approuvés par le Comité institutionnel des animaux soin et l&#39;utilisation (IACUC) au Centre FDA / national pour la recherche toxicologique. NOTE: La conception de l&#39; étude décrite ici est basée sur le protocole développé par le Centre japonais pour la validation des méthodes alternatives (JaCVAM) pour leur validation de l&#39;essai in vivo rongeur alcaline de la comète 18, et en outre modi...

<ol>
	<li>Collins, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comet+assay+for+DNA+damage+and+repair:+principles,+applications,+and+limitations.">The comet assay for DNA damage and repair: principles, applications, and limitations.</a> Mol Biotechnol. 26 (3), 249-261 (2004).</li><li>Olive, P. L., Banath, J. P., Durand, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+in+radiation-induced+DNA+damage+and+repair+in+tumor+and+normal+cells+measured+using+the+'comet'+assay.">Heterogeneity in radiation-induced DNA damage and repair in tumor and normal cells measured using the 'comet' assay.</a> Radiat Res. 122 (1), 86-94 (1990).</li><li>Committee, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scientific+opinion+on+genotoxicity+testing+strategies+applicable+to+food+and+feed+safety+assessment.">Scientific opinion on genotoxicity testing strategies applicable to food and feed safety assessment.</a> EFSA Journal. 9 (9), 2379 (2011).</li><li>Ding, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex-specific+dose-response+analysis+of+genotoxicity+in+cyproterone+acetate-treated+F344+rats.">Sex-specific dose-response analysis of genotoxicity in cyproterone acetate-treated F344 rats.</a> Mutat Res Genet Toxicol Environ Mutagen. 774, 1-7 (2014).</li><li>Ding, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+genotoxicity+of+estragole+in+male+F344+rats.">In vivo genotoxicity of estragole in male F344 rats.</a> Environ Mol Mutagen. 56 (4), 356-365 (2015).</li><li>Ding, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+genotoxicity+of+furan+in+F344+rats+at+cancer+bioassay+doses.">In vivo genotoxicity of furan in F344 rats at cancer bioassay doses.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 261 (2), 164-171 (2012).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxicity+and+genotoxicity+assessment+of+silver+nanoparticles+in+mouse.">Cytotoxicity and genotoxicity assessment of silver nanoparticles in mouse.</a> Nanotoxicology. 8 (suppl 1), 36-45 (2014).</li><li>Ding, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methyleugenol+genotoxicity+in+the+Fischer+344+rat+using+the+comet+assay+and+pathway-focused+gene+expression+profiling.">Methyleugenol genotoxicity in the Fischer 344 rat using the comet assay and pathway-focused gene expression profiling.</a> Toxicol Sci. 123 (1), 103-112 (2011).</li><li>Manjanatha, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotoxicity+of+doxorubicin+in+F344+rats+by+combining+the+comet+assay,+flow-cytometric+peripheral+blood+micronucleus+test,+and+pathway-focused+gene+expression+profiling.">Genotoxicity of doxorubicin in F344 rats by combining the comet assay, flow-cytometric peripheral blood micronucleus test, and pathway-focused gene expression profiling.</a> Environ Mol Mutagen. 55 (1), 24-34 (2014).</li><li>Smith, C. C., O'Donovan, M. R., Martin, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=hOGG1+recognizes+oxidative+damage+using+the+comet+assay+with+greater+specificity+than+FPG+or+ENDOIII.">hOGG1 recognizes oxidative damage using the comet assay with greater specificity than FPG or ENDOIII.</a> Mutagenesis. 21 (3), 185-190 (2006).</li><li>Collins, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+oxidative+damage+to+DNA+and+its+repair+with+the+comet+assay.">Measuring oxidative damage to DNA and its repair with the comet assay.</a> Biochim Biophys Acta. 1840 (2), 794-800 (2014).</li><li>Brendler-Schwaab, S., Hartmann, A., Pfuhler, S., Speit, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+in+vivo+comet+assay:+use+and+status+in+genotoxicity+testing.">The in vivo comet assay: use and status in genotoxicity testing.</a> Mutagenesis. 20 (4), 245-254 (2005).</li><li>Hartmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+conducting+the+in+vivo+alkaline+Comet+assay.+4th+International+Comet+Assay+Workshop.">Recommendations for conducting the in vivo alkaline Comet assay. 4th International Comet Assay Workshop.</a> Mutagenesis. 18, 45-51 (2003).</li><li>Collins, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+oxidative+DNA+damage+and+its+repair+using+the+comet+assay.">Investigating oxidative DNA damage and its repair using the comet assay.</a> Mutat Res. 681, 24-32 (2009).</li><li>Collins, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comet+assay+in+human+biomonitoring+studies:+reliability,+validation,+and+applications.">Comet assay in human biomonitoring studies: reliability, validation, and applications.</a> Environ Mol Mutagen. 30 (2), 139-146 (1997).</li><li>Gutzkow, K. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+comet+assay+using+96+minigels.">High-throughput comet assay using 96 minigels.</a> Mutagenesis. 28 (3), 333-340 (2013).</li><li>AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals: 2013 Edition. AVMA Panel on Euthanasia Available from: <a target="_blank" href="https://www.avma.org/KB/Policies/Documents/euthanasia.pdf">https://www.avma.org/KB/Policies/Documents/euthanasia.pdf</a> (2013)</li><li>Ruehl-Fehlert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1.">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55 (2-3), 91-106 (2003).</li><li>Carson, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Self-Instrumental+Text.">A Self-Instrumental Text.</a> Histotechnology. , 25-37 (1996).</li><li>Dusinska, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=THE+COMET+ASSAY,+modified+for+detection+of+oxidised+bases+with+the+use+of+bacterial+repair+endonucleases.">THE COMET ASSAY, modified for detection of oxidised bases with the use of bacterial repair endonucleases.</a> Dusinska Protocol [Internet]. , (2000).</li><li>Schuppler, J., Gunzel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+tumors+and+steroid+hormones+in+rats+and+mice.">Liver tumors and steroid hormones in rats and mice.</a> Arch Toxicol Suppl. 2, 181-195 (1979).</li><li>Hobkirk, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+sulfotransferases+and+steroid+sulfate+sulfatases:+characteristics+and+biological+roles.">Steroid sulfotransferases and steroid sulfate sulfatases: characteristics and biological roles.</a> Can J Biochem Cell Biol. 63 (11), 1127-1144 (1985).</li></ol>

Ce protocole décrit la mesure concurrente de dommages à l&#39;ADN et à l&#39;oxydation directe dans le foie de rat au niveau de la cellule unique. Le protocole général est applicable à tout tissu à partir duquel les cellules ou les noyaux individuels peuvent être isolés avec un minimum de lésions de l&#39; ADN induites par le traitement ( à savoir, des lésions de l&#39; ADN induites et non par l&#39;agent d&#39;essai, mais la manipulation et le traitement des tissus d&#39;origine animale). Dans notr...

Le test des comètes alcalines mesure les ruptures d&#39;ADN au niveau d&#39;une seule cellule. Les suspensions de cellules individuelles sont noyées dans agarose sur une lame de microscope et les cellules ont été lysées pour former nucléoïdes, qui contiennent des boucles surenroulées de l&#39;ADN. Electrophorèse à pH&gt; 13 résultats dans la perte de surenroulement dans des boucles d&#39;ADN contenant la rupture des brins, les brins d&#39;ADN libérés migrent vers l&#39;anode, la création de structures de comète qui peuvent être observées par microscopie à fluorescence. ADN Fragmenté migre de la «tête» de la comète dans la «queue» en fonction de la taille du fragment, et la fluorescence relative de la queue de la comète par rapport à l&#39;intensité totale (de la tête et de la queue) peut être utilisé pour quantifier l&#39; ADN rupture 1 , 2. Le test est simple, sensible, polyvalent, rapide et relativement peu coûteux 1. La détection d&#39;ADN fragmenté causées par des agents endommageant l&#39;ADN est utilisé un dosage pour la quantification des lésions de l&#39;ADN dans les cellules ou les noyaux isolés à partir individeux tissus d&#39;animaux traités avec le matériau (x) potentiellement génotoxiques. En raison de ses avantages, le test in vivo de la comète est recommandé comme un second test in vivo de génotoxicité (jumelé avec le test du micronoyau in vivo) pour effectuer des évaluations de sécurité des produits en cours Conférence internationale sur l&#39; harmonisation (ICH) 3 et Autorité européenne de sécurité des aliments (EFSA ) 4 lignes directrices réglementaires. Dans notre laboratoire, nous avons utilisé le test pour évaluer des dommages de l&#39; ADN in vivo induite par les ingrédients alimentaires, les produits pharmaceutiques et les nanomatériaux 5-10. Rat foie sera utilisé comme exemple dans ce protocole, mais le test des comètes peut être réalisée avec d&#39;autres tissus / organes d&#39;animaux de laboratoire, aussi longtemps que des cellules individuelles intactes peuvent être isolées à partir du tissu. Certains types de dommages à l&#39;ADN sont difficiles à détecter que les ruptures d&#39;ADN sans modifier le test des comètes alcalines de base. Dans le cas des dommages oxydatifs à l&#39;ADN, brin breaks peuvent être créés au niveau des lésions oxydatives de l&#39;ADN par digestion avec des enzymes de réparation tels que la 8-oxoguanine ADN-N glycosylase humaine 1 (hOGG1, ce qui crée des pauses à la 8-oxoguanine (8 oxoGua) et la méthyl-fapy-guanine 11. en outre, l&#39; endonucléase III (endo III) crée des sauts principalement à pyrimidines oxydées 1. Ainsi, l&#39;addition d&#39;une étape enzymatique digestion permet le dosage d&#39; une méthode spécifique et sensible pour mesurer les dégâts oxydatifs de l&#39; ADN in vivo 12. en utilisant ces tests, nous avons démontré les dommages oxydatifs à l&#39;ADN induite par la substance toxique dans le foie des rats et des souris 6-8 et dans le cœur des rats 10. Le test des comètes alcalines a de nombreuses applications en toxicologie génétique et la biosurveillance humaine: 1) en tant que suivi dans l&#39; essai in vivo pour génotoxiques identifiés par sensibles tests in vitro 3,13, 2) pour évaluer les mécanismes de lésions de l&#39; ADN xénobiotiques-induite dans plusieurs tissus 14, 3) pour examiner si unecancérogène fonctionne à l&#39; aide d&#39; un génotoxique ou un mode non génotoxique d&#39;action (MOA) 7, 4) pour évaluer l&#39; ADN réparation des dommages 15, 5) pour étudier les maladies humaines et les expositions professionnelles 16 et 6) comme un test de criblage à haut débit potentiel de spécifique d&#39; un organe de génotoxicité 17.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="743">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Coverslips (No. 1, 24 x 50 mm)&#160;</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">12-544-14</td>
			<td style="width:215px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Microscope Slides</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">12-550-123</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Dimethylsulfoxide (DMSO)&#160;</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">67-68-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">EDTA, Disodium</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">BP120-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">ICN1860454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:232px;">1X Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) (Ca++, Mg++ free)&#160;</td>
			<td style="width:140px;">HyClone</td>
			<td style="width:156px;">SH30588.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">HEPES</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">BP310-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Low Melting Point Agarose (LMP)</td>
			<td style="width:140px;">Lonza</td>
			<td align="right" style="width:156px;">50081</td>
			<td>NuSieve GTG Agarose</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Normal Melting Agarose (NMA)&#160;</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">BP1356-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">pH testing paper strips (pH 7.5-14)</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">M95873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Potassium Cloride</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">7447-40-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Potassium Hydroxide</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">1310-58-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">slide labels, (0.94 x 0.5 in.)</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">NC9822036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Sodium Chloride (NaCl)&#160;</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Sodium Hydroxide (NaOH)&#160;</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">1310-73-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">SYBR&#8482; Gold&#160;</td>
			<td style="width:140px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:156px;">S11494</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Triton X-100&#160;</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Trizma Base&#160;</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">77-86-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">2.0 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td style="width:156px;">05-402-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Cell strainer (40 &#181;m)</td>
			<td style="width:140px;">Fisher</td>
			<td align="right" style="width:156px;">22363547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Endonuclease III (Nth)&#160;</td>
			<td style="width:140px;">New England Biolabs</td>
			<td style="width:156px;">M0268S</td>
			<td>Dilution 1:1000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">hOGG1&#160;</td>
			<td style="width:140px;">New England Biolabs</td>
			<td style="width:156px;">M0241S</td>
			<td>Dilution 1:1000</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo alkaline comet assay and enzyme-modified alkaline comet assay for measuring dna strand breaks and oxidative dna damage in rat liver

Unrepaired DNA damage can lead to genetic instability, which in turn may enhance cancer development. Therefore, identifying potential DNA damaging agents is important for protecting public health. The in vivo alkaline comet assay, which detects DNA damage as strand breaks, is especially relevant for assessing the genotoxic hazards of xenobiotics, as its responses reflect the in vivo absorption, tissue distribution, metabolism and excretion (ADME) of chemicals, as well as DNA repair process. Compared to other in vivo DNA damage assays, the assay is rapid, sensitive, visual and inexpensive, and, by converting oxidative DNA damage into strand breaks using specific repair enzymes, the assay can measure oxidative DNA damage in an efficient and relatively artifact-free manner. Measurement of DNA damage with the comet assay can be performed using both acute and subchronic toxicology study designs, and by integrating the comet assay with other toxicological assessments, the assay addresses animal welfare requirements by making maximum use of animal resources. Another major advantage of the assays is that they only require a small amount of cells, and the cells do not have to be derived from proliferating cell populations. The assays also can be performed with a variety of human samples obtained from clinically or occupationally exposed individuals.

Le test des comètes alcalines in vivo a été réalisée conjointement avec le test des comètes enzyme modifiée pour mesurer les dommages de l&#39; ADN direct et oxydatif dans le foie des rats traités avec de l&#39; acétate de cyprotérone (CPA) 5. CPA est un médicament hormonal synthétique qui provoque des tumeurs du foie de rat d&#39;une manière spécifique du sexe, avec cinq fois plus fortes doses nécessaires pour induire des tumeurs du foie chez les rats ...

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In Vivo Alkaline Comet Assay and Enzyme-modified Alkaline Comet Assay for Measuring DNA Strand Breaks and Oxidative DNA Damage in Rat Liver

In Vivo Alkaline Comet Assay et Enzyme modifiée Alkaline Comet Assay pour mesurer Breaks brin d&#39; ADN et l&#39; ADN oxydative dommages de foie de rat

The alkaline comet assay measures DNA strand breaks in eukaryotic cells. By adding an Endonuclease III or human 8-oxoguanine-DNA-N-glycosylase digestion step, the assay can efficiently detect oxidative DNA damage. We describe methods for using these assays to detect DNA damage in rat liver.

Unrepaired DNA damage can lead to genetic instability, which in turn may enhance cancer development. Therefore, identifying potential DNA damaging agents ...

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